ZAP-70在24例B细胞慢性淋巴细胞白血病中的表达研究

为了研究慢性淋巴细胞白血病中zeta链相关蛋白-70(zeta-associatedprotein-70,ZAP-70)的表达及其与其他预后因素的相关性,应用四色流式细胞术检测24例B细胞慢性淋巴细胞白血病(B-CLL)患者骨髓或外周血白血病细胞ZAP-70和CD38的表达。结果显示:①37.5%B-CLL患者表达ZAP-70,其中BinetA期患者有20%(3/15)表达ZAP-70+,BinetB+C期患者有66.7%(6/9)表达ZAP-70+,ZAP-70+表达在BinetA期和BinetB+C期之间有显著差异(P<0.05);②29.1%B-CLL患者表达CD38,其中BinetA期患者有3例;在此3例中2例同时伴有ZAP-70+,CD38+在BinetA期和BinetB+C期之间无显著差异(P>0.05);③83.3%(20/24)患者表达ZAP-70+CD38+或ZAP-70-CD38-,ZAP-70和CD38存在相关性(P<0.05)。结论:在常规实验室可以采用流式细胞术检测ZAP-70,ZAP-70高表达与B-CLL临床分期、染色体及CD38表达等预后相关因素有一定的相关性。

CD38ZAP-70在B慢性淋巴细胞白血病中表达及其临床意义的研究

目的:检测CD38及zeta链相关蛋白-70(zeta-associated protein-70,ZAP-70)在B慢性淋巴细胞白血病(B-CLL)中的表达,探讨其与临床的相关性。方法:采用流式细胞仪检测51例B慢性淋巴细胞白血病(B-CLL)患者骨髓或外周血白血病细胞CD38和ZAP-70的表达,结合其与患者临床分期、病情进展、化疗疗效进行分析。结果:1)44例患者中10例(22.73%)CD38和ZAP-70同时表达阳性,22例(50%)CD38和ZAP-70同时表达阴性。2)31例CD38患者中,初诊时处于Binet B+C期者9例(29.03%);11例CD38+患者中,初诊时处于Binet B+C期者7例(63.64%)。CD38阳性、阴性表达在Binet分期上无显著差异(P>0.05)。27例ZAP-70-患者中,初诊时处于Binet B+C期者6例(占22.22%);16例ZAP-7+患者中,初诊时处于Binet B+C期者10例(62.5%)。ZAP-70阳性、阴性表达在Binet分期上有显著差异(P<O.05)。3)23例患者予氟达拉滨单药或联合CTX治疗,16例CD38表达者中,化疗有效(CR+PR)者11例(68.75%);7例CD38+表达者中,化疗有效者2例(14.29%)。11例ZAP-70-表达者中,化疗有效者9例(81.82%);9例ZAP-70+表达者中,化疗有效者1例(11.11%)。CD38和ZAP-70阳性、阴性的表达与化疗疗效有显著差异(P<0.05)。结论:1)B-CLL患者CD38的表达和ZAP-70的表达有关。2)B—CLL患者ZAP-70阳性、阴性的表达与Binet分期有关系,ZAP-70的阳性表达患者较阴性表达者的病情进展快。3)B-CLL患者CD38和ZAP-70的阳性表达者较阴性表达者的化疗疗效差,预后欠佳。采用流式细胞术检测ZAP-70的表达结合CD38可以作为慢性淋巴白血病的临床分型和预后判断的一个参考指标。

慢性淋巴细胞白血病中医证型与CD38 ZAP-70相关性研究

目的:探讨慢性B淋巴细胞白血病(B-CLL)患者ZAP-70、CD38的表达与中医辨证分型的关系。方法:采用流式细胞术检测对40例B-CLL病人骨髓或外周血ZAP-70、CD38的表达水平,并从分子生物学角度探讨其与中医证型的关系。结果:气阴两虚型患者ZAP-70、CD38的表达率明显高于淤血痰结型(P<0.05)。结论:ZAP-70、CD38的表达为指导CLL中医辨证诊治提供了客观指标。

70例B细胞慢性淋巴细胞白血病中ZAP-70、CD38的表达

目的:探讨ZETA相关蛋白(ZAP-70)、CD38在慢性B淋巴细胞白血病(B-CLL)病人骨髓及外周血中的表达及两者相关性,并分析其临床意义。方法:采用流式细胞术检测70例B-CLL病人及12例正常人骨髓或外周血ZAP-70、CD38的表达水平。结果:在70例B-CLL病人中,15例ZAP-70阳性表达,40例CD38阳性表达;对照组ZAP-70、CD38均阴性表达。结论:ZAP-70、CD38在B-CLL中表达与预后相关,阳性提示预后不良。

慢性B淋巴细胞白血病病人骨髓及外周血ZAP-70与CD38表达及意义

目的探讨ZETA相关蛋白(ZAP-70)、CD38在慢性B淋巴细胞白血病(B-CLL)病人骨髓及外周血中的表达及两者相关性,并分析其临床意义。方法采用半定量RT-PCR的方法对19例B-CLL病人及12例正常人骨髓或外周血ZAP-70 mRNA的表达水平进行测定,采用流式细胞术检测CD38的表达水平。结果在19例B-CLL病人中,7例ZAP-70阳性表达,8例CD38阳性表达;对照组ZAP-70、CD38均为阴性表达。结论ZAP-70 mRNA、CD38在B-CLL中表达阳性提示预后不良。ZAP-70可以取代IgVH基因突变状态作为B-CLL有效的预后指标。

退化细胞ZAP-70在慢性淋巴细胞白血病的表达及预后影响

目的:探讨退化细胞、ZAP-70在慢性淋巴细胞白血病(CLL)患者外周血中的表达及其对预后的影响。方法:利用光学显微镜观察退化细胞在92例CLL患者外周血涂片的检出率;采用流式细胞术检测外周血淋巴细胞XAP-70的阳性率。分析二者之间的相关性,并观察这二项指标与疾病进展的关系。结果:在92例CLL患者中,Binet A期28例(30.5%),Binet B期44例(47.8%),Binet C期20例(21.7%)。外周血涂片退化细胞百分比的中位数为19%(3%～48%)。取≥20%为阳性表达,则退化细胞阳性56例(60.9%);ZAP-70阳性32例(34.8%)。双因素直线相关分析提示二者呈负相关。退化细胞阴性患者临床预后差,较阳性患者的8年无进展生存率(PFS)下降(59.4%vs.86.0%,P<0.05),ZAP-70阳性患者较阴性患者的8年PFS也下降(57.8%vs.79.5%,P<0.05);退化细胞阴性伴ZAP-70阳性患者PFS更低(27.8%,P<0.05)。结论:退化细胞阴性和ZAP-70阳性提示CLL预后不良且二者密切相关。

T细胞非霍奇金淋巴瘤中ZAP-70的表达及其与P53、Ki67的相关性

背景与目的:检测T细胞非霍奇金淋巴瘤(T-NHL)中ZAP-70的表达水平变化,分析ZAP-70与P53、Ki67的相关性,探讨ZAP-70蛋白在T-NHL中表达的意义。材料与方法:采用SP免疫组织化学方法检测48例T-NHL中ZAP-70、P53、Ki67蛋白的表达,利用χ2、t检验、Spearman's等级相关检验方法分析3种蛋白表达的相关性。结果:ZAP-70在T-NHL中的表达阳性率为58.3%。肿瘤恶性程度越高,ZAP-70蛋白的表达水平越低,ZAP-70蛋白与肿瘤的恶性程度呈负相关关系(P=0.001);P53、Ki67蛋白与肿瘤的恶性程度呈正相关,P53蛋白的表达与Ki67蛋白之间存在相关性(P<0.01),且P53蛋白与EB病毒感染呈正相关(P<0.05)。结论:ZAP-70蛋白表达的缺失对于恶性T细胞淋巴瘤的诊断可能具有一定的辅助作用;联合检测P53与Ki67蛋白的表达水平对判断T-NHL的预后,指导术后辅助治疗具有重要意义。

T细胞的扩增及其信号转导分子ZAP-70的检测

目的检测γδT细胞信号转导分子ζ链相关蛋白-70（ζ-chainassociated protein70，ZAP．70）。方法分离获取健康人PBMC，用结核杆菌低分子多肽抗原（Mtb．Ag）刺激PBMC，通过流式细胞仪检测总T细胞和丫6T细胞CD69分子的动态表达；Mtb-Ag活化俩T细胞增殖培养，10d后收集细胞，用免疫磁珠阳性分选法分离获取高纯度的γδT细胞；westernblot方法检测γδT细胞内的ZAP．70分子。结果总T细胞和γδT细胞均在活化刺激24h时表达CD69分子达高峰，但总T细胞仅为16％，γδT细胞可达75．2％；新鲜分离的PBMC中γδT细胞的比例仅为4．9％，Mtb-Ag刺激培养10d后升为69．2％，免疫磁珠阳性分选后达99-3％；检测到Y6T细胞内的ZAP-70分子。结论Mtb-Ag可特异性激活俩T细胞，用Mtb-Ag刺激γδT细胞活化增殖培养，可获得大量的γδT细胞；成功地检测到细胞内ZAP-70分子，这为Y6T细胞内其它分子的检测分析奠定方法学基础，也为进一步检测γδT细胞活化信号转导过程中ZAP-70分子的激活及作用奠定基础。

T细胞的扩增及其信号转导分子ZAP-70的检测

目的检测Y6T细胞信号转导分子ξ链相关蛋白-70（ξ-chain associated protein70，ZAP-70）。方法分离获取健康人PBMC，用结核杆菌低分子多肽抗原（Mtb-Ag）刺激PBMC，通过流式细胞仪检测总T细胞和Y6T细胞CD69分子的动态表达；Mtb-Ag活化γδT细胞增殖培养，10d后收集细胞，用免疫磁珠阳性分选法分离获取高纯度的γδT细胞；western blot方法检测俩T细胞内的ZAP-70分子。结果总T细胞和γδT细胞均在活化刺激24h时表达CD69分子达高峰，但总T细胞仅为16％，γδT细胞可达75．2％；新鲜分离的PBMC中γδT细胞的比例仅为4．9％，Mtb-Ag刺激培养10d后升为69．2％，免疫磁珠阳性分选后达99．3％；检测γδT细胞内的ZAP-70分子。结论Mtb—Ag可特异性激活γδT细胞，用Mtb-Ag刺激γδT细胞活化增殖培养，可获得大量的γδT细胞；成功地检测到细胞内ZAP-70分子，这为γδT细胞内其它分子的检测分析奠定方法学基础，也为进一步检测γδT细胞活化信号转导过程中ZAP-70分子的激活及作用奠定基础。

TCRζ缺陷的急性髓细胞白血病病人T细胞中Elf-1、Zap-70和FcεR Iγ基因的表达特点

目的了解TCRζ缺陷的急性髓细胞白血病(acute myeloid leukemia,AML)病人外周血T细胞中Elf-1、Zap-70和FcεR Iγ基因的表达特点。方法采用SYBR GreenⅠ荧光定量PCR和相对定量分析法检测10例TCRζ缺陷的AML病人外周血CD3+T细胞中Zap-70、Elf-1和FcεR Iγ基因的表达情况。以β2微球蛋白基因(β2M)作为内参,10例健康成人作为对照;采用相对定量公式:2-△Ct×100%,计算Zap-70、Elf-1和FcεR Iγ基因的表达水平。结果 TCRζ缺陷的AML病人外周血T细胞中Elf-1基因的表达水平(中位数8.526%)明显低于健康对照组(中位数33.237%)(P<0.001),而FcεR Iγ基因的表达水平(中位数2.571%)则高于健康对照组(中位数0.958%)(P=0.019),Zap-70基因在两组中的表达水平没有显著性差异,但均与TCRζ基因的表达水平呈正相关。结论 TCRζ缺陷的AML病人T细胞中Elf-1基因的低表达可能是导致AML病人TCRζ基因缺陷性表达的原因之一,而FcεR Iγ基因的高表达则可能是在一定程度上缓解了TCRζ基因缺陷性表达所带来的T细胞免疫异常。

ZAP-70在ITAM活化中的作用

在假设ITAM两步磷酸化的基础上 ,建立理论模型 ,定性讨论了ZAP 70在ITAM活化中的作用 .结果表明 :TCR与MHC pep抗原多肽的亲和力是影响免疫应答的一个重要参数 ,但ZAP 70对ITAM活化事件的正反馈调节会使得TCR对特异性抗原识别的敏锐性降低 ,当这种调节达到一定程度时 ,免疫应答将不再依赖抗原的特异性 .进一步讨论了半活化状态的ZAP 70的作用 ,运用此模型还解释了ITAM的活化过程存在一个ITAM/ZAP 70的浓度阈值问题 .

Syk或ZAP-70信号途径诱导脐带血CD4^+T细胞极化

目的:探讨IL-2或IL-4和基质细胞源因子(SDF)-1α协同刺激下,脐带血CD4+T细胞极化的作用及其与非受体型蛋白质酪氨酸激酶的关系。方法:流式细胞术、实时定量RT-PCR检测IL-2或IL-4和SDF-1α协同刺激下,CD4+T细胞中胞内Th1型和Th2型细胞因子的表达;免疫复合物激酶分析法和免疫印迹法检测Th细胞极化过程中非受体型蛋白酪氨酸激酶Syk和ZAP-70的磷酸化;反义肽核酸(PNA)技术探讨Syk和ZAP-70在协同刺激Th细胞极化过程中的作用。结果:L-2或IL-4和SDF-1α协同作用可通过Syk或ZAP-70磷酸化诱导CD4+T细胞极化;Syk或ZAP-70 PNA可明显阻断Syk或ZAP-70磷酸化以及CD4+T细胞极化。结论:Syk和ZAP-70磷酸化对于IL-2或IL-4和SDF-1α协同诱导CD4+T细胞极化十分重要。

ZAP-70用于慢性淋巴细胞白血病标准化检测方法的探讨

慢性淋巴细胞白血病是一种临床预后差异极大的疾病。由于ZAP-70与免疫球蛋白重链可变区(IgVH)基因突变有明显相关性且检测方法相对简单,故ZAP-70成为IgVH基因突变的理想替代指标。近年来,不同的ZAP-70检测方法表现出的差异性限制了ZAP-70在临床上的应用,因此ZAP-70标准化检测方法的研究成为焦点。本文就ZAP-70的生物学特征、临床意义、检测方法进行综述。检测方法主要集中在分析方法和实验技术两方面;分析方法包括百分比法、荧光定量法、参比法,其中重要的一步是设定对照;实验技术包括标本的存储、检测时间、固定方法、抗体和荧光素的选择。虽然大量文献对检测方法的诸多变量研究进行了比较,但ZAP-70标准化检测方法在目前尚未有定论。

结核杆菌抗原活化的γδT细胞中ZAP-70的酪氨酸磷酸化特点

目的 观察结核杆菌抗原 (Mtb Ag)活化的γδT细胞信号转导分子ZAP 70酪氨酸磷酸化的特点。方法 用Mtb Ag和抗CD3单克隆抗体 (CD3McAb)体外刺激人外周血单个核细胞(PBMC) ,诱导活化 ,在含IL 2的培养液中扩增培养 ,分别获得Mtb Ag激活的T细胞 (MtbAT)和CD3McAb激活的T细胞 (CD3AT)。再分别用Mtb Ag和CD3McAb刺激 ,在不同时间内提取细胞裂解液 ,用抗 酪氨酸磷酸化蛋白抗体作免疫沉淀 ,用抗ZAP 70单克隆抗体进行免疫印迹。结果 MtbAT中γδT细胞可达 6 0 %～ 80 % ,CD3AT中CD3+ 细胞可达 90 %以上 ,而γδT细胞 <10 % ;MtbAT细胞用Mtb Ag再刺激后 15min时出现ZAP 70的酪氨酸磷酸化 ,30min达高峰 ,可持续到 6 0～ 12 0min ,而CD3AT用CD3McAb再刺激后仅在 5min时检测到ZAP 70的磷酸化。结论 与CD3McAb对普通T细胞的作用比较 ,Mtb Ag刺激可优先活化γδT细胞 ,其对γδT细胞ZAP 70活化的特点是 :较慢、较强。

ZAP-70及CD38在慢性B淋巴细胞白血病中表达的意义

目的检测zeta相关蛋白（ZAP-70）及CD38在慢性B淋巴细胞白血病（B—CLL）中的表达，分析两者的相关性，并探讨其临床意义。方法采用流式细胞仪检测21例B—CLL患者骨髓或外周血中ZAP-70及CD38的表达水平。结果在21例B—CLL中9例ZAP-70阳性，8例CD38阳性。二者同时阳性8例，二者同时阴性8例。结论ZAP-70及CD38可以为B—CLL提供重要的预后信息，阳性提示预后不良，二者具有相关性。

尼罗罗非鱼ZAP-70蛋白的原核表达、纯化及其多抗制备

[目的]构建尼罗罗非鱼ZAP-70原核表达载体,纯化其重组蛋白并制备多克隆抗体。[方法]采用无缝克隆技术构建尼罗罗非鱼ZAP-70重组表达载体,并转入大肠杆菌B21中诱导表达,将表达的ZAP-70蛋白免疫日本大耳兔得到多克隆抗体,采用Western Blotting和ELISA技术鉴定抗体的特异性和效价。[结果]成功构建原核表达重组质粒p ET-B2m-ZAP-70,诱导表达的重组蛋白分子量约为39 k Da,主要以包涵体的形式表达;获得效价为1∶512 000的多克隆抗血清,WB检测显示该抗体能够特异性的识别所表达的ZAP-70重组蛋白。[结论]尼罗罗非鱼ZAP-70重组质粒在大肠杆菌B21中高效表达,分子量约为39 k Da,该蛋白具有良好的免疫原性,为进一步探索ZAP-70在尼罗罗非鱼免疫系统中的功能奠定了基础。

γδT细胞的扩增及其信号转导分子ζ链相关蛋白-70的免疫印迹检测

目的 检测人外周血γδT细胞的信号转导分子ζ链相关蛋白-70 （ZAP-70）的表达.方法 应用淋巴细胞分离液常规分离获取健康人外周血单个核细胞（PBMC）,用结核杆菌低分子多肽抗原（Mtb-Ag）刺激PBMC增殖培养,10d后收集细胞,用免疫磁珠阳性分选法分离获取高纯度的γδT细胞；采用免疫印迹方法检测γδT细胞内的ZAP-70分子.结果 新鲜分离的PBMC中γδT细胞的比例仅为4.9％,Mtb-Ag刺激培养10d后升为69.2％,免疫磁珠阳性分选后达99.3％.免疫印迹显示检测到γδT细胞内相对分子质量为70 000的ZAP-70分子的表达.结论 ZAP-70分子在活化增殖的人外周血γδT细胞内高表达.

溴隐亭对植物血凝素诱导活化T淋巴细胞的影响

目的研究溴隐亭(BRC)对植物血凝素(PHA)诱导活化T淋巴细胞的影响。方法用泌乳素(PRL)与BRC单独和联合刺激培养PHA诱导活化的CD4+T淋巴细胞系JurkatE6-1细胞,利用实时聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测活化T淋巴细胞重要信号分子转接蛋白(LAT)、T细胞受体相关的相对分子质量为70000的蛋白激酶ζ链(ZAP-70)mRNA表达变化情况;利用Realtime-PCR方法检测活化T淋巴细胞自身PRLmRNA表达变化情况;利用流式细胞术检测T淋巴细胞活化早期表面标志细胞分化抗原CD25分子表达变化情况;利用脂质体转染荧光素酶报告系统检测T淋巴细胞活化的核转录因子-κB(NF-κB)活性变化情况。结果1.BRC可抑制PHA诱导的T淋巴细胞活化和PRL-泌乳素受体(PRLR)信号转导途径的共同信号分子ZAP-70mRNA及活化T淋巴细胞自身PRLmRNA的表达;2.BRC促进了活化T淋巴细胞信号分子LATmRNA和活化T淋巴细胞表面CD25分子的表达;3.BRC抑制了PHA诱导的活化T淋巴细胞核NF-κB活性。结论BRC可通过抑制T淋巴细胞活化和PRL-PRLR途径中的共同信号分子ZAP-70及活化T淋巴细胞自身PRLmRNA分泌,对T淋巴细胞活化发挥抑制作用。

慢性淋巴细胞白血病的免疫表型研究

目的结合ZAP-70、CD38探讨免疫表型在B慢性淋巴细胞白血病(B-CLL)诊断和预后评价中的应用价值。方法采用多参数流式细胞术检测45例B-CLL患者CD5、CD10、CD19、CD20、CD22、CD23、FMC7、CD38及ZAP-70的表达。结果45例B-CLL均高表达CD19、CD20,其中有43例(95.6%)表达CD5,42例(93.3%)表达CD23,30例表达CD22(66.7%),无一例表达FMC7和CD10。将所有病例分为两组,ZAP-70+CD38+/ZAP-70-CD38-组占84.4%(38/45),ZAP-70+CD38-/ZAP-70-CD38+占15.6%(7/45),两组所占比例差异有统计学意义(P<0.05)。结论同时表达CD5、CD23、CD19是诊断B-CLL的特征性免疫表型,CD5-见于不典型B-CLL,CD38和ZAP-70的表达存在相关性。

慢性B细胞淋巴细胞白血病的免疫表型研究

目的探讨免疫表型在慢性B细胞淋巴细胞白血病(B-CLL)诊断及预后评价中的应用价值。方法应用流式细胞仪,采用系列相关单克隆抗体和三色流式细胞术对37例慢性B细胞淋巴细胞白血病患者进行免疫表型分析。结果 37例B-CLL患者中大部分表达CD5、CD19、CD20、人白细胞DR抗原(HLA-DR),有部分表达CD22、cyCD79a、CD38、zeta链相关蛋白70(ZAP-70),极少表达CD7、CD13,不表达CD3、CD14、CD34。B-CLL患者ZAP-70表达的阳性率为13.5%,其中Binet A期患者有3.8%(1/26)表达ZAP-70,Binet B+C期患者有36.4%(4/11)表达ZAP-70,ZAP-70在Binet A期和Binet B+C期的表达存在显著差异(P<0.05)。结论对B-CLL患者进行免疫表型分析,对于诊断及预后评价有重要意义。ZAP-70可作为B-CLL有效的预后指标。