恒河猴XC趋化因子受体1(XCR1)基因的克隆和体外表达

目的了解恒河猴XC趋化因子受体1(XCR1)基因特征,并在HEK293T细胞上表达。方法采用反转录PCR和cDNA末端快速扩增法(RACE)克隆恒河猴XCR1基因、并与GenBank中其他物种XCR1的cDNA序列进行比对。构建真核表达载体3.1-XCR1并转染HEK293T细胞,采用流式细胞术、Western blot法和激光扫描共聚焦显微镜技术检测XCR1蛋白的表达。结果恒河猴XCR1 cDNA序列全长1665 bp,包含415 bp的5'非翻译区(5'UTR)、1003 bp的编码区和248 bp的3'UTR;恒河猴XCR1编码区氨基酸序列与人XCR1的相似性为96.8%,而且具有相似的结构特征:含有七次跨膜结构,酸性N端以及保守的G蛋白锚定功能性基序HRYLSVV。与基因组序列比对和跨外显子反转录PCR结果表明,在恒河猴多种组织中只存在缺失第二外显子的剪接变异体。恒河猴XCR1可在HEK293T细胞中表达Mr40 000左右的分子、主要分布于细胞质和细胞膜上。结论除mRNA剪接异构体以外,恒河猴XCR1分子与人高度相似,并且能在HEK293T细胞中有效表达。