circRNA ZNF609靶向miR-512-5p调控胶质瘤细胞恶性生物学行为的分子机制研究

目的探讨circRNA ZNF609影响胶质瘤细胞恶性生物学行为的可能机制。方法(1)收集35例胶质瘤患者手术切除的肿瘤标本(胶质瘤组)及7例颅脑外伤患者的脑组织标本(对照组),RT-qPCR法检测组织中环状RNA(circRNA)ZNF609与微小RNA(miR)-512-5p表达量;(2)正常胶质细胞(HEB)为对照,RT-qPCR法检测胶质瘤细胞系(LN18、SW1088和Hs683)中circRNA ZNF609与miR-512-5p表达量;(3)胶质瘤LN18细胞,分别转染circRNA ZNF609小干扰RNA(siRNA)、miR-512-5p模拟物、或共转染circRNA ZNF609小干扰siRNA与anti-miRNA-512-5p后,用MTT法、流式细胞术、Transwell法分别检测LN18细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭;Western blot法检测细胞中细胞周期蛋白D1(cyclin D1)和cleaved-caspase-3蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验验证circRNA ZNF609与miR-512-5p的调控关系。结果与对照组比较,胶质瘤组circRNAZNF609表达升高(t=13.59,P<0.01),miR-512-5p表达降低(t=17.76,P<0.01)。与HEB细胞比较,LN18、SW1088和Hs683细胞中circRNA ZNF609表达量均升高(均P<0.01),miR-512-5p表达量均降低(均P<0.01)。敲减circRNAZNF609或过表达miR-512-5p后,吸光度值、迁移和侵袭数、cyclin D1水平降低,凋亡率和cleaved-caspase-3水平增高(均P<0.01)。结论胶质瘤细胞系中circRNA ZNF609上调表达,敲减circRNA ZNF609表达可能通过负向调控mi R-512-5p表达降低胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭能力,并促进凋亡。

MicroRNA-150-5p对肝细胞癌细胞增殖、凋亡和周期的影响

目的研究microRNA-150-5p(miR-150-5p)在人正常肝细胞和肝细胞癌细胞中的表达,及其对肝细胞癌细胞增殖、凋亡和周期的影响及潜在机制。方法通过实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测各处理组细胞中的miR-150-5p的表达水平;MTT法检测miR-150-5p对肝细胞癌细胞增殖的影响;流式细胞术检测miR-150-5p对肝细胞癌细胞凋亡和周期的影响;荧光素酶报告基因实验检测锌指蛋白609是否为miR-150-5p的直接靶基因。结果 miR-150-5p在肝细胞癌细胞系中的表达较人正常肝细胞细胞系降低,miR-150-5p可抑制肝细胞癌细胞的增殖,促进肝细胞癌细胞的凋亡,并阻滞细胞周期于G_1期。miR-150-5p在肝细胞癌中发挥肿瘤抑制分子作用的潜在机制为直接靶向抑制ZNF609的表达。结论 miR-150-5p在肝细胞癌细胞中表达降低,并可通过调控ZNF609的表达而调控肝细胞癌细胞增殖、凋亡和周期。

秦皮甲素抑制人鼻咽癌细胞系HNE-3增殖

目的 探讨秦皮甲素对鼻咽癌细胞生物学行为的影响及其可能作用机制。方法 不同浓度的秦皮甲素处理人鼻咽癌细胞系HNE-3;并将si-NC、si-circ-ZNF609转染至HNE-3细胞,pcDNA、pcDNA-circ-ZNF609分别转染至HNE-3细胞后用秦皮甲素处理细胞;采用CCK-8法检测细胞增殖;采用试剂盒检测细胞内葡萄糖摄取水平与乳酸水平;采用酶活性试剂盒检测丙酮酸激酶和己糖激酶的活性;Transwell小室法检测细胞迁移及侵袭;RT-qPCR检测circ-ZNF609的表达量;Western blot检测MMP-2、MMP-9蛋白表达量。结果 秦皮甲素以浓度依赖性的方式降低细胞存活率和MMP-2、MMP-9蛋白水平(P<0.001),降低葡萄糖摄取水平和乳酸水平(P<0.001),降低丙酮酸激酶和己糖激酶的活性(P<0.001),减少迁移及侵袭细胞数(P<0.001);秦皮甲素可降低circ-ZNF609的表达量(P<0.001),且呈剂量依赖性;转染si-circ-ZNF609后细胞存活率和MMP-2、MMP-9蛋白水平降低(P<0.001),葡萄糖摄取水平和乳酸水平降低(P<0.001),丙酮酸激酶和己糖激酶的活性降低(P<0.001),迁移及侵袭细胞数减少(P<0.001);转染pcDNA-circ-ZNF609能够回复秦皮甲素对HNE-3细胞增殖、糖酵解、迁移及侵袭的抑制作用。结论 秦皮甲素可通过调控circ-ZNF609表达而抑制HNE-3细胞增殖、糖酵解、迁移及侵袭。