转录因子ETS1激活长链非编码RNA XIST促进胶质瘤细胞增殖

目的探讨ETS原癌基因1(ETS1)在胶质瘤中的生物学功能及其下游机制。方法生物信息学和免疫组织化学分析ETS1在胶质瘤组织中的表达;实时定量PCR(qRT-PCR)检测ETS1 mRNA和长链非编码RNA(lncRNA)X染色体失活特异转录本(XIST)的表达水平。CCK-8和5-乙炔基-2'-脱氧尿苷摄入实验检测细胞增殖。Western blot检测凋亡相关蛋白(Bax、Bak、Bcl-2)的表达。PROMO数据库预测ETS1与XIST启动子的结合位点。双荧光素酶报告基因实验和染色质免疫共沉淀-PCR用于验证ETS1与XIST启动子区域的结合关系。cBioPortal数据库分析ETS1 mRNA与lncRNA XIST在胶质瘤组织中表达的相关性。结果ETS1 mRNA和蛋白的表达水平在胶质瘤中显著上调(P<0.05)。敲低ETS1可显著抑制胶质瘤细胞增殖(P<0.05)并促进细胞凋亡(P<0.05)。ETS1可靶向结合XIST并促进XIST的表达(P<0.05),过表达XIST可逆转敲低ETS1对胶质瘤细胞增殖的抑制作用(P<0.05)以及对细胞凋亡的促进作用(P<0.05)。结论ETS1在胶质瘤组织中高表达,其可能通过促进lncRNA XIST高表达而减少细胞凋亡和促进胶质瘤细胞增殖。

沉默lncRNA XIST对阿霉素诱导的扩张型心肌病的影响及其机制

目的 探究长链非编码RNA X-无活性特异性转录物(lncRNA XIST)对阿霉素诱导的扩张型心肌病(DCM)大鼠心肌纤维化和心肌细胞凋亡的影响及其机制。方法 采用阿霉素诱导法建立DCM大鼠模型,将DCM大鼠分为模型组、sh-NC组和sh-XIST组,每组10只;另取10只健康SD大鼠设为对照组。采用超声影像系统检测各组大鼠心脏功能指数左室收缩末期内径(LVESD)、左室舒张末期内径(LVEDD)和左室射血分数(LVEF),采用苏木素伊红染色和Masson三色染色检测大鼠心肌组织病理学变化,TUNEL检测大鼠心肌细胞凋亡水平。采用阿霉素诱导H9c2细胞系构建DCM细胞模型,将DCM细胞分为模型组、sh-NC组、sh-XIST组、sh-XIST+miR-NC组和sh-XIST+miR-149-5p inhibitor组,未经阿霉素处理的H9c2细胞作为对照组。采用双荧光素酶报告试验分析XIST、miR-149-5p和血小板源性生长因子C(PDGFC)的靶向关系。采用流式细胞术检测心肌细胞凋亡水平。采用RT-qPCR检测大鼠心肌组织和H9c2细胞中XIST、miR-149-5p和PDGFC表达水平。采用Western blot检测大鼠心肌组织和H9c2细胞中PDGFC、α-SMA、collagenⅠ和TGF-β1表达水平。结果 (1)与sh-NC组比较,sh-XIST组大鼠心肌组织中XIST水平及PDGFC的mRNA和蛋白水平均降低(P<0.01),LVESD、LVEDD、TUNEL阳性细胞率以及α-SMA、collagenⅠ和TGF-β1蛋白水平均降低(P<0.05),miR-149-5p水平和LVEF水平均升高(P<0.01);心肌细胞坏死和组织纤维化均减少。(2)与sh-NC组比较,sh-XIST组H9c2细胞凋亡率、XIST水平、PDGFC mRNA和蛋白水平以及α-SMA、collagenⅠ和TGF-β1蛋白水平均降低(P<0.05),miR-149-5p表达水平升高(P<0.05)。与sh-XIST+miR-NC组比较,sh-XIST+miR-149-5p inhibitor组H9c2细胞凋亡率、PDGFC mRNA和蛋白水平以及α-SMA、collagenⅠ和TGF-β1蛋白水平均升高(P<0.05),miR-149-5p表达水平降低(P<0.05)。结论 沉默lncRNA XIST通过上调miR-149-5p表达和抑制PDGFC表达,进而抑制阿霉素诱导的DCM大鼠心肌纤维化和心肌细胞凋亡水平,从而改善DCM的发展。

RNA XIST、mir-130b-3p在乳腺癌组织中的表达及与其预后相关性

目的 探讨RNA XIST、mir-130b-3p在乳腺癌组织中的表达及与其临床病理特征及预后的相关性。方法选择120例乳腺癌患者,收集其癌组织和癌旁正常组织,采用免疫组化染色法测定RNA XIST、mir-130b-3p水平及其与乳腺癌临床病理学特征的关系;从治疗起对所有患者随访60个月,记录总生存率,并建立Logistic多元回归方程分析乳腺癌患者死亡高危因素。结果 RNA XIST在乳腺癌组织中表达量高于癌旁正常组织(P<0.05),mir-130b-3p在乳腺癌组织的表达量低于癌旁正常组织(P<0.05);RNA XIST与mir-130b-3p在乳腺癌组织中表达呈显著负相关关系(P<0.05);RNA XIST、mir-130b-3p表达量与患者年龄、肿瘤直径、肿瘤分期、淋巴结转移、分化程度显著相关(P<0.05);所有患者均从治疗起随访60个月,6例于治疗后24~36个月复发,8例全身转移,54例死亡,存活患者RNA XIST表达量低于死亡患者(P<0.05)、mir-130b-3p表达量高于死亡患者(P<0.05);年龄≥55岁、肿瘤直径>5 cm、肿瘤Ⅲ~Ⅳ期、淋巴结转移、RNA XIST高表达、mir-130b-3p低表达为乳腺癌患者死亡危险因素(P<0.05)。结论 RNA XIST、mir-130b-3p与乳腺癌患者预后显著相关,且两者在癌细胞中的表达量呈负相关关系,可对其进行监测作为早期筛查乳腺癌生物标志物和治疗靶点。

LncRNA XIST和miR-101-3p在SLE患者外周血单核细胞中的表达及临床应用价值

目的分析长链非编码RNA(Lnc RNA)X染色体失活特异转录本(XIST)和微小RNA-101-3p(mi R-101-3p)在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单核细胞中的表达及临床应用价值。方法选取2019年4月至2021年10月在新乡市中心医院治疗的180例SLE患者作为观察组,选择同期180例健康体检者作为对照组。根据SLE疾病活动指数(SLEDAI)评分将观察组分为稳定期组80例和活动期组100例。采用实时荧光定量聚合酶链反应(q RT-PCR)法对患者外周血单核细胞中Lnc RNA XIST、mi R-101-3p的相对表达水平进行检测。分析Lnc RNA XIST与mi R-101-3p的相关性以及二者与SLEDAI评分的相关性;对影响SLE的因素进行logistic回归分析;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析Lnc RNA XIST、mi R-101-3p的表达对SLE的诊断价值。结果与对照组相比,观察组患者外周血单核细胞Lnc RNA XIST水平升高,mi R-101-3p水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05);活动期组患者较稳定期组外周血单核细胞中Lnc RNA XIST水平升高,mi R-101-3p水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05);患者外周血单核细胞Lnc RNA XIST与mi R-101-3p水平呈负相关(r=-0.410,P<0.05);Lnc RNA XIST水平与SLEDAI评分呈正相关(r=0.425,P<0.05),mi R-101-3p水平与SLEDAI评分呈负相关(r=-0.454,P<0.05);logistic回归分析显示,Lnc RNA XIST是影响SLE的危险因素(P<0.05),mi R-101-3p是影响SLE的保护因素(P<0.05);Lnc RNA XIST、mi R-101-3p联合诊断SLE的ROC曲线下面积为0.960,均优于其各自单独诊断(Z_(二者联合-Ln-c RNA XIST)=3.268,P=0.001;Z_(二者联合-mi R-101-3p)=2.584,P=0.005)。结论SLE患者外周血单核细胞Lnc RNA XIST水平升高,mi R-101-3p水平降低,与SLE疾病活动性有关,对SLE具有一定的诊断价值。

LncRNA XIST靶向miR-543对胶质瘤细胞增殖凋亡的作用机制研究

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)XIST通过miR-543对胶质瘤细胞增殖凋亡的作用及机制。方法RT-PCR检测胶质瘤细胞株U251、T98G、U87-MG、A172、SW1783中XIST表达水平及si-XIST转染U251细胞后XIST与miR-543表达;在胶质瘤细胞U251中敲低XIST后,MTT法、流式细胞术检测胶质瘤细胞的增殖和凋亡情况;用双荧光素酶报告基因验证LncRNA XIST与miR-543的靶向关系。结果XIST在U251细胞中表达水平(0.79±0.08)最高,故以U251细胞进行后续实验;与XIST组[(2.35±0.17)、(0.37±0.05)]相比,si-XIST组U251细胞XIST表达水平(0.25±0.19)较低,miR-543表达水平(3.15±0.36)较高(P<0.05);与XIST组[(0.57±0.09)、(0.81±0.01)、(1.15±0.04)]相比,si-XIST组胶质瘤U251细胞A570在24、48、72 h[(0.22±0.02)、(0.31±0.03)、(0.55±0.04)]明显降低(P<0.05)。与XIST组(1.12±0.56)%相比,si-XIST组细胞凋亡率(35.64±4.31)%较高(P<0.05)。共转染XIST-wt和miR-543处理组中相对荧光素酶活性显著下降[(1.15±0.22)vs(0.22±0.03)](P<0.05)。结论干扰LncRNA XIST可通过靶向负调控miR-543表达,抑制胶质瘤细胞增殖、诱导细胞凋亡。

炙马钱子胶囊抑制BIPN的临床疗效及基于lncRNA ZFAS1(XIST)活化FAK信号通路抑制神经炎症的机制

[目的]评估炙马钱子胶囊医治硼替佐米相关性周围神经病(bortezomib induced peripheral neuropathy,BIPN)的有效性,初步探究其基于长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)X失活特异性转录本(X inactive specific transcript,XIST)/锌指结构反义转录本1(ZNFX1 antisense RNA 1,ZFAS1)干预BIPN的机制。[方法]通过前瞻性非随机对照的研究方法,共收集20例符合多发性骨髓瘤中西医诊断并接受硼替佐米(bortezomib,BTZ)治疗而且发生BIPN接受炙马钱子胶囊治疗的患者,与未接受马钱子治疗的患者进行中医症候积分、神经毒性评分、周围神经病变(peripheral neuropathy,PN)分级、部分周围神经传导速度的比较。通过自身对照,采集治疗组患者的外周血液样本,使用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测炎症相关因子表达。培养DRG 50B11细胞,通过细胞增殖毒性检测筛选马钱子最佳作用浓度和时间及BTZ最佳作用时间,随机分为正常对照组、BTZ组、马钱子+BTZ组,以实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time quantitative polymerase chain reaction,Real-time qPCR)检测炎症相关因子及细胞总RNA相关指标表达,分析差异性及相关性。[结果]临床研究显示,与对照组比较,患者治疗后PN、中医证候积分、神经毒性评分降低,周围神经传导速度增加(P<0.05),无明显不良反应。实验研究显示,与治疗前比较,白细胞介素-17(interleukin-17,IL-17)、IL-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、神经生长因子(nerve growth factor,NGF)、脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)表达均降低(P<0.05),且与时间存在显著负相关性(P<0.01)。与BTZ组比较,马钱子+BTZ组IL-17、TNF-α、IL-1β、IL-6、NGF、BDNF、lncRNA XIST、纤维粘连蛋白1(fibronectin 1,FN1)、磷酸化局部黏着斑激酶(phospho-focal adhesion kinase,p-FAK)表达降低(P<0.05),miR-96-5P、miR-1271-5P表达升高(P<0.05),lncRNA ZFAS1表达量差异无统计学意义(P>0.05);lncRNA XIST表达与IL-17、TNF-α、IL-1β、IL-6、NGF、BDNF、FN1、p-FAK表达显著正相关(P<0.01),与miR-96-5P存在中等负相关性(P<0.05),与miR-1271-5P存在极弱相关或无相关性(P>0.05)。[结论]炙马钱子胶囊在一定程度上可缓解BIPN且较为安全,其机制可能与调控lncRNA XIST,促进miR-96-5P/FN1表达,抑制p-FAK介导的神经炎症有关。

宫颈癌患者血清lncRNA XIST的表达及其意义

目的探讨血清长链非编码RNA(lncRNA)XIST在宫颈癌辅助诊断中应用的可能性。方法选取2018年12月至2019年12月南通大学附属肿瘤医院的92例初诊宫颈癌患者,60例宫颈上皮内瘤变(CIN)患者,38例子宫良性病变(子宫肌瘤、宫颈炎症)患者及54例体检健康者作为研究对象。分别用化学发光法和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组标本血清糖类抗原125(CA125)、人鳞状细胞癌相关抗原(SCCAg)水平和血清lncRNA XIST相对表达水平并进行方法学评价。分析血清lncRNA XIST相对表达水平与临床病理参数间的关系,并用受试者工作特征曲线评价血清lncRNA XIST、CA125、SCCAg单独与联合检测的诊断效能。结果宫颈癌组、CIN组、良性病变组血清lncRNA XIST相对表达水平高于对照组(P<0.01);宫颈癌组血清lncRNA XIST相对表达水平高于CIN组及良性病变组(P<0.01);CIN组与良性病变组血清lncRNA XIST相对表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。不同年龄、绝经状态、肿瘤FIGO分期、淋巴结转移宫颈癌患者血清lncRNA XIST相对表达水平比较差异有统计学意义(P<0.05),不同肿瘤最大径宫颈癌患者血清lncRNA XIST相对表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。lncRNA XIST鉴别宫颈癌患者与健康者的曲线下面积大于CA125、SCCAg单项检测,且其灵敏度达90.21%,优于SCCAg、CA125单项检测,两两联合和三者联合时灵敏度均得到提高,三者联合时最高达98.91%。宫颈癌患者血清lncRNA XIST相对表达水平与CA125、SCCAg水平均无相关性(P>0.05)。结论血清lncRNA XIST可以作为一种新的生物学标志物,用于宫颈癌的早期筛查;其相对表达水平可作为宫颈癌与CIN及子宫良性病变的辅助鉴别指标。

右美托咪定预处理通过XIST/miR-125a/DRAM2轴预防大鼠心肌缺血再灌注损伤

目的探讨右美托咪定(dexmedetomidine,Dex)预处理通过XIST/miR-125a/DRAM2轴对大鼠心肌缺血再灌注损伤(myocardical ischemia-reperfusion injury,MI/RI)的影响。方法体内实验将45只大鼠随机分为假手术组、MI/RI组、Dex组;采用结扎冠状动脉左前降支法建立MI/RI大鼠模型;Dex组缺血前给予静脉注射5μg/kg Dex预处理;体外实验以H9C2心肌细胞为研究对象,分为空白组、H/R组、Dex组、Dex+pcDNA3.1 NC组、Dex+pcDNA3.1 XIST组;通过缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)构建MI/RI体外细胞模型;通过qRT-PCR技术检测体内外实验各组中XIST、miR-125a、DRAM2的mRNA表达水平;通过免疫印迹技术检测体内外实验各组中DRAM2的蛋白表达水平;通过HE染色检测大鼠心肌组织病理学变化和心肌梗死面积;通过ELISA技术检测各组大鼠血清中肌酸激酶同工酶(creatine kinase isoenzyme,CK-MB)、肌钙蛋白I(cTnI)含量;通过丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)检测试剂盒考察细胞上清液中MDA和SOD的浓度;通过双荧光素酶报告基因系统考察XIST、miR-125a的靶向关系。结果在体内实验中,与假手术组相比,MI/RI组梗死面积、CK-MB、cTnI含量、XIST、DRAM2表达均显著上调(P<0.05),而miR-125a的显著下调(P<0.05);此外,与MI/RI组相比,Dex组梗死面积、CK-MB、cTnI含量、XIST、DRAM2表达均显著下调(P<0.05),miR-125a表达显著上调(P<0.05);在体外实验中,与对照组相比,H/R组MDA含量、细胞凋亡率、XIST、DRAM2表达均显著上调(P<0.05),SOD含量、miR-125a表达均显著下调(P<0.05);与H/R组相比,Dex组MDA含量、细胞凋亡率、XIST、DRAM2表达均显著下调(P<0.05),SOD含量、miR-125a表达均显著上调(P<0.05);过表达XIST逆转了Dex对MIRI体外细胞模型的保护作用(P<0.05)。结论Dex预处理可以改善MIRI大鼠症状,抑制心肌细胞氧化应激损伤及细胞凋亡,可能与调控XIST/miR-125a/DRAM2轴有关。

LncRNA XIST沉默对非酒精性脂肪肝小鼠T细胞免疫功能的作用机制

目的探讨长链非编码RNA XIST(LncRNA XIST)调节微小RNA-137-3p(miR-137-3p)/Krüppel样转录因子2(KLF2)轴对非酒精性脂肪肝(NAFLD)小鼠T细胞免疫功能的影响。方法建立NAFLD小鼠模型,检测脾脏CD4+T、CD8+T细胞及细胞中LncRNA XIST表达,将CD4+T细胞分为si-NC组、si-XIST组、si-XIST+anti-NC组及si-XIST+anti-miR-137-3p组,分别检测LncRNA XIST、miR-137-3p和KLF2表达水平、细胞增殖与凋亡;将各组转染的CD4+T细胞与人肝细胞HL-7702共培养,分别检测TGF-β1、IL-10、IFN-γ、IL-17水平及Th17、Treg细胞比例;双荧光素酶报告基因实验验证LncRNA XIST、KLF2与miR-137-3p靶向关系。结果NAFLD组小鼠CD4+T细胞比例显著升高,CD8+T细胞比例显著降低(P<0.05),且LncRNA XIST在CD4+T细胞中表达水平显著升高(P<0.05);抑制LncRNA XIST表达可显著抑制CD4+T细胞增殖,诱导细胞凋亡,诱导CD4+T细胞TGF-β1、IL-10分泌,抑制IFN-γ、IL-17水平,升高Treg细胞比例,降低Th17细胞比例;抑制miR-137-3p表达可逆转抑制LncRNA XIST表达对CD4+T细胞的影响;双荧光素酶报告基因实验证实,LncRNA XIST可调控miR-137-3p表达,KLF2是miR-137-3p下游靶点。结论LncRNA XIST在NAFLD小鼠CD4+T细胞中表达水平升高,抑制LncRNA XIST表达可通过调节miR-137-3p/KLF2信号轴,调节炎性因子分泌,升高Treg细胞比例,降低Th17细胞比例。

血清lncRNA XIST和miRNA-130a表达与脓毒症患者病情严重程度及患者预后的关系

目的研究脓毒症患者血清长非编码RNA X非活性特异性转录本(lncRNA XIST)和微小RNA(miRNA)-130a表达与脓毒症患者病情严重程度及预后的关系,以探究其临床意义。方法选取2021年1月至2022年12月西安国际医学中心医院收治的脓毒症患者73例作为研究对象,根据症状严重程度分为脓毒症组(52例)和脓毒性休克组(21例),另选取30例同时期在该院接受体检的健康者作为对照组。采用反转录聚合酶链反应检测血清lncRNA XIST和miRNA-130a表达水平,全自动生化仪检测C反应蛋白、白细胞计数、降钙素原、乳酸水平,并记录序贯器官衰竭(SOFA)评分、急性生理与慢性健康(APACHEⅡ)评分,采用多因素Logistic回归进行危险因素分析;采用受试者工作特征(ROC)曲线评价血清lncRNA XIST和miRNA-130a表达水平对脓毒症的预测价值。结果与对照组比较,脓毒症组和脓毒性休克组血清lncRNA XIST表达水平均升高,且脓毒性休克组高于脓毒症组,差异均有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,脓毒症组和脓毒性休克组血清miRNA-130a表达水平均降低,且脓毒性休克组低于脓毒症组,差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,脓毒性休克、SOFA评分≥7.85分、APACHEⅡ评分≥19.55分、lncRNA XIST表达水平升高、miRNA-130a表达水平降低是脓毒症患者预后情况的独立危险因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清lncRNA XIST和miRNA-130a联合诊断ROC曲线下面积大于各项指标单独检测,诊断价值理想。结论lncRNA XIST在脓毒症患者血清中表达明显增加,miRNA-130a在脓毒症患者血清中表达明显下降,两者联合诊断灵敏度和特异性更高,对预测脓毒症发生具有一定临床参考意义。

LncRNA XIST通过miR-20a-5p/HMGA2轴调控乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的机制

目的 探讨LncRNA XIST对乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响及机制。方法 选取正常乳腺上皮细胞MCF-10A及乳腺癌细胞系MCF-7、T47D和Bcap-37细胞,将不同物质转染至MCF-7、T47D细胞,设为空白组(无转染)、si-XIST组(转染si-XIST)、si-NC组(转染si-NC)、微小RNA-20a-5p(miR-20a-5p)组(转染miR-20a-5p mimics)及miR-NC组(转染miR-NC)。CCK-8检测细胞增殖能力;Transwell检测细胞侵袭能力;划痕实验检测细胞迁移能力;TUNEL染色检测细胞凋亡。采用荧光素酶报告基因实验验证LncRNA XIST与miR-20a-5p及miR-20a-5p与高迁移率族蛋白A2(HMGA2)的靶向关系。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测LncRNA XIST、miR-20a-5p的表达水平。采用Western blot检测HMGA2的表达水平。结果 与MCF-10A细胞比较,MCF-7、T47D和Bcap-37细胞中LncRNA XIST表达水平升高,miR-20a-5p表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。下调LncRNA XIST或上调miR-20a-5p抑制乳腺癌细胞增殖、侵袭及迁移,促进细胞凋亡(P<0.05)。LncRNA XIST负性调控miR-20a-5p, miR-20a-5p负性调控HMGA2。结论 下调LncRNA XIST通过miR-20a-5p/HMGA2轴抑制乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡。

类风湿关节炎患者血清外泌体长链非编码RNA Hotair和XIST的表达及意义

目的 研究类风湿关节炎(RA)患者血清来源外泌体中长链非编码RNA (lncRNA)Hotair、XIST、H19和MALAT1的表达水平,分析与RA患者炎症参数的相关关系,探讨其对RA的临床诊断价值。方法 收集70例RA患者为疾病组,同期就诊的40例系统性红斑狼疮(SLE)患者为疾病对照组,40例体检健康者为健康对照组(HC)。收集3组研究对象血清并提取外泌体,通过纳米粒径追踪仪检测外泌体浓度,采用实时定量PCR(RT-qPCR)法检测外泌体中lncRNA Hotair、XIST、H19和MALAT1的表达水平。采用Spearman秩相关分析Hotair、XIST与RA患者红细胞沉降率(ESR)、C-反应蛋白(CRP)和疾病活动评分-28(DAS-28)的相关性。绘制ROC曲线分析Hotair、XIST对RA患者的诊断价值。结果 与健康对照组相比,RA组和SLE组外泌体浓度显著升高(P<0.05),RA组与SLE组之间无显著差异(P>0.05)。血清外泌体lncRNA H19和MALAT1表达水平在3组间差异无统计学意义(P>0.05);lncRNA Hotair和XIST在RA组表达水平较SLE组和健康对照组显著增加(P<0.001),并且两者的表达水平与RA患者ESR、CRP、DAS-28具有正相关关系(P<0.05),诊断RA的ROC曲线下面积(AUCROC)分别为0.84(95%CI=0.78~0.90,P<0.001)和0.76(95%CI=0.68~0.83,P<0.001)。结论 血清外泌体来源lncRNA Hotair和XIST在RA患者中表达显著性升高,与血清ESR、CRP、DAS-28存在正相关关系,提示外泌体来源LncRNAHotair和XIST可作为诊断RA的潜在生物学标志物。

利用CRISPR／Cas9系统建立Xist基因敲除猪模型

体细胞核移植技术在家畜良种繁育、基因修饰动物生产、濒危动物的拯救和人类疾病的治疗等领域具有重要的应用价值,但目前克隆动物生产效率较低,平均不超过5%。低下的克隆效率极大地限制了该技术的快速发展。在影响克隆猪生产效率的诸多因素中,X染色体的异常失活是导致克隆效率低下的重要原因,而与X染色体失活密切相关的一个重要基因是Xist基因,这表明Xist基因可能直接或间接地影响猪的克隆效率。本文以CRISPR/Cas系统为基础,在Xist基因上设计5个CRISPR/Cas系统打靶位点,并筛选出有效的Target 3、Target4 sg RNA,在细胞水平切割效率为1%和3%,在胚胎水平为75%和85.7%。同时将有效的sg RNA体外转录并显微注射至胚胎体内,发现Target 3和Target 4组合效果最好,敲除效率为100%。通过胞浆注射和胚胎移植方法生产出6头克隆猪,有2头活仔实现完全敲除。本文成功建立Xist基因敲除猪模型,为后续通过敲除猪Xist基因提高克隆效率的研究奠定了基础。

lncRNA XIST通过调控miR-337-3p/HOXC8轴促进胃癌的发展进程

目的:探讨lncRNA XIST(XIST)通过调控miR-337-3p/HOXC8分子轴介导胃癌发展进程的分子机制。方法:选取2013年3月至2018年1月河北省唐山市开滦总医院普通外科手术切除的58例胃癌组织和对应的癌旁组织标本,以及人胃癌细胞系AGS、MGC803、HGC27和人胃黏膜细胞GES-1,用qPCR检测胃癌组织和细胞系中XIST和miR-337-3p的表达水平。将XIST敲降载体、miR-337-3p mimics/inhibitor和HOXC8过表达载体转染进AGS细胞,用CCK-8、Transwell实验检测AGS细胞的增殖及侵袭能力,用WB检测HOXC8及上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、神经钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(vimentin)的表达水平。用双荧光素酶报告基因验证XIST、miR-337-3p和HOXC8的靶向关系。结果:XIST在胃癌组织和细胞系中高表达(均P<0.01)。敲降XIST显著抑制AGS细胞的增殖、侵袭和EMT(P<0.05或P<0.01)。XIST靶向作用miR-337-3p并下调其表达,HOXC8是miR-337-3p的靶基因。敲降XIST通过靶向上调miR-337-3p对HOXC8表达的抑制作用,从而抑制AGS细胞增殖、侵袭和EMT(P<0.05或P<0.01)。结论:敲降XIST可抑制AGS细胞增殖、侵袭和EMT,其作用机制是通过靶向miR-337-3p并下调HOXC8的表达。

LncRNA XIST在急性髓系白血病中的表达及其临床意义

目的探讨在急性髓系白血病(AML)患者中长链非编码RNA X染色体失活特异性转录因子(LncRNA XIST)的表达情况及其临床意义。方法收集105例AML初治组(AML)、20例AML化疗后完全缓解组(AML-CR)和20例缺铁性贫血(IDA)对照组(CON)的骨髓标本,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测LncRNA XIST的表达量,分析3组之间的表达差异,探讨其表达水平与患者的临床特征及预后的相关性。结果与对照组比较, LncRNA XIST在初治AML组中低表达( P <0.001)。与初治的AML组比较,其在AML-CR组中表达明显上调( P <0.001),而AML-CR 组与对照组中LncRNA XIST表达水平的差异无统计学意义( P >0.05)。AML初治组中,LncRNA XIST的表达水平与AML分型急性髓细胞白血病部分成熟型-急性早幼粒细胞白血病/急性粒单核细胞白血病-急性单核细胞白血病(M2-M3/M4-M5)、有无髓外浸润、白细胞数及乳酸脱氢酶水平存在相关性。LncRNA XIST低表达组患者的生存率明显低于高表达组患者( P =0.018)。通过COX回归分析显示,LncRNA XIST和白球比可以作为AML独立预后因素。结论 LncRNA XIST在初治AML患者中低表达,化疗完全缓解中表达上调,且与预后相关,提示其有作为AML患者的预后标志物及治疗靶点的可能。

长链非编码RNA XIST通过miR-186调控宫颈癌细胞侵袭迁移及凋亡的分子机制

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)XIST通过miR-186调控宫颈癌细胞侵袭迁移及凋亡。方法:宫颈癌细胞中转染XIST shRNA,qRT-PCR检测XIST表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell小室检测细胞侵袭和迁移,Western blot检测Cleaved Caspase-3、MMP-2和MMP-9蛋白表达。生物信息学软件预测XIST和miR-186互补结合位点,荧光素酶报告载体鉴定。qRT-PCR检测XIST shRNA对miR-186表达影响。宫颈癌细胞中共转染XIST shRNA和miR-186 inhibitor,检测细胞凋亡、侵袭迁移和Cleaved Caspase-3、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平,评估抑制miR-186对XIST shRNA影响宫颈癌细胞凋亡、侵袭和迁移的作用。结果:转染XIST shRNA可以下调宫颈癌细胞中XIST表达水平,促进细胞凋亡并抑制细胞侵袭和迁移,诱导Cleaved Caspase-3蛋白表达,减少MMP-2和MMP-9蛋白表达。XIST可靶向调控miR-186表达,XIST shRNA可提高miR-186表达。miR-186 inhibitor可明显逆转XIST shRNA对宫颈癌细胞miR-186表达促进、凋亡促进、侵袭迁移抑制和Cleaved Caspase-3、MMP-2、MMP-9蛋白表达影响。结论:下调XIST通过促进miR-186表达抑制宫颈癌细胞侵袭迁移并诱导细胞凋亡。

lncRNA XIST靶向miR-150对LPS诱导的小鼠肺上皮MLE-12细胞凋亡和炎症因子分泌的影响

目的研究lncRNA XIST靶向miR-150对脂多糖(LPS)诱导的MLE-12细胞凋亡和炎症因子分泌的影响及机制。方法小鼠肺上皮MLE-12细胞分成Control、LPS(LPS处理)、sh-NC+LPS(转染shRNA control,给予LPS处理)、sh-XIST+LPS(转染XIST shRNA,给予LPS处理)组,采用qRT-PCR方法检测XIST表达水平,采用Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,采用Western blotting方法检测细胞中Bax、Bcl-2蛋白表达,利用TBA法检测MDA含量,利用黄嘌呤氧化法检测SOD活性,利用DCFH-DA法检测ROS水平,利用ELISA法分析培养液上清中IL-1β、TNF-α水平。利用生物信息学软件Starbase分析XIST的可能靶基因(miR-150),然后利用荧光素酶报告系统鉴定二者的靶向关系。在MLE-12细胞中将XIST shRNA、miR-150 inhibitor共转染,然后给予LPS处理,同样测定细胞凋亡、氧化损伤指标、炎症因子分泌变化。结果与Control组比较,LPS组MLE-12细胞中XIST水平升高,细胞凋亡率和Bax蛋白表达升高,Bcl-2蛋白表达降低,ROS和MDA水平升高,SOD水平降低,细胞分泌的IL-1β、TNF-α增多;与sh-NC+LPS组比较,sh-XIST+LPSMLE-12组细胞中XIST水平降低,细胞凋亡率和Bax蛋白表达降低,Bcl-2蛋白表达升高,ROS和MDA水平降低,SOD水平升高,细胞分泌的IL-1β、TNF-α减少。下调XIST靶向促进miR-150表达。miR-150 inhibitor能够逆转XIST shRNA对LPS诱导的MLE-12细胞凋亡、氧化损伤指标、炎症因子分泌的作用。结论下调lncRNA XIST靶向miR-150可抑制LPS诱导的小鼠肺上皮MLE-12细胞凋亡和炎症因子分泌作用。

LncRNA XIST靶向miR-511-3p调控食管癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究

目的探讨LncRNA XIST通过靶向miR-511-3p对食管癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法体外培养食管癌细胞Eca109,将细胞分组,分别为:si-NC组(转染si-NC)、si-XIST组(转染si-NC)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-511-3p组(转染miR-511-3p)、si-XIST+anti-miR-NC组(共转染si-XIST和anti-miR-NC)和si-XIST+anti-miR-511-3p组(共转染si-XIST和anti-miR-511-3p)。qRT-PCR检测XIST和miR-511-3p的表达;MTT检测细胞的增殖水平;Transwell法检测细胞的迁移和侵袭能力;Western blot检测PCNA和MPP-2的蛋白表达;双荧光素酶报告实验验证XIST和miR-511-3p的靶向关系。结果与正常食管黏膜上皮细胞相比,食管癌细胞中XIST表达明显增加,miR-511-3p表达明显降低(P<0.05);干扰XIST或过表达miR-511-3p可以明显抑制食管癌细胞Eca109增殖、迁移和侵袭。XIST可以靶向调控miR-511-3p的表达,抑制miR-511-3p可以逆转干扰XIST对食管癌细胞Eca109增殖、迁移和侵袭的作用。结论XIST可通过上调miR-511-3p抑制食管癌细胞的增殖、迁移和侵袭,旨在为食管癌提供新的作用靶点。

长春新碱通过lncRNA XIST/miR-485-5p调控宫颈癌细胞增殖、迁移及侵袭的分子机制

目的:探讨长春新碱对宫颈癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其对lncRNA XIST/miR-485-5p通路的调控作用。方法:采用不同浓度的长春新碱处理宫颈癌细胞HeLa;pcDNA-NC、pcDNA-lncRNA XIST、miR-NC、miR-485-5p mimics分别转染入HeLa细胞;pcDNA-NC、pcDNA-lncRNA XIST、miR-NC、miR-485-5p mimics、miR-NC+pcDNA-lncRNA XIST、miR-485-5p mimics+pcDNA-lncRNA XIST分别转染入HeLa细胞后加入长春新碱处理细胞。采用MTT实验检测细胞活力,Transwell小室实验检测细胞迁移及侵袭能力,qPCR法检测lncRNA XIST、miR-485-5p表达,双荧光素酶报告基因实验检测lncRNA XIST与miR-485-5p的靶向关系,Western blotting法检测CyclinD1、MMP2、MMP9蛋白表达。结果:与NC组比较,长春新碱不同剂量组细胞活力显著降低,迁移及侵袭细胞数减少,CyclinD1、MMP2、MMP9蛋白水平降低,lncRNA XIST表达水平降低,miR-485-5p表达水平升高(均P<0.05)。与pcDNA-NC组比较,pcDNA-lncRNA XIST组细胞活力及CyclinD1、MMP2、MMP9蛋白表达水平升高,迁移及侵袭细胞数增多(均P<0.05),而lncRNA XIST过表达可明显逆转长春新碱对HeLa细胞增殖、迁移及侵袭的作用。与miR-NC组比较,miR-485-5p组细胞活力及CyclinD1、MMP2、MMP9蛋白表达水平降低,迁移及侵袭细胞数减少(均P<0.05),而miR-485-5p过表达可增强长春新碱对HeLa细胞增殖、迁移及侵袭的作用。双荧光素酶报告基因实验证实lncRNA XIST可竞争性结合miR-485-5p。与miR-NC+pcDNA-lncRNA XIST+高剂量组比较,miR-485-5p+pcDNA-lncRNA XIST+高剂量组细胞活力及CyclinD1、MMP2、MMP9蛋白表达水平降低,迁移及侵袭细胞数减少(均P<0.05)。结论:长春新碱可通过调控lncRNA XIST/miR-485-5p而减弱宫颈癌细胞增殖、迁移及侵袭能力。

血清LncRNA-XIST在慢性心力衰竭患者中表达及临床价值

目的探讨血清长链非编码RNA-XIST(LncRNA-XIST)在慢性心力衰竭(CHF)中的表达,并分析其与部分临床资料的关系。方法选取2016年6月至2018年6月于郑州人民医院诊治108例CHF患者作为CHF组,同期50例健康体检者作为对照组。收集各组血清LncRNA-XIST、N末端脑钠肽前体(NT-proBNP)、左心室射血分数(LVEF)和左心室舒张末期内径(LVEDD)。结果CHF组和对照组血清LncRNA-XIST水平比较,差异有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线图分析血清LncRNA-XIST诊断CHF的诊断价值:AUC 0.925(0.814~1.000),截断值3.92,敏感性80.0%,特异性92.0%。在CHF患者中,NYHA心功能(Ⅲ+Ⅳ级)者血清LncRNA-XIST明显高于NYHA心功能(Ⅰ+Ⅱ级)者,差异有统计学意义(P<0.05)。经Pearson法分析,CHF患者血清LncRNA-XIST与NT-proBNP和LVEDD呈正相关(P<0.05),而血清LncRNA-XIST与LVEF呈负相关(P<0.05)。经logistic回归分析得知,病程≥5年、心功能分级(Ⅲ+Ⅳ级)和血清LncRNA-XIST≥5.52是导致CHF心脏事件发生的独立危险因素(P<0.05)。结论血清LncRNA-XIST在CHF患者中高表达,NYHA心功能分级越高,其值越大,有望成为CHF诊断及预后评估的有效指标之一。