Efficacy of Xianglian pill for antibiotic-associated diarrhea: a protocol for systematic review and meta-analysis

Background:Antibiotic-associated diarrhea is a clinical common symptom of antibiotics overuse and occurs in 5%-70%of adults.Xianglian pill has been traditionally considered as an efficient treatment of diarrhea and gastrointestinal diseases for thousands of years.However,no systematic review and meta-analyses have focused on its positive effects.Hence,this protocol for systematic review and meta-analysis was developed to evaluate the effect and clinical safety of Xianglian pill on treating antibiotic-associated diarrhea.Methods:All randomized controlled trials published in Chinese and English and assessed use of Xianglian pill for antibiotic-associated diarrhea will be included.Databases of PubMed,EMBASE,Cochrane Library,China National Knowledge Infrastructure,Chinese Biomedical Literature,Wanfang,and Chinese Science and Technology Periodical Database will be searched for randomized controlled trials from their inception until November 16,2020.Primary outcomes will be the incidence of diarrhea and adverse events,and secondary outcomes will be bowel movements and microbiome characteristics.Two authors will extract data and assess the risk of bias independently.Risk ratio will be used to evaluate the results,and meta-analyses will be conducted using STATA 15.0 software.The review aims to demonstrate the effectiveness of Xianglian pill in the prevention and treatment of antibiotic-associated diarrhea.

基于UPLC-Q-TOF-MS/MS技术分析香连丸的化学成分与小鼠体内的入血成分及代谢产物

目的采用UPLC-Q-TOF-MS/MS技术研究香连丸的体内外物质基础,对香连丸的主要成分、入血的原型成分及代谢产物进行定性分析。方法采用Thermo Accucore C_(18)柱(2.1 mm×100 mm,2.6μm),0.1%甲酸水(A)-乙腈(B)为流动相进行梯度洗脱,柱温40℃,流速为0.4 mL·min^(-1),进样量为4μL。采用电喷雾(ESI)离子源,正、负离子扫描模式下采集质谱信息。结果通过分析各成分的精确相对分子质量、保留时间、二级碎片等质谱信息,并与对照品的质谱信息和相关文献信息进行比对,最终在香连丸提取液中共鉴定出75个化学成分,主要为生物碱类、倍半萜类、黄酮苷类、柠檬苦素类和有机酸类等成分。此外,在给药后的小鼠血浆中共鉴定出16个原型成分和15个代谢产物。血浆中发现的原型成分以生物碱为主,这些成分在体内的代谢途径主要有羟基化、去甲基化、还原、水解、氢化和葡萄糖醛酸化等。结论该方法可用于快速且全面地鉴定香连丸的体内外化学成分,其分析结果为进一步阐明香连丸的药效物质基础提供依据。

反相高效液相色谱法同时测定五味香连丸中10种成分含量

目的建立同时测定五味香连丸中盐酸小檗碱、黄连碱、巴马汀、延胡索乙素、木香烃内酯、去氢木香内酯、吴茱萸碱、吴茱萸次碱、柠檬苦素、芍药苷10种成分含量的反相高效液相色谱法。方法色谱柱为Waters SunFire C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5µm),流动相为含0.02%三乙胺的0.02 mol/L磷酸二氢钾溶液(用磷酸调pH至3.5)-乙腈(梯度洗脱),流速为1.0 mL/min,柱温为35℃,检测波长为225 nm,进样量为10µL。结果盐酸小檗碱、黄连碱、巴马汀、延胡索乙素、木香烃内酯、去氢木香内酯、吴茱萸碱、吴茱萸次碱、柠檬苦素、芍药苷的质量浓度分别在6.852~51.39µg/mL、2.956~22.17µg/mL、2.918~21.88µg/mL、4.643~34.82µg/mL、4.871~36.53µg/mL、4.007~30.05µg/mL、4.519~33.89µg/mL、4.482~33.62µg/mL、2.724~20.43µg/mL、2.809~21.07µg/mL范围内与峰面积线性关系良好(r≥0.9992,n=6);定量限分别为0.66,0.31,0.29,0.45,0.48,0.41,0.42,0.46,0.27,0.28µg/mL;精密度、稳定性、重复性试验结果的RSD均小于2.0%(n=6);回收率分别为100.36%,98.74%,98.71%,99.67%,99.86%,99.59%,98.70%,98.38%,98.25%,98.72%,RSD分别为0.89%,1.02%,1.04%,1.17%,0.84%,1.15%,1.33%,1.20%,1.07%,1.23%(n=6)。3批样品中上述成分的平均含量分别为1.165~1.192 mg/g、0.5231~0.5276 mg/g、0.4997~0.5011 mg/g、0.6814~0.6889 mg/g、0.6977~0.7002 mg/g、0.6068~0.6134 mg/g、0.5801~0.5837 mg/g、0.4277~0.4422 mg/g、0.4101~0.4165 mg/g、0.4002~0.4013 mg/g(n=2)。结论所建立的方法简便可行、结果准确可靠、稳定性好,可用于同时测定五味香连丸中10种成分的含量。

加味香连丸联合美沙拉嗪治疗溃疡性结肠炎临床观察

目的:观察加味香连丸联合美沙拉嗪治疗大肠湿热证溃疡性结肠炎的临床疗效。方法:将64例大肠湿热证溃疡性结肠炎患者随机分为两组各32例。对照组予美沙拉嗪肠溶片治疗,治疗组在对照组基础上联合加味香连丸治疗,2周为1个疗程,治疗2个疗程后,比较两组临床疗效。结果:治疗组总有效率为84.38%优于对照组的71.86%(P<0.05)。治疗后治疗组中医症状评分和结肠黏膜评分(采用改良Mayo评分)均低于对照组(P<0.05)。结论:加味香连丸联合美沙拉嗪治疗大肠湿热证溃疡性结肠炎疗效较好。

香连丸及有效单体黄连素联合5-氟尿嘧啶对HCT116结肠癌荷瘤裸鼠的影响

目的通过建立结肠癌荷瘤裸鼠模型和结肠癌HCT116细胞实验,探讨香连丸及有效单体黄连素联合5-FU对结肠癌HCT116细胞的抑制作用。方法(1)建立HCT116结肠癌荷瘤裸鼠模型,给予香连丸,黄连素,5-氟尿嘧啶,香连丸和黄连素+5-FU干预,观察各组药物对肿瘤大小影响。PCR法检测裸鼠瘤体组织中Caspase-3,TNF,TP53 mRNA的表达;(2)建PCR法检测裸鼠瘤体组织中Caspase-3,肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF),TP53 mRNA表达;和检测体外培养的HCT116细胞中Caspase-3,TNF,TP53 mRNA表达;(3)CCK8法观察黄连素组、5-FU组、黄连素+5-FU联合用药组对HCT116细胞增殖的影响。结果(1)通过建立结肠癌荷瘤裸鼠模型,与模型对照组比较,香连丸组、黄连素组、香连丸+5-FU联合用药组和黄连素+5-FU联合用药组的肿瘤瘤体均有所减小,抑瘤率增加,差异有统计学意义(P<0.05);与香连丸、5-FU和黄连素单药组比较,黄连素+5-FU联合用药组的裸鼠瘤体明显减小,抑瘤率显著增加,差异有统计学意义(P<0.01)。(2)体内实验的PCR结果显示:与模型对照组比较,香连丸组、黄连素组、5-FU组、香连丸+5-FU联合用药组和黄连素+5-FU联合用药组Caspase-3表达均没有上升,差异均无统计学意义(P>0.05)。与模型对照组比较,黄连素组TNF表达明显上升,差异有统计学意义(P<0.01);与模型对照组比较,香连丸+5-FU联合用药组、黄连素+氟尿嘧啶联合用药组TNF表达上升,但差异无统计学意义(P>0.05);与模型对照组比较,5-FU组TNF表达无明显上升,且差异无统计学意义(P>0.05);与香连丸、5-FU单药组比较,香连丸+5-FU联合用药组TNF表达明显上升,且差异有统计学意义(P<0.05);与模型对照组比较,黄连素组TP53表达明显上升,差异有统计学意义(P<0.01);与模型对照组比较,5-FU和香连丸单药组TP53表达下降,差异无统计学意义(P>0.05);与香连丸单药组比,香连丸+5-FU联合用药组、黄连素+5-FU联合用药组、黄连素单药组的TP53上升,差异无统计学意义(P>0.05)。(3)与模型对照组比较,黄连素和5-FU单药组干预24 h和48 h后可抑制结肠癌细胞HCT116的增殖,作用随浓度和时间增加而增强,差异有统计学意义(P<0.05);与黄连素、5-FU单药组比较,黄连素+5-FU两药联合干预24 h和48 h后显著抑制结肠癌细胞HCT116的增殖,差异有统计学意义(P<0.05);与黄连素、5-FU单药组比较,黄连素+5-FU联合用药组细胞的存活率降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论体内实验:香连丸和黄连素、5-FU单独用药对HCT116结肠癌裸鼠瘤体有一定的抑制作用,香连丸及有效单体黄连素联合5-FU对裸鼠瘤体的抑制作用更为显著。体外实验:黄连素、5-FU单独用药对结肠癌细胞有抑制作用,黄连素联合5-FU对结肠癌细胞的抑制作用更为显著。黄连素联合5-FU可通过上调Caspase-3、TP53、和TNF水平促进细胞凋亡,抑制肿瘤生长。

LC-MS/MS同时测定左金丸和香连丸中6种生物碱的含量

目的:建立左金丸(黄连、吴茱萸)和香连丸(黄连(吴茱萸制)、木香)中6种生物碱含量的LC-MS/MS测定方法。方法:色谱条件:Phenomenex Luna C18柱(5μm,250 mm×4.60 mm);乙腈-水(4 mmol/L乙酸铵和0.08%甲酸)为流动相,梯度洗脱;质谱条件:采用电喷雾离子源(ESI),正离子检测,MRM模式。结果:左金丸中药根碱、黄连碱、巴马汀、小檗碱、吴茱萸碱和吴茱萸次碱的平均回收率分别为101.0%,101.3%、101.2%、100.2%、99.6%、99.7%,RSD分别为1.1%、1.8%、0.98%、1.0%、1.3%、1.3%,香连丸中药根碱、黄连碱、巴马汀、小檗碱和吴茱萸碱的平均回收率分别为101.6%、99.8%、101.9%、101.0%、101.3%,RSD分别为1.0%、1.9%、0.75%、1.1%、1.9%。结论:本方法可同时测定左金丸和香连丸中药根碱、黄连碱、巴马汀、小檗碱、吴茱萸碱和吴茱萸次碱的含量,具有快速、简便等特点。

香连丸组方抗菌作用研究

实验采用琼脂稀释法对香连丸抗菌作用进行了拆方研究，结果表明：香连丸煎剂伴外抗菌作用较单用黄连为弱；香连丸临床应用以丸剂为宜。

薄层色谱-荧光分光光度法测定黄连及香连丸中盐酸小檗碱的含量

目的建立黄连和香连丸中盐酸小檗碱的含量测定方法。方法样品经提取、薄层展开后,采用薄层色谱-荧光分光光度法对黄连和香连丸中盐酸小檗碱进行含量测定,展开剂为苯-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-氨水(6:3:1.5:1.5:0.5),激发波长Ex=365nm,发射波长Em=409nm。结果盐酸小檗碱在0.473～3.784μg范围内线性关系良好,r=0.9993。黄连的回收率为99.03%,RSD=1.86%。香连丸的回收率为97.10%,RSD=1.09%。结论该法操作简便,分离效果好,灵敏度高。

HPLC法同时测定加味香连丸中芍药苷、柚皮苷、橙皮苷和黄芩苷

目的建立同时测定加味香连丸中芍药苷、柚皮苷、橙皮苷和黄芩苷的HPLC法。方法采用Hypersil ODS色谱柱（4.6 mm×200 mm,5μm）;乙腈-0.2%磷酸水溶液为流动相;体积流量1.0 m L/min;检测波长274 nm;柱温为25℃。结果加味香连丸中的芍药苷、柚皮苷、橙皮苷和黄芩苷分别在0.32~7.68μg/m L（r=0.999 8）、2.08~49.92μg/m L（r=0.999 8）、0.68~16.32μg/m L（r=0.999 7）和1.32~31.68μg/m L（r=0.999 8）范围内与峰面积呈良好的线性关系;平均回收率分别为98.2%（RSD为0.88%）、97.7%（RSD为1.3%）、98.7%（RSD为0.94%）和97.9%（RSD为0.90%）。结论本方法适用于加味香连丸中4种成分的定量测定。

香连丸对急性溃疡性结肠炎小鼠氧化应激介导的细胞自噬的影响研究

目的观察香连丸对急性溃疡性结肠炎大鼠氧化应激反应及其介导的细胞自噬的影响。方法 60只C57BL/6小鼠随机分为正常组、模型组、香连丸低、中、高剂量组和美沙拉嗪组。除正常对照组外,余下各组大鼠均采用DSS的方法复制UC模型。分别观察各组大鼠结肠组织病理学形态,生化法检测氧化应激指标(MDA、SOD和GSH-px)的含量,Western blotting法检测自噬相关蛋白(Beclin-1、LC3Ⅱ、LC3Ⅰ和p62)的表达。结果香连丸能够显著改善UC小鼠结肠组织形态,降低DAI及组织学损伤评分,与模型组比较差异均具有显著统计学意义(P <0.01);此外,香连丸还能显著下调结肠组织中MDA和LC3Ⅰ的表达,增加SOD及GSH-px的活性、Beclin-1、LC3Ⅱ、p62蛋白的表达及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值,与模型组比较差异均具有统计学意义(P <0.05和P <0.01)。结论香连丸可以明显降低氧化应激反应,促进细胞自噬,减轻肠道炎性损伤,促进组织修复。

IL-6/STAT3信号通路在溃疡性结肠炎发病中的机制及香连丸对其的干预作用

目的通过STAT3抑制剂及香连丸的干预,观察溃疡性结肠炎(UC)模型大鼠结肠组织IL-6、STAT3蛋白变化,探讨UC发病中IL-6/STAT3信号通路的变化机制。方法将100只雄性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、中药组(香连丸)、抑制剂组、中药+抑制剂组。采用经典TNBS灌肠法复制UC大鼠模型,造模成功后予抑制剂AG-490腹腔注射及香连丸灌胃干预。观察大鼠结肠黏膜组织损伤程度并评分,透射电镜观察各组结肠黏膜情况,Western blotting检测IL-6、STAT3蛋白变化。结果 UC模型大鼠结肠部位溃疡形成,肉眼及镜下观察可见炎症、充血、水肿等病理改变。与正常组比较,UC模型大鼠结肠组织IL-6、STAT3蛋白表达均显著增高(P<0.001);与模型组比较,中药组、抑制剂组及中药+抑制剂组结肠组织中IL-6、STAT3蛋白表达水平相对降低(P<0.001)。结论 IL-6/STAT3通路相关因子表达异常是溃疡性结肠炎发生的重要分子生物学基础,香连丸可通过调节IL-6/STAT3通路抑制UC肠黏膜STAT3的活化,促进炎症细胞凋亡,从而起到临床治疗作用。

香连滴丸制备方法的实验研究

本文研究了木香、黄连的提取工艺和滴丸制备方法。香连滴丸制备方法:用木香、黄连提取混合物吸附木香挥发油,加适量水研成均匀糊状,再加入熔融的PEG4000,置水浴上拌匀,倒入已预热(90℃)的自制滴丸器内,用内口径为4.5mm、外口径为6.1mm的滴头,以24滴/min的滴速将混熔物滴入甲基硅油中。所制备的滴丸符合《中华人民共和国药典》(1990年版)滴丸剂通则要求。体外抗菌实验证明,香连滴丸与香连丸有相同的抗菌作用。

加味香连丸的质量控制研究

[目的]对加味香连丸质量控制进行研究。[方法]采用薄层色谱法对加味香连丸中白芍、当归、黄芩进行定性鉴别,建立高效液相色谱法同时测定加味香连丸中芍药苷、柚皮苷、黄芩苷、厚朴酚的含量。[结果]白芍、当归、黄芩的薄层色谱鉴别斑点清晰,阴性对照无干扰; 高效液相色谱方法测定加味香连丸中芍药苷、柚皮苷、黄芩苷、厚朴酚分别在0.011 68~0.116 8、0.022~0.22、0.255~0.025 5、0.004 1~0.041 g/L范围内线性关系良好,平均回收率分别为98.75%、99.79%、99.22%、99.36%（n=6）; RSD分别为1.63%、1.3%、1.57%、1.6%。[结论]本法简便易行、准确、重现性良好,为加味香连丸的质量控制提供了理论依据。

HPLC法测定香连制剂中盐酸小檗碱、巴马汀和药根碱含量

建立香连制剂中盐酸小檗碱、盐酸巴马汀和盐酸药根碱含量测定方法.采用高效液相法测定香连片（丸）中盐酸小檗碱、盐酸巴马汀和盐酸药根碱含量,色谱柱：Diamonsil C18;流动相：0.2 mol·L^-1磷酸二氢钠（用磷酸调节pH至3.0）-乙腈（70 ∶ 30）;流速：1 mL·min^-1;柱温：30℃;检测波长：345 nm.盐酸小檗碱在10.2～510 ng范围内线性关系良好,r=0.9997,平均回收率为98.43%,RSD=2.0%;盐酸巴马汀在5.0～250 ng范围内线性关系良好,r=0.9998,平均回收率为98.51%,RSD=2.4%;盐酸药根碱在4.8～240 ng范围内线性关系良好,r=0.9992,平均回收率为97.57%,RSD=2.7%.该方法简便可行、重复性好,可更好评价香连片（丸）质量.

邵朝弟教授名方妙用治疗肾病

邵朝弟教授是全国著名中医肾病专家,尤其擅长肾系病证的辨证治疗,方精药简,善用小方、名方。临证中善于将香连丸(木香、萸黄连)、连苏饮(黄连、苏叶)、左金丸(黄连、吴茱萸)、水陆二仙丹(金樱子、芡实)、当归补血汤(黄芪、当归)、二至丸(女贞子、旱莲草)、缩泉丸(乌药、益智仁、山药)、二鲜饮(白茅根、藕节)等名方灵活应用于肾系病证的治疗当中,疗效显著。

美沙拉嗪联合香连丸对溃疡性结肠炎患者细胞因子及免疫细胞的影响

目的探讨美沙拉嗪联合香连丸对溃疡性结肠炎患者血清细胞因子及免疫细胞水平的影响。方法选取佳木斯大学附属第一医院消化科接受治疗的溃疡性结肠炎患者86例,按随机数字表法进行分组,对照组43例予美沙拉嗪治疗,研究组43例予美沙拉嗪联合香连丸治疗,对比2组患者治疗前后细胞因子及免疫细胞水平,同时对比临床疗效。结果对照组治疗后临床有效率69.77%低于研究组治疗后临床有效率88.37%(P<0.05);与对照组比较,研究组治疗后肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平低于对照组,白细胞介素4(IL-4)、白细胞介素2(IL-2)、白细胞介素10(IL-10)水平高于对照组,治疗后血清三叶因子1(trefoil factor 1,TFF1)、三叶因子3(trefoil factor 3,TFF3)水平高于对照组,治疗后CD3^+及CD4^+/CD8^+、NK细胞水平高于对照组,CD8^+水平低于对照组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论采用美沙拉嗪联合香连丸能减轻溃疡性结肠炎患者炎症反应,提高临床效果,不良反应较低。

高效液相色谱法测定加味香连丸中盐酸小檗碱的含量

目的建立加味香连丸中盐酸小檗碱含量测定的高效液相色谱方法。方法色谱柱为Agilent SB-C18(250mm×4.6mm,5μm);流动相为磷酸盐缓冲液[0.05mol·L-1磷酸二氢钾和0.05mol·L-1庚烷磺酸钠(1∶1),含0.2%的三乙胺,并用磷酸调pH值至3.0]-乙腈(68∶32);检测波长为345nm;流速:1.0mL/min;柱温:40℃。结果盐酸小檗碱在24.06～64.17μg·mL-1范围内呈良好的线性关系,平均回收率为98.86%,RSD为1.1%。结论本法可用于加味香连丸中盐酸小檗碱的含量测定。

香连丸对活动期溃疡性结肠炎患者自然杀伤T细胞功能的调节作用

目的:探讨香连丸对活动期溃疡性结肠炎(UC)患者自然杀伤T细胞(NKT)功能的调节作用。方法:收集坚持随访行电子结肠镜的56例活动期UC患者,随机分为观察组与对照组各28例,分别使用香连丸及柳氮磺吡啶治疗,比较治疗前后外周血及肠黏膜内NKT及其胞内细胞因子γ干扰素(IFN-γ)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的百分含量。结果:治疗前两组患者NKT、IFN-γ及TNF-α均无统计学差异;治疗后两组患者临床表现均好转,且上述三项指标均呈不同程度回升,但上升幅度以观察组明显,且治疗后观察组上述三项指标均明显高于对照组(P<0.05)。结论:NKT降低是活动期UC的一个重要特征,香连丸可有效上调NKT、IFN-γ及TNF-α的含量,可能是香连丸治疗活动期UC的免疫机制之一。

HPLC法测定加味香连丸中芍药苷的含量

目的建立加味香连丸中芍药苷的含量测定方法,用于加味香连丸质量标准的研究。方法本实验采用HPLC法测定芍药苷含量,使用C18色谱柱,甲醇∶水∶冰醋酸（25∶75∶0.1）为流动相,检测波长为230nm。结果芍药苷在0.42~2.1μg与峰面积呈良好的线性关系（r=0.9999,n=5）,平均回收率为98.92%（RSD为1.56%,n=6）。结论该法简便、快速、稳定、可靠,可用于测定加味香连丸中芍药苷的含量。