转录因子ETS1激活长链非编码RNA XIST促进胶质瘤细胞增殖

目的探讨ETS原癌基因1(ETS1)在胶质瘤中的生物学功能及其下游机制。方法生物信息学和免疫组织化学分析ETS1在胶质瘤组织中的表达;实时定量PCR(qRT-PCR)检测ETS1 mRNA和长链非编码RNA(lncRNA)X染色体失活特异转录本(XIST)的表达水平。CCK-8和5-乙炔基-2'-脱氧尿苷摄入实验检测细胞增殖。Western blot检测凋亡相关蛋白(Bax、Bak、Bcl-2)的表达。PROMO数据库预测ETS1与XIST启动子的结合位点。双荧光素酶报告基因实验和染色质免疫共沉淀-PCR用于验证ETS1与XIST启动子区域的结合关系。cBioPortal数据库分析ETS1 mRNA与lncRNA XIST在胶质瘤组织中表达的相关性。结果ETS1 mRNA和蛋白的表达水平在胶质瘤中显著上调(P<0.05)。敲低ETS1可显著抑制胶质瘤细胞增殖(P<0.05)并促进细胞凋亡(P<0.05)。ETS1可靶向结合XIST并促进XIST的表达(P<0.05),过表达XIST可逆转敲低ETS1对胶质瘤细胞增殖的抑制作用(P<0.05)以及对细胞凋亡的促进作用(P<0.05)。结论ETS1在胶质瘤组织中高表达,其可能通过促进lncRNA XIST高表达而减少细胞凋亡和促进胶质瘤细胞增殖。

血清lncRNA-XIST、lncRNA-MALAT1水平与多囊卵巢综合征不孕症患者胰岛素抵抗及促排卵治疗后妊娠结局的关联性研究

目的探讨lncRNA-XIST、lncRNA-MALAT1与多囊卵巢综合征(PCOS)不孕症患者胰岛素抵抗及促排卵治疗后妊娠结局的关联性。方法招募2020年2月至2022年1月于唐山市妇幼保健院进行促排卵治疗的125例PCOS不孕症患者(PCOS不孕症组),另选取同期体检健康的女性125名作为对照组。比较两组血清lncRNA-XIST、lncRNA-MALAT1水平及稳态模型评估的胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)。采用Pearson相关分析探讨血清lncRNA-XIST、lncRNA-MALAT1水平与HOMA-IR的相关性。采用多因素logistic回归分析探讨影响PCOS不孕症患者促排卵治疗后妊娠结局的因素。结果与对照组比较,PCOS不孕症组血清lncRNA-XIST水平及HOMA-IR较高,lncRNA-MALAT1水平较低,差异有统计学意义(P<0.05)。HOMA-IR与血清lncRNA-XIST水平呈正相关(r=0.689,P<0.001),与血清lncRNA-MALAT1水平呈负相关(r=-0.771,P<0.001)。PCOS不孕症患者经促排卵治疗后累积临床妊娠率为43.20%(54/125)。多因素logistic回归分析结果显示,较高的促黄体生成素(LH)/卵泡刺激素(FSH)比值[OR(95%CI)=1.121(1.005~1.278)]和血清lncRNA-XIST水平[OR(95%CI)=1.252(1.014~1.449)]是促进PCOS不孕症患者治疗后未妊娠的独立危险因素(P<0.05),较高的血清抗米勒管激素(AMH)水平[OR(95%CI)=0.518(0.348~0.771)]、lncRNA-MALAT1水平[OR(95%CI)=0.394(0.238~0.652)]是促进PCOS不孕症患者治疗后获得妊娠的保护因素(P<0.05)。结论PCOS不孕症患者血清lncRNA-XIST呈高表达,lncRNA-MALAT1呈低表达,且两个指标水平与胰岛素抵抗、促排卵治疗后妊娠结局密切相关。

XIST对椎间盘退变大鼠髓核细胞增殖及细胞外基质合成的影响及其机制

目的探讨X染色体失活特异转录本(XIST)对椎间盘退变(IDD)大鼠髓核细胞增殖及细胞外基质合成的影响及其机制。方法体外分离培养SD大鼠椎间盘髓核细胞,随机分为对照组、模型组、XIST敲低组、空载质粒组、XIST敲低+miR-132-3p敲低组,除对照组外其余各组细胞以白细胞介素(IL)-1β诱导建立IDD细胞模型。分别处理各组椎间盘髓核细胞后,采用qRT-PCR检测大鼠椎间盘髓核细胞中XIST、miR-132-3p的表达;MTS法和EdU染色检测大鼠椎间盘髓核细胞增殖能力;ELISA测定椎间盘髓核细胞培养液中IL-6、IL-18水平;Western blotting检测大鼠椎间盘髓核细胞细胞外基质标志蛋白Ⅱ型胶原(CollagenⅡ)、蛋白聚糖(Aggrecan)的表达;双荧光素酶报告基因实验检测大鼠椎间盘髓核细胞中XIST对miR-132-3p的靶向调控。采用椎间盘内注射IL-1β诱导建立IDD大鼠模型,分为假手术组、模型组、XIST敲低组、空载质粒组、XIST敲低+miR-132-3p敲低组,每组12只。分别处理各组大鼠后,采用qRT-PCR检测大鼠椎间盘组织中XIST、miR-132-3p的表达;TUNEL染色检测大鼠椎间盘组织髓核细胞凋亡情况;番红O染色观察大鼠椎间盘软骨组织形态;ELISA测定大鼠血清炎性因子IL-6、IL-18水平;Western blotting检测大鼠椎间盘组织中CollagenⅡ、Aggrecan的表达。结果与对照组(细胞)/假手术组(大鼠)相比,模型组大鼠椎间盘髓核细胞及椎间盘组织中XIST表达,椎间盘组织髓核细胞凋亡率,以及椎间盘髓核细胞培养液和血清中IL-6、IL-18水平升高(P<0.05),髓核细胞活力、增殖率,以及髓核细胞和椎间盘组织中miR-132-3p、CollagenⅡ、Aggrecan蛋白表达降低(P<0.05);与模型组相比,XIST敲低组大鼠椎间盘组织髓核细胞凋亡率,椎间盘髓核细胞培养液和血清中IL-6、IL-18水平,以及髓核细胞和椎间盘组织中XIST的表达降低(P<0.05),髓核细胞活力、增殖率,以及髓核细胞和椎间盘组织中miR-132-3p、CollagenⅡ、Aggrecan蛋白表达升高(P<0.05);下调miR-132-3p可减弱敲低XIST对IL-1β诱导的椎间盘损伤和软骨基质流失的改善作用。XIST可靶向下调大鼠髓核细胞中miR-132-3p的表达。结论敲低XIST可能通过上调miR-132-3p而抑制炎症,从而抑制IDD髓核细胞凋亡,促进其增殖及细胞外基质合成。

血浆lncRNA XIST在子宫平滑肌瘤患者中的相对表达量及其临床意义

目的探讨血浆长链非编码RNA X-非活性特异性转录本(lncRNA XIST)在子宫平滑肌瘤(UL)患者中的相对表达量及其临床意义。方法选取2018年5月至2022年2月在该院首次接受了UL外科手术治疗的562例女性为UL组,从其中的116例患者中同时获得了UL肿块组织及癌旁组织。另招募280例妇科体检健康女性作为对照组。根据随访情况,将UL组患者进一步分为复发组与未复发组。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)分析所有研究对象的血浆lncRNA XIST相对表达量,以及116例患者UL肿块及癌旁组织中lncRNA XIST相对表达量。比较UL组与对照组、复发组与未复发组血浆lncRNA XIST相对表达量,比较UL肿块组织及癌旁组织中lncRNA XIST相对表达量。采用Pearson相关分析UL组织与血浆lncRNA XIST相对表达量的相关性。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血浆lncRNA XIST相对表达量对UL的诊断价值,以及对术后复发的预测价值。采用多变量Cox比例风险回归分析UL术后复发生存的影响因素。结果UL组血浆lncRNA XIST相对表达量明显高于对照组,差异有统计学意义(Z=15.732,P<0.001)。血浆lncRNA XIST诊断UL的曲线下面积(AUC)为0.948(95%CI:0.933~0.963,P<0.001)。UL肿块组织lncRNA XIST相对表达量明显高于癌旁组织,差异有统计学意义(Z=6.672,P<0.001)。UL患者血浆和UL肿块lncRNA XIST相对表达量呈正相关(r=0.198,P=0.033)。224例(43.42%)UL患者出现了疾病复发,纳入复发组,其余患者纳入未复发组。复发组血浆lncRNA XIST相对表达量明显高于未复发组,差异有统计学意义(Z=4.779,P<0.001)。血浆lncRNA XIST预测术后复发的AUC为0.618(95%CI:0.572~0.663,P<0.001)。多变量Cox比例风险回归分析结果显示,超声检查肌瘤数量、血浆lncRNA XIST相对表达量和术后残余是术后无复发生存的独立影响因素(P<0.05)。Kaplan-Meier曲线分析结果显示,与血浆lncRNA XIST≤3.483患者相比,血浆lncRNA XIST>3.483患者无复发生存时间更短(Log-rank χ^(2)=32.259,P<0.001)。结论高血浆lncRNA XIST相对表达量可能是引起UL的机制之一,此外高血浆lncRNA XIST相对表达量预示着UL患者的预后不良。

沉默lncRNA XIST对阿霉素诱导的扩张型心肌病的影响及其机制

目的 探究长链非编码RNA X-无活性特异性转录物(lncRNA XIST)对阿霉素诱导的扩张型心肌病(DCM)大鼠心肌纤维化和心肌细胞凋亡的影响及其机制。方法 采用阿霉素诱导法建立DCM大鼠模型,将DCM大鼠分为模型组、sh-NC组和sh-XIST组,每组10只;另取10只健康SD大鼠设为对照组。采用超声影像系统检测各组大鼠心脏功能指数左室收缩末期内径(LVESD)、左室舒张末期内径(LVEDD)和左室射血分数(LVEF),采用苏木素伊红染色和Masson三色染色检测大鼠心肌组织病理学变化,TUNEL检测大鼠心肌细胞凋亡水平。采用阿霉素诱导H9c2细胞系构建DCM细胞模型,将DCM细胞分为模型组、sh-NC组、sh-XIST组、sh-XIST+miR-NC组和sh-XIST+miR-149-5p inhibitor组,未经阿霉素处理的H9c2细胞作为对照组。采用双荧光素酶报告试验分析XIST、miR-149-5p和血小板源性生长因子C(PDGFC)的靶向关系。采用流式细胞术检测心肌细胞凋亡水平。采用RT-qPCR检测大鼠心肌组织和H9c2细胞中XIST、miR-149-5p和PDGFC表达水平。采用Western blot检测大鼠心肌组织和H9c2细胞中PDGFC、α-SMA、collagenⅠ和TGF-β1表达水平。结果 (1)与sh-NC组比较,sh-XIST组大鼠心肌组织中XIST水平及PDGFC的mRNA和蛋白水平均降低(P<0.01),LVESD、LVEDD、TUNEL阳性细胞率以及α-SMA、collagenⅠ和TGF-β1蛋白水平均降低(P<0.05),miR-149-5p水平和LVEF水平均升高(P<0.01);心肌细胞坏死和组织纤维化均减少。(2)与sh-NC组比较,sh-XIST组H9c2细胞凋亡率、XIST水平、PDGFC mRNA和蛋白水平以及α-SMA、collagenⅠ和TGF-β1蛋白水平均降低(P<0.05),miR-149-5p表达水平升高(P<0.05)。与sh-XIST+miR-NC组比较,sh-XIST+miR-149-5p inhibitor组H9c2细胞凋亡率、PDGFC mRNA和蛋白水平以及α-SMA、collagenⅠ和TGF-β1蛋白水平均升高(P<0.05),miR-149-5p表达水平降低(P<0.05)。结论 沉默lncRNA XIST通过上调miR-149-5p表达和抑制PDGFC表达,进而抑制阿霉素诱导的DCM大鼠心肌纤维化和心肌细胞凋亡水平,从而改善DCM的发展。

血清lncRNAXIST和SIRT1水平与DR的关系及其诊断价值

目的:检测2型糖尿病(T2DM)患者血清长链非编码RNA(lncRNA)X非活性特异性转录本(XIST)、沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)表达水平,并探讨其与糖尿病视网膜病变(DR)的相关性及其诊断价值。方法:前瞻性研究。选取2022-01/2023-02在我院收治T2DM患者214例作为研究对象。根据是否发生视网膜病变,分为非DR组126例126眼,DR组88例88眼。另选取同期体检健康者130例为对照组。检测三组血清lncRNA XIST、SIRT1水平并进行比较。采用Pearson法分析lncRNA XIST和SIRT1表达与DR的关系,受试者工作特征(ROC)曲线评价血清lncRNA XIST、SIRT1单独及联合对DR的预测价值,多因素Logistic回归分析影响T2DM患者发生DR的因素。结果:与对照组比较,非DR组和DR组血清lncRNA XIST、SIRT1水平依次降低(均P<0.05);DR患者血清lncRNA XIST和SIRT1水平呈正相关(r=0.639,P<0.05);ROC分析显示,血清lncRNA XIST、SIRT1联合预测DR的曲线下面积(AUC)为0.940,高于血清lncRNA XIST、SIRT1单独检测的AUC(0.855、0.875)。Logistic回归分析显示,lncRNA XIST(OR=0.752)、SIRT1(OR=0.694)是DR发生的影响因素(均P<0.01)。结论:DR患者血清lncRNA XIST、SIRT1水平均降低,lncRNA XIST联合SIRT1对DR发生有较好的评估效能。

血清长链非编码RNA XIST联合miR-150-5p早期预测脓毒症并发急性肺损伤的价值

目的探讨血清长链非编码RNA XIST(lncRNA XIST)联合微小RNA(miR)-150-5 p对脓毒症患者并发急性肺损伤(ALI)的早期预测价值。方法收集2022年9月—2024年1月福建医科大学孟超肝胆医院收治的102例脓毒症患者作为研究对象,根据入院48 h氧合指数将其分为观察组32例(脓毒症并发ALI)和70例脓毒症对照组(脓毒症未并发ALI);选取30例同期健康体检者作为健康对照组。收集患者的基本临床资料,记录急性生理学与慢性健康状况Ⅱ(APACHEⅡ)评分。采用qRT-PCR检测血清lncRNA XIST和miR-150-5 p表达水平。比较组间差别,分析主要指标的相关性,采用二元logistic回归分析脓毒症患者并发ALI的影响因素,采用受试者工作特征(ROC)曲线分别评估lncRNA XIST、miR-150-5 p及两者联合对脓毒症患者并发ALI的早期预测价值。结果与健康对照组比较,观察组和脓毒症对照组血清lncRNA XIST相对表达量均升高,miR-150-5 p相对表达量均降低,且观察组变化更明显,差别均有统计学意义(P<0.01)。血清lncRNA XIST、miR-150-5 p与APACHEⅡ评分的相关性均有统计学意义(r=0.518,r=-0.492,均为P<0.01)。二元logistic回归分析显示,高APACHEⅡ评分、lncRNA XIST高表达、miR-150-5 p低表达是脓毒症患者并发ALI的独立危险因素(P<0.05)。lncRNA XIST、miR-150-5 p单独预测脓毒症患者并发ALI的曲线下面积(AUC)分别为0.725(95%CI:0.628~0.809)和0.706(95%CI:0.608~0.792),联合预测的AUC为0.916(95%CI:0.844~0.962),优于各自单一预测效能,且具有较高的灵敏度(96.9%)和特异度(81.4%)。结论血清lncRNA XIST联合miR-150-5 p在预测脓毒症患者并发ALI方面具有一定的临床价值,可作为早期预警指标。

RNA XIST、mir-130b-3p在乳腺癌组织中的表达及与其预后相关性

目的 探讨RNA XIST、mir-130b-3p在乳腺癌组织中的表达及与其临床病理特征及预后的相关性。方法选择120例乳腺癌患者,收集其癌组织和癌旁正常组织,采用免疫组化染色法测定RNA XIST、mir-130b-3p水平及其与乳腺癌临床病理学特征的关系;从治疗起对所有患者随访60个月,记录总生存率,并建立Logistic多元回归方程分析乳腺癌患者死亡高危因素。结果 RNA XIST在乳腺癌组织中表达量高于癌旁正常组织(P<0.05),mir-130b-3p在乳腺癌组织的表达量低于癌旁正常组织(P<0.05);RNA XIST与mir-130b-3p在乳腺癌组织中表达呈显著负相关关系(P<0.05);RNA XIST、mir-130b-3p表达量与患者年龄、肿瘤直径、肿瘤分期、淋巴结转移、分化程度显著相关(P<0.05);所有患者均从治疗起随访60个月,6例于治疗后24~36个月复发,8例全身转移,54例死亡,存活患者RNA XIST表达量低于死亡患者(P<0.05)、mir-130b-3p表达量高于死亡患者(P<0.05);年龄≥55岁、肿瘤直径>5 cm、肿瘤Ⅲ~Ⅳ期、淋巴结转移、RNA XIST高表达、mir-130b-3p低表达为乳腺癌患者死亡危险因素(P<0.05)。结论 RNA XIST、mir-130b-3p与乳腺癌患者预后显著相关,且两者在癌细胞中的表达量呈负相关关系,可对其进行监测作为早期筛查乳腺癌生物标志物和治疗靶点。

LncRNA XIST和miR-101-3p在SLE患者外周血单核细胞中的表达及临床应用价值

目的分析长链非编码RNA(Lnc RNA)X染色体失活特异转录本(XIST)和微小RNA-101-3p(mi R-101-3p)在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单核细胞中的表达及临床应用价值。方法选取2019年4月至2021年10月在新乡市中心医院治疗的180例SLE患者作为观察组,选择同期180例健康体检者作为对照组。根据SLE疾病活动指数(SLEDAI)评分将观察组分为稳定期组80例和活动期组100例。采用实时荧光定量聚合酶链反应(q RT-PCR)法对患者外周血单核细胞中Lnc RNA XIST、mi R-101-3p的相对表达水平进行检测。分析Lnc RNA XIST与mi R-101-3p的相关性以及二者与SLEDAI评分的相关性;对影响SLE的因素进行logistic回归分析;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析Lnc RNA XIST、mi R-101-3p的表达对SLE的诊断价值。结果与对照组相比,观察组患者外周血单核细胞Lnc RNA XIST水平升高,mi R-101-3p水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05);活动期组患者较稳定期组外周血单核细胞中Lnc RNA XIST水平升高,mi R-101-3p水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05);患者外周血单核细胞Lnc RNA XIST与mi R-101-3p水平呈负相关(r=-0.410,P<0.05);Lnc RNA XIST水平与SLEDAI评分呈正相关(r=0.425,P<0.05),mi R-101-3p水平与SLEDAI评分呈负相关(r=-0.454,P<0.05);logistic回归分析显示,Lnc RNA XIST是影响SLE的危险因素(P<0.05),mi R-101-3p是影响SLE的保护因素(P<0.05);Lnc RNA XIST、mi R-101-3p联合诊断SLE的ROC曲线下面积为0.960,均优于其各自单独诊断(Z_(二者联合-Ln-c RNA XIST)=3.268,P=0.001;Z_(二者联合-mi R-101-3p)=2.584,P=0.005)。结论SLE患者外周血单核细胞Lnc RNA XIST水平升高,mi R-101-3p水平降低,与SLE疾病活动性有关,对SLE具有一定的诊断价值。

LncRNA XIST靶向miR-543对胶质瘤细胞增殖凋亡的作用机制研究

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)XIST通过miR-543对胶质瘤细胞增殖凋亡的作用及机制。方法RT-PCR检测胶质瘤细胞株U251、T98G、U87-MG、A172、SW1783中XIST表达水平及si-XIST转染U251细胞后XIST与miR-543表达;在胶质瘤细胞U251中敲低XIST后,MTT法、流式细胞术检测胶质瘤细胞的增殖和凋亡情况;用双荧光素酶报告基因验证LncRNA XIST与miR-543的靶向关系。结果XIST在U251细胞中表达水平(0.79±0.08)最高,故以U251细胞进行后续实验;与XIST组[(2.35±0.17)、(0.37±0.05)]相比,si-XIST组U251细胞XIST表达水平(0.25±0.19)较低,miR-543表达水平(3.15±0.36)较高(P<0.05);与XIST组[(0.57±0.09)、(0.81±0.01)、(1.15±0.04)]相比,si-XIST组胶质瘤U251细胞A570在24、48、72 h[(0.22±0.02)、(0.31±0.03)、(0.55±0.04)]明显降低(P<0.05)。与XIST组(1.12±0.56)%相比,si-XIST组细胞凋亡率(35.64±4.31)%较高(P<0.05)。共转染XIST-wt和miR-543处理组中相对荧光素酶活性显著下降[(1.15±0.22)vs(0.22±0.03)](P<0.05)。结论干扰LncRNA XIST可通过靶向负调控miR-543表达,抑制胶质瘤细胞增殖、诱导细胞凋亡。

炙马钱子胶囊抑制BIPN的临床疗效及基于lncRNA ZFAS1(XIST)活化FAK信号通路抑制神经炎症的机制

[目的]评估炙马钱子胶囊医治硼替佐米相关性周围神经病(bortezomib induced peripheral neuropathy,BIPN)的有效性,初步探究其基于长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)X失活特异性转录本(X inactive specific transcript,XIST)/锌指结构反义转录本1(ZNFX1 antisense RNA 1,ZFAS1)干预BIPN的机制。[方法]通过前瞻性非随机对照的研究方法,共收集20例符合多发性骨髓瘤中西医诊断并接受硼替佐米(bortezomib,BTZ)治疗而且发生BIPN接受炙马钱子胶囊治疗的患者,与未接受马钱子治疗的患者进行中医症候积分、神经毒性评分、周围神经病变(peripheral neuropathy,PN)分级、部分周围神经传导速度的比较。通过自身对照,采集治疗组患者的外周血液样本,使用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测炎症相关因子表达。培养DRG 50B11细胞,通过细胞增殖毒性检测筛选马钱子最佳作用浓度和时间及BTZ最佳作用时间,随机分为正常对照组、BTZ组、马钱子+BTZ组,以实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time quantitative polymerase chain reaction,Real-time qPCR)检测炎症相关因子及细胞总RNA相关指标表达,分析差异性及相关性。[结果]临床研究显示,与对照组比较,患者治疗后PN、中医证候积分、神经毒性评分降低,周围神经传导速度增加(P<0.05),无明显不良反应。实验研究显示,与治疗前比较,白细胞介素-17(interleukin-17,IL-17)、IL-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、神经生长因子(nerve growth factor,NGF)、脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)表达均降低(P<0.05),且与时间存在显著负相关性(P<0.01)。与BTZ组比较,马钱子+BTZ组IL-17、TNF-α、IL-1β、IL-6、NGF、BDNF、lncRNA XIST、纤维粘连蛋白1(fibronectin 1,FN1)、磷酸化局部黏着斑激酶(phospho-focal adhesion kinase,p-FAK)表达降低(P<0.05),miR-96-5P、miR-1271-5P表达升高(P<0.05),lncRNA ZFAS1表达量差异无统计学意义(P>0.05);lncRNA XIST表达与IL-17、TNF-α、IL-1β、IL-6、NGF、BDNF、FN1、p-FAK表达显著正相关(P<0.01),与miR-96-5P存在中等负相关性(P<0.05),与miR-1271-5P存在极弱相关或无相关性(P>0.05)。[结论]炙马钱子胶囊在一定程度上可缓解BIPN且较为安全,其机制可能与调控lncRNA XIST,促进miR-96-5P/FN1表达,抑制p-FAK介导的神经炎症有关。

LncRNA XIST通过miR-20a-5p/HMGA2轴调控乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的机制

目的 探讨LncRNA XIST对乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响及机制。方法 选取正常乳腺上皮细胞MCF-10A及乳腺癌细胞系MCF-7、T47D和Bcap-37细胞,将不同物质转染至MCF-7、T47D细胞,设为空白组(无转染)、si-XIST组(转染si-XIST)、si-NC组(转染si-NC)、微小RNA-20a-5p(miR-20a-5p)组(转染miR-20a-5p mimics)及miR-NC组(转染miR-NC)。CCK-8检测细胞增殖能力;Transwell检测细胞侵袭能力;划痕实验检测细胞迁移能力;TUNEL染色检测细胞凋亡。采用荧光素酶报告基因实验验证LncRNA XIST与miR-20a-5p及miR-20a-5p与高迁移率族蛋白A2(HMGA2)的靶向关系。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测LncRNA XIST、miR-20a-5p的表达水平。采用Western blot检测HMGA2的表达水平。结果 与MCF-10A细胞比较,MCF-7、T47D和Bcap-37细胞中LncRNA XIST表达水平升高,miR-20a-5p表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。下调LncRNA XIST或上调miR-20a-5p抑制乳腺癌细胞增殖、侵袭及迁移,促进细胞凋亡(P<0.05)。LncRNA XIST负性调控miR-20a-5p, miR-20a-5p负性调控HMGA2。结论 下调LncRNA XIST通过miR-20a-5p/HMGA2轴抑制乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡。

右美托咪定预处理通过XIST/miR-125a/DRAM2轴预防大鼠心肌缺血再灌注损伤

目的探讨右美托咪定(dexmedetomidine,Dex)预处理通过XIST/miR-125a/DRAM2轴对大鼠心肌缺血再灌注损伤(myocardical ischemia-reperfusion injury,MI/RI)的影响。方法体内实验将45只大鼠随机分为假手术组、MI/RI组、Dex组;采用结扎冠状动脉左前降支法建立MI/RI大鼠模型;Dex组缺血前给予静脉注射5μg/kg Dex预处理;体外实验以H9C2心肌细胞为研究对象,分为空白组、H/R组、Dex组、Dex+pcDNA3.1 NC组、Dex+pcDNA3.1 XIST组;通过缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)构建MI/RI体外细胞模型;通过qRT-PCR技术检测体内外实验各组中XIST、miR-125a、DRAM2的mRNA表达水平;通过免疫印迹技术检测体内外实验各组中DRAM2的蛋白表达水平;通过HE染色检测大鼠心肌组织病理学变化和心肌梗死面积;通过ELISA技术检测各组大鼠血清中肌酸激酶同工酶(creatine kinase isoenzyme,CK-MB)、肌钙蛋白I(cTnI)含量;通过丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)检测试剂盒考察细胞上清液中MDA和SOD的浓度;通过双荧光素酶报告基因系统考察XIST、miR-125a的靶向关系。结果在体内实验中,与假手术组相比,MI/RI组梗死面积、CK-MB、cTnI含量、XIST、DRAM2表达均显著上调(P<0.05),而miR-125a的显著下调(P<0.05);此外,与MI/RI组相比,Dex组梗死面积、CK-MB、cTnI含量、XIST、DRAM2表达均显著下调(P<0.05),miR-125a表达显著上调(P<0.05);在体外实验中,与对照组相比,H/R组MDA含量、细胞凋亡率、XIST、DRAM2表达均显著上调(P<0.05),SOD含量、miR-125a表达均显著下调(P<0.05);与H/R组相比,Dex组MDA含量、细胞凋亡率、XIST、DRAM2表达均显著下调(P<0.05),SOD含量、miR-125a表达均显著上调(P<0.05);过表达XIST逆转了Dex对MIRI体外细胞模型的保护作用(P<0.05)。结论Dex预处理可以改善MIRI大鼠症状,抑制心肌细胞氧化应激损伤及细胞凋亡,可能与调控XIST/miR-125a/DRAM2轴有关。

血清lncRNA XIST和miRNA-130a表达与脓毒症患者病情严重程度及患者预后的关系

目的研究脓毒症患者血清长非编码RNA X非活性特异性转录本(lncRNA XIST)和微小RNA(miRNA)-130a表达与脓毒症患者病情严重程度及预后的关系,以探究其临床意义。方法选取2021年1月至2022年12月西安国际医学中心医院收治的脓毒症患者73例作为研究对象,根据症状严重程度分为脓毒症组(52例)和脓毒性休克组(21例),另选取30例同时期在该院接受体检的健康者作为对照组。采用反转录聚合酶链反应检测血清lncRNA XIST和miRNA-130a表达水平,全自动生化仪检测C反应蛋白、白细胞计数、降钙素原、乳酸水平,并记录序贯器官衰竭(SOFA)评分、急性生理与慢性健康(APACHEⅡ)评分,采用多因素Logistic回归进行危险因素分析;采用受试者工作特征(ROC)曲线评价血清lncRNA XIST和miRNA-130a表达水平对脓毒症的预测价值。结果与对照组比较,脓毒症组和脓毒性休克组血清lncRNA XIST表达水平均升高,且脓毒性休克组高于脓毒症组,差异均有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,脓毒症组和脓毒性休克组血清miRNA-130a表达水平均降低,且脓毒性休克组低于脓毒症组,差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,脓毒性休克、SOFA评分≥7.85分、APACHEⅡ评分≥19.55分、lncRNA XIST表达水平升高、miRNA-130a表达水平降低是脓毒症患者预后情况的独立危险因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清lncRNA XIST和miRNA-130a联合诊断ROC曲线下面积大于各项指标单独检测,诊断价值理想。结论lncRNA XIST在脓毒症患者血清中表达明显增加,miRNA-130a在脓毒症患者血清中表达明显下降,两者联合诊断灵敏度和特异性更高,对预测脓毒症发生具有一定临床参考意义。

宫颈癌患者血清lncRNA XIST的表达及其意义

目的探讨血清长链非编码RNA(lncRNA)XIST在宫颈癌辅助诊断中应用的可能性。方法选取2018年12月至2019年12月南通大学附属肿瘤医院的92例初诊宫颈癌患者,60例宫颈上皮内瘤变(CIN)患者,38例子宫良性病变(子宫肌瘤、宫颈炎症)患者及54例体检健康者作为研究对象。分别用化学发光法和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组标本血清糖类抗原125(CA125)、人鳞状细胞癌相关抗原(SCCAg)水平和血清lncRNA XIST相对表达水平并进行方法学评价。分析血清lncRNA XIST相对表达水平与临床病理参数间的关系,并用受试者工作特征曲线评价血清lncRNA XIST、CA125、SCCAg单独与联合检测的诊断效能。结果宫颈癌组、CIN组、良性病变组血清lncRNA XIST相对表达水平高于对照组(P<0.01);宫颈癌组血清lncRNA XIST相对表达水平高于CIN组及良性病变组(P<0.01);CIN组与良性病变组血清lncRNA XIST相对表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。不同年龄、绝经状态、肿瘤FIGO分期、淋巴结转移宫颈癌患者血清lncRNA XIST相对表达水平比较差异有统计学意义(P<0.05),不同肿瘤最大径宫颈癌患者血清lncRNA XIST相对表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。lncRNA XIST鉴别宫颈癌患者与健康者的曲线下面积大于CA125、SCCAg单项检测,且其灵敏度达90.21%,优于SCCAg、CA125单项检测,两两联合和三者联合时灵敏度均得到提高,三者联合时最高达98.91%。宫颈癌患者血清lncRNA XIST相对表达水平与CA125、SCCAg水平均无相关性(P>0.05)。结论血清lncRNA XIST可以作为一种新的生物学标志物,用于宫颈癌的早期筛查;其相对表达水平可作为宫颈癌与CIN及子宫良性病变的辅助鉴别指标。

LncRNA XIST沉默对非酒精性脂肪肝小鼠T细胞免疫功能的作用机制

目的探讨长链非编码RNA XIST(LncRNA XIST)调节微小RNA-137-3p(miR-137-3p)/Krüppel样转录因子2(KLF2)轴对非酒精性脂肪肝(NAFLD)小鼠T细胞免疫功能的影响。方法建立NAFLD小鼠模型,检测脾脏CD4+T、CD8+T细胞及细胞中LncRNA XIST表达,将CD4+T细胞分为si-NC组、si-XIST组、si-XIST+anti-NC组及si-XIST+anti-miR-137-3p组,分别检测LncRNA XIST、miR-137-3p和KLF2表达水平、细胞增殖与凋亡;将各组转染的CD4+T细胞与人肝细胞HL-7702共培养,分别检测TGF-β1、IL-10、IFN-γ、IL-17水平及Th17、Treg细胞比例;双荧光素酶报告基因实验验证LncRNA XIST、KLF2与miR-137-3p靶向关系。结果NAFLD组小鼠CD4+T细胞比例显著升高,CD8+T细胞比例显著降低(P<0.05),且LncRNA XIST在CD4+T细胞中表达水平显著升高(P<0.05);抑制LncRNA XIST表达可显著抑制CD4+T细胞增殖,诱导细胞凋亡,诱导CD4+T细胞TGF-β1、IL-10分泌,抑制IFN-γ、IL-17水平,升高Treg细胞比例,降低Th17细胞比例;抑制miR-137-3p表达可逆转抑制LncRNA XIST表达对CD4+T细胞的影响;双荧光素酶报告基因实验证实,LncRNA XIST可调控miR-137-3p表达,KLF2是miR-137-3p下游靶点。结论LncRNA XIST在NAFLD小鼠CD4+T细胞中表达水平升高,抑制LncRNA XIST表达可通过调节miR-137-3p/KLF2信号轴,调节炎性因子分泌,升高Treg细胞比例,降低Th17细胞比例。

类风湿关节炎患者血清外泌体长链非编码RNA Hotair和XIST的表达及意义

目的 研究类风湿关节炎(RA)患者血清来源外泌体中长链非编码RNA (lncRNA)Hotair、XIST、H19和MALAT1的表达水平,分析与RA患者炎症参数的相关关系,探讨其对RA的临床诊断价值。方法 收集70例RA患者为疾病组,同期就诊的40例系统性红斑狼疮(SLE)患者为疾病对照组,40例体检健康者为健康对照组(HC)。收集3组研究对象血清并提取外泌体,通过纳米粒径追踪仪检测外泌体浓度,采用实时定量PCR(RT-qPCR)法检测外泌体中lncRNA Hotair、XIST、H19和MALAT1的表达水平。采用Spearman秩相关分析Hotair、XIST与RA患者红细胞沉降率(ESR)、C-反应蛋白(CRP)和疾病活动评分-28(DAS-28)的相关性。绘制ROC曲线分析Hotair、XIST对RA患者的诊断价值。结果 与健康对照组相比,RA组和SLE组外泌体浓度显著升高(P<0.05),RA组与SLE组之间无显著差异(P>0.05)。血清外泌体lncRNA H19和MALAT1表达水平在3组间差异无统计学意义(P>0.05);lncRNA Hotair和XIST在RA组表达水平较SLE组和健康对照组显著增加(P<0.001),并且两者的表达水平与RA患者ESR、CRP、DAS-28具有正相关关系(P<0.05),诊断RA的ROC曲线下面积(AUCROC)分别为0.84(95%CI=0.78~0.90,P<0.001)和0.76(95%CI=0.68~0.83,P<0.001)。结论 血清外泌体来源lncRNA Hotair和XIST在RA患者中表达显著性升高,与血清ESR、CRP、DAS-28存在正相关关系,提示外泌体来源LncRNAHotair和XIST可作为诊断RA的潜在生物学标志物。

利用CRISPR／Cas9系统建立Xist基因敲除猪模型

体细胞核移植技术在家畜良种繁育、基因修饰动物生产、濒危动物的拯救和人类疾病的治疗等领域具有重要的应用价值,但目前克隆动物生产效率较低,平均不超过5%。低下的克隆效率极大地限制了该技术的快速发展。在影响克隆猪生产效率的诸多因素中,X染色体的异常失活是导致克隆效率低下的重要原因,而与X染色体失活密切相关的一个重要基因是Xist基因,这表明Xist基因可能直接或间接地影响猪的克隆效率。本文以CRISPR/Cas系统为基础,在Xist基因上设计5个CRISPR/Cas系统打靶位点,并筛选出有效的Target 3、Target4 sg RNA,在细胞水平切割效率为1%和3%,在胚胎水平为75%和85.7%。同时将有效的sg RNA体外转录并显微注射至胚胎体内,发现Target 3和Target 4组合效果最好,敲除效率为100%。通过胞浆注射和胚胎移植方法生产出6头克隆猪,有2头活仔实现完全敲除。本文成功建立Xist基因敲除猪模型,为后续通过敲除猪Xist基因提高克隆效率的研究奠定了基础。

lncRNA XIST通过调控miR-337-3p/HOXC8轴促进胃癌的发展进程

目的:探讨lncRNA XIST(XIST)通过调控miR-337-3p/HOXC8分子轴介导胃癌发展进程的分子机制。方法:选取2013年3月至2018年1月河北省唐山市开滦总医院普通外科手术切除的58例胃癌组织和对应的癌旁组织标本,以及人胃癌细胞系AGS、MGC803、HGC27和人胃黏膜细胞GES-1,用qPCR检测胃癌组织和细胞系中XIST和miR-337-3p的表达水平。将XIST敲降载体、miR-337-3p mimics/inhibitor和HOXC8过表达载体转染进AGS细胞,用CCK-8、Transwell实验检测AGS细胞的增殖及侵袭能力,用WB检测HOXC8及上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、神经钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(vimentin)的表达水平。用双荧光素酶报告基因验证XIST、miR-337-3p和HOXC8的靶向关系。结果:XIST在胃癌组织和细胞系中高表达(均P<0.01)。敲降XIST显著抑制AGS细胞的增殖、侵袭和EMT(P<0.05或P<0.01)。XIST靶向作用miR-337-3p并下调其表达,HOXC8是miR-337-3p的靶基因。敲降XIST通过靶向上调miR-337-3p对HOXC8表达的抑制作用,从而抑制AGS细胞增殖、侵袭和EMT(P<0.05或P<0.01)。结论:敲降XIST可抑制AGS细胞增殖、侵袭和EMT,其作用机制是通过靶向miR-337-3p并下调HOXC8的表达。

LncRNA XIST在急性髓系白血病中的表达及其临床意义

目的探讨在急性髓系白血病(AML)患者中长链非编码RNA X染色体失活特异性转录因子(LncRNA XIST)的表达情况及其临床意义。方法收集105例AML初治组(AML)、20例AML化疗后完全缓解组(AML-CR)和20例缺铁性贫血(IDA)对照组(CON)的骨髓标本,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测LncRNA XIST的表达量,分析3组之间的表达差异,探讨其表达水平与患者的临床特征及预后的相关性。结果与对照组比较, LncRNA XIST在初治AML组中低表达( P <0.001)。与初治的AML组比较,其在AML-CR组中表达明显上调( P <0.001),而AML-CR 组与对照组中LncRNA XIST表达水平的差异无统计学意义( P >0.05)。AML初治组中,LncRNA XIST的表达水平与AML分型急性髓细胞白血病部分成熟型-急性早幼粒细胞白血病/急性粒单核细胞白血病-急性单核细胞白血病(M2-M3/M4-M5)、有无髓外浸润、白细胞数及乳酸脱氢酶水平存在相关性。LncRNA XIST低表达组患者的生存率明显低于高表达组患者( P =0.018)。通过COX回归分析显示,LncRNA XIST和白球比可以作为AML独立预后因素。结论 LncRNA XIST在初治AML患者中低表达,化疗完全缓解中表达上调,且与预后相关,提示其有作为AML患者的预后标志物及治疗靶点的可能。