豫医无毛小鼠分离近交系的建立及其遗传纯度测定

采用强迫杂合性兄妹交配方式培育携带无毛突变基因的分离近交系 ,然后用生化标记法、皮肤移植实验和毛色基因测试法对其进行遗传监测。并对其基本生物学特性进行了研究。结果育成了具有独特生物学特性的豫医无毛小鼠分离近交系。现已达 30代。生化标记法测定的 9条染色体上 13个生化标记位点全部纯合 ;同系异体间皮肤移植 10 0天后 ,未见排斥现象 ,为同系组织遗传性 ;与DBA/2交配进行的毛色基因测试 ,杂交的F1代相同 ,全部为野生色 ,基因型为AABBccDD。表明豫医无毛小鼠已成为一个达到国际标准的新品系。

微卫星DNA在近交系小鼠遗传监测中的应用

用7对引物对5种不同品系近交系小鼠的微卫星位点进行多态性分析。结果显示,不同品系及同品系不同个体近交系小鼠的扩增产物在7个微卫星位点上均出现一清晰条带,在不同品系小鼠之间筛选出4个(D3Mit22、D6Mitl92、D6Mit36、D6Mitl49)具有多态性的位点;同品系内不同个体之间没有多态性。结果表明,所检测的小鼠符合近交系要求,筛选出的4个微卫星位点可用于国内有关近交系小鼠的遗传背景监测。

促性腺激素作用下豫医无毛小鼠超排卵效果观察

目的 :探讨近交系豫医无毛小鼠超排卵的最佳条件 ,提高超排卵效果。方法 :30只近交系豫医无毛小鼠随机分为 3组 ,分别用 5IU、8IU、10IU的孕马血清促性腺激素 (PMSG)和人绒毛膜促性腺激素 (HCG) ,间隔 4 8h注射 ,比较排出卵母细胞的数量。结果与结论 :腹腔间隔 4 8h各注射 8IU的PMSG和HCG超排卵效果最好 ;各剂量组右侧卵巢比左侧卵巢超排卵效果好 (P <0 .0 5 )。

豫医无毛小鼠近交系毛色基因遗传学测试

目的 :考核豫医无毛小鼠 (YYHL)近交系纯化程度及毛色基因型。方法 :用复隐性基因小鼠DBA/ 2、6 15分别对YYHL近交系进行了毛色基因测试。结果和结论 :杂交所生的F1代全部为野生色 ,表明其毛色基因为纯合 ,其基因型为AABBccDD。豫医无毛小鼠近交系已达到近交系的国际标准。

豫医无毛小鼠无毛基因DNA原位PCR检测

目的 :探讨原位PCR技术对检测基因组变异的有效性。方法 :应用原位PCR检测豫医无毛小鼠皮肤和脾的石蜡组织切片 ,并以健康昆明小鼠皮肤和脾的石蜡组织切片、PCR反应液不加TaqDNA聚合酶、不加引物和引物不带生物素作为对照。结果 :豫医无毛小鼠皮肤和脾石蜡组织切片中检测到清晰的杂交信号 ,而且杂交信号位于细胞核内 ;4组对照均未出现杂交信号。结论 :原位PCR在基因组变异检测方面实用。

豫医无毛小鼠无毛基因部分DNA序列分析

目的:探讨豫医无毛小鼠的无毛基因突变情况。方法:采用PCR方法扩增豫医无毛小鼠无毛基因的部分DNA序列,并进行克隆测序,将测序结果与国外公布的小鼠、大鼠及人无毛基因的cDNA序列做同源性比较和分析,确定该鼠无毛基因的特异性。结果:克隆测序结果为一923bp的片段,相当于Genbank上公布的小鼠无毛基因cDNA序列的3150～3565bp位置,包含4个外显子(外显子13～16)及3个内含子(内含子13～15);与本室以前所测昆明小鼠无毛基因部分DNA序列100%同源,其外显子部分共416bp,可编码138个氨基酸,与国外公布的小鼠、大鼠、人的无毛基因核苷酸同源性分别为100%、95%、84%,氨基酸同源性分别为100%、97.8%、84%。结论:①克隆定序了豫医无毛小鼠无毛基因的部分DNA序列;②排除了豫医无毛小鼠无毛基因的突变发生于本段序列的可能;③无毛基因在哺乳动物体内同源性很高,应属保守基因,其蛋白质产物可能在一些基本的调节途径中起重要作用,推测豫医无毛小鼠的无毛基因可能也位于14号染色体。

突变无毛小鼠近交系的育成及特性

目的 :培育突变无毛小鼠分离近交系 ,鉴定其基因纯合度 ,明确其生物学特性。方法 :采用强迫杂合性全同胞兄妹交配法进行分离近交系培育。生化标记检测、皮肤移植试验和毛色基因测试法对其基因纯合度进行鉴定。并采用相应方法对其基本生物学特性进行研究。结果 :育成具有独特生物学特性、基因高度纯合的豫医无毛小鼠分离近交系。现已达 3 0代。结论 :可以认为 ,豫医无毛小鼠分离近交系是一个遗传上高度纯合的新品系。

豫医无毛小鼠主要免疫器官组织学观察

Objective: The purpose of this study is to observe histological structure of major immune organs of Yuyi hairless mice.Methods: By using Weigert′s hematoxylin and eosin staining.Results: The histological structure of spleen and lymph node of Yuyi hairless mice was normal at different ages.Thymus was showed with thicker cortex in one month and two months.Thymus shrank in fat tissues in eight months,showed a medulla structure without cortex.Thymus bodies were not found at different ages.Conclusion: The major immune organs of Yuyi hairless mice were normal in one month and two months,thymus shrank without cortex in eight months.

豫医无毛小鼠末梢血T淋巴细胞酯酶染色法的观察

目的：观察豫医无毛小鼠Ｔ淋巴细胞及其亚群与正常昆明小明鼠有无差异。方法：用α醋酸萘酯酶法（ＡＮＡＥ）对豫医无毛小鼠进行了末梢血Ｔ淋巴细胞及其亚群的观察。结果：１月龄和２月龄豫医无毛小鼠Ｔ淋巴细胞总数和Ｔ抑制细胞数无显著差异，Ｔ辅助细胞数高于正常昆明小鼠，但６月龄无毛小鼠与正常昆明小鼠Ｔ淋巴细胞及其亚群无明显差异。结论：豫医无毛小鼠６月龄后Ｔ淋巴细胞及其亚群趋于正常，与正常昆明小鼠无显著差异。

豫医无毛小鼠体重与主要脏器重之间关系分析

目的：了解豫医无毛小鼠体重与主要脏器重之间关系。方法：剖取豫医无毛小鼠及杂合子有毛小鼠内脏器官，用ＬＩＢＲＯＲＬ１６０ＤＴＰ电子称重天平称重，对取得的数据进行统计学处理。结果：获取与主要脏器重之间关系资料。对豫医无毛小鼠及杂合子有毛小鼠进行ｔ检验，仅雌性动物心脏、胸腺有差异性。结论：豫医无毛小鼠及杂合子有毛小鼠仅雌性动物心脏、胸腺有差异，其它无差别。

豫医无毛小鼠与昆明小鼠部分血液生化特性的比较研究

目的：比较豫医无毛小鼠与昆明小鼠血液生化特性有无差异。方法：测定总蛋白（ＴＰ）、白蛋白（ＡＬ）、丙氨酸转氨酶（ＡＬＴ）、天冬氨酸转氨酶（ＡＳＴ）、γ谷氨酰转肽酶（γＧＴ）、碱性磷酸酶（ＡＫＰ）均采用卫生部临床检验中心推荐的常规微量检测方法。结果：豫医无毛小鼠ＡＬ和ＡＬＴ测定值显著高于昆明小鼠（Ｐ＜００５）。结论：豫医无毛小鼠具有某些独特的生化特性。

豫医无毛小鼠无毛基因部分内含子突变研究

目的研究豫医无毛小鼠突变的分子机制。方法对豫医无毛小鼠和昆明小鼠的基因组DNA进行PCR扩增,对二者扩增片段克隆后测序,对结果进行比较,以确定豫医无毛小鼠无毛基因的特异性程度。结果本实验共测出豫医无毛小鼠DNA序列1 746 bp和昆明小鼠DNA序列1 733 bp,两者不同之处有32处,均位于内含子,突变形式包括插入、缺失和点突变。结论无毛性状的产生可能与内含子中的插入、缺失和点突变有关。

近交培育的豫医无毛小鼠H抗原系统的同源性

目的：研究豫医无毛小鼠Ｈ 抗原系统的同源性。方法：采用近交培育２０ 代２ 月龄雌性豫医无毛小鼠皮肤异体移植法。结果：经１００ ｄ 观察，受试小鼠无急慢性排斥反应发生，移植皮片全部为永久性接受。结论：豫医无毛小鼠突变种群经２０ 代近交培育，组织相容性抗原一致。

豫医无毛小鼠染色体G带核型分析

分析了豫医无毛小鼠的２２个骨髓细胞Ｇ显带核型，并以正常昆明小鼠做对照，两小鼠Ｇ显带标本均能观察到显示大带和小带的两种带型细胞，根据其带型能区分各号染色体，两种小鼠大带带型基本相同。

5-氟尿嘧啶对豫医无毛小鼠S_(180)肉瘤的抑制作用

目的 :研究 5 氟尿嘧啶对豫医无毛小鼠S1 80 肉瘤的抑制作用。方法 :豫医无毛小鼠 (2 5只 )和昆明种小鼠(2 5只 )分别接种S1 80 肉瘤细胞建立荷瘤动物模型 ,分别随机分成对照组和用药组 ,用药组腹腔给予 5 氟尿嘧啶 ,9d后全部处死、剥离、称瘤重 ,计算抑瘤率。结果 :豫医无毛小鼠用药组瘤重 (0 .93± 0 .38)g,对照组瘤重 (2 .89± 1 .1 5)g,抑瘤率 67.7% ;昆明种小鼠用药组瘤重 (0 .2 3± 0 .0 8)g ,对照组瘤重 (2 .56± 0 .78)g,抑瘤率 91 .0 %。各用药组瘤重与对照组相比差异有统计学意义 ,P <0 .0 1。 2用药组比较 ,差异亦有统计学意义 ,P <0 .0 5。结论 :5 氟尿嘧啶对豫医无毛小鼠S1 80 肉瘤有抑制作用 。

近交系豫医无毛小鼠微卫星DNA多态性分析

目的:研究微卫星DNA多态性在豫医无毛小鼠等近交系小鼠遗传监测中的应用。方法:选取小鼠不同染色体上的18个微卫星位点(D3Mit17、D3Mit18、D3Mit15、D3Mit21、D3Mit22、D6Mit192、D6Mit81、D6Mit36、D6Mit149、D16Mit4、D7Nds1、D2Nds3、D3Mit16、D3Mit85、D3Mit41、D4Mit2、D5Mit66、D7Mit164),应用PCR技术对7个近交系小鼠(豫医无毛小鼠、BALB/C、C57、CBA、DBA/2、C3H/HeJ、FVB/NJ)进行了微卫星多态性分析。结果:18个微卫星DNA具有稳定扩增效果。不同品系个体之间11个位点(D3Mit17、D3Mit18、D3Mit15、D3Mit21、D3Mit22、D6Mit192、D6Mit81、D6Mit36、D6Mit149、D16Mit4、D7Nds1)具有多态性,其中5个位点(D6Mit36、D6Mit81、D16Mit4、D6Mit149、D7Nds1)具有显著多态性;同一品系不同个体之间表现为单态性。结论:所检测的小鼠符合近交要求,运用筛选出的11个位点(D3Mit17、D3Mit18、D3Mit15、D3Mit21、D3Mit22、D6Mit192、D6Mit81、D6Mit36、D6Mit149、D16Mit4、D7Nds1)进行微卫星多态性分析,能够快速、经济地对近交系小鼠进行品系鉴别和遗传背景监测。同时也反映了近交系豫医无毛小鼠与其他品系小鼠之间亲缘关系的远近。

豫医无毛小鼠无毛基因突变部位的定位和分析

目的:研究豫医无毛小鼠(YYHL)突变的分子机制。方法:对豫医无毛小鼠和昆明小鼠的基因组DNA进行PCR扩增,对扩增片段克隆后测序,并与Musmuscnlus进行同源性分析。结果:共测出YYHL DNA序列1824bp和昆明小鼠DNA序列1816bp,其不同之处有27处,变异方式包括插入、缺失和点突变。其中在12外显子中有一无义突变(G→A),导致该部位由编码色氨酸的UGG转变为终止密码子UGA。结论:YYHL无毛性状的产生可能与基因组的变异有关。

豫医无毛小鼠眼球组织学观察

目的：观察豫医无毛小鼠眼球组织学的结构，探讨豫医无毛小鼠视物能力差的原因。方法：取豫医无毛小鼠及昆明小鼠各5只，于室温（20-28℃）饲养，饲养期间观察2组小鼠眼睑、眼球外观，12周后采用颈椎脱臼法处死小鼠，取眼球组织进行HE染色观察。结果：豫医无毛小鼠仔鼠时期眼睑外观正常，12周龄时眼睑及皮肤有许多油脂黏附，头侧、眼睑及体侧出现皱纹和褶痕，眼睑松垂，眼球变混浊，视物能力、敏感性及行动性均降低。昆明小鼠饲养期间眼睑及眼球无明显变化。豫医无毛小鼠角膜、视网膜、睫状体组织学结构与昆明小鼠相比无明显差异。结论：豫医无毛小鼠眼球的组织学结构与昆明小鼠相同，其视物能力差可能是由眼睑松垂所致。

豫医无毛小鼠中期染色体标本中无毛基因的原位PCR检测

目的 确立豫医无毛小鼠无毛基因的原位PCR荧光检测方法。方法 应用原位PCR的方法对豫医无毛小鼠中期染色体标本的无毛基因进行检测 ,并设立PCR反应液中无TaqDNA聚合酶、无引物、无bio - 11-dUTP等进行多组对照。结果 染色体标本上出现 1～ 2个黄绿色的扩增信号 ,而对照组则无。