小鼠ZnT3 cDNA片断的克隆及其mRNA表达

为了解ZnT3 (zinctransporter3 )mRNA在小鼠各组织中的表达状况 ,用反转录多聚酶链反应法 (RT PCR)克隆ZnT3cDNA片断 ,荧光标记的全自动测序法确定ZnT3cDNA片断的碱基顺序 ,RT PCR法检测小鼠各组织ZnT3mRNA表达并比较在组织中的表达量。结果 :RT PCR获得单一条带的片断 ,其大小 70 0bp ,碱基顺序与文献报道序列一致 ;在大脑皮层、海马和睾丸中检测到ZnT3mRNA表达 ,其中睾丸中表达量最高 ,大脑皮层、海马表达量无显著性差别 ,心、肝、脾、肺、肾、小肠及嗅球、小脑等组织中未见ZnT3mRNA表达。说明克隆到正确的ZnT3cDNA片断。ZnT3mRNA主要表达于睾丸、大脑皮层、海马 。

急性热应激与热惊厥幼龄大鼠脑内Fos的免疫反应性及ZnT3 mRNA原位杂交研究

目的探讨热应激（HS）和热性惊厥（FC）对脑内Fos免疫反应性和ZnT3 mRNA定位表达的影响，揭示FC发生的神经解剖学机制和对海马苔藓纤维发芽相关基因ZnT3表达的影响，为临床合理干预提供依据。方法采用热水浴诱导21日龄大鼠FC模型，应用免疫组织化学技术对HS和FC大鼠Fos免疫反应性在不同脑区的定位表达进行比较分析，采用原位杂交技术对海马ZnT3 mRNA表达进行检测。结果①Fos—IR阳性细胞的分布：正常对照组大鼠大脑皮层偶见零星淡染的圆形棕褐色细胞核，无定位分布特征；HS组Fos—IR阳性细胞分布具有明显群集分布特征，丘脑内呈典型核特异性分布，主要位于丘脑中线一带，即自侧脑室的背侧部沿中线延伸至第三脑室的背侧部，下丘脑室旁核（PVN）小细胞部明显表达，而下丘脑外侧区（LH）、下丘脑腹内侧核（VMH）、弓状核（Arc）和下丘脑视上核（SON）则无表达，大脑皮层见于杏仁周皮质（PIR）、内嗅皮质（Ent）、嗅周皮质（PRH）、顶皮质（PAR）、压部后皮质（RSG、RSA）、额皮质（Fr）等区域，PIR和Ent主要见于Ⅱ层。海马内偶见阳性细胞，杏仁核阴性。FC组海马明显表达，在丘脑和下丘脑则呈弥漫性分布，缺乏明显核团分布特征，PIR和Ent全层分布，Ⅱ、Ⅳ～Ⅵ层明显表达。②FC组海马区域可见明显ZnT3 mRNA表达，而HS组和对照组无明显表达。结论①Fos—IR阳性神经元图布（mapping）：HS组特征性分布于PVN小细胞部和丘脑中线一带核团，在大脑皮层以PIR和EntII层分布为主，海马表达极弱；FC组大鼠则以海马，杏仁核，大脑皮层Ⅱ、Ⅳ-Ⅵ层为主，丘脑和下丘脑呈均匀泛化分布，丘脑中线一带缺乏核团分布特征。这种神经解剖学的差异可能是造成HS和FC大鼠行为学迥异的基础。②FC组海马ZnT3 mRNA明显表达提示FC组海马区域存在异常增高的锌离子转运。

ZnT3经由ERK通路影响老年小鼠认知能力

目的探讨ZnT3表达变化对老龄小鼠认知能力的影响。方法选取2月龄和20月龄C57BL/6J小鼠,各12只。通过Morris水迷宫实验检测小鼠的学习记忆能力;应用免疫组织化学染色和体视学方法检测青年小鼠和老年小鼠脑组织中ZnT3表达差异;应用免疫印迹技术检测青年小鼠和老年小鼠海马中ZnT3和P-ERK、ERK蛋白含量变化。结果Morris水迷宫实验表明老年小鼠学习记忆能力下降明显。免疫组织化学染色结果显示ZnT3表达于小鼠海马神经元胞质,体视学测量结果表明老年小鼠海马CA1区、CA3区和齿状回区域ZnT3的表达均弱于青年小鼠。免疫印迹结果表明老年小鼠海马组织中Zn T3蛋白表达明显少于青年小鼠,P-ERK/ERK比值低于青年小鼠。结论ZnT3影响老年小鼠认知能力,其机制可能与ERK蛋白激酶通路有关。

运动训练对新生期大鼠反复惊厥所致学习能力损害及海马ZnT3表达的影响

目的探讨踏转轮运动训练对新生期大鼠反复惊厥所致学习能力损害及海马ZnT3表达的影响。方法将出生后6d的SD大鼠随机分为惊厥组和对照组。惊厥组每日吸入三氟乙醚诱导惊厥发作1次，每次持续30min，连续6d；对照组给予同样操作，但期间不吸入三氟乙醚。2组大鼠分别于出生后29～35d及61—67d进行Y迷宫学习训练，检测其学习、记忆功能。期间2组大鼠于出生后51～56d进行踏转轮训练，每天1次，每次30min，连续6d。最后于出生后78d时将各组大鼠处死行脑组织切片，检测ZnT3在海马中的表达。结果①学习能力测试：惊厥组大鼠第1次Y-迷宫辨别学习达标的电刺激次数为（60．0±14．1）次，与对照组[（37．5±17．2）次]比较，差异有统计学意义（P〈0．05）；第2次惊厥组Y-迷宫辨别学习达标的电刺激次数为（27．5±14．1）次，与对照组[（21．0±11．0）次]比较，差异无统计学意义（P〉0．05）；2组大鼠第2次学习能力成绩均较第1次显著改善，差异均有统计学意义（P〈0．05）。②记忆能力测试：惊厥组与对照组2次测试结果间差异均无统计学意义（P〉0．05）。③ZnT3原位杂交检测：2组大鼠ZnT3 mRNA在海马各区均有明显表达，差异无统计学意义（P〉0．05）；但惊厥组大鼠齿状回znT3 mRNA灰度值与CA3区比值较对照组显著减小，差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论运动训练能显著改善新生期反复长程惊厥对大鼠学习能力的榻喜．并能有效调节海马氏ZnT3的异常表扶水平．

锌离子和锌转运蛋白3在小鼠海马苔藓纤维的共存

目的研究锌离子与锌转运蛋白3(ZNT3)抗体进行双标的可行性。方法应用TSQ荧光技术以及普通荧光技术在小鼠海马苔藓纤维双重标记锌离子和ZNT3蛋白。结果在小鼠海马苔藓纤维,锌离子和ZNT3蛋白被各自标记,荧光反应阳性。而合并后的图片表明,两者实现完全共区域化。结论TSQ作为一种锌离子特殊荧光染色是可以和普通荧光染色的抗体进行双重标记的。

硫酸锌对脊髓损伤小鼠的神经修复作用

目的:探讨硫酸锌(ZnSO_(4))促进脊髓损伤(SCI)小鼠的神经修复作用及分子机制。方法:成年雌性C57BL/6小鼠48只按照随机数表法分为假手术组(sham)、脊髓损伤组(SCI)和硫酸锌治疗组(ZnSO_(4)),采用Allen’s打击法制备小鼠SCI模型,治疗组小鼠进行腹腔注射硫酸锌。运用BMS评分评定小鼠的运动功能,术后5 d采用Western Blot检测小鼠脊髓损伤区锌转运蛋白体3(ZnT3)和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)蛋白表达,免疫组织化学染色检测小鼠脊髓损伤区域ZnT3和mTOR蛋白表达与定位。结果:与sham组比较,SCI组及ZnSO_(4)组小鼠术后各时间点BMS评分降低,术后第7 d起,ZnSO_(4)组BMS评分高于SCI组(P<0.05);硫酸锌治疗5 d后,ZnSO_(4)组小鼠ZnT3表达高于SCI组,并且mTOR表达低于SCI组,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论:硫酸锌可以通过调控小鼠脊髓损伤后ZnT3和mTOR的表达水平促进脊髓损伤的修复。

铅暴露对雄性仔鼠海马锌离子转运体3表达的影响

目的探讨铅暴露对雄性仔鼠海马锌离子转运体3(zinc transporter 3,ZNT3)表达的影响。方法将12只健康SPF级雌性SD大鼠随机分为3组,分别为对照(去离子水)组和低(0.5 g/L乙酸铅)、高(2.0 g/L乙酸铅)剂量铅染毒组,每组4只。采取自由饮水方式进行染毒,自妊娠前10 d至仔鼠断乳(出生后21 d)。采用等离子体发射光谱(ICP-AES)法检测雄性仔鼠全血及海马组织中铅、锌的含量;采用RT-PCR法检测其海马组织中ZNT3 m RNA的表达水平;采用Western blot法检测其海马组织中ZNT3蛋白的表达。结果与对照组比较,各剂量铅染毒组雄性仔鼠全血与海马组织中的铅含量均较高,锌含量均较低,差异有统计学意义(P<0.05);且随着铅染毒剂量的升高,雄性仔鼠全血和海马组织中铅的含量呈上升趋势,锌含量呈下降趋势。与对照组比较,各剂量铅染毒组雄性仔鼠海马组织中ZNT3 m RNA及蛋白的表达水平均较高,差异有统计学意义(P<0.05);但高、低剂量铅染毒组雄性仔鼠海马组织中ZNT3 m RNA及蛋白的表达水平间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论铅暴露上调了大鼠海马组织中ZNT3的表达水平,这可能与铅暴露使海马锌含量的降低有关。

热惊厥幼龄大鼠脑内Fos和热休克蛋白-70及锌离子转运体3mRNA表达的研究

目的探讨热应激（Heatstress，HS）和热惊厥（Febrileconvulsions，FC）对脑内FOS蛋白、热休克蛋白70（Heatstressprotein-70，HSP-70）和锌离子转运体3（Zinctransporter3，ZnT3）表达的影响。方法清洁级21日龄雄性SD大鼠，体重（52—62）g，由浙江大学医学实验动物中心提供。36只大鼠随机分为正常对照组（8只）和热应激组（28只）。28只热应激处理大鼠中15只达到5级（设为热性惊厥组，Febrileconvulsiongroup，FC），10只未出现惊厥（设为单纯热应激组．Heatst艄group，HS），3只达到2级惊厥，弃用。采用热水浴诱导21日龄大鼠FC模型，应用免疫组织化学技术对Hs和FC大鼠Fos、HSP-70免疫反应性在不同脑区的表达进行分析，原位杂交检测ZnT3表达。计量资料以均数±标准差（x^-±s）表示，首先作正态性W检验和方差齐性检验，符合正态性分布和总体方差相等时，采用方差分析。P〈0．05认为差异具有统计学意义。结果FC组大鼠大脑皮层各区和海马各区Fos阳性细胞数明显高于HS组大鼠（P〈0．01）。HS组和对照组未见HSP-70-IR阳性细胞，而FC组则于大脑皮层、海马、杏仁核、丘脑及下丘脑见大量HSP-70-IR阳性细胞，呈弥漫性分布。FC组海马区域可见明显ZnT3mRNA表达，而HS组和对照组无明显表达。结论FC组海马及大脑皮层各区FOS高表达，表明FC组大鼠脑神经元呈过度兴奋状态，为神经元的早期轻微损伤提供了依据。FC组出现HSP-70迅速表达，而HS组表达阴性，提示FC可能导致神经细胞在很早的时间内发生损伤变性。FC组海马ZnT3mRNA明显表达提示FC组海马区域存在异常增高的锌离子转运。