尿液蛋白激酶Y基因启动子位点甲基化在前列腺癌早期诊断中的价值

目的 探讨尿液蛋白激酶(PRKY)基因启动子位点甲基化在前列腺癌(PCa)早期诊断中的临床价值。方法 收集50例疑似PCa患者的尿液,提取DNA后,通过定量甲基化特异性PCR(qMSP)法检测PRKY基因启动子位点cg05163709、cg08045599及cg05618150甲基化水平,同时将患者分为良性前列腺增生(BPH)组和PCa组,并分析两组患者临床指标差异以及两组患者尿液中的PRKY基因启动子位点甲基化状态。建立受试者工作特征曲线(ROC),计算曲线下面积(AUC),分析其在PCa中的诊断价值,并联合临床指标进行联合诊断。结果 PCa患者尿液标本中cg05163709和cg05618150甲基化率明显高于BPH患者,其中cg05163709甲基化诊断PCa的AUC为0.762,敏感度为86.70%。与前列腺特异性抗原(tPSA)等临床指标相比,PRKY甲基化在PCa早期筛查中表现更好。cg05618150甲基化与前列腺特异抗原密度(PSAD)联合诊断的AUC为0.787,敏感度为86.70%;cg05163709甲基化与PSAD联合诊断PCa的AUC为0.855,特异度为95.00%。结论 尿液PRKY基因启动子cg05163709和cg05618150位点甲基化在诊断PCa上具有较高的敏感度和特异度,有望成为PCa早期诊断的生物标志物。

液泡氨肽酶Y编码基因PoAPE3在稻瘟病菌中的生物学功能研究

氨肽酶是一类可以选择性剪切氨基酸残基的蛋白酶,液泡氨肽酶Y能够调控碱性氨基酸残基的剪切以及液泡的活性。本研究通过同源性比对获得酵母液泡氨肽酶Y在稻瘟病菌中的同源基因PoAPE3,利用基因敲除法获得PoAPE3基因敲除突变体(ΔPoAPE3),并构建回补体菌株进行生物学功能分析。表型测定结果表明,PoAPE3基因敲除突变体在产孢量、孢子萌发率、致病性、侵染过程等方面与野生型均无明显差异。突变体在完全培养基(CM)和稻秆培养基(SDC)上生长速率下降,且在应对胁迫剂H 2O 2时表现为更耐受,应对刚果红时表现为更敏感。以上结果表明PoAPE3参与调控稻瘟病菌的营养生长和对外界环境胁迫的应答过程。

大豆核因子GmNF-YA13基因的克隆及功能分析

【目的】探究大豆核因子GmNF-YA13基因在大豆应对非生物胁迫中的生物学功能,为GmNF-YA13基因在抗逆育种中的应用奠定基础。【方法】以大豆北豆9号和烟草NC89的种子为供试材料,将大豆培养至第一片三出复叶展开后,分别进行干旱、高盐、低温和脱落酸(ABA)处理,通过实时荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)对GmNF-YA13在以上4种非生物胁迫下的相对表达量进行检测,并对GmNF-YA13进行克隆及生物信息学分析,将GmNF-YA13转化烟草,并对转基因烟草中抗逆相关基因(NtABA2、NtOsmotin、NtAPX2、NtSOD、NtCAT1和NtCaMK3)的表达量进行qRT-PCR检测。【结果】干旱、高盐、低温和ABA处理均能不同程度诱导GmNF-YA13的表达,其中干旱胁迫和ABA处理对GmNF-YA13的诱导效果尤为显著。GmNF-YA13位于大豆基因组13号染色体,开放阅读框915 bp,编码含有304个氨基酸的蛋白质,该蛋白质分子量75.14 ku,等电点5.10。GmNF-YA13蛋白序列包含一个保守的DNA结合结构域。蛋白系统进化分析结果表明,GmNF-YA13与GmNF-YA7和拟南芥AtNF-YA1亲缘关系较近。启动子顺式作用元件预测分析结果表明,GmNF-YA13启动子区含有3个ABA响应元件ABRE、1个厌氧诱导元件ARE、1个防御和胁迫反应元件TC-rich repeats及1个干旱诱导的MYB转录因子结合位点MBS。GmNF-YA13在大豆叶片中的相对表达量最高。同时构建GmNF-YA13植物表达载体,并将GmNF-YA13转化烟草,获得3株转基因烟草植株。转基因烟草中抗逆相关基因表达量检测结果显示,转基因烟草中的NtABA2、NtOsmotin和NtAPX2相对表达量均显著高于野生型烟草,转基因烟草中NtSOD、NtCAT1和NtCaMK3的相对表达量与野生型烟草差异不显著。【结论】GmNF-YA13与大豆干旱、高盐、低温等非生物胁迫之间关系密切,GmNF-YA13可能通过促进抗逆相关基因表达量的升高以提高转基因烟草的抗逆性。

灵龟灸法配合电针治疗痰湿阻络型颈性眩晕疗效观察

目的观察灵龟灸法配合电针治疗痰湿阻络型颈性眩晕(cervical vertigo,CV)的临床疗效。方法将80例痰湿阻络型CV患者随机分为A组和B组,每组40例。A组采用灵龟灸法配合电针治疗,B组采用单纯电针治疗。观察两组治疗前后眩晕残障程度评定量表(dizziness handicap inventory,DHI)评分、颈椎功能障碍指数量表(neck disability index,NDI)评分、椎动脉经颅多普勒超声(transcranial doppler,TCD)各项参数[左椎动脉(left vertebral artery,LVA)与右椎动脉(right vertebral artery,RVA)收缩期血流速度(systolic blood flow velocity,Vs)、舒张期血流速度(diastolic velocity,Vd)、平均血流速度(mean velocity,Vm)]及血浆神经肽Y(neuropeptide Y,NPY)、内皮素-1(endothelin-1,ET-1)和降钙素基因相关肽(calcitonin gene related peptide,CGRP)水平的变化,并比较两组临床疗效及安全性指标。结果两组治疗后DHI评分、NDI评分及血浆NPY、ET-1水平均较同组治疗前显著降低,椎动脉TCD各项参数及血清CGRP水平均显著上升,差异均具有统计学意义(P<0.05)。A组治疗后DHI评分、NDI评分、椎动脉TCD各项参数及血浆NPY、ET-1水平与B组比较,差异均具有统计学意义(P<0.05)。A组治疗后总有效率为95.0%,明显高于B组的80.0%,两组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。两组治疗前后血、尿常规及肝肾功能均未见明显异常,且无烫伤、化脓等不良事件发生。结论灵龟灸法配合电针治疗痰湿阻络型CV疗效确切,能减轻患者眩晕症状,改善颈椎功能及椎动脉TCD各项参数,调节血浆NPY、ET-1和CGRP水平,且安全性较好。

转录因子NbNAC062及其纳米药物对PVY侵染的抑制作用

前期研究表明NbNAC062能够抑制PVY早期侵染,本研究通过构建NbNAC062敲除突变体和过表达植株进一步明确NbNAC062的抗病毒功能,并利用异硫氰酸荧光素(fluorescein-5-isothiocyanate,FITC)标记的壳聚糖季铵盐(chitosan quaternary ammonium salt,HACC)包被NbNAC062质粒,制备HACC-NbNAC062纳米药物。激光共聚焦显微镜对纳米药物进行示踪;透射电镜和激光粒子分析仪对其表征进行分析。通过GFP荧光差异、qRT-PCR和蛋白免疫印迹检测病毒含量来探明纳米药物对PVY侵染的影响。结果显示,敲除组病毒GFP荧光增强,而过表达组病毒GFP荧光减弱,PVY CP含量与上述结果一致。纳米药物粒径集中分布在18~32 nm之间;Zeta电位为+41.8 mV。浸润纳米药物HACC-NbNAC062后48 h,在细胞内观察到FITC-HACC(绿色荧光)与RFP-NbNAC062(红色荧光);接种PVY-GFP后5、7、9 d,NbNAC062-HACC施药组的PVY CP mRNA水平较对照组分别下调17.41%、47.81%、13.03%;第7天施药组PVY CP蛋白水平明显低于对照组,病毒荧光强度显著暗于对照组。上述研究结果说明HACC-NbNAC062纳米药物成功递送了NbNAC062,并发挥了其对PVY初期侵染的抑制作用。

女性性反转综合征合并性腺母细胞瘤及无性细胞瘤一例

性反转综合征是一类染色体性别与性腺性别不相符的遗传性疾病,其发病率极低、发病机制不详且相关临床表现各异。现报告1例染色体核型为46,XY,但其社会性别、内外生殖器均为女性,且右侧卵巢伴有性腺母细胞瘤及无性细胞瘤患者的病例资料,以期为该病的相关诊疗及研究提供一些新的临床思路。

针灸对克罗恩病模型大鼠天枢穴局部皮肤中缓激肽、CGRP和NPY的影响

目的观察艾灸与针刺对克罗恩病模型大鼠天枢穴局部皮肤中缓激肽(bradykinin,BK)、降钙素基因相关肽(calcitonin gene related peptid,CGRP)、神经肽Y(neuropeptide Y,NPY)含量的影响。方法将50只SD大鼠随机分为正常组、模型组、艾灸组、针刺组和西药组,每组10只。除正常组外,其余各组应用2,4,6-三硝基苯磺酸(2,4,6-trinitrobenzenesulfonic acid,TNBS)灌肠的方法制备克罗恩病肠纤维化大鼠模型。模型制备成功后,分别采用艾灸和针刺的方法干预艾灸组和针刺组大鼠双侧天枢穴和上巨虚穴,每次15 min;西药组大鼠给予美沙拉嗪肠溶片溶液灌胃。上述干预均1次/d,连续干预7 d。干预结束后,肉眼和HE染色观察各组大鼠结肠病理形态学变化;剪取各组大鼠天枢穴局部皮肤,ELISA法检测BK的蛋白表达,Western blot法检测CGRP、NPY的蛋白表达。结果与正常组相比,模型组大鼠肠壁可见典型鹅卵石样改变、黏膜充血水肿等病理形态学损伤,天枢穴局部皮肤中BK含量显著升高(P<0.01),CGRP相对表达量显著降低(P<0.05),NPY相对表达量差异无统计学意义(P>0.05)。与模型组相比,各治疗组大鼠肠黏膜受损情况明显较轻,天枢穴局部皮肤中BK含量均显著降低(P<0.01),CGRP相对表达量均显著升高(P<0.01或P<0.05),NPY相对表达量差异无统计学意义(P>0.05)。针刺组、艾灸组和西药组3组之间相比,天枢穴局部皮肤中BK、CGRP和NPY的差异均无统计学意义(P>0.05)。结论克罗恩病大鼠天枢穴局部皮肤中BK、CGRP的变化可能是肠腑病变在体表的客观反映,艾灸、针刺对克罗恩病大鼠天枢穴局部皮肤中BK、CGRP具有调节作用。

NPY和POMC基因在生长差异与饥饿再摄食鳙个体中的表达分析

为研究摄食促进基因和摄食抑制基因对鱼类生长调控和饥饿再摄食过程的影响,研究克隆了鳙神经肽Y(HynNPY)基因和前阿黑皮素原(HynPOMC)基因cDNA序列,采用qRT-PCR技术分析它们在生长显著差异鳙个体下丘脑、肠中的基因表达变化;设置对照组(连续投喂4周)、饥饿组、饥饿再摄食组,分析NPY和POMC在不同处理组鳙的下丘脑、肠中的基因表达变化。鳙NPY和POMC基因cDNA全长分别为839和799 bp,开放阅读框有291和657 bp,分别编码96和218个氨基酸。系统进化分析结果表明,鳙NPY和POCM基因具有高度保守性。鳙NPY在下丘脑的表达量最高,其次为肠和脑;POMC在肠道中的表达量最高,其次为下丘脑和肝脏。在相同环境下生长差异鳙个体的下丘脑和肠中,NPY在极大个体的表达量高于极小组个体,POMC在极小个体中的表达量高于极大个体。饥饿导致NPY在下丘脑表达上升,在肠表达量显著上升,恢复摄食后,NPY在下丘脑和肠中表达量下降;POMC在饥饿组下丘脑和肠中都表现为表达量呈显著上升,复投喂后POMC表达量逐步下降至接近对照组水平。肠组织学观察显示,极大个体的肠腔直径、肠绒毛长度、肠壁厚度均优于极小个体;饥饿胁迫导致的肠绒毛断裂、黏膜白细胞浸润等损伤能在再摄食后逐步恢复。研究结果表明,NPY促进摄取更多食物,POMC抑制食欲,二者共同参与鳙中枢神经和外周组织摄食调控,并可能通过影响摄食行为、营养吸收和GH分泌从而直接或间接调控鳙生长。研究结果对加深鳙生长调控分子机制的理解及遗传改良具有较大的理论和现实意义。

靶向切割猪Y染色体的CRISPR/Cas9载体构建及功能验证

【目的】通过CRISPR/Cas9系统对Y染色体多位点切割,实现目标染色体的敲除,为畜禽性别控制提供新的手段。【方法】以CRISPR/Cas9技术为基础,寻找Y染色体上能被sgRNA特异性识别的多拷贝重复序列,并通过体外切割、定量分析、核型鉴定验证其对靶点的有效性。【结果】所设计的sgRNA能够在体外实现对靶片段的明显切割,且切割效率均达到了50%以上。基因的定量分析结果证明了其在细胞水平切割的有效性,且簇状重复序列切割效果明显优于散在重复序列;核型鉴定结果证实了细胞水平猪Y染色体的丢失。【结论】研究结果为后续构建染色体敲除猪,实现猪的性别控制奠定了基础。

MLN4924通过抑制类泛素化通路上调人肺腺癌A549细胞中PD-L1的表达

目的:探究MLN4924对肺腺癌A549细胞中程序性死亡-配体1(PD-L1)表达的影响及其可能的内在机制。方法:体外培养A549细胞,按(0、0.25、0.5、0.75、1、5、10μmol/L)MLN4924分组分别处理24、48、72 h后,CCK-8法检测细胞增殖抑制率,作图并计算各组半数抑制浓度(IC_(50)),流式细胞术检测PD-L1的表达,选择最适时间72 h及其IC_(50)用于后续实验。后续实验按(0、0.469μmol/L)MLN4924分组培养72 h,Western blot法检测FBXW2蛋白、肌段同源盒2(MSX2)蛋白、Y-染色体性别决定基因盒2(SOX2)蛋白、PD-L1蛋白表达,qPCR法测定PD-L1 mRNA表达。结果:MLN4924在24、48、72 h的IC_(50)值分别为(1.976、0.647、0.469)μmol/L;与对照组相比,实验组A549细胞PD-L1表达均上调,呈时间-浓度依赖性。与对照组相比,实验组A549细胞FBXW2、SOX2蛋白表达降低,MSX2蛋白、PD-L1 mRNA及蛋白表达均增加。结论:MLN4924通过抑制类泛素化通路上调人肺腺癌A549细胞中PD-L1表达。

Y染色体性别决定区相关高速泳动族框因子9和周期素依赖性激酶4在结直肠息肉、结直肠癌中的表达及意义

目的 探究Y染色体性别决定区相关高速泳动族框因子9(SOX9)和周期素依赖性激酶4(CDK4)在结直肠息肉、结直肠癌中的表达及意义。方法 选取中国人民解放军第八十二集团军医院2015年1月至2017年6月收治的结直肠癌病人病理组织标本(结直肠癌组)94例及癌旁正常结直肠组织(正常结直肠组)39例,另取同时期结直肠息肉病人结直肠息肉组织(结直肠息肉组)51例。采用免疫组织化学SP染色法检测SOX9、CDK4的表达情况,分析SOX9、CDK4表达与结直肠癌病人临床病理参数之间的关系;对结直肠癌病人进行术后复查随访,分析结直肠癌病人生存情况。结果 SOX9在正常结直肠组织、结直肠息肉组织和结直肠癌组织中的阳性表达率分别为10.26%(4/39)、27.45%(14/51)、76.59%(72/94),差异有统计学意义(P<0.05);CDK4在正常结直肠组织、结直肠息肉组织和结直肠癌组织中的阳性表达率分别为7.69%(3/39)、21.57%(11/51)、54.84%(51/94),差异有统计学意义(P<0.05);正常结直肠组织中SOX9、CDK4蛋白表达水平低于结直肠息肉组织、结直肠癌组织(P<0.05),结直肠息肉组织中SOX9、CDK4蛋白表达水平低于结直肠癌组织(P<0.05)。结直肠癌病人病理组织SOX9、CDK4表达与肿瘤分化程度、临床分期、是否合并淋巴结转移有关(P<0.05);结直肠癌组织SOX9与CDK4表达呈正相关(r=0.58,P<0.001),由TCGA数据库检索结直肠癌组织SOX9、CDK4基因表达相关性显示,二者之间亦呈正相关(r=0.40,P<0.001);SOX9高表达、低表达病人术后3年累积生存率分别为44.6%、72.4%,两组比较Log-rank检验差异有统计学意义(χ^(2)=8.31,P=0.004);CDK4高表达、低表达病人术后3年累积生存率分别为25.6%、76.5%,两组比较Log-rank检验差异有统计学意义(χ^(2)=36.36,P<0.001)。结论 SOX9和CDK4在结直肠癌组织、结直肠息肉组织、正常结直肠组织中的阳性表达率逐渐降低,与结直肠癌肿瘤分化程度、临床分期、淋巴结转移情况及预后有关,可能参与结直肠癌的发生发展过程。

穴位埋线对肝阳上亢证高血压患者CGRP、NPY的影响

目的:探讨穴位埋线对肝阳上亢证高血压患者的效果及对降钙素基因相关肽(CGRP)、神经肽Y(NPY)的影响。方法:选择阳江市人民医院2021年1月—2022年6月收治的肝阳上亢证高血压患者80例,采用随机数字表法将筛选后的受试者按1∶1分配入对照组与观察组。对照组给予苯磺酸氨氯地平片+调整生活方式干预,观察组在对照组基础上给予穴位埋线干预。比较两组治疗前后血压、中医症候评分、血清CGRP及NPY水平,评价两组治疗安全性。结果:治疗前两组血压水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05);治疗后两组收缩压、舒张压水平均低于治疗前,观察组均低于对照组(P<0.05)。治疗前两组中医症候评分比较,差异无统计学意义(P>0.05);治疗后两组中医症候评分均低于治疗前,观察组低于对照组(P<0.05)。治疗前两组血清CGRP、NPY水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05);治疗后两组血清CGRP水平均高于治疗前,NPY水平均低于治疗前,观察组血清CGRP水平高于对照组,NPY水平低于对照组(P<0.05)。两组治疗过程中均未发生明显不良反应。结论:穴位埋线治疗肝阳上亢证高血压患者的效果良好,能够显著改善患者血压水平、临床症状,其作用机制可能与调控血清CGRP、NPY水平相关。

内蒙古赤峰地区蒙古族35个Y-STR和3个Y-InDel的遗传多态性

调查35个Y-STR基因座和3个Y-InDel标记在内蒙古赤峰地区蒙古族的分布情况并计算与其他蒙古族男性群体的遗传距离。应用YfilerTM Platinum复合扩增试剂盒检测1318名赤峰地区蒙古族无亲缘关系的男性个体在35个Y-STR基因座和3个Y-InDel标记的基因分型。32个Y-STR单拷贝基因座分别检测到4~16种“等位”基因;3个Y-STR多拷贝基因座(DYS527、DYF387S1、DYS385)分别检测到60、59、79种“等位”基因组合。单倍型多样性为0.999974。经与YHRD数据库中其他蒙古族男性群体共有的25个Y-STR基因座统计数据比较,发现赤峰地区蒙古族男性与呼和浩特蒙古族遗传距离最近(Rst=0.0516),与呼伦贝尔蒙古族遗传距离最远(Rst=0.1091)。所检测35个Y-STR基因座和3个Y-InDel标记在内蒙古赤峰地区蒙古族男性群体中具有丰富的遗传多态性。

miRNA-485-5p靶向调控SOX5对结直肠癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响分析

目的 分析miRNA-485-5p靶向调控性别决定区Y框蛋白5(SOX5)对结直肠癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响。方法 取结直肠癌癌组织、癌旁组织,检测miRNA-485-5p、SOX5表达,购买结直肠癌结细胞株HT29,细胞培养后分为对照组、空载组、沉默组、过表达组,对照组常规培养,不做转染处理,空载组、沉默组、过表达组分别转染miRNA-485-5p-NC、miRNA-485-5pmimics、anti-miRNA-485-5p。鉴定转染效率,萤光素酶报告基因系统验证miRNA-485-5p、SOX5靶向关系,分析转染miRNA-485-5p对结直肠癌细胞生物学行为的影响。结果 结直肠癌癌组织中miRNA-485-5p表达量低于癌旁组织,SOX5表达量高于癌旁组织(P<0.05)。与对照组、空载组相比,沉默组miRNA-485-5p表达量降低,过表达组miRNA-485-5p表达量升高(P<0.05)。与对照组、空载组相比,沉默组SOX5表达量升高,过表达组SOX5表达量降低(P<0.05);与沉默组相比,过表达组SOX5表达量降低(P<0.05)。与对照组、空载组相比,沉默组细胞增殖活性、细胞迁移数、细胞侵袭数均升高,过表达组增殖活性、细胞迁移数、细胞侵袭数均降低(P<0.05);与沉默组相比,过表达组增殖活性、细胞迁移数、细胞侵袭数均降低(P<0.05)。与空载组相比,过表达A组、过表达B组增殖活性、细胞迁移、侵袭数降低,差异具有统计学意义(P<0.05);与过表达A组相比,过表达B组增殖活性、细胞迁移数、细胞侵袭数升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 miRNA-485-5p可抑制结直肠癌细胞增殖、迁移、侵袭,其作用机制可能为靶向调控SOX5表达,有望成为结直肠癌的治疗靶点。

利用SSR标记对家蚕黄血基因的定位及连锁分析

位于家蚕第2染色体的黄血基因(yellow blood,Y)控制类胡萝卜素由中肠进入血淋巴,是形成黄色茧系的基础。利用家蚕雌不发生交换的特点,采用黄茧品系KY和白茧品系C108组配正反交BC_1群体(C108×KY)×C108和C108×(C108×KY),分别记作BC_1F和BC_1M,根据已经构建的家蚕SSR分子连锁图谱,对Y基因进行了定位及连锁分析。筛选出6个与Y基因连锁的SSR标记,这些标记在BC_1F群中的所有黄血个体均表现出与(C108×KY)F_1相同的杂合型带型；而所有白血个体带型与亲本C108一致,为纯合型。利用另一个群体BC_1M构建了关于Y基因的遗传连锁图,遗传距离为18．9cM,Y基因位于15．6cM。

基因芯片技术检测黄瓜花叶病毒、烟草花叶病毒和马铃薯Y病毒

黄瓜花叶病毒、烟草花叶病毒和马铃薯Y病毒是世界性分布的重要植物病毒,对农业生产危害较大。农作物感病多为复合侵染,症状表现较为复杂,急需建立快速、准确、能够一次检测多种病毒的检测方法。本研究根据3种病毒的外壳蛋白基因序列,设计引物和探针,制备基因芯片;用Cy3标记下游引物,RT-PCR扩增产物与芯片杂交,荧光扫描仪检测并分析信号。结果表明,该芯片可以从病毒侵染样本中检测到特异性识别信号,检测灵敏度比RT-PCR高10～100倍,该技术能对植物病毒做出快速、准确的检测。

斜带石斑鱼IFN-γ基因的克隆与表达分析

IFN-γ在天然免疫和适应性免疫应答中均发挥着重要的作用。由于低等脊椎动物IFN-γ与哺乳动物IFN-γ相似性非常低,硬骨鱼类的IFN-γ近年来才得到鉴定。本研究报道了斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)的IFN-γ基因,并对其表达进行了分析。斜带石斑鱼IFN-γcDNA全长为867 bp,编码200个氨基酸。其基因组全长为5 104 bp,由4个外显子、3个内含子组成。氨基酸序列比对显示斜带石斑鱼IFN-γ与高等脊椎动物IFN-γ的序列相似性较低,仅为32.5%～39%,与其他硬骨鱼类的IFN-γ相似性为38.0%～68.5%。序列分析结果显示,斜带石斑鱼IFN-γ分子C末端中存在IFN-γ的特征序列以及核定位基序。二级结构分析结果显示斜带石斑鱼IFN-γ序列中包含6个α螺旋结构,其排列与高等脊椎动物的IFN-γ类似。应用荧光定量PCR检测了IFN-γ基因在Poly I:C诱导后的表达变化。发现在肾、脾、鳃、头肾、皮肤和胸腺组织中,Poly I:C能显著诱导IFN-γ的表达,在胸腺中上调倍数最高,其次为头肾、脾、肾、皮肤和鳃,而在脑和心脏组织中没有显著变化。据此推测,IFN-γ在斜带石斑鱼抵抗病毒感染的过程中起有十分重要的作用。

神经肽Y基因多态性及其与小尾寒羊产羔数的关系

本研究旨在阐明神经肽Y(neuropeptide Y,NPY)基因的多态性及其与小尾寒羊产羔数的关系,为绵羊多羔性的标记辅助选择提供科学依据。采用PCR-SSCP技术检测NPY基因全部3个外显子在小尾寒羊、湖羊、特克塞尔和多赛特羊中的单核苷酸多态性,分析该基因对小尾寒羊多羔性的影响。仅引物P1扩增片段存在多态性,在小尾寒羊中检测到5种基因型,在湖羊和多赛特羊中检测到3种基因型,而在特克塞尔羊中仅检测到1种基因型;测序分析显示,在小尾寒羊中存在CR、TR和TW 3种等位基因,在湖羊和多赛特羊中存在CR和TR 2种等位基因,而在特克塞尔中仅存在CR 1种等位基因。TR与CR相比在绵羊NPY基因编码区第93 bp处发生了1个C→T的单碱基突变;TW与CR相比除发生C93T的单碱基突变外,还在130和131 bp发生了GA→AT的双碱基突变,该突变引起绵羊NPY成熟肽第16位氨基酸由天冬氨酸变为异亮氨酸。对于多态位点C/T,小尾寒羊3种基因型之间产羔数差异均不显著(P>0.05)。对于多态位点GA/AT,RW型小尾寒羊产羔数平均比RR型的多0.56只(P<0.05)。在小尾寒羊5种复合基因型中,TTRW和CTRW型小尾寒羊产羔数差异不显著(P>0.05);TTRR、CTRR和CCRR型小尾寒羊产羔数差异也不显著(P>0.05);TTRW和CTRW型小尾寒羊产羔数均显著高于其余3种基因型(P<0.05)。本研究结果初步表明NPY基因GA/AT突变位点的W等位基因是提高绵羊产羔数的1个潜在有效的DNA标记。

脂肪组织中TNF-α基因表达与神经肽Y Y5受体反义基因减肥降脂作用关系的研究

目的:探讨脂肪组织中TNF-α基因表达与神经肽Y(NPY)Y5受体反义基因减肥降脂作用的关系。方法:建立高营养饮食诱导的肥胖大鼠模型,侧脑室插管后注射NPY Y5受体反义、错义寡核苷酸或生理盐水,观察肥胖大鼠腹腔内脂肪组织湿重与血脂的变化,采用RT-PCR技术检测腹膜后脂肪组织中TNF-α基因的表达水平。结果:①高营养饮食诱导下,肥胖大鼠腹腔内脂肪组织湿重与血脂水平均明显高于正常大鼠,腹膜后脂肪组织中TNF-α基因的表达:水平则显著高于正常大鼠;②NPYY5受体反义寡核苷酸干预后,肥胖大鼠腹腔内脂肪组织湿重与血脂水平均明显降低,腹膜后脂肪组织中TNF-α基因的表达水平则显著低于肥胖对照大鼠。结论:侧脑室注射NPY Y5受体反义寡核苷酸可显著降低肥胖大鼠的体脂、血脂,其机制可能与腹膜后脂肪组织TNF-α基因的表达下调有关。

动物性食品中沙门菌实时荧光定量PCR快速检测方法的建立

根据沙门菌属高度保守的fimY基因序列设计探针和引物,通过优化反应条件,建立检测动物性食品中沙门菌实时荧光定量PCR方法,应用于动物性食品中沙门菌的快速检验。建立的荧光PCR方法灵敏度约为5.2cfu/mL,经对781份肉类、蛋、奶及水产品进行检测,共检出56份阳性样本,与国标(GB/T4789.4——2008)方法的检测结果一致。建立的荧光PCR方法操作简便、特异性强、灵敏度高,具有良好的实用性。