C家族趋化因子XCL1增强CVB3基因疫苗的抗病毒免疫应答及保护作用

为提高以往构建的基因疫苗pcDNA3.1-VP1的抗B3型柯萨奇病毒(CVB3)感染的免疫效果,以编码C家族趋化因子XCL1的质粒pcDNA3.1-XCL1共注射,观察诱导的CVB3特异性免疫应答及CVB3病毒性心肌炎预防效果。将两种质粒各50μg混合后分别于0、2、4、6周肌注免疫小鼠4次,末次免疫后4周分别以5×LD50剂量CVB3攻击小鼠观察保护率,或以3×LD50剂量CVB3感染小鼠观察病毒性心肌炎的诱生。结果显示,与单纯pcDNA3.1-VP1质粒相比,XCL1质粒共注射可增强血清CVB3特异性IgG以及特异性CTL应答。5×LD50病毒攻击后,共注射组体重降低7.28%,而pcDNA3.1-VP1组体重降低10.97%;共注射组28 d保护率达40%,高于pcDNA3.1-VP1组的30%。3×LD50病毒感染后心肌组织病理显示,共注射组心外膜下仅有轻微炎症,心肌内未见炎症细胞浸润,而pcDNA3.1-VP1组除心外膜下有较多淋巴细胞聚集外,心肌内有少量炎症浸润和坏死灶。提示XCL1质粒共注射可增强CVB3特异性体液和细胞免疫应答及抗病毒保护,可有效预防病毒性心肌炎的发生。

乙型肝炎后肝硬化患者血清XCL1、IFN-γ及T细胞亚群的相关性分析

目的探讨XCL1、γ干扰素、T细胞亚群在乙肝病毒所致肝硬化中的水平变化及其临床意义。方法彩色腹部多普勒B超检查肝脏,测量脾脏厚度、门静脉宽度、有无腹水;全自动生化仪检测肝功能;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清XCL1、IFN-γ的水平;流式细胞仪检测T淋巴细胞亚群。结果正常对照组、慢性乙型肝炎组、乙型肝炎肝硬化组XCL1水平分别为(8.29±1.82)ng/mL、(13.18±2.86)ng/mL、(11.86±2.47)ng/mL,IFN-γ水平分别为(19.98±2.92)pg/mL、(37.55±6.15)pg/mL、(31.26±5.44)pg/mL。慢性乙型肝炎组、乙型肝炎肝硬化组血清XCL1、IFN-γ水平显著高于正常对照组血清XCL1、IFN-γ水平(P<0.01);慢性乙型肝炎组血清XCL1、IFN-γ水平显著高于乙型肝炎肝硬化组血清XCL1、IFN-γ水平(P<0.01或0.05);XCL1水平与IFN-γ水平呈正相关(r=0.457,P<0.01);XCL1水平与CD4+T细胞百分比呈负相关(r=-0.339,P<0.01);IFN-γ水平与CD8+T细胞百分比呈正相关(r=0.330,P<0.05)。结论 XCL1通过影响IFN-γ从而导致CD4+T/CD8+T比值失衡,引起肝细胞的慢性炎症参与肝硬化进程。

猪淋巴细胞趋化因子XCL1的电子克隆和编码区序列RT-PCR验证

淋巴细胞趋化因子（XCL1）是C族趋化因子的一员，可由CD8＋T细胞、NK细胞、γδT细胞、肥大细胞等多种细胞产生，其趋化性主要作用于CD8＋T细胞和NK细胞。根据猪的EST数据库中猪XCL1基因序列，设计引物采用RT—PCR的方法从猪胸腺中扩增猪XCL1全基因序列，将其连接到pMD-19T载体上并测序，得到猪XCLl基因（GenBank登录号为EU743945）。猪XCL1cDNA大小为333bp，编码由110个氨基酸残基组成的多肽。该多肽序列含Chemokine-C、Chemokine、Chemokine-CC和SCY等功能域，与羊和人的氨基酸序列相似率分别为81．6％和68．4％。预测分析其为分泌蛋白，信号肽剪切位点在21A和22V。猪XCL1基因定位于猪4号染色体（CU468871），基因结构与人XCL1的相似，都由3个外显子组成。该基因ORF翻译起始处基本符合Kozak规则，ORF起始密码子上游同一相位有终止密码子，ORF后有1个加尾信号，预测得到4个可能的启动子，可能性高达85％～98％。总之，通过电子克隆与试验验证，成功地克隆了猪新基因XCL1。

C型趋化因子XCL1研究进展

C型趋化因子家族唯一成员XCL1,又称淋巴趋化因子,主要由CD8+T细胞和自然杀伤细胞产生.XCL1具有独特的序列特征以及两种可相互转换的蛋白空间构象,使得XCL1有别于其他趋化因子并发挥独特的功能.XCL1特异性受体XCR1是G蛋白偶联受体家族成员,二者相互作用不仅在胸腺的阴性选择和建立自身免疫耐受中发挥重要作用,而且能启动交叉抗原递呈并介导细胞毒性免疫反应.XCL1不仅能调节免疫系统平衡,维持肠道免疫稳态,而且与多种疾病相关,如自身免疫病、肾炎、结核和人类免疫缺陷病毒感染等.近年来证实XCR1选择性地表达在具有抗原递呈能力的CD8+DCs细胞上,引发许多XCL1相关应用研究并取得很好的效果,使得XCL1在黏膜免疫,抗肿瘤免疫治疗和靶向疫苗研制方面具有广阔的应用前景.

猪XCL1蛋白纯化、多克隆抗体的制备及其生物活性鉴定

目的:纯化获得体外表达猪his-XCL1的重组蛋白,制备多克隆抗体并研究其对淋巴细胞增殖的影响。方法:首先,采用HiTrapTM Chelating HP纯化方法,SDS-PAGE检测重组蛋白纯化情况,Western blot检测重组蛋白表达情况。再免疫动物制备多抗血清,双向琼脂扩散试验、间接ELISA检测多克隆抗体效价,MTT法检测猪XCL1对淋巴细胞增殖的影响。结果:当结合缓冲液的浓度为40 mmol/L,洗脱缓冲液500 mmol/L时,SDS-PAGE电泳可观察到有单一目的条带,Western blot显示重组蛋白成功表达,双向琼脂扩散试验证实抗原抗体的结合比为1∶8,间接ELISA检测到抗体水平达到1∶12 800。重组蛋白XCL1能促进淋巴细胞的增殖,而此实验制备的多克隆抗体可以阻断这种效应。结论:体外表达的重组蛋白具有生物活性,制备的多克隆抗体为研究XCL1在猪体中的功能提供科技资料。

固始鸡XCL1基因CDS区克隆与生物信息学分析

本研究旨在克隆鸡淋巴细胞趋化因子(lymphotactin,XCL1)基因CDS区并探索其生物学特性。试验以固始鸡胸腺组织总RNA为模板,采用RT-PCR技术对该基因的CDS区进行扩增和克隆,并通过生物信息学软件进行相关生物信息学分析。结果表明,固始鸡XCL1基因CDS区长294 bp,编码97个氨基酸。相似性分析结果发现,鸡XCL1基因CDS区序列与牛、山羊、绵羊、人、小鼠、猪和大鼠的相似性分别为53.7%、53.0%、52.9%、51.8%、51.1%、50.9%和50.4%。进化树结果表明,鸡作为非哺乳动物,与哺乳动物亲缘关系较远。XCL1蛋白分子式为C_(491)H_(822)N_(150)O_(132)S_(6),理论等电点为10.95,属于碱性蛋白;分子质量为11.13 ku,脂肪系数为102.37,不稳定系数为51.44,属于不稳定蛋白,半衰期为30 h;具有跨膜结构(第5-27位氨基酸)和信号肽区域(第1-18位氨基酸),属于亲水性分泌型蛋白。XCL1蛋白存在8个潜在的磷酸化修饰位点和3个潜在的糖基化修饰位点。XCL1蛋白的二级结构由α-螺旋(35.05%)、β-转角(5.15%)、延伸链(26.80%)和无规则卷曲(32.99%)组成,三级结构预测结果与二级结构一致。亚细胞定位分析表明XCL1蛋白主要在细胞外发挥作用;该蛋白有1个位于第31—88氨基酸残基处的SCY保守性结构域;该蛋白能与OXT、PTAFR、GPR132和XCR1等分子形成互作网络。本试验结果为进一步研究鸡XCL1基因功能提供理论参考。

XCL1/Glypican-3 fusion protein induces potent CD8^+ T-cell generation and enhances the anti-PD1 effect to suspend hepatocellular carcinoma development

Objective:To induce potent CD8^+T-cells against glypican-3(GPC3),which is overexpressed in hepatocellular carcinoma(HCC),to suspend tumor development.Methods:Since the chemokine receptor XCR1 is selectively expressed on professional cross-presenting CD8α^+dendritic cells(DCs).

急性淋巴细胞白血病患儿血清PGRN、XCL1与危险度分层和预后的关系

目的:探讨急性淋巴细胞白血病(ALL)患儿血清颗粒蛋白前体(PGRN)、X-C基序趋化因子配体1(XCL1)与危险度分层和预后的关系。方法:选取2018年1月~2020年1月我院收治的102例ALL患儿为ALL组,根据危险度分层分为低危组27例、中危组42例、高危组33例,根据生存结局分为死亡组和存活组,另选取同期50名于我院体检健康儿童为对照组。采用酶联免疫吸附法检测血清PGRN、XCL1水平。采用多因素Logistic回归分析ALL患儿死亡的影响因素,受试者工作特征(ROC)曲线分析血清PGRN、XCL1水平对ALL患儿死亡的评估价值。结果:与对照组比较,ALL组血清PGRN、XCL1水平升高(P<0.05)。低危组、中危组、高危组血清PGRN、XCL1水平依次升高(P<0.05)。随访2年,102例ALL患儿死亡率为34.31%(35/102)。单因素分析显示,白细胞计数(WBC)、混合谱系白血病(MLL)重排、危险度分层、PGRN、XCL1为ALL患儿死亡的影响因素(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,WBC≥50×10^(9)/L、MLL重排阳性、危险度分层高危和PGRN、XCL1升高为ALL患儿死亡的独立危险因素(P<0.05)。ROC曲线分析显示,血清PGRN联合XCL1评估ALL患儿死亡的曲线下面积(AUC)大于PGRN、XCL1单独评估。结论:ALL患儿血清PGRN、XCL1水平升高,与危险度分层和预后有关,血清PGRN联合XCL1评估ALL患儿预后的价值较高,可能成为ALL患儿预后辅助评估指标。

乙型肝炎患者血清XCL1、IFN-γ与T细胞亚群的关系及临床意义

目的:探讨XCL1、γ干扰素的浓度变化与乙型肝炎慢性化的关系。方法:采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清XCL1、IFN-γ的浓度;流式细胞仪检测T淋巴细胞亚群;时间分辨荧光分析仪检测乙型肝炎抗原/抗体半定量指标;全自动生化仪检测肝功能。结果:(1)随着肝脏炎症程度的加重,血清中XCL1的含量逐渐增加。HBeAg+组与HBeAg-组比较,HBeAg+组血清XCL1浓度显著高于HBeAg-组(P<0.05);HBeAg-组血清IFN-γ浓度显著高于HBeAg+组(P<0.05)。(2)血清XCL1浓度与CD4+T细胞含量呈负相关(r=-0.336,P=0.017),IFN-γ浓度与CD8+T细胞含量呈正相关(r=0.319,P=0.024)。结论:γ干扰素通过影响XCL1的表达促进乙型肝炎慢性化的形成与发展,XCL1参与了乙型肝炎慢性化进程。