“益精方”对小鼠精子尾部特异性钙通道CatSper1的影响

目的:观察"益精方"对环磷酰胺所致少弱精子症模型小鼠精子尾部特异性钙通道CatSper1的影响。方法:将40只雄性昆明小鼠随机分为对照组(CG)、模型组(MG)、小剂量中药治疗组(SG)和大剂量中药治疗组(LG),按60mg/kg体重给CG小鼠腹腔注射生理盐水(NS),给MG、SG、LG小鼠腹腔注射环磷酰胺,每天1次,连续5d,第6d开始按体重分别给SG和LG小鼠灌服"益精方",剂量分别为人类常规用量(以60kg为标准)的1倍和5倍,MG小鼠给予等体积的NS灌胃,每天1次,连续34d,CG常规饲养,然后对小鼠进行精液常规分析,并用RT-PCR法检测小鼠精子CatSper1的表达。结果:CG、MG、SG和LG组小鼠附睾精子密度分别为(5.20±1.34)、(1.73±0.03)、(2.08±0.01)、(3.31±0.56)×106/ml,a+b级精子百分率分别为(14.49±0.30)%、(6.64±1.88)%、(11.99±1.01)%、(19.40±3.13)%,a+b+c级精子百分率分别为(68.39±15.13)%、(39.96±4.89)%、(62.28±4.43)%、(73.61±5.05)%,MG组精子密度、a+b级精子百分率、a+b+c级精子百分率显著低于CG组(P<0.05),经治疗后LG组精子密度、a+b级精子百分率、a+b+c级精子百分率明显增加,与MG组比较有显著性差异(P<0.05),而与CG组在a+b级精子百分率和a+b+c级精子百分率上没有明显区别。CatSper1的表达量在CG、MG、SG和LG组分别为0.76±0.05、0.73±0.03、0.75±0.12、0.85±0.04,LG组显著高于MG组(P<0.05),而与CG组比较没有明显区别。结论:腹腔注射环磷酰胺可使小鼠精子密度、a+b级精子百分率、a+b+c级精子百分率降低,CatSper1表达量下降,大剂量"益精方"可以通过提高CatSper1的表达量,增加小鼠精子密度、a+b级和a+b+c级精子百分率,从而达到治疗少弱精子症的目的。

隔姜温针灸结合自拟益精方治疗肾虚型不育症临床观察

目的:观察治疗组和对照组对肾虚型不育症患者精液常规中的各项指标的影响和疗效差异。方法:将40例符合纳入标准的患者分别用针药结合和单纯中药的方法治疗,每日1次,30天为1个疗程,共治疗3个疗程,疗程间间隔3天。结果:两组的疗效差别经统计学检验有极显著性意义(P<0.01),治疗组的治疗方案明显优于对照组。结论:隔姜温针灸结合自拟益精方对肾虚型不育症有较好疗效。

益精方对腺嘌呤法大鼠睾丸支持细胞中紧密连接蛋白表达的实验研究

目的:观察益精方对腺嘌呤法不育症大鼠睾丸支持细胞中紧密连接蛋白表达的影响。方法:选用48只健康的SPF级Wistar雄性大鼠,2月龄,体质量(180±20)g,按随机数字表法,平均分为空白组,模型组,复方玄驹组,益精方组,每组12只。除空白组外,其余各组均以腺嘌呤1 m L/(100g·d)的剂量连续灌胃12 d;从第13天开始,空白组及模型组用等量生理盐水灌胃,复方玄驹组以复方玄驹胶囊水溶液灌胃,益精方组以益精方汤剂灌胃,每天1次,连续20 d。实验结束后处死大鼠,摘取睾丸和附睾,采用计算机精子分析系统计数精子密度和精子活动率;采用免疫组化技术测定大鼠睾丸支持细胞中紧密连接蛋白claudin的表达。结果:与空白组比较,模型组中精子活动率、精子密度、claudin蛋白表达均降低,差异均具有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较,复方玄驹组精子活动率、精子密度均升高,差异具有统计学意义(P<0.05),claudin蛋白表达升高不明显,差异无统计学意义(P>0.05),益精方组精子活动率、精子密度、claudin蛋白表达均升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:益精方能够提高腺嘌呤诱导的肾阳虚模型大鼠的精子密度和精子活动率水平;同时使claudin蛋白的表达增多。

益精方治疗弱精子症的临床随机对照研究

目的:观察益精方治疗弱精子症的临床疗效。方法:450例患者以信封法随机分为治疗组(益精方组)300例和对照组(五子衍宗丸+左卡尼汀口服液组)150例,经精液常规检查诊为弱精子症,治疗组服用益精方,每天1剂,温水冲服,分2次服用,对照组服用五子衍宗丸+左卡尼汀口服液,五子衍宗丸9 g,口服,每日2次,左卡尼汀口服液,10 ml,口服,每日2次,均治疗3个月,于治疗前及治疗后的第1个月(第27~33天)、2个月(第57~63天)和3个月(第87~93天)分别检测患者的精液常规,比较治疗前后精子浓度、前向运动精子百分率(PR)、精子总活力(PR+NP)等精液参数的变化。结果:两组患者治疗前精液常规检查结果无显著差异(P>0.05)。治疗组治疗1、2、3个月时,精子浓度分别为49.66±10.91、55.21±11.46、74.90±13.07(×10~6/ml),PR分别为23.81±2.56、26.12±2.34、32.17±1.62(%),PR+NP分别为34.17±3.43、36.59±3.36、47.08±2.97(%),精液体积分别为3.15±1.06、3.12±0.90、3.27±0.78(ml),液化时间分别为31.68±3.14、30.38±3.44、30.86±2.42(min),组内比较显示,治疗后精子浓度、PR、PR+NP较治疗前差异显著(P<0.001),精液体积、液化时间差异不明显(P>0.05)。对照组治疗1、2、3个月时,精子浓度分别为40.53±8.32、47.51±12.73、56.14±11.98(×10~6/ml),PR分别为25.17±2.64、27.23±2.25、31.89±2.27(%),PR+NP分别为33.89±2.26、37.38±4.79、40.35±3.06(%),精液体积分别为3.16±1.78、3.15±0.96、3.12±0.65(ml),液化时间分别为29.36±4.25、28.21±3.26、28.33±3.59(min),组内比较显示,治疗后精子浓度、PR、PR+NP较治疗前差异显著(P<0.001),精液体积、液化时间差异不明显(P>0.05)。组间比较显示,治疗组精子浓度及PR+NP增长率较对照组有显著差异(P<0.001),PR增长率两组间差异不明显(P>0.05)。结论:益精方可在生精周期多个阶段调控精子的发生,提高弱精子症患者的PR及PR+NP比例,是一种有效的治疗弱精子症的方剂。

“益精方”提高小鼠精子特异性钙通道蛋白1及胞内Ca^(2+)浓度的表达

目的研究以"益精方"为代表的中药对小鼠精子尾部特异性钙通道蛋白(cation channel l Of sperm,CatSper1)及其胞内Ca^(2+)浓度的影响。方法将60只成年雄性昆明小鼠用分层法随机分为大剂量中药治疗组(large dose,LD)、小剂量中药治疗组(small dose,SD)、模型组(model group,MG)和对照组(control group,CG),按60 mg/kg体质量给MG、SD、LD组小鼠腹腔注射环磷酰胺,给CG组小鼠腹腔注射生理盐水,1次/d,连续5 d,第6天开始按体质量分别给SD和LD组小鼠灌服"益精方",剂量分别为人类常规用量(以60 kg为标准)的1倍和5倍,MG组小鼠给予等体积的生理盐水灌胃,1次/d,连续34 d,CG组小鼠常规饲养,然后对小鼠进行精液常规分析,并用RT-PCR法检测小鼠精子CatSper1的表达,流式细胞术检测精子胞内Ca^(2+)浓度。结果经"益精方"治疗后,LD组精子密度、前向运动精子百分率、精子活动率明显增加,与MG组比较有统计学意义(P<0.05);MG组小鼠精子密度,前向运动精子百分率,精子活动率显著低于CG组(P<0.05);MG组小鼠精子CatSper1的表达量虽然下降,但与CG组比较没有明显区别,治疗后LD组显著高于MG组(P<0.05),而与CG组比较没有明显区别;MG组小鼠精子胞内Ca^(2+)浓度明显减少,与CG组小鼠比较有统计学意义(P<0.05),而治疗后LD组小鼠胞内Ca^(2+)浓度显著改善,与MG组小鼠比较有统计学意义(P<0.05)。结论环磷酰胺腹腔注射可降低小鼠前向运动精子百分率、精子总活动率和精子密度,降低CatSper1表达量,大剂量"益精方"通过增加精子尾部CatSper1的表达,提高精子胞内Ca^(2+)浓度,进而增加精子前向运动率和活动率,并可以增加小鼠精子密度,从而达到治疗少弱精子症的目的。

益精方对小鼠精子线粒体功能的影响

目的：观察益精方对环磷酰胺所致少弱精子症模型小鼠精子线粒体功能的影响。方法将40只雄性昆明小鼠随机分为对照组（CG）、模型组（MG）、小剂量中药治疗组（SG）和大剂量中药治疗组（LG）。按60mg/kg体质量给CG小鼠腹腔注射生理盐水（NS），给MG、SG、LG小鼠腹腔注射环磷酰胺，每天1次，连续5d，第6天开始按体质量分别给SG和LG小鼠灌服益精方，剂量分别为人类常规用量（以60 kg为标准）的1倍和5倍，MG小鼠给予等体积的NS灌胃，每天1次，连续34 d，CG常规饲养，然后对小鼠进行精液常规分析，流式细胞术检测精子线粒体功能。结果 CG、MG、SG和LG 组小鼠附睾精子密度分别为（5.20±1.34）、（1.73±0.03）、（2.08±0.01）、（3.31±0.56）×10^6/mL；精子活力[（a＋b）级精子百分率]分别为（14.49±0.30）%、（6.64±1.88）%、（11.99±1.01）%、（19.40±3.13）%；精子活率[（a＋b＋c）级精子百分率]分别为（68.39±15.13）%、（39.96±4.89）%、（62.28±4.43）%、（73.61±5.05）%。MG组精子密度、精子活力、精子活率显著低于CG组（P＜0.05）；经治疗后LG组精子密度、精子活力和精子活率明显增加，与MG组比较有显著性差异（P ＜0.05），而与CG组在精子活力和精子活率上没有明显区别。在CG、MG、SG和LG组，线粒体功能良好精子的百分率分别为（1105.93±0.33）%、（848.55±6.15）%、（888.77±22.46）%、（1000.885±72）%，线粒体功能丧失精子的百分率分别为（27.94±0.32）%、（42.43±1.00）%、（35.11±1.23）%、（30.91±0.44）%，MG小鼠精子线粒体功能良好的表达量明显下降，而线粒体功能丧失的表达量明显增多，与CG小鼠比较均有明显差异（P＜0.05）；经治疗后， LG小鼠精子线粒体功能良好的表达量显著性增加（P＜0.05），同时线粒体功能丧失的表达量明显减少，与MG小鼠比较有明显差异（P ＜0.05）。结论腹腔注射环磷酰胺可使小鼠精子密度、精子活力、精子活率降低，大剂量益精方可以增加小鼠精子密度，并增加精子线粒体功能，提高精子活力和精子活率，从而达到治疗少弱精子症的目的。