益肝降脂方预处理对酒精性脂肪肝SD大鼠诱导型一氧化氮合酶表达影响

目的:观察分析益肝降脂方(YGJZF)预处理对酒精性脂肪肝(AFLD)SD大鼠内源性保护物质诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA和蛋白表达的影响,探讨YGJZF预处理模拟或加强缺血预适应效应对肝脏保护作用的机制。方法:将116只SD大鼠随机分为模型组22只,中药干预组94只,模型组连续12周予高脂+酒精灌胃进行酒精性脂肪肝造模,中药组在模型组基础上用中药干预。分别于实验不同时段宰杀取样,检测大鼠血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(T-CHO)含量;实时荧光定量(PCR)和免疫印迹法(Western blot)分别检测大鼠肝脏iNOS mRNA和蛋白的表达;同时HE染色观察大鼠肝脏组织病理学变化。结果:模型组大鼠ALT、AST、TG、TC水平明显升高,与YGJZF用药3周组、YGJZF用药6周组、YGJZF用药9周组比较,差异有显著性意义(P<0.05);RT-PCR和Western blot显示模型组肝组织iNOS mRNA和蛋白呈现高表达,随着用药时间的延长,iNOSmRNA和蛋白表达逐渐下降;肝组织HE染色酒精模型组肝脏损伤严重,随着YGJZF用药时间的延长,肝脏损伤逐渐减轻。结论:YGJZF对酒精性脂肪肝保护作用机制可能是触发了肝脏的内源性保护传导路径的关键物质诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达,模拟并加强了肝脏的缺血预适应效应。

益肝降脂方预处理对酒精性脂肪肝SD大鼠HSP70表达的影响

目的:观察分析益肝降脂方(YGJZF)预处理对酒精性脂肪肝(AFLD)SD大鼠热休克蛋白70(HSP70)mRNA和蛋白表达的影响,探讨YGJZF对内源性保护机制中效应物质HSP70调控的意义。方法:SPF级雄性SD大鼠120只适应性喂养1周后,随机分为空白对照组4只、模型组22只、中药YGJZF干预组94只(包括第3周干预组35只,第6周干预组31只,第9周干预组28只)。模型组给予酒精灌胃+高脂饮食造模,中药组在造模进行同时于实验第3周、第6周、第9周起给予干预,于第6周末、9周末、12周末随机取材观察大鼠一般情况;分别采用RT-PCR法和Western blot法检测各组大鼠肝组织HSP70 mRNA和蛋白的表达情况;HE染色观察大鼠肝脏组织病理形态改变。结果:模型组及中药YGJZF不同时段干预组大鼠肝组织HSP70 mRNA和蛋白表达水平均明显高于空白对照组,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,YGJZF不同时段用药组肝组织HSP70 mRNA和蛋白表达水平均降低,且各中药用药组间比较有统计学意义(P<0.05),中药第3周干预组降低更加明显;HE染色显示模型组肝脏损伤最严重,中药第3周干预组肝细胞变性、坏死程度明显减轻,肝组织病变明显改善。结论:YGJZF预处理可降低和推迟慢性酒精刺激引起的HSP70的表达,减轻了酒精性肝损伤,实现了药物预适应样保护作用,早期干预显示效果明显;内源性信号传导路径中效应物质HSP70对慢性酒精刺激引起的酒精性肝损伤具有一定的缓解作用,这可能是YGJZF预处理减轻酒精性肝损伤的重要原因。

酒精诱导大鼠脂肪肝8-异前列腺素F2α活性变化及益肝降脂方的干预时效

目的观察8-异前列腺素F2α（8-iso-PGF2α）在大鼠酒精性脂肪肝病（AFLD）造模过程中的活性变化及与益肝降脂方干预的时效关系。方法将97只SD大鼠随机分为模型组22只和中药干预组75只,予高脂联合梯度酒精灌胃建立AFLD模型;中药干预组随机分为第3周组、第6周组、第9周组,分别于造模第3周、第6周、第9周起给予益肝降脂方浸膏1ml（含生药1.33g/ml）灌胃,模型组给予等剂量生理盐水,至造模12周。各组在不同时间点检测血清8-iso-PGF2α活性,丙氨酸氨基转移酶（ALT）、门冬氨酸氨基转移酶（AST）、甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）含量,肝组织丙二醛（MDA）、黄嘌呤氧化酶（XOD）活性;观察肝组织病理变化。结果随着造模时间延长,大鼠血清8-iso-PGF2α活性与ALT、AST、TG、TC水平明显升高（P〈0.05或P〈0.01）;第3周组（3～6周）和（3～12周）与第9周组（9～12周）比较,8-iso-PGF2α、ALT、AST、TC、MDA、XOD水平明显降低（P〈0.05或P〈0.01）。光镜下模型组脂肪变性随着造模时间延长呈现逐渐加重趋势,至12周末呈中、重度脂肪变性伴水样变性3～4度,各中药干预组病变程度均较模型组减轻,第3周组较第9周组（9～12周）脂肪变性及水样变性程度减轻。结论大鼠血清8-iso-PGF2α活性、肝损伤程度与造模时间正相关;益肝降脂方对AFLD肝损伤具有保护作用,且干预时间越早效果越明显,其机制可能与降低8-iso-PGF2α活性,减轻氧化应激及脂质过氧化相关。