拉米夫定治疗2年时乙肝病毒的YMDD变异情况

观察核苷类似物拉米夫定治疗慢性乙肝病人２年时ＹＭＤＤ变异情况及其与血清ＨＢＶＤＮＡ，ＡＬＴ水平等指标的关系。第一阶段（１－１２周）为随机、双盲、安慰剂对照研究，７２名ＨＢｓＡｇ．ＨＢｅＡｇ阳性至少６个月，ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性的慢性乙肝患者分别口服拉米夫定１００ｍｇ／ｄ（ｎ＝５４）或安慰剂（ｎ＝１８）；第二阶段（１３－１０４周）所有患者均服用拉米夫定 １００ｇ／ｄ。５２周和 １０４周检查病毒的 ＹＭＤＤ变异．其总变异率分别为 １３．７％（８／５８）和 ３９．７％（２３／５８）。１０４周时变异组血清 ＨＢＶＤＮＡ，ＡＬＴ水平高于无变异组（３９４．９±７２７．９比 １６．３±５０．９，Ｐ＝０．００４８；６２．７±５７．９比２６ ４±２７．５，Ｐ＝０．００３），ＨＢＶＤＮＡ阴转率低于未变异组（１７．４％比４８．６％，Ｐ＜０．０５）；服用拉米夫定的慢性乙肝患者的ＹＭＤＤ发生率与服药时间长短有关，血清ＨＢＶＤＮＡ及ＡＬＴ水平与ＹＭＤＤ相关。

拉米夫定治疗慢性乙型肝炎发生病毒学反弹患者YMDD变异分析

选取402例服用拉米夫定后出现乙型肝炎病毒(HBV)DNA反弹的慢性乙型肝炎(CHB)患者血清样品,应用荧光PCR法定性检测YMDD变异情况。402例中有309例(76.87%)检测出YMDD变异,其中120例为YVDD变异,74例为YIDD变异,115例为YVDD+YIDD联合变异;309例YMDD变异患者中同时检测出变异株与野生株占69.26%(214/309),仅检测出变异株占30.74%(95/309)。另外,93例为YMDD野生型阳性。

拉米夫定治疗中国乙型肝炎患者中发现YMDD耐药变异株

为了监测拉米夫定临床治疗过程中耐药性的产生 ,更好地指导临床用药。采用 PCR产物克隆后测序的方法 ,对 2 0例服用拉米夫定病人进行随访观察 ,检测其体内乙型肝炎病毒 (HBV)聚合酶基因 (P gene) )酪氨酸 -蛋氨酸 -天门冬氨酸 -天门冬氨酸 (YMDD)区域变异情况 ,同时观察其 HBV DNA定量和肝功能指标变化。结果发现 ,1例病人在服用拉米夫定 9个月时出现 HBV YMDD变异株 ,并由混合感染逐渐进展为单一的变异株感染 ,出现耐药时伴有 HBV DNA定量反跳和 AL T的上升。表明拉米夫定长期治疗 (>6个月 )可能出现耐药 ,耐药变异株由弱势株逐渐演变为优势株 ,耐药出现时可伴有 HBV

阿德福韦酯联合拉米夫定治疗YMDD变异的慢性乙型肝炎疗效相关因素分析

目的研究分析影响阿德福韦(ADV)联合拉米夫定(LAM)治疗YMDD变异的慢性乙型肝炎疗效的相关因素。方法应用ADV联合LAM治疗71例YMDD变异的患者48周,采用Logistic回归分析影响疗效的相关因素。结果治疗48周时,HBV DNA转阴率为78.9%(56/71),ALT复常率为80.3%(57/71),HBeAg阳性患者HBeAg转阴或血清转换率为26.7%(12/45);治疗24周和48周HBV DNA转阴、48周HBeAg转阴或血清转换和48周ALT复常者较相应时间点未转阴者的基线HBV DNA水平低(P<0.05);Logistic回归分析结果显示,基线HBV DNA低水平、24周HBV DNA转阴、12周YMDD变异转阴是48周获得较好疗效的相关因素。结论采用ADV联合LAM治疗YMDD变异的慢性乙型肝炎患者,其基线HBV DNA低水平、24周HBV DNA转阴、12周YMDD变异转阴是48周疗效较好的预测因素,发生病毒学突破而无生化学突破的患者早期联合治疗可获得更佳的疗效。

拉米夫定治疗后乙肝病毒发生YMDD变异的研究

目的 观察拉米夫定治疗后乙肝病毒发生YMDD变异情况。方法 87例慢性乙肝患者分成两组 ,一组 5 1例接受拉米夫定及保肝治疗 ,另一组 36例做为对照组只给予保肝治疗 ,治疗 1年后对患者HBV多聚酶基因YMDD基序进行定性检测 ,观察是否有突变。结果 拉米夫定治疗组在用药 1年后有 8例发生YMDD突变 ,其中YIDD变异有 5例 ,YVDD变异 3例 ,变异株中有 5例伴HBVDNA、ALT水平升高 ,而对照组无变异株产生。结论 拉米夫定可诱导HBV多聚酶基因 (P基因 )YMDD基序发生基因突变 。

HBV-YMDD变异患者与中医虚实辨证关系初探

目的 :初步探讨服用拉米夫定后HBV -YMDD变异患者中医辨证虚证、实证之间的关系。方法 :对服用拉米夫定半年以上的乙型慢性病毒性肝炎患者采用联合基因集团上海博华基因技术有限公司出品的迈科锐乙型肝炎病毒突变检测基因芯片 ,进行HBV -YMDD变异检测。出现HBV -YMDD者 ,根据中医基础理论 ,将其分为实证、虚证 ,来探讨HBV -YMDD变异患者中医虚、实辨证的关系。结果 :HBV -YMDD变异患者中实证变异率(38/ 4 8)明显高于虚证 (10 / 4 8) ,具有统计学意义。结论 :HBV -YMDD变异与虚、实辨证之间具有相关性。

拉米夫定干扰素α联合治疗慢性乙型肝炎对YMDD产生的影响

目的探讨拉米夫定联合干扰素α治疗慢性乙型肝炎YMDD变异的发生率。方法112例慢性乙型肝炎患者随机分为2组,治疗组60例,用拉米夫定、干扰素α治疗26周,后单用拉米夫定26周;对照组52例,单用拉米夫定治疗52周;所有病例均于治疗前检测丙氨酸转氨酶(ALT)、HBeAg/AntiHBeHBVDNA及YMDD变异。结果112例患者治疗52周后,HBeAg/AntiHBe转换率治疗组为46.7%、对照组为23.1%,两组比较差异有明显性(P<0.05);YMDD变异发生率治疗组为3.3%、对照组为17.3%,两组对照差异有明显性(P<0.05);HBVDNA总转阴率治疗组为83.3%、对照组为67.3%,经统计学处理,差异有明显性(P<0.05)。结论拉米夫定与干扰素α联合治疗对HBeAg/AntiHBe转换率及HBVDNA转阴率均明显优于单用拉米夫定组,并对于延迟及减少YMDD变异相关性耐药有一定的作用。

HBV YMDD模序突变及其与肝癌发生的关系

目的探讨肝癌病人HBV YMDD模序突变及其与肝癌发生的关系。方法用流过式反向斑点杂交结合血清生化指标分析慢乙肝组(CHB)、肝硬化组(LC)和肝癌组(HCC)中HBV YMDD模序突变情况。结果HCC组、LC组、CHB组HBV YMDD模序突变率分别为1.67%(1/60)、4.44%(2/45)和63.82%(30/47)。HCC组、LC组及CHB组中ALT(谷丙转氨酶)活性分别为(66±25)、(66.98±113)、(105±170)U/L,而AST(谷草转氨酶)活性分别为(152±108)、(74.13±58)和(57.2±56.6)U/L。HBV YMDD模序突变的产生与用药时间长短显著相关,HBV YMDD模序突变与ALT升高相关性不显著,但与AST升高显著相关。60例肝癌中有HBVYMDD模序突变的只有1例,突变率为1.67%。结论HBV YMDD模序突变的发生与肝癌发生不存在明显相关性,仅与拉米夫定用药时间长短显著相关。同ALT相比,AST更好地反映了HBV引起的肝病肝脏损坏的严重程度。ALT是拉米夫定用药过程中与HBV YMDD突变有关的较为敏感的肝功能生化诊断和病情监测指标。

乙型肝炎病毒感染者YMDD自然变异研究

目的了解未经抗病毒治疗的慢性乙型肝炎患者中HBVP基因YMDD变异情况,并观察YMDD自然变异组与非变异组临床病情轻重的关系。方法采用PCR和荧光探针杂交检测技术,检测60例慢性乙型肝炎患者血清HBV YMDD自然变异情况。结果在60例患者中,YMDD变异阳性5例(8.33%),阴性55例,5例变异中2例为YIDD阳性,3例为YVDD阳性。结论未经抗病毒治疗的慢性乙型肝炎患者存在YMDD自然变异株;YMDD自然变异的患者没有临床病情加重的趋势。

慢性乙型肝炎YMDD变异后的治疗

目的:评价阿德福韦酯(ADV)和恩替卡韦(ETV)治疗慢性乙型肝炎YMDD变异患者2年的疗效和安全性.方法:2005-06/2007-06我院门诊和住院经拉米夫定治疗后出现YMDD变异的乙型肝炎患者120例,随机分为4组.A组单用ADV10mg/d,治疗96wk;B组采用ADV10mg/d、拉米夫定100mg/d,联合治疗12wk,后单用ADV10mg/d,治疗84wk;C组采用ADV10mg/d、拉米夫定100mg/d,联合治疗96wk;D组接受ETV1mg/d,治疗96wk.患者在治疗前和12、24、48、72、96wk检测肝功能、HBVDNA、HBV标志物、电解质(血磷)、肾功能,对HBVDNA阳性患者检测YMDD变异株,病毒学无应答或反弹的患者进行HBVP区测序.结果:治疗96wk时4组患者间ALT水平、HBeAg阳性患者血清转换率比较,差异均无统计学意义(P>0.05).C组患者ALT复常率、HBVDNA达到检测水平以下的百分率与A组患者比较,差异有统计学意义(χ2=7.500,6.648,P<0.05);4组患者96wk的基因型耐药率分别为16.7%(5/30)、13.3%(4/30)、0及13.3%(4/30).A组1例患者出现重型肝炎.结论:YMDD变异后采用ADV与拉米夫定联合治疗更安全有效.

乙型肝炎病毒YMDD变异与基因型相关性的研究

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)发生YMDD基因变异与HBV基因型的关系。方法首先HBV 6个主要基因型(A^F)特异性多引物用巢式PCR法对175例接受拉米夫定抗病毒治疗患者的血清HBV DNA进行基因分型和分析,再采用实时荧光PCR法对标本进行YMDD变异检测。结果在175例标本中B、C、D基因型阳性率分别为9.1%、88.6%、2.3%;103例标本发生YMDD变异,YMDD总变异率、B、C基因型标本YMDD变异率分别为58.9%、62.5%5、8.1%;HBV B、C两基因型间的YMDD的变异率差异无统计学意义(P>0.05);在10例B基因型YMDD变异的标本中,有2例发生YIDD变异;其余8例发生YVDD(YMDD+YVDD)变异;68例C基因型YMDD变异的标本中,有44例发生YIDD(YMDD+YIDD)变异、24例发生YVDD(YMDD+YVDD)变异;HBV B、C两基因型间的YMDD不同变异类型发生率差异有统计学意义。结论在拉米夫定抗病毒治疗2~4年,HBV YMDD变异率为58.9%;HBV B、C基因型标本间发生YMDD变异率差异无统计学意义;HBV B、C基因型标本基因变异类型差异均有统计学意义(χ2=5.5,P<0.05)。

DNA序列测定法与实时荧光PCR法检测YMDD突变结果的比较

目的比较DNA序列测定法与实时荧光法检测YMDD突变的结果,并对除YMDD突变之外的耐药相关基因突变及其意义进行讨论。方法收集89例慢性乙肝患者的92份血清样本,均用实时荧光PCR法做YMDD突变检测。采用巢式PCR法扩增HBV反转录酶(RT)基因,对PCR产物进行DNA双向测序,采用NTI软件比对结果,并对RT基因上其他11个已知耐药相关突变位点进行分析。结果在37份YMDD突变阴性的样本中,DNA测序法检测结果为33份M204M(未突变)、1份M204I、3份M204V;4份YMDD突变阳性样本均为突变/未突变序列共存;另检出7份样本存在ADV耐药相关突变,占18.9%(7/37)。在55份YMDD突变阳性样本中,DNA测序法检测到52份,阳性结果符合率为94.5%(52/55);另检出5例存在ADV或ETV耐药相关突变,占9.1%(5/55)。结论DNA序列测定法检测HBVRT基因耐药相关突变敏感性高,重复性好,与实时荧光PCR方法的检测结果有较高的符合率,可同时检出YMDD突变以外的各种耐药相关突变,有助于临床全面了解患者对核苷(酸)类似物的耐药情况,合理地制订抗HBV治疗方案。

中医辨证治疗对减少乙型肝炎病毒YMDD变异的疗效观察

探讨辨证运用柴芍六君汤对减少乙型肝炎病毒YMDD变异的疗效观察。方法将360例慢性乙型肝炎患者分为对照组60例,治疗组300例,分别给予拉米夫定、柴胡六君汤联合拉米夫定治疗18个月,观察患者ALT复常率、HBeAg阴转率、HBeAg血清转换率、HBV-DNA阴转率及治疗1年及1年半的YMDD变异率。结果治疗组较对照组在ALT复常率、HBeAg阴转率及HBeAg血清转换率、治疗18个月时YMDD变异率方面均明显优于对照组(P<0.05或P<0.01)。结论辨证运用柴芍六君汤联合拉米夫定对改善患者肝功能有良好的作用,能提高拉米夫定抑制病毒复制作用,减少病毒YMDD变异。

阿德福韦酯治疗YMDD变异慢性乙型肝炎82例

目的:研究阿德福韦酯治疗YMDD突变后慢性乙型肝炎患者的疗效和安全性。方法:82例YMDD突变的慢性乙型肝炎患者分为对照组和试验组,对照组服用拉米夫定100mg·d-1,48周,试验组服用阿德福韦酯10mg·d-1,48周。服药后第24,48周检测谷丙转氨酶(ALT)、HBV DNA定量、HBeAg及观察不良反应。结果:试验组24及48周HBV DNA下降水平均明显高于对照组(均P<0·01),HBV DNA应答率和ALT复常率也均高于对照组(均P<0·01),HBeAg阴转率两组无显著性统计学差异。两组均未发现明显不良反应。结论:阿德福韦酯治疗YMDD突变的慢性乙型肝炎安全有效。

HBVP基因YMDD变异的检测及临床应用的初步研究

目的采用错配PCR扩增方法进行HBVP基因YMDD变异的检测,对其临床意义进行初步的研究。方法应用分子克隆方法,构建YMDD、YVDD和YIDD变异的阳性质粒,并对该方法进行敏感性及特异性试验。对65例未经抗病毒治疗的乙型肝炎患者检测YMDD变异情况。结果经PCR方法、酶切鉴定及直接测序鉴定出YMDD、YVDD和YIDD质粒构建成功,且该方法具有较好的敏感性和特异性。65例未经拉米夫定治疗的乙型肝炎患者存在YMDD变异,出现变异6例,阳性率为9.07%;其中YIDD和YI/YMDD各1例,YVDD3例,YV/YMDD1例。结论本检测方法简便、实用,在未经抗病毒治疗的患者中可存在YMDD变异,其与野生株一样是自然存在的,抗病毒药物压力不是导致HBVYMDD变异的唯一因素。

未接受抗病毒治疗的慢性乙型肝炎患者多聚酶P基因YMDD变异检测

目的 了解未经拉米夫定及干扰素抗病毒治疗的慢性乙型肝炎患者中HBV多聚酶YMDD变异情况。方法 应用错配PCR扩增方法检测病人血清HBV的YMDD位点 ,选择 65例病史超过半年以上、肝功能异常、HBVDNA阳性的慢性乙型肝炎患者。结果 在 65例患者中 ,YMDD变异阳性 6例 ( 9.0 7%) ,阴性 5 9例 ,6例变异中 2例为YIDD阳性 ,其中 1例为YMDD野毒株和变异株混合存在 ,4例为YVDD阳性 ,其中 1例为YMDD野毒株和变异株混合存在。结论 本检测方法简便、实用 ,在未经抗病毒治疗的慢性乙型肝炎患者中可存在YMDD变异株 ,其与野生株一样是自然存在的。

基因芯片检测拉米夫定治疗慢性乙型肝炎后引起的HBV YMDD变异

目的 建立乙型肝炎病毒变异基因诊断芯片对拉米夫定治疗慢性乙型肝炎过程中出现的肝炎病毒P基因区YMDD变异进行快速准确的检测诊断方法。方法 设计特异性寡核苷酸探针数组 ,特别处理芯片载体 ,用点样法制备乙型肝炎病毒变异基因诊断芯片。选择 30例服用拉米夫定后 ,HBVDNA转阴 ( <5 0 0copies/ml) ,6 8周后又反跳≥ 5 0 0copies/ml的病人进行基因芯片杂交检测分析。同时用PCR直接测序法对病人血清标本进行双盲HBVDNA聚合酶活性区域测序对照。结果 30例服药后HBVDNA反跳病人中 ,基因芯片测得HBVYMDD变异 2 1例 ,其中YVDD变异11例 ,YIDD变异 10例。HBVDNAPCR直接序列测定结果为有核苷酸A741变为G ,使氨基酸由蛋氨酸 5 5 2变为缬氨酸 (氨基酸基序由YMDD变为YVDD) ,6例核苷酸A669变为C ,氨基酸由亮氨酸5 2 8变为蛋氨酸 ;核苷酸G743 变为T ,使氨基酸由蛋氨酸 5 5 2变为异亮氨酸。 (氨基酸基序由YMDD变为YIDD)。其中有 3例伴有核苷酸T781变为C ,使氨基酸由亮氨酸 5 6 5变为脯氨酸。标本阳性变异序号与基因芯片检测结果完全一致。结论 乙型肝炎病毒变异基因诊断芯片可以同时检测YVDD、YIDD变异 ,与PCR直接测序法比较 ,准确率达 10 0 %。

YMDD自然变异毒株流行病学调查

目的了解YMDD自然变异的发生情况及影响YMDD自然变异的因素。方法依托国家食品药品监督管理局注册药物临床试验“阿德福韦酯片治疗成人慢性乙型肝炎的多中心、随机、双盲、对照临床研究(Ⅲ期)”开展。采用乙型肝炎病毒(HBV)拉米夫定耐药荧光PCR检测试剂盒及实时荧光PCR基因型分型试剂盒,对该临床研究筛选期183例半年内未经抗病毒治疗的慢性乙型肝炎(CHB)患者血清标本进行检测,并通过Logistic逐步回归对影响YMDD自然变异检出率的可能因素进行多因素分析。结果183例CHB患者中,检出YMDD自然变异毒株者40例(21.86%),其中YVDD阳性36例,YIDD阳性3例,YVDD和YIDD同时阳性者1例;变异毒株占总病毒量50%以上者6例,占25%～50%者9例,占9%～25%者25例。B基因型CHB患者中YMDD自然变异检测阳性的比例高于C基因型(31.67%对17.65%,P=0.0382),患者性别、年龄、HBeAg状态、血清HBVDNA载量及丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平对YMDD自然变异检出率无显著影响(P>0.05)。结论在CHB患者中存在YMDD自然变异毒株;YMDD自然变异的发生率与患者性别、年龄、HBeAg状态、HBVDNA水平、ALT水平无关。B基因型较C基因型更易出现YMDD自然变异。

拉米呋啶治疗后乙肝病毒聚合酶YMDD的变异

目的观察拉米呋啶治疗慢性乙肝患者1年前后,患者体内HBV DNA多聚酶结构域C的酪氨酸—甲硫氨酸—天门冬氨酸—天门冬氨酸(YMDD)基因变异情况,及其与血清HBV DNA、丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平及乙肝标志物变化的关系。方法采用实时荧光定量PCR、ELISA及速率法分别检测60例乙肝患者经拉米呋啶治疗后其血清YMDD、HBV DNA、乙肝标志物及ALT的变化情况。结果拉米呋啶治疗9月、1年后YMDD的变异率分别为5%、13.3%。YMDD变异组HBV DNA阴转率为12.5%,无变异组HBV DNA阴转率为67.3%,两组阴转率相比差异有统计学意义(P<0.01)。拉米呋啶治疗1年后YMDD变异组ALT为(40.7±14.7)u/L,无变异组ALT为(26.5±10.1)u/L,两组相比差异有统计学意义(P<0.01)。5名HbeAg阴转患者无YMDD变异。结论乙肝患者经拉米呋啶治疗后,YMDD变异率随用药时间的延长可逐渐增加,当其HBV DNA、ALT含量出现明显反跳时,应及早改变治疗方案。

未经拉米夫定治疗HBVYMDD变异的临床分析

目的分析未经拉米夫定治疗的HBV病毒YMDD变异出现的情况,探讨HBV病毒YMDD变异出现可能的机理,了解以YMDD自然变异的慢性HBV感染患者的肝损害情况。方法对140例HBVDNA阳性,未经拉米夫定治疗的慢性HBV感染者进行YMDD检测,同时检测谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、血清总胆红素(TBIL)、白蛋白(ALB)、发病年龄、HBeAg与抗HBe等临床相关指标。结果140例未经拉米夫定治疗的慢性乙肝病毒感染者中20例自然发生YMDD变异,YMDD变异组与未变异组引起的肝损害无显著性差异(P>0.05)。YMDD变异与HBeAg与抗HBe的阳性表达无明显差异(P>0.05)。结论HBV病毒YMDD变异株作为一个准种与野毒株同时存在感染个体,YMDD变异对肝损害严重性无关,YMDD变异与HBeAg阳性率与抗HBe阳性率无明显差异。