人脑髓鞘碱性蛋白对H_2O_2诱导人肺癌细胞YTLMC-90凋亡的抑制作用

背景与目的:人脑髓鞘碱性蛋白(myelinbasicprotein,MBP)广泛分布于神经系统及多种非神经组织之中,而且在肺癌、乳腺癌、神经胶质瘤等多种肿瘤细胞中均检查到MBP的表达。但MBP与癌细胞侵犯神经组织的活性是否相关、与肺癌细胞的生物学行为是否相关尚未见报道。本研究主要探讨MBP对过氧化氢(H2O2)诱导人肺癌细胞YTLMC-90凋亡的影响。方法:实验分为MBPcDNA微基因pSVCEPMBPCAT转染组(试验组)、空质粒pSVCEPCAT转染组和未转染组(对照组)。将含人Ⅰ型胶原a1链(COLⅠA1)基因启动子和增强子元件、并在其3′端接MBPcDNA的微基因,转染YTLMC-90细胞,并驱动MBP异位表达;采用MTT法检测细胞增殖,吖啶橙荧光染色显微镜和电镜观察细胞形态及其超微结构的改变;琼脂糖凝胶电泳检测染色质DNA断裂。结果:200μmol/LH2O2作用24h后,转染组、未转染组和空载体pSVCEPCAT转染组YTLMC-90细胞的生长抑制率分别为36.67%、84.00%和78.67%(P<0.001);对照组YTLMC-90细胞普遍可见凋亡细胞特有的形态学及生物化学改变,如胞核固缩、染色质断裂,DNA电泳呈梯状条带;而MBPcDNA微基因转染的YTLMC-90细胞未发现上述凋亡特征。结论:MBP促进YTLMC-90细胞增殖和拮抗H2O2诱导的凋亡,明显减少H2O2对YTLMC-90的细胞毒作用。

苯丁酸钠体外对YTMLC-90细胞生长的影响

目的:观察苯丁酸钠(PB)体外对人个旧肺鳞状细胞癌YTMLC-90细胞生长的影响。方法:YTMLC-90细胞分为6组,对照组不作任何处理,余5组分别给予250、500、1000、2000和4000mg/LPB,分别作用48、72和96h。采用MTT法观察各组细胞生长情况,计算细胞生长抑制率。另取YTMLC-90细胞分为3组:对照组、500和1000mg/LPB组,分别作用48和72h,采用流式细胞术检测3组细胞的细胞周期及凋亡情况。结果:不同质量浓度的PB作用48、72和96h,各组细胞的生长抑制率相比,差异均有统计学意义(F=672.413、1633.321和1196.548,P均<0.05)。PB作用48和72h后,各组细胞G0/G1期、S期与G2/M期细胞百分率及凋亡率比较,差异均有统计学意义(F48h=508.347、224.522、19.890和111.849,F72h=311.979、102.923、247.432和177.018,P均<0.05)。与对照组相比,PB作用后YTMLC-90细胞生长缓慢,细胞阻滞于G0/G1期,凋亡增加(P<0.05)。结论:PB可抑制YTMLC-90细胞的生长,使其阻滞于G0/G1期,凋亡增加。

热休克蛋白70、90在白血病细胞K562巨噬细胞样分化过程中的表达研究

目的 复制hexamethylenebisacetamide(HMBA)诱导白血病细胞K5 6 2向巨噬细胞样分化的模型 ,检测热休克蛋白 70、90 (HSP70 ,HSP90 )在这一分化过程中的表达变化。方法 用HMBA诱导K5 6 2细胞并通过联苯胺、萘酚AS D氯醋酸酯酶及吉姆萨 瑞氏染色、电镜观察、流式细胞仪证实其分化方向 ,并用Westernblot方法检测K5 6 2细胞分化前后HSP70、HSP90的表达变化。结果 成功地复制了这一模型 ,并检测到HSP70、HSP90蛋白在K5 6 2细胞向巨噬细胞样分化后表达增高。结论 HSP70、HSP90可能在K5 6 2细胞向巨噬细胞样分化过程中有重要作用。

催乳素刺激Jurkat细胞热休克蛋白90的表达及地塞米松的干预作用

目的：探讨催乳素刺激下Jurkat细胞的热休克蛋白（HSP90）的表达状况以及地塞米松对这种表达的影响。方法：以四组不同浓度催乳素（25、50、100、200ng/ml）刺激Jurkat细胞,采用RT-PCR和Western blot检测刺激前后HSP90的表达水平;另将四种不同浓度的地塞米松（10^-9-10^-6mol/L）和高浓度催乳素（100ng/ml）与Jurkat细胞共同孵育,同法检测地塞米松干预后HSP90的表达水平。结果：所有浓度催乳素刺激Jurkat细胞在mRNA和蛋白质水平表达的HSP90均显著高于空白对照组（P〈0.05）,且表达水平随刺激浓度增加而升高,但当浓度高于100ng/ml以上时升高不明显。加入不同浓度地塞米松和高浓度催乳素孵育的Jurkat细胞表达HSP90水平与对照组比较有显著下降（P〈0.05）,且随地塞米松浓度升高而降低。结论：催乳素可刺激Jurkat细胞HSP90的表达,而地塞米松可抑制此效应且有剂量依赖关系。

格尔德霉素对宫颈癌HeLa细胞中bcl-2表达的影响

目的:观察格尔德霉素(geldanamycin,GA)在体外对宫颈癌HeLa细胞抗凋亡基因bcl-2和mRNA转录、蛋白表达水平的影响。方法:分别给予宫颈癌HeLa细胞0,0.02,0.2,2,10μmol/L浓度GA处理24h,用annexin V方法检测细胞凋亡,半定量PCR检测bcl-2、Hsp90 mRNA转录水平,用10μmol/L的GA处理HeLa细胞3、12、24、48h后,Western blot检测bcl-2、Hsp90蛋白表达水平的变化。结果:宫颈癌HeLa细胞经不同浓度的GA作用24h,细胞凋亡指数呈剂量依赖性增加,bcl-2 mRNA表达呈剂量依赖性降低,bcl-2蛋白表达水平呈时间依赖性降低,处理组与对照组之间的差异有统计学意义;但GA对Hsp90 mRNA和蛋白表达水平无明显影响。结论:GA可抑制宫颈癌HeLa细胞抗凋亡基因bcl-2的转录和表达,促进凋亡。

肺鳞癌细胞单克隆抗体的建立及鉴定

目的制备出高效价的抗人肺鳞癌单克隆抗体。方法以云南个旧肺鳞癌细胞YTMLC-90免疫的BALB/c小鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤NS-1、SP2/0细胞为亲代细胞,应用鼠-鼠杂交瘤技术建立杂交瘤细胞系。ELISA法筛选,有限稀释法克隆化培养,ELISA法测定抗体效价,双抗体夹心法鉴定Ig亚类,制备染色体,G iemsa染色计数染色体数目,ABC免疫组化法行不同组织细胞的交叉检测。结果获得3株稳定分泌抗YTMLC-90细胞抗体的杂交瘤细胞株S2D1、N2D1及N3C5。培养上清效价分别为1∶512、1∶284及1∶1 024,腹水效价分别为1∶105、1∶104及1∶104;Ig亚类分别为IgG1、IgG2a及IgG3;染色体众数在90~110之间;3株抗人肺鳞癌单克隆抗体与其他组织细胞无交叉反应性。杂交瘤细胞体外传代培养6个月仍保持抗体稳定分泌。结论成功制备高效且特异的抗人肺鳞癌单克隆抗体。

三株抗人肺鳞癌单克隆抗体免疫组化分析

目的对三株抗云南个旧肺鳞癌YTMLC-90杂交瘤细胞S2D1、N2D1、N3C5所分泌的单克隆抗体进行不同组织细胞的免疫组化分析,探讨其特异性.方法用收集的原倍杂交瘤细胞上清常规ABC免疫组化法进行组织细胞学交叉检测,分析三个抗体与临床病理确诊的肺鳞癌组织、肺腺癌组织、肠癌组织、食道癌组织、肾癌组织、肺正常组织石腊切片和肺鳞癌YTMLC-90细胞系、肺腺癌GLC-82细胞系、舌鳞癌Tca-8113细胞系、鼻咽癌KB细胞系、胶质瘤U-251细胞系、膀胱癌T-24、B1u-87细胞系的交叉反应.结果杂交瘤细胞上清液与肺癌组织及肺鳞癌、肺腺癌细胞系YTMLC-90、GLC-82反应呈阳性,阳性率分别为82%、100%;与正常肺组织及肠癌组织、肾癌组织、食道癌组织及体外培养的其它各肿瘤细胞系均呈阴性反应.结论经免疫组化研究,三株单克隆抗体具有肺癌特异性,属于肺癌相关抗原的单克隆抗体.

γ-分泌酶抑制剂DAPT抑制Jurkat T细胞增殖

目的:探讨γ-分泌酶抑制剂DAPT在体外对人T淋巴细胞白血病JurkatT细胞株增殖的抑制作用及其某些机制。方法:通过倒置显微镜和MTT法检测DAPT对Jurkat T细胞聚集的影响和对其增殖的抑制作用;利用碘化丙锭染色结合流式细胞术检测DAPT对Jurkat T细胞周期的影响;藉免疫印迹法检测DAPT对Jurkat T细胞周期蛋白ICBP90表达的影响。结果:DAPT能显著影响Jurkat T细胞的聚集,抑制Jurkat T细胞的增殖,使其细胞周期停滞于S期,且周期蛋白ICBP90的表达下调。结论:γ-分泌酶抑制剂DAPT能够抑制Jurkat T细胞的增殖和细胞周期的进行,其抑制作用可能与ICBP90蛋白表达的下调有关。

硼替佐米对人类多发性骨髓瘤细胞系U266细胞抗凋亡蛋白HSP-90的影响

目的 探讨硼替佐米对人类多发性骨髓瘤（MM）细胞系U266细胞抗凋亡蛋白HSP-90的影响.方法 采用RT-PCR技术研究经不同浓度的硼替佐米作用于U266细胞4 h后其内HSP-90mRNA表达情况的变化.结果 随着硼替佐米浓度的增加,其MM细胞中HSP-90α的mRNA表达量逐渐增加.由低浓度组到高浓度组（0、50、100、150、200 nmol/L）所对应的HSP-90α的灰度值分别为0.343±0.017、0.505±0.039、0.640±0.029、0.760±0.059、0.963±0.054;两两组间比较差异有统计学意义（P〈0.05）.浓度由低到高组对应HSP-90β的灰度值分别为0.610±0.022、0.765±0.050、0.645±0.052、0.770±0.059、0.790±0.027,而HSP-90β的灰度值0 nmol/L组与50、150、200nmol/L组之间差异有统计学意义（P〈0.05）.50、100 nmol/L浓度组对应的HSP-90β的灰度值不同（P〈0.05）.100 nmol/L组与150、200 nmol/L组对应的HSP-90β的灰度值差异有统计学意义（P〈0.05）.HSP-90β的mRNA表达量增加趋势不很明显,但总体差异仍具统计学意义（P〈0.05）.结论 硼替佐米可以上调HSP-90的分子水平的表达,并且以上调HSp-90α的表达为主.