凋亡抑制蛋白XIAP基因对A549细胞凋亡和化疗敏感性的影响

背景与目的X连锁凋亡抑制蛋白(X-linked inhibitor of apoptosis protein,XIAP)是新发现的一个IAP家族中的主要成员,是IAP家族中最强的凋亡抑制因子,它可直接抑制caspases并可多途径调节细胞凋亡。XIAP基因在大多数的肿瘤细胞株中过表达,其表达与肿瘤的进展、复发、预后以及肿瘤化疗的耐药密切相关。研究通过RNAi方法下调非小细胞肺癌(NSCLC)细胞NIC-A549的XIAP基因表达后,研究XIAP siRNA特异序列在NSCLC细胞凋亡和化疗敏感性方面的作用。方法应用半定量RT-PCR法检测A549细胞中XIAP mRNA基因的表达,设计并构建XIAP干扰性小RNA(small interfering RNA,siRNA)序列的表达载体,转染siRNA载体至A549中。荧光纤维镜确定转染效率,MTT法测定细胞增殖率及化疗药物对细胞杀伤率,流式细胞仪测定细胞凋亡率。结果酶切和DNA测序证实XIAP siRNA构建成功。荧光纤维镜显示阳性转染组及阴性转染组的细胞转染效率无差异。半定量RT-PCR法示阳性转染组较阴性转染组、未转染组细胞XIAP mRNA表达明显降低;与对照组相比,顺铂对阳性转染组XIAP mRNA表达的抑制作用明显增强、阳性转染组细胞增殖在24h、48h、72h、96h明显受抑制;细胞杀伤率、凋亡率明显增加。结论XIAP基因在NSCLC中表达增高,可抑制NSCLC细胞凋亡,导致NSCLC化疗耐药。XIAP siRNA序列可特异性地抑制NSCLC细胞增长,下调XIAP基因的表达,促进细胞凋亡,增加NSCLC化疗敏感性。XIAP siRNA序列有可能成为NSCLC治疗的靶标。

融合蛋白pTAT-XIAP的原核表达及穿透血脑屏障功能的鉴定

目的构建pTAT-XIAP原核表达载体,以获得pTAT-XIAP融合蛋白,并研究该融合蛋白穿透血脑屏障的功能。方法在体外合成大鼠XIAP基因,将其插入pTAT-HA质粒,构建pTAT-XIAP融合蛋白表达载体,转入大肠杆菌表达菌株BL21plysS进行诱导表达。pTAT-XIAP融合蛋白经Ni-NTA亲和层析纯化,SDS-PAGE及Western印迹鉴定融合蛋白。pTAT-XIAP融合蛋白腹腔注射SD大鼠体内,免疫荧光法检测在脑组织的分布。结果表达产物经SDS-PAGE及Western印迹分析后,在64kD处有一明显表达条带,与理论结果相符。免疫荧光法检测,pTAT-XIAP融合蛋白在大脑皮质、基底节等广泛分布。结论重组融合蛋白pTAT-XIAP成功表达并可穿透血脑屏障,为进一步研究该基因的功能奠定了基础。

pTAT-XIAP融合蛋白表达载体的构建

目的探索pTAT-XIAP融合蛋白表达载体的构建。方法在体外合成大鼠XIAP基因,将其插入pTAT-HA质粒,构建pTAT-XIAP融合蛋白表达载体,将pTAT-XIAP质粒转化至DH5α,培养筛选成功转化子,提取纯化质粒,电泳鉴定。结果pTAT-XIAP质粒在含氨苄青霉素的LB固体培养基上呈分散菌落生长,在无氨苄青霉素的LB固体培养基上成片生长,未经质粒转化的DH5α感受态细胞在含氨苄青霉素的LB固体培养基上未见菌落生长。电泳结果显示pTAT-XIAP质粒约4500bp,pTAT-HA质粒约3000bp,条带大小与质粒图谱一致。结论将大鼠XIAP基因插入PTAT-HA质粒,成功构建pTAT-XIAP融合蛋白表达载体。

安多霖对高功率微波辐照大鼠睾丸生精细胞Caspase-9和XIAP的影响

为探讨安多霖对微波辐射损伤的的防治机制,将SD雄性大鼠按质量随机分为正常对照组、辐照组和预防组(给药量分别为3、6、9 mg/kg)。预防组大鼠连续灌胃给药,对照组和辐照组给予双蒸水,20 d后辐照组和预防组大鼠行100 m W/cm^2的高功率微波(High power-microwave,HPM)全身辐照10 min。于辐照后第1、2、5天取睾丸组织制备病理标本,采用SP免疫组化检测试剂盒标定目的蛋白,Image-pro plus图像分析软件对特定染色区域进行灰度分析和测定。结果显示,辐照组大鼠睾丸细胞Caspase-9水平较对照组呈"高-低-高"的"倒抛物线"形(p<0.05),给药组则随着时间呈现"先低后高"的趋势(p<0.05);对于X连锁凋亡抑制蛋白(X-linked inhibitor of apoptosis protein,XIAP)而言,辐照组与对照组之间的差异不显著,而6、9 mg/kg组在辐照后第5天较辐照组显著升高(p<0.05)。结果提示,Caspase-9参与了HPM致大鼠睾丸细胞凋亡的过程,安多霖对大鼠睾丸细胞的保护作用需要Caspase-9和XIAP的共同参与。

凋亡抑制蛋白XIAP在肝细胞癌中的表达及其对肝细胞癌肝移植患者预后的影响

目的:研究凋亡抑制蛋白XIAP在肝细胞癌中的表达并探讨其对肝细胞癌肝移植患者预后的影响。方法:用免疫组化方法检测组织芯片中192例肝细胞癌及癌旁组织中XIAP的表达,分析其与其他临床病理因素的相关性及对肝细胞癌肝移植患者预后的影响。结果:XIAP在肝细胞癌组织中的阳性表达率高达89.6%,显著高于癌旁组织(45.8%,P=0.000)。以XI-AP表达对肝细胞癌患者肝移植术后生存情况进行分层分析显示,XIAP阳性组3年总体生存率明显低于阴性组(P=0.021),复发率显著高于阴性组(P=0.001)。Cox多因素分析提示XIAP是影响肝细胞癌肝移植术后患者总体生存率的独立预后因素。结论:XIAP在肝细胞癌中阳性表达率较高,XIAP的表达水平是肝细胞癌肝移植患者预后的独立相关因素。

凋亡抑制蛋白XIAP研究进展

X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)是哺乳动物中具有抑制细胞凋亡作用的蛋白,是IAPs家族的一员。XIAP通过杆状病毒IAP重复序列(BIR)直接与起始以及效应caspases结合,抑制了细胞凋亡的线粒体途径,也可以通过NF-kB途径抑制细胞表面受体介导的凋亡。XIAP具有不同于Bcl-2的作用机制,是IAPs家族中最具有抑制活性的一个。XIAP的作用受到线粒体释放的蛋白Smac的拮抗,以及受到自身具有泛素连接酶E3活性的RING指结构域的调节。阐述XIAP抑制caspase以及Smac等拮抗XIAP的机理对于治疗肿瘤以及过度凋亡疾病具有重要的意义。

P21蛋白和XIAP在美伐他汀诱导A549细胞凋亡中的作用

目的研究P21蛋白和凋亡相关基因XIAP在美伐他汀诱导A549细胞凋亡中的作用及其分子机制。方法应用MTT法检测细胞系的增殖作用,流式细胞仪、透射电镜检测细胞周期和凋亡;用流式细胞术、Western blot和RT-PCR检测P21蛋白、XIAP蛋白及P21和XIAP mRNA的表达。结果美伐他汀呈剂量和时间依赖性对A549增殖产生抑制;并诱导A549细胞G0/G1期阻滞和凋亡。美伐他汀对P21 mRNA及P21总蛋白的表达无影响,但可使P21胞膜蛋白的表达下降。美伐他汀作用后XIAP mRNA及XIAP蛋白的表达均下降。加入甲羟戊酸可完全逆转美伐他汀的上述作用。结论美伐他汀通过甲羟戊酸途径抑制A549细胞增殖并诱导凋亡,使细胞周期进程阻滞于G0/G1期,XIAP参与美伐他汀诱导A549细胞凋亡的基因调控。美伐他汀靶向HMG-CoA还原酶,抑制P21蛋白异戊二烯化、阻止P21蛋白与细胞膜的结合,不影响P21总蛋白的表达。

TAT-XIAP融合蛋白对缺血缺氧新生大鼠远期学习记忆能力的影响

目的探讨TAT-XIAP融合蛋白对缺血缺氧性脑损伤(hypoxic ischemic brain damage,HIBD)新生大鼠生后学习记忆能力的影响。方法将出生7 d的SD大鼠,经氯胺酮腹腔静脉注射麻醉后结扎左颈总动脉,建立HIBD动物模型,通过水迷宫实验筛选出学习记忆障碍大鼠20只,分为TAT-XIAP融合蛋白给药组和对照组,每组10只。TAT-XIAP融合蛋白给药组给予TAT-XIAP大鼠尾静脉注射,对照组给予同体积生理盐水大鼠尾静脉注射,4周后应用水迷宫检测大鼠学习记忆能力。结果游泳轨迹路线多在平台所在象限附近,呈趋向型。与对照组对比,TAT-XIAP融合蛋白给药组的逃避潜伏期时间明显缩短(P<0.05);穿越原平台位置的次数和在原平台象限游程、时间百分比均高于对照组(P<0.05)。结论TAT-XIAP融合蛋白可能改善缺血缺氧新生大鼠生后学习记忆能力。

XIAP在鼻咽癌细胞株CNE1、CNE2和5-8F中的表达与研究

目的比较CNE1、CNE2及5-8F鼻咽癌细胞株中X链锁调亡抑制蛋白(XIAP)的表达差异。方法体外培养鼻咽癌细胞株CNE1、CNE2及5-8F,采用RT-PCR法检测CNE1、CNE2及5-8F细胞株中XIAP基因表达情况。结果 XIAP基因在CNE1低表达,而在CNE2和5-8F高表达。结论 XIAP与NPC的恶性程度和转移潜能有关。

结直肠癌组织中XIAP的表达及其意义

目的探讨结直肠癌组织中凋亡抑制蛋白XIAP的表达及其与各临床病理因素的关系。方法应用免疫组织化学染色法以及RT-PCR检测87例结直肠癌组织中XIAP的表达情况。结果结直肠癌、癌旁组织、正常组织中XIAPmRNA表达阳性率分别为64.4%(56/87)、49.4%(43/87)和11.4%(10/87),结直肠癌组织中XIAPmRNA表达阳性率与癌旁组织和正常组织比较均有显著性差异。免疫组化染色显示,87例结直肠癌组织有61例(70.1%)XIAP呈阳性,XIAP表达在不同病理分级之间差异有显著性(P=0.014),在不同的临床分期、肿瘤部位、淋巴结转移之间的差异无显著性。结论XIAP在结直肠癌中的高表达与结直肠癌的发生可能有关,其是一种具有潜在价值的结直肠癌肿瘤标志物。

XIAP抑制剂的研究进展

凋亡抑制蛋白(XIAP)被认为是凋亡抑制蛋白家族中对细胞凋亡抑制作用最强的蛋白,研究发现,它在许多肿瘤细胞中有过量表达,其作用机制是XIAP对执行凋亡的caspase家族蛋白产生抑制作用。近年来,XIAP小分子抑制剂研究越来越受到人们的重视。该文对XIAP抑制剂的研究进行综述。

非小细胞肺癌XIAP和Smac的表达与临床病理特征及预后的关系

目的:探讨XIAP(X-linked inhibitor of apoptosis protein,XIAP)和Smac(second mitochondria-derived activator of cas-pase,Smac)在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织中的表达与临床病理特征及预后的关系。方法:采用免疫组织化学法检测70例非小细胞肺癌组织及70例对应癌旁肺组织中XIAP、Smac的表达。结果:XIAP在70例NSCLC组织中有59例阳性表达,其中高表达16例;对应70例癌旁肺组织中有52例表达,其中高表达5例,两组XIAP表达强度比较差异有统计学意义(Z=-4.049,P<0.001);Smac在70例肺癌组织中有63例阳性表达,其中高(强阳性)表达32例;对应70例癌旁肺组织有53例表达,其中高(强阳性)表达5例,两组Smac表达强度比较差异有统计学意义(Z=-5.484,P<0.001)。NSCLC组织中XIAP、Smac的表达与患者的性别、年龄、肿瘤大小、组织类型、分化程度、吸烟与否等无明显关系(P>0.05);但二者的表达均与临床分期、淋巴结转移与否有关系(P<0.05)。通过Kaplan-Meier法分析得出,XIAP和Smac在NSCLC中的表达与患者的预后均无明显关系(P>0.05)。结论:1)XIAP和Smac在非小细胞肺癌组织及其对应癌旁肺组织中均有表达,但存在表达量的差异。2)XIAP和Smac在非小细胞肺癌中的表达与患者的预后均无显著关系。

XIAP、XAF1、TNF-α在子宫内膜异位症发病机制中的作用

目的:探讨X染色体连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)及相关因子1(XAF1)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在子宫内膜异位症(EMT)发病机制中的作用。方法:2007年6月～2008年4月行腹腔镜下子宫内膜异位囊肿剥除术患者65例(研究组),同期因输卵管因素不孕行腹腔镜手术治疗的患者55例(对照组),均刮取子宫内膜,利用流式细胞仪检测细胞凋亡率;免疫组化检测在位及异位子宫内膜组织中XIAP和XAF1的表达;ELISA检测两组患者腹水中TNF-α浓度。结果:①对照组分泌期细胞凋亡率(7.38±0.76%)高于增生期(4.66±1.14%)(P<0.05);研究组在位和异位内膜增生期与分泌期细胞凋亡率均无周期变化,异位内膜低于在位内膜(P<0.05),在位内膜低于正常内膜(P<0.05)。②对照组和研究组在位内膜中XIAP的表达,增生期均高于分泌期(P<0.05),在研究组异位内膜中表达无周期变化。③XAF1的表达,对照组和研究组在位内膜组织中分泌期XAF1表达高于增生期(P<0.05),研究组异位内膜增生期和分泌期XAF1的表达无差异(P>0.05)。④研究组和对照组增生期与分泌期腹水中TNF-α浓度无差异(P>0.05),研究组高于对照组(P<0.05)。⑤XIAP与XAF1表达呈负相关,XAF1的表达与TNF-α水平呈正相关(P<0.05)。结论:在EMT中凋亡抑制因子表达增强,凋亡促进因子表达减弱,可能对异位内膜种植起促进作用,但TNF-α水平升高通过增强XAF1活性,在一定程度上限制了异位内膜的无限制生长,使其表现为良性疾病。

XIAP及PCNA表达水平与非小细胞肺癌患者临床分期及预后的关系

目的探讨X染色体连锁的凋亡抑制蛋白(XIAP)及增殖细胞核抗原(PCNA)表达与非小细胞肺癌患者临床分期及预后的关系。方法以本院2012年1月至2016年12月收治的260例非小细胞肺癌患者为研究对象,分析患者血清中XIAP及PCNA表达水平与非小细胞肺癌患者临床分期及预后的关系。结果 XIAP、cyclin D1、Smac、PCNA、E-cadherin、Ki67、CD34、VEGF及EGFR表达水平与非小细胞肺癌临床分期密切相关,且随着临床分期增高,上述蛋白表达水平升高(P<0.05);XIAP及PCNA表达水平与非小细胞肺癌患者预后呈负相关,即非小细胞肺癌患者XIAP及PCNA表达水平越高,预后越差(P<0.05)。结论 XIAP及PCNA蛋白与非小细胞肺癌患者临床分期及预后有关。

XIAP及其相关因子1在急性淋巴细胞白血病中表达意义

目的:探讨X染色体连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)及其相关因子(XAF1)在急性淋巴细胞白血病(ALL)中的表达及其临床意义,并评估其在临床治疗及预后中的价值。方法:采用病例对照研究,应用实时荧光定量聚合酶链反应(RQ-PCR)检测85例ALL患者骨髓标本中XIAP及XAF1的mRNA表达水平。结果:XIAP mRNA表达水平初诊ALL组高于CR组和对照组(P<0.05),而低于复发组(P<0.05),CR组表达水平高于对照组(P<0.05);而XAF1在ALL时呈低表达或不表达,CR组表达高于ALL其它组(P<0.05),与对照组差异无统计学意义(P>0.05)。XIAP及XAF1二基因表达水平在T系ALL与B系ALL,成人与儿童,男女性别之间表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。XIAP/XAF1比值在ALL患者中初诊组和复发组明显高于对照组和缓解组(P<0.05),缓解组高于对照组(P<0.05)。结论:ALL患者XIAP基因高表达,而XAF1呈现低表达或不表达,提示XIAP可能通过抑制白血病细胞凋亡参与了ALL的发生发展,并与预后不良及治疗反应相关。ALL中XIAP与XAF1表达水平的不平衡,可能是ALL预后不良及复发的一项重要因素之一。抑制XIAP及上调XAF1基因来治疗ALL,将为ALL的基因治疗提供新思路。

XIAP、P53和Ki67在甲状腺乳头状癌中的表达及相互关系

目的探讨XIAP、P53和Ki67在甲状腺乳头状癌组织中的表达及相互关系。方法采用免疫组化SP法检测35例甲状腺乳头状癌和28例甲状腺腺瘤组织中XIAP、P53和Ki67的表达情况。结果 XIAP、P53和Ki67在甲状腺乳头状癌组织中表达阳性率分别为94.29%、85.71%和65.71%,与甲状腺腺瘤(50.00%、14.29%、7.14%)比较差异有统计学意义(P<0.01)。P53和Ki67的表达与XIAP的表达无相关性(r值分别为0.05177和0.02457,P均>0.05)。P53和Ki67在甲状腺乳头状癌组织中的表达与性别、年龄、结节数量、肿瘤大小无关(P>0.05),XIAP表达女性高于男性。结论 XIAP、P53和Ki67在甲状腺乳头状癌组织中表达增高,XIAP、P53和Ki67表达无相关关系。

消瘤1号通过影响XIAP表达诱导MCF-7人乳腺癌细胞凋亡

目的探讨中成药消瘤1号诱导MCF-7人乳腺癌细胞的凋亡作用,并通过分析其作用后的MCF-7细胞XIAP蛋白表达的变化,探讨其诱导MCF-7细胞凋亡的分子机制。方法采用细胞培养技术,用不同浓度药物处理MCF-7细胞24、48、72 h,用CCK-8法检测药物对细胞增殖的影响;用HE染色细胞,观察细胞形态变化;采用Western blot法检测XIAP和caspase-3表达。结果消瘤1号处理MCF-7细胞24 h,随着药物浓度增加,作用时间延长,细胞增殖速度减慢;细胞经染色后,与对照组相比,经药物处理后的细胞核出现皱缩,细胞膜褶皱、卷曲和破碎,提示凋亡细胞的增多。Western blot检测结果表明,消瘤1号通过下调XIAP,上调caspase-3蛋白表达诱导乳腺癌细胞的凋亡,并且呈浓度依赖性。结论消瘤1号能够通过XIAP直接抑制凋亡效应分子caspase-3的活性,促进MCF-7细胞凋亡,抑制细胞增殖。

前列腺癌基因治疗XIAP-shRNA表达载体的构建及鉴定

目的为了研究X连锁凋亡抑制蛋白(X-linked inhibitor of apoptosis protein,XIAP)对前列腺癌的作用,构建靶向XIAP基因的小发夹RNA(small hairpin RNA,shRNA)表达载体.方法设计3对针对XIAP基因不同位点的shRNA片段,构建携带此shRNA片段的真核表达载体pGPU6/GFP/Neo-XIAP,分别命名为XIAP-shRNA1、XIAP-shRNA2和XIAP-shRNA3,进行酶切及测序鉴定.通过脂质体转染人前列腺癌细胞株DU145,并优化转染率.结果测序证明干扰序列完全正确,当质粒与脂质体比例1μg:2μl时转染率最高.结论成功构建重组质粒pGPU6/GFP/Neo-XIAP,为进一步研究XIAP基因在前列腺癌基因治疗奠定了基础.

凋亡抑制蛋白在TRAIL诱导胃癌细胞凋亡中的作用

目的探讨凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis pro-teins,IAP)在调节胃癌细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)敏感性方面的作用。方法 PI染色流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测caspase-3、PARP、XIAP、Survivin、cIAP1和cIAP2的表达。结果 TRAIL能诱导胃癌细胞凋亡,BGC-823细胞较SGC-7901细胞对TRAIL更敏感。caspase-3的活化及PARP的裂解在TRAIL作用早期即出现,且BGC-823细胞较SGC-7901细胞发生得更快。4种IAP蛋白在两株胃癌细胞中都组成性地高表达,Survivin和cIAP1在TRAIL处理前后无变化。而XIAP在BGC-823细胞中明显下降,在SGC-7901细胞中无改变。cIAP2在TRAIL作用后两株细胞中均有所降低。结论 TRAIL诱导胃癌细胞凋亡可能在活化的caspase-3水平受调控,XIAP能保护胃癌细胞免于凋亡。

紫杉醇联合奥沙利铂对非小细胞肺癌模型小鼠的治疗作用

目的观察紫杉醇联合奥沙利铂对荷瘤裸鼠非小细胞肺癌治疗效果以及对PDCD5和XIAP表达的影响。方法制备裸鼠肺癌荷瘤模型,将荷瘤小鼠随机分为空白组、0.9%氯化钠溶液组、奥沙利铂组、紫杉醇组和紫杉醇联合奥沙利铂组;q-PCR检测各组PDCD5和XIAP基因表达水平;Western bolt分析各组PDCD5和XIAP蛋白表达情况;对比分析各组肿瘤组织重量。结果紫杉醇联合奥沙利铂组PDCD5 mRNA表达水平最高(P<0.01),XIAP mRNA表达水平最低(P<0.01);紫杉醇联合奥沙利铂组PDCD5蛋白表达最高(P<0.01),XIAP蛋白表达最低(P<0.01);对比各分组肿瘤组织重量,紫杉醇联合奥沙利铂组肿瘤质量最小(P<0.01)。结论紫杉醇联合奥沙利铂化疗能显著增加PDCD5表达和降低XIAP表达,能使已发生的非小细胞肺癌组织质量显著减少。