Zfx在小鼠睾丸生精细胞中的表达

目的:了解Zfx基因在各级生精细胞中的表达情况。方法:本试验采集6、8、17日龄和成年小鼠睾丸,采用组合酶消化法制备单细胞悬液,BSA铺设密度梯度法分离生精细胞,运用荧光实时定量PCR(qRT-PCR)及Western印迹法(WB)方法检测Zfx基因的表达。结果:组合酶消化法制备单细胞悬液、BSA铺设密度梯度法可获得纯度>85%的各级生精细胞;Zfx基因在原始A型精原细胞、A型精原细胞、B型精原细胞中表达水平低,前细线期精母细胞、粗线期精母细胞、圆形精子细胞中表达量高,长形精子、成熟精子不表达。结论:Zfx基因在各级生精细胞中呈现阶段性表达,可能是参与调控生精细胞减数分裂的重要转录因子。

PCR扩增ZFY、ZFX序列鉴定奶牛性别的灵敏度研究

从克隆、测序所得奶牛ＺＦＹ、ＺＦＸ序列中设计１对高特异性引物（或探针），即分别特异于牛ＺＦＹ、ＺＦＸ的ＺＦ３、ＺＦ４，与克隆时使用的引物ＺＦ２搭配成ＺＦ２、ＺＦ３和ＺＦ２、ＺＦ４。利用这２对引物和ＺＦ１、ＺＦ２对奶牛基因组ＤＮＡ进行ＮｅｓｔＰＣＲ来判断性别，结果达到用超微量（８ｐｇ）ＤＮＡ，即可检出ＺＦＹ、ＺＦＸ序列而判定雌雄的灵敏度；用非同位素标记试剂盒（ＤＩＧ－Ｓｙｓｔｅｍ）标记ＺＦ３、ＺＦ４作为探针，对ＺＦ１、ＺＦ２扩增产物点杂交来判断性别。

辽宁新品系绒山羊ZFX、ZFY基因片段的进化研究与性别鉴定

根据摩弗伦羊(Mouflon)和人(Human)的ZFX、ZFY基因序列以及相关文献设计引物,以雌雄辽宁新品系绒山羊的基因组DNA为模板,用PCR方法扩增并克隆其ZFX、ZFY基因第11号外显子的部分片段,进行序列测序。结果用NCBI的BLAST,生物软件ClustalX.exe、Mega、BioEdit.exe、DNAClub等进行分析。对辽宁新品系绒山羊(New-breeding cashmere goat)、藏系绵羊(Tibetan sheep)、摩弗伦羊(Mouflon)、马(Horse)、山狗(Coyote)、猪(Pig)、鲸(Whale)、人(Human)和牛(Cow)的ZFX、ZFY基因的外显子同源性进行序列对比分析。用N-J方法构建分子系统树。分析结果表明:ZFX、ZFY基因两者核苷酸同源性达92%,推导的氨基酸同源性为95%。经分析可知,辽宁新品系绒山羊与摩弗伦羊亲缘关系最近,与其他物种的亲缘关系较远。利用限制性内切酶AvaII对辽宁新品系绒山羊ZFX、ZFY基因的PCR产物进行酶切,确定AvaII为ZFX基因上的特异酶切位点,以此对辽宁新品系绒山羊性别进行鉴定。

毛冠鹿ZFY、ZFX基因片段的克隆与性别鉴定

根据人和鼠性别分化相关的ZFY、ZFX基因序列设计引物,以雌雄毛冠鹿的基因组DNA为模板进行PCR扩增,将扩增产物克隆到pMD18T上,获得ZFY、ZFX重组克隆,并测定了ZFY、ZFX基因片段的序列,序列比较显示两者同源性达91%,仅在少数位点有差异,以此确定AvaⅡ为ZFX上特异酶切位点,通过PCR扩增和AvaⅡ特异酶切对毛冠鹿性别进行鉴定。

奶牛ZFY、ZFX基因片段的克隆及测序

奶牛的早期胚胎性别鉴定是奶牛胚胎分割及移植技术产生较大经济效益的前提，用ＰＣＲ技术进行早期胚胎性别鉴定具有准确、快速、灵敏度高的特点。利用人和鼠的性别分化相关的ＤＮＡ序列ＺＦＹ、ＺＦＸ基因序列设计的引物对公牛和母牛的染色体ＤＮＡ、ＰＣＲ扩增，将扩增产物定向克隆到ｐＵＣ１１８上，获得ＺＦＹ、ＺＦＸ转化子，并测定了ＺＦＹ、ＺＦＸ基因的序列，发现两者同源性达８８．２％，以此为基础可设计引物和探针，以ＰＣＲ方法进行高灵敏度的奶牛性别鉴定。

奶牛ZFX,ZFY基因片段的克隆、测序及PCR对奶牛性别鉴定灵敏度研究

奶牛胚胎的性别鉴定是多年来奶牛业研究和探索的问题。尤其在体外授精,胚胎分割冷冻,保存及胚胎移植一系列生物科学高技术发展和应用的今天,这一问题的解决显得更加重要和迫切。用分子杂交的方法也可对胚胎进行早期性别鉴定,但这一方法必须要有大量的样品DNA,而且所需时间长。

牦牛与其他物种ZFX/ZFY基因片段间的进化关系

利用PCR扩增、克隆和序列分析法对牦牛ZFX/ZFY基因第11外显子部分片段进行了研究,并同来自于NCBIGenBank中人、猩猩、普通牛等9个物种的ZFX/ZFY基因核苷酸及其氨基酸序列进行了进化分析.结果表明,牦牛ZFX、ZFY基因间核苷酸序列同源性为94.1%,显示同一物种同源基因ZFX/ZFY间存在变异;比较的10个物种间ZFX基因核苷酸序列同源性为87.7%、ZFY基因为81.7%,相应ZFX、ZFY氨基酸同源性分别为96.6%、91.0%,ZFY基因的变异性大于ZFX基因,显示X染色体与Y染色体可能是独立进化.

siRNA靶向沉默ZFX基因对肝内胆管癌细胞生物学功能的影响

目的探讨siRNA沉默X染色体连锁的锌指蛋白(ZFX)基因的表达后对肝内胆管癌细胞(HCCC-9810)的增殖、克隆、迁移及侵袭能力的影响。方法通过脂质体lipofectamine 3000介导转染肝内胆管癌细胞株HCCC-9810,抑制ZFX基因在肝内胆管癌细胞系中的表达,RT-PCR检测ZFX基因的mRNA表达水平的变化,Western blot检测ZFX基因的蛋白表达水平的变化。ZFX基因下调后分别用软琼脂克隆形成实验检测克隆形成能力,CCK-8增殖实验检测细胞增殖情况,Transwell检测细胞的迁移、转移情况。结果RT-PCR及Western blot结果表明与Cell组、NC-siRNA组相比,ZFX-siRNA组有效降低了HCCC-9810细胞系ZFX的mRNA水平及蛋白水平的表达。克隆形成实验显示:ZFX基因沉默后,该细胞系克隆形成能力明显减弱。CCK-8增殖实验证明实验组细胞增殖能力明显降低。Transwell实验显示,Cell组、NC-siRNA组细胞迁移、转移能力明显高于ZFX-siRNA组细胞。各组实验中Cell组、NC-siRNA组之间均未见明显差异。结论本实验siRNA成功降低肝内胆管癌细胞系HCCC-9810中ZFX基因的表达并证明ZFX的表达降低后与肝内胆管癌细胞的克隆形成、增殖、迁移、转移能力相关。推测ZFX在肝内胆管癌的发生发展中发挥重要的作用,可作为该基因治疗的新靶点。

ZFX基因在骨肉瘤中的表达及其作用机制

目的探讨X染色体偶联锌指蛋白(ZFX)基因在骨肉瘤中的表达及其作用机制。方法采用手术切除后存档的人骨肉瘤组织及瘤旁组织石蜡包埋标本50例,通过Western blot检测其中ZFX的表达。体外培养人骨肉瘤MG63细胞,分别用ZFX小干扰RNA(ZFX-siRNA)和阴性对照(siRNA-NC)转染细胞,以空脂质体转染的细胞作为对照组,各组细胞培养48 h后,用Western blot检测细胞中ZFX、Bcl-2、Bax、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达变化;CCK-8检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡。结果 ZFX基因在骨肉瘤组织中的蛋白表达显著高于瘤旁组织(P<0.01);siRNA-NC组细胞增殖活力、凋亡率及ZFX、Bcl-2、Bax、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达与对照组比较无显著差异(P>0.05);ZFX-siRNA组细胞活力及ZFX、Bcl-2、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达显著低于对照组,细胞凋亡率及Bax蛋白表达显著高于对照组(P<0.01)。结论 ZFX基因在人骨肉瘤组织中高表达,可能通过促进人骨肉瘤MG63细胞增殖并抑制其凋亡在其发生发展过程中发挥重要的作用,其机制可能与Wnt信号通路的激活有关。

ZFX基因同源序列在黄鳝基因组中的检出及其染色体定位(英文)

以大熊猫锌指蛋白基因Zfx为探针 ,在黄鳝基因组DNA中检测到一条长约 9 5kb的杂交带。依据哺乳类和爬行类动物锌指蛋白基因 (ZFX/Zfc)编码第 7～ 13个锌指结构的DNA序列保守性设计引物 ,在黄鳝基因组DNA中仅扩增到一条 5 12bp的DNA片段。将此片段克隆至载体 pBS中 ,从雌性、雄性个体中分别挑选 4个含有插入片段的白色克隆进行测序。测序结果表明 ,这些克隆中插入片段的核苷酸序列一致。该DNA片段在核苷酸水平上与人类ZFX和ZFY分别具有 88%和 87%同源性 ,但其与美洲鳄鱼Zfc的同源性可达 90 % ,而在氨基酸水平上则分别存在 95 9%、95 9%和 93 5 %的同源性 (170个氨基酸 )。该基因命名为黄鳝锌指蛋白基因Zfa ,并运用FISH将其定位于黄鳝 1号染色体 ,距离着丝粒的相对位置为 6 0 1± 0 38。通过进一步研究证明 ,黄鳝 1号染色体上存在有真兽类哺乳动物X染色质同源的保守片段 ,该保守片段有可能就是哺乳动物X染色体起源和进化的原始物质基础之一。应用哺乳动物X染色体连锁的其他基因在鱼类开展染色体比较定位研究 。

ZFX蛋白在胃癌组织中的表达与病理和预后关系的研究

目的:探讨胃癌组织中X染色体连锁锌指蛋白(ZFX)的表达,评价其与患者临床病理特征及预后的关系。方法:选取2013年1月—2015年12月经手术切除的胃癌组织标本,并收集其癌旁组织标本作为对照组。采用qRT-PCR方法检测43例胃癌组织及其对应癌旁组织中ZFX mRNA的表达,免疫组织化学(IHC)方法进一步检测114例胃癌及其癌旁组织中ZFX蛋白的表达情况,观察并探讨其与临床病理参数之间的关系,采用Kaplan-Meier对胃癌患者生存情况进行分析。结果:qRT-PCR结果显示ZFX mRNA在胃癌组织中的表达异常升高,明显高于癌旁组织;进一步IHC结果表明,ZFX蛋白的表达位于细胞核,胃癌组织中的表达阳性率约为76.3%,而癌旁组织中的阳性率仅有19.3%,差异有统计学意义(P<0.01)。进一步分析显示,胃癌组织中ZFX蛋白的表达与患者的年龄、性别、肿瘤部位及TNM分期无关(P>0.05),而与肿瘤分化程度、淋巴结转移、肿瘤的浸润深度密切相关(P<0.05)。Kaplan-Meier生存曲线显示ZFX蛋白阴性表达组的总生存期高于阳性表达组(P<0.05)。结论:ZFX在胃癌组织中于基因水平和蛋白水平均呈现异常高表达,并与患者临床病理参数和预后密切相关,提示ZFX参与胃癌的发生发展,有望成为胃癌潜在的预后指标。

藏系绵羊ZFX/ZFY基因片段进化分析

目的:获得X染色体、Y染色体在进化上是独立进行的依据。方法:用PCR方法扩增并克隆藏系绵羊ZFX/ZFY基因片段并测序,对ZFX/ZFY基因片段进行了序列比对。结果:扩增的ZFX/ZFY基因片段长度为447bp,该对基因比对结果是总的同源相似率为80.76%,ZFX基因的同源性在96.4～99.3%之间,而ZFY基因的同源性在95.3～98.4%之间;在相应148个氨基酸中,ZFX基因的氨基酸差异为2个,而ZFY基因的氨基酸差异为12个。结论:在进化过程中ZFY基因比ZFX基因更活跃,而ZFX基因较为保守,为研究X染色体、Y染色体在进化上的差异提供参考。

高效抑制小鼠精子zfx基因shRNA分子的筛选

zfx是小鼠X性染色体上的特异基因，可能与X精子的发生有关，沉默或下调该基因的正常表达可影响X精子的正常发育，使后代性别比列发生偏移。本实验为了筛选对小鼠zfx基因有效的shRNA分子，利用RNAi技术针对X精子zfx基因组mRNA的不同外显子选取10个干扰靶位，成功构建了10个shRNA质粒表达载体；通过对体外培养的生精细胞zfx基因的干扰试验，并用qRT—PCR方法检测生精细胞中zfxmRNA的表达丰度。结果显示：有4个干扰质粒组对zfx基因表达抑制明显，抑制率为33．47％～92．61％，其中pqz1、pqz3和pqz4等3个表达质粒抑制效果最好，抑制率分别为70．1％（P〈0．05）、85％（P〈0．05）和92．61％（P〈0．01），表明这3个质粒能明显抑制小鼠生精细胞中zfx基因的表达。

Zfx基因与干细胞自我更新

干细胞具有自我更新保持不分化状态的特性,不同的干细胞具有不同的自我更新机制。Zfx基因(zinc finger-X gene)在部分胚胎干细胞和造血干细胞中高表达,该基因高表达有利于胚胎干细胞和造血干细胞自我更新;Zfx基因表达不足或缺乏的胚胎干细胞和造血干细胞自我更新的能力下降,细胞凋亡明显增加。在胚胎干细胞和造血干细胞中发现一些Zfx基因直接调控的靶基因,Zfx基因可能是控制各种干细胞自我更新的共同的分子机制。Zfx基因表达不足不影响胚胎干细胞和造血干细胞的分化,缺乏Zfx基因的胚胎干细胞和造血干细胞能够正常分化为各自的功能细胞。

锌指蛋白Zfx在人脑胶质瘤中的表达与意义

背景与目的:X染色体耦联锌指蛋白(Zfx)是锌指蛋白超家族中的一员,是胚胎干细胞和成体干细胞自我更新的共同分子基础。本研究探讨Zfx在人脑胶质瘤中的表达及其与脑胶质瘤的发生和恶性程度的关系有待探讨。方法:收集52例经病理证实的脑胶质瘤肿瘤标本和8例正常脑组织标本,根据病理结果对脑胶质瘤标本进行分组,通过实时定量PCR、免疫组织化学和Westernblot等方法对标本中Zfx的mRNA和蛋白表达进行检测,应用统计学方法对正常脑组织和不同恶性程度脑胶质瘤中Zfx的表达进行分析。结果:免疫组化染色结果显示,Zfx主要表达于细胞核。脑胶质瘤中Zfx的mRNA和蛋白表达均高于其在正常脑组织中的表达,在不同病理分级的脑胶质瘤中Zfx的表达水平有差异,Zfx的表达水平随脑胶质瘤的恶性程度增高而增高。结论:Zfx的mRNA和蛋白在脑胶质瘤中高表达,与脑胶质瘤的恶性程度呈正相关,它有可能是脑胶质瘤抗凋亡、恶性增殖的一个关键性的调控因子。

ZFX、ZFY基因与动物进化关系的分析

本文对ChinaHolsteinZFY,ZFX基因外显子片段进行克隆、测序,并利用NCBI和BLAST犤5、6、7犦与Japaneseblack、Sheep、Horse、Pig、Human的ZFY、ZFX的同一外显子同源序列进行对比分析,结果表明:本文分析的锌指蛋白基因ZFY和ZFX外显子片段在上述各物种间,种属距离越远,种属间SNP的差异越大。对ChinaHolstein及Japaneseblack间的ZFY、ZFX对比分析表明:同种属内不同品种间的SNP也存在差异,但同源性高于种间。同种属或品种内ZFY与ZFX的同源比较ZFY的SNP高于ZFX,ZFY在进化过程中较ZFX更活跃,而ZFX较为保守,该结果与国外多数学者的研究结果一致犤2、3、13犦,对ZFY与ZFX的SNP性质进行研究发现ZFY中的碱基颠换率为16.22%、ZFX为16%.本文结果可作为奶牛胚胎早期性别鉴定的基础方法。

扩增ZFX/ZFY基因—一个可靠的性别鉴定系统

应用PCR技术扩增人ZFX和ZFY基因特异性DNA顺序,在男性DNA中检测到ZFX基因特异和ZFY基因特异的两种扩增产物,在女性DNA中仅检测到ZFX基因特异的一种扩增产物。采用ZFX/ZFY扩增系统进行性别鉴定的优点为:①检测X、Y两条性染色体,无假阴性结果;②ZFY基因位于Y染色体短臂,不受Y染色体长臂正常变异影响;③ZFY基因邻接TDF基因,适于性反转受检者;④扩增产物可经电泳直接区分。

应用SRY基因、ZFX/ZFY基因和DYZ1顺序检测性发育异常

目的 :从基因水平进行性别检测 ,为性发育异常患者的基因结构分析提供依据和检测方法。方法 :应用PCR技术 ,扩增SRY基因、ZFX/ZFY基因、DYZ1顺序进行性发育异常患者的基因检测。结果 :检测 14例患者中 ,1～ 4例为SRY基因异常所致的性反转综合征 ;5～ 7例为性染色体数目异常或结构畸变所致的Turner综合征 ;8～ 9例为性染色体 (X)与常染色体易位所致性腺发育不全 ;10～ 14例为Y染色体多态。结论 :SRY基因和性染色体数目异常及结构畸变是导致性发育异常的主要原因 。

用ZFX86微处理器设计NAS系统

介绍了ZFX86的性能特征以及以ZFX86微处理器为核心,设计NAS系统的硬件原理,详细阐述了NAS的操作系统平台以及管理系统的架构。

马鹿Zfx/Zfy基因的克隆及序列分析

根据GenBank中公布的牛Zfx/Zfy基因的mRNA序列,设计特异性引物,对马鹿Zfx/Zfy基因进行扩增,并对该序列进行分析。结果表明,克隆得到马鹿Zfx基因序列长为2 115bp,GenBank登录号为KP257294.1,编码696个氨基酸;Zfy基因序列长为2 406bp,GenBank登录号为KU041539,编码801个氨基酸。依据Zfx/Zfy基因氨基酸序列构建进化树,分析表明,马鹿Zfx基因与人的亲缘关系较近,与聚为一类的野牛、藏羚羊、虎、家猫、家牛、家犬、绵羊的亲缘关系稍远;Zfy基因与家牛、野牛、藏羚羊、绵羊的亲缘关系较近,与其他动物及人的亲缘关系较远。本研究首次克隆了马鹿Zfx/Zfy基因,为研究该基因蛋白质的结构和功能奠定了基础。