四氢嘧啶对HaCaT细胞活力及AQP3、Claudin-1、ZO-1表达的影响

目的研究四氢嘧啶(Ectoine)对人角质形成细胞(HaCaT)的细胞活力、细胞凋亡率和细胞活性氧(ROS)的影响,并分析水通道蛋白3(AQP3)、紧密连接蛋白-1(Claudin-1)、闭锁连接蛋白(ZO-1)的表达水平。方法设置Ectoine浓度实验组和空白对照组,培养HaCaT细胞(24 h),采用CCK8法检测HaCaT细胞的细胞活力,甄选最佳的Ectoine作用浓度。用Western Blot法检测HaCaT细胞的AQP3、Claudin-1、ZO-1表达水平;用流式细胞仪检测HaCaT细胞的凋亡率及胞内ROS水平。结果CCK8法检测结果显示,0.10%Ectoine组、0.20%Ectoine组、0.30%Ectoine组的HaCaT细胞活力均高于120%,其中0.20%Ectoine组最高(146.92%±7.67%)。Ectoine浓度实验组相对于空白对照组,HaCaT细胞的AQP3、Claudin-1、ZO-1表达水平明显升高(P<0.05),且细胞凋亡率和胞内ROS水平均明显降低(P<0.05)。结论Ectoine可提高HaCaT细胞的细胞活力,降低凋亡率和胞内ROS水平,上调AQP3、Claudin-1、ZO-1表达水平。Ectoine可能与相关保湿蛋白的表达相关,对HaCaT细胞具有一定的保护作用。

壳聚糖对仔猪肠黏膜通透性及Occludin和ZO-1表达的影响

旨在探讨日粮中添加壳聚糖对早期断奶仔猪肠道屏障功能的影响。将30头21d断奶仔猪((6.62±0.59)kg)随机分为3组,预试期采用大肠杆菌攻毒(109细胞.头-1),对照组饲喂基础日粮,试验组分别在基础日粮中添加50mg.kg-1金霉素和300mg.kg-1壳聚糖,饲养期21d。结果表明,与对照组相比,壳聚糖能降低血浆中D-乳酸(D-Lactate)含量(P<0.05)、二胺氧化酶(DAO)活性(P<0.05)和血清内皮素-1(ET-1)水平(P<0.05),但对血清一氧化氮(NO)含量无明显影响(P>0.05);免疫组化结果显示,壳聚糖组空肠黏膜Occludin(P<0.01)和ZO-1(P<0.05)蛋白表达提高;荧光定量PCR结果表明,壳聚糖组空肠黏膜Occludin(P<0.01)和ZO-1(P<0.05)mRNA表达丰度升高。结果说明,日粮中添加300mg.kg-1的壳聚糖能降低早期断奶仔猪小肠黏膜屏障功能的损伤作用。

紧密连接蛋白ZO-1、occludin和actin参与缺氧缺血诱导的血脑屏障通透性增加

目的探讨血脑屏障紧密连接(blood-brain barrier-tight junction,BBB-TJ)蛋白ZO-1、occludin和ac-tin在缺氧缺血诱导的血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)通透性增加中的变化及其机制。方法利用人脐静脉内皮细胞系ECV304与星形胶质细胞(astrocytes,AS)共培养建立体外BBB模型,模型随机分为正常对照组和缺氧缺血两组。透射电镜观察两组间BBB-TJ的变化,直接免疫荧光观察细胞骨架蛋白actin分布的改变。γ计数仪检测大分子物质125I-牛血清白蛋白(125I-BSA)通透曲线观察BBB通透性的改变,Western blot检测细胞骨架蛋白actin,胞浆附着蛋白ZO-1,跨膜蛋白occludin的表达量的改变。结果透射电镜观察培养第10天的体外BBB模型,可见内皮细胞连接紧密,细胞间形成光滑、连续、较高密度的紧密连接。缺氧缺血后5 h,内皮细胞间连接开放,形成裂隙。直接免疫荧光下检测可见周边Actin丝带模糊,部分断裂,形成细胞间裂隙。缺氧缺血组125I-BSA的通透量增加,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。同时ZO-1的表达量显著减少,而occludin和actin的表达量无明显改变。结论缺氧缺血诱导occludin的位置分布改变和ZO-1的表达量减少进而促使actin蛋白发生重排,是导致缺氧缺血后BBB通透性增加的可能机制之一。

乌司他丁对急性重症胰腺炎患者血清ZO-1、occludin、IL-18水平影响的多中心研究

目的通过多中心研究,探究乌司他丁对急性重症胰腺炎患者血清ZO-1、occludin、IL-18水平的影响。方法选取2012年4月~2014年6月河北省承德医学院附属医院、隆化县医院以及平泉县医院内科收治的急性重症胰腺炎患者150例,采用随机数字表法分为2组。对照组76例,予西医常规治疗;实验组74例,在常规药物治疗的基础上,加用乌司他丁治疗,比较2组患者治疗前后血清ZO-1、occludin、IL-18水平的变化以及患者疼痛、发热等临床症状。结果治疗后,2组患者血清ZO-1蛋白均有所增加,且实验组(+++)显著高于对照组(+),差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,2组患者血清occludin含量均有所升高,且实验组(128.36±18.21)ng/L显著高于对照组(115.21±12.51)ng/L,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,2组患者血清IL-18水平均有所下降,实验组为(36.79±10.31)ng/L,显著优于对照组的(42.69±12.35)ng/L,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,2组患者腹痛、发热症状均有所改善,实验组有效率分别为90%、88%,显著高于对照组的83%、80%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论乌司他丁可有效改善急性重症胰腺炎患者血清ZO-1、occludin、IL-18水平,改善患者腹痛、发热症状,是治疗急性重症胰腺炎的有效药物。

骨髓增生异常综合征患者ZO-1基因甲基化状态检测的临床意义

本研究探讨紧密连接蛋白(zonula occludens-1,ZO-1)基因异常甲基化在骨髓增生异常综合征(MDS)诊断中基因标志作用的临床意义。采用甲基化特异性-PCR(MS-PCR)方法分析30例健康人骨髓标本及85例MDS患者骨髓标本的ZO-1基因启动子区甲基化状况。结果显示:ZO-1基因在30例健康人标本中均呈完全非甲基化状态;MDS患者骨髓中ZO-1基因甲基化阳性率(56.5%)明显高于健康人,二者差异有统计学意义(p<0.05)。MDS各亚型病人骨髓ZO-1基因启动子区甲基化阳性率均高于健康人,其差异也具有统计学意义(p<0.05)。MDS亚型RA、RAS、RAEB、RCMD间ZO-1基因甲基化阳性率差别无统计学意义(p>0.05)。结论:与健康人相比,MDS病人骨髓中ZO-1基因启动子区呈高甲基化状态并具有特异性。MDS是一种常见的克隆增殖性血液系统疾病,在临床诊断中有时很难与其他疾病相鉴别,而ZO-1基因甲基化模式的改变与MDS的发生密切相关,因此ZO-1基因作为有价值的诊断标志具有重要的临床意义,它可能是一个潜在的血液系统恶性疾病的相关基因。

伊文思蓝、ZO-1评估血脑屏障损伤的应用研究

目的 :寻找新的简捷、快速、精确、灵敏的评估血脑屏障 (BBB)损伤的指标和方法。方法 :应用脑缺血再灌注损伤模型 ,造成大鼠BBB的损伤 ,采用形态学和化学定量两种新方法观察BBB对伊文思蓝的通透性 ,应用免疫组织化学法检测脑组织中ZO - 1蛋白的表达水平的变化 ,以反映BBB的损伤程度。结果 :①脑局限性缺血再灌注损伤后脑内ZO - 1蛋白水平迅速降低 ,至再灌注后 2 4h达最低水平 ,至再灌注 7d时恢复到正常水平 ;②两种方法检测的伊文思蓝最大通透率均出现在再灌注损伤第 2 4h ,其变化趋势与脑组织中ZO - 1蛋白水平的变化趋势相一致。结论 :BBB对伊文思蓝的通透性和脑组织中ZO - 1蛋白水平的变化均可用于反映BBB损伤的程度 。

黄芪甲苷对大鼠脑缺血再灌注后血-脑屏障的保护作用及ZO-1蛋白表达的影响

目的探讨黄芪甲苷对大鼠脑缺血再灌注后血-脑屏障的保护作用及其相关蛋白ZO-1表达的影响。方法SD大鼠72只,随机分为假手术组、模型组和黄芪甲苷治疗A组(10mg/kg)、黄芪甲苷治疗B组(20mg/kg)。分别采用伊文思蓝及干湿法测定大鼠血-脑屏障的通透性,使用免疫组化与医学图像分析相结合的方法检测血-脑屏障上ZO-1蛋白的表达。结果与模型组相比,两黄芪甲苷治疗组大鼠脑组织中伊文思蓝含量及含水量显著降低,ZO-1蛋白表达增加(均P<0.05);两黄芪甲苷治疗组间相比,差异无统计学意义。结论黄芪甲苷可通过抑制脑缺血再灌注后血-脑屏障通透性的增高而发挥脑保护作用,其保护血-脑屏障的机制可能与上调ZO-1蛋白的表达有关。

调胃承气汤灌胃与灌肠对肠源性脓毒症大鼠肠上皮细胞occludin和ZO-1蛋白表达的影响

【目的】观察和比较调胃承气汤灌胃与灌肠对肠源性脓毒症(GOS)大鼠肠黏膜屏障的影响。【方法】将48只大鼠随机分为假手术组,模型组,中药灌胃高、低剂量组(分别给予调胃承气汤9.450、4.725 g/kg灌胃),中药灌肠高、低剂量组(分别给予调胃承气汤9.450、4.725 g/kg灌肠),每组8只。采用盲肠结扎穿刺法(CLP)复制GOS大鼠模型。各组在造模后2、10、24 h分别对应给药。采用酶联免疫吸附分析(ELISA)检测血清降钙素原(PCT)、D-乳酸(D-LA)水平,逆转录实时定量PCR(RT-qPCR)法检测小肠组织occludin、闭锁小带蛋白(ZO-1)基因及肝脏组织肿瘤坏死因子α(TNF-α)、干扰素γ(INF-γ)基因表达水平,免疫组化法检测小肠组织occludin、ZO-1蛋白的表达,苏木素—伊红(HE)染色观察小肠病理组织结构的变化。【结果】与假手术组比较,模型组大鼠小肠组织结构有明显损伤,血清PCT和D-LA水平显著升高(P <0.01),小肠组织occludin、ZO-1基因相对表达水平明显下调(P <0.01),肝脏组织TNF-α、INF-γ基因相对表达水平显著上调(P <0.01),小肠组织occludin、ZO-1蛋白免疫组化阳性表达明显减少(P <0.05);与模型组比较,中药各治疗组能明显改善小肠的损伤程度,显著降低血清PCT和D-LA水平(P <0.05或P <0.01),上调小肠组织occludin和ZO-1基因相对表达水平,下调肝脏组织TNF-α和INF-γ基因相对表达水平(P <0.05或P <0.01),并且能提高小肠组织occludin和ZO-1蛋白免疫组化阳性表达(P <0.05或P <0.01);与灌胃组比较,中药灌肠组的治疗效果更为明显(P <0.05或P <0.01)。【结论】调胃承气汤可上调GOS模型大鼠肠上皮细胞紧密连接蛋白occludin、ZO-1及下调体内炎性因子TNF-α、INF-γ的表达,从而修复肠黏膜屏障,治疗GOS,且灌肠疗法要优于灌胃疗法。

猴头菇多糖对氧化应激的IPEC-J2细胞抗氧化能力及紧密连接蛋白ZO-1的影响

旨在探究在H_2O_2诱导的氧化应激损伤状态下,猴头菇多糖(HEPs)对IPEC-J2细胞的保护作用。将IPEC-J2细胞分为5组:空白组、模型组、HEPs低剂量组、HEPs中剂量组、HEPs高剂量组。采用MTT法分别选取试验用的H_2O_2和HEPs的最佳剂量;利用DCFH-DA染色观察并测定细胞内活性氧簇(ROS)的含量;通过比色法检测培养细胞上清液中丙二醛(MDA)的含量,细胞中超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)的活力以及乳酸脱氢酶(LDH)的释放率;应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测紧密连接蛋白ZO-1基因的转录水平。结果显示,(1)构建IPEC-J2细胞氧化应激模型的H_2O_2浓度为0.4mmol·L-1。(2)H_2O_2能够极显著地增加细胞内的ROS含量,诱导细胞凋亡,同时极显著地降低了SOD和CAT的活力,极显著地升高MDA含量与LDH释放率。但是,与模型组相比,经过HEPs预处理后,细胞内ROS的含量极显著地降低(P<0.01);同时极显著地提高了SOD和CAT的活力(P<0.01),极显著地降低了MDA含量与LDH释放率(P<0.01)。(3)实时荧光定量PCR结果显示,H_2O_2能够极显著地降低ZO-1基因的转录量(P<0.01),与模型组比较,HEPs能够极显著的提高ZO-1基因的转录量(P<0.01);Western blot结果显示ZO-1蛋白的表达量与ZO-1基因类似。可见,猴头菇多糖对H_2O_2诱导氧化损伤状态下的IPEC-J2细胞具有保护作用。

三七总皂苷对β-淀粉样蛋白42损伤脑微血管内皮细胞ZO-1表达的影响

目的观察三七总皂苷对β-淀粉样蛋白(Aβ)42损伤脑微血管内皮细胞ZO-1表达的影响,为阿尔茨海默病的对因治疗提供新的依据。方法细胞分为正常对照组、模型组和三七总皂苷低、中、高剂量组,37℃、5%CO2培养箱中培养24 h后,采用MTT比色法检测细胞活力,Western blot检测ZO-1蛋白表达。结果 Aβ42刺激后微血管内皮细胞活力降低(P<0.01),ZO-1蛋白表达被抑制(P<0.01);与模型组比较,三七总皂苷低、中、高剂量组微血管内皮细胞活力增加,其中三七总皂苷中、高剂量组增加较为明显,差异有统计学意义(P<0.05),ZO-1蛋白表达增加。结论三七总皂苷通过抑制Aβ42所致微血管内皮细胞活力降低,恢复血脑屏障的部分屏障功能。

糖肾煎对早期2型糖尿病肾病大鼠足细胞α-actinin-4、ZO-1表达的影响

目的:探讨α-辅肌动蛋白-4(α-actinin-4)、紧密连接蛋白(ZO-1)在早期糖尿病肾病(DN)大鼠肾脏表达与DN的关系,中药糖肾煎对保护肾脏的作用机制。方法:采用单肾切除+高脂饲料+小剂量链脲佐菌素(STZ)腹腔注射,结合行为干预建立早期(气阴两虚型)2型糖尿病肾病病证结合大鼠模型,按随机数字表法分为假手术组(N组)、模型组(M组)、糖肾煎组(T组)、贝那普利组(B组)。干预16周,观察各组大鼠一般状况、空腹血糖(FBG)、负荷后血糖(P2h BG)、空腹胰岛素(FINS)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、24 h尿白蛋白(24 h-UAlb)、尿β2微球蛋白(U-β2MG)、血尿素氮(BUN)、血肌酐(Cr))、足细胞密度及病理改变,应用免疫组化及荧光定量PCR方法观察α-actinin-4、ZO-1及mRNA表达。结果:与N组比较,M组一般状况较差,FBG、P2h BG、FINS、HOMA-IR、24 h-UAlb、U-β2MG水平指标均有明显上升,α-actinin-4、ZO-1的累积光密度值(IOD)下降,PCR表达下降,足细胞密度较少,足突增宽、融合;与M组比较,T、Z组各指标均有改善;与B组比较,T组HOMA-IR、α-actinin-4、ZO-1的IOD有所改善,余指标比较差异无统计学意义。结论:中药糖肾煎能上调足细胞α-actinin-4、ZO-1的表达从而保护足细胞、延缓DN的进展。

ZO-1基因甲基化在MDS进展中的意义

目的:探讨ZO-1基因甲基化在骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome,MDS)向急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)转化中的临床意义,为MDS患者的预后评估进一步提供理论依据。方法:采用甲基化特异性PCR(methylation specific PCR,MS-PCR)方法检测ZO-1基因在正常对照者骨髓标本(normal control,NC)、MDS、AML患者骨髓标本中的甲基化状态。运用亚硫酸氢盐侧序PCR(bisulfite sequencing PCR,BSP)方法检测1例MDS系列标本ZO-1基因在其MDS-RA、MDS-RAEB、AML阶段的甲基化状态。结果:ZO-1基因在NC、MDS、AML患者标本中的甲基化阳性率存在明显差异(P=0.000),在NC组未发现甲基化阳性,在AM L组阳性率最高(65.0%)。MDS/AML患者ZO-1基因甲基化阳性组髓系原始细胞比例更高(P=0.000)。1例MDS患者系列标本显示,随着疾病进展,在MDS-RA、MDS-RAEB、AML阶段中,甲基化位点阳性频率存在明显差异(P=0.000),在AML阶段阳性频率最高(64.65%)。结论:ZO-1基因启动子区高甲基化发生于MDS/AML患者中,随着恶性克隆增生,ZO-1基因甲基化阳性率及甲基化位点阳性频率越来越高,在一定程度上预示着MDS疾病进展,进一步提示ZO-1基因甲基化水平可成为监测MDS患者急性白血病转化的新指标。

Zo-1与id4基因异常甲基化在多发性骨髓瘤中的临床意义

多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)是浆细胞恶性增殖性疾病,常规化疗不能治愈,为探讨zo-1、id4基因异常甲基化在MM诊断、预后、微小残留病检测及治疗中基因标志作用的临床意义,采用甲基化特异性聚合酶链反应(methylation specific PCR,MS-PCR)方法检测MM细胞系U266、H929及IM9(B淋巴母细胞,MM患者骨髓来源)中zo-1、id4基因的甲基化状况;应用MS-PCR方法分析20例MM患者及6例健康供者骨髓标本zo-1、id4基因启动子区甲基化状况。结果显示:zo-1、id4基因在MM细胞系中均为甲基化阳性(完全甲基化或部分甲基化);zo-1、id4基因在5例健康人标本中均呈完全非甲基化状态;MM患者骨髓中zo-1、id4基因甲基化阳性率分别是50%和85%,二者阳性覆盖率高达95%,二者均阳性的标本阳性率为40%,明显高于健康人(0%),差异均有统计学意义(p<0.05);MM患者不同重链及不同轻链间甲基化阳性率没有统计学差异;MM患者是否具有B组症状并不影响患者的甲基化阳性率,这可能与标本数量有关。结论:MM患者中zo-1、id4基因甲基化状态发生改变并具有特异性,可能是MM新的基因标记。

非小细胞肺癌组织中ZO-1的表达及其临床意义

背景与目的已有的研究表明紧密连接蛋白-1(zonula occluden-1,ZO-1)表达和肿瘤细胞的生长和转移存在密切联系。本研究旨在探讨非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织中ZO-1表达的临床意义。方法应用实时荧光定量PCR、Western blot和免疫组化检测101例NSCLC癌组织及癌旁组织中ZO-1mRNA和蛋白表达,以61例肺部良性病变患者作为对照。结果 ZO-1mRNA在癌组织和肺良性病变组织间差异具有统计学意义(P<0.01)。Western blot显示:ZO-1蛋白在癌组织、癌旁组织、肺良性病变组织的相对表达量之间均存在明显差异(P<0.01或P<0.05)。免疫组化显示:ZO-1平均光密度在癌组织、癌旁组织和肺良性病变组织中分别为69.55±17.13、246.39±83.15、330.93±72.44,组间差异均具有统计学意义(P<0.01)。伴有淋巴结转移与不伴淋巴结转移肺癌组织ZO-1mRNA表达水平比较有显著性差异(t=-5.07,P<0.01),肺癌患者术后2年内生存组和2年内死亡组间ZO-1mRNA表达水平比较差异具有统计学意义(t=5.61,P<0.01)。结论 ZO-1mRNA和蛋白在NSCLC癌组织中表达降低,并与淋巴结转移的术后生存有密切关系。

食管鳞状细胞癌中紧密连接蛋白occludin、ZO-1的表达及其临床意义

目的探讨紧密连接蛋白occludin及ZO-1在食管鳞状细胞癌及手术切缘正常食管黏膜组织中的表达及其临床意义。方法采用组织芯片和免疫组化法检测49例食管鳞状细胞癌患者的癌组织及手术切缘正常食管黏膜组织(距肿瘤组织>5 cm)中occludin和ZO-1的表达,分析食管鳞状细胞癌癌组织中occludin、ZO-1表达与肿瘤的增殖、侵袭和转移之间的关系。结果食管鳞状细胞癌组织中occludin及ZO-1的阳性表达明显低于手术切缘正常食管粘膜组织(P<0.01),且癌组织中occludin、ZO-1的表达与其分化程度及淋巴结转移有关(P<0.05)。结论食管鳞状细胞癌的occludin和ZO-1的表达下调或缺失与肿瘤细胞的增殖、侵袭和转移有关,在食管癌的进展中起重要作用。

脓毒症大鼠血脑屏障通透性及脑组织 ZO -1表达的实验研究

目的：观察脓毒症大鼠血脑屏障通透性及脑组织胞质附着蛋白（ ZO-1）的变化。方法50只健康SD大鼠随机分为假手术组（ n＝10）及脓毒症模型组（ n＝40），脓毒症模型组又分为脓毒症制模后6、12、24、48 h 4个亚组，每组10只，采用盲肠结扎穿孔（ CLP）法制作脓毒症模型。于相应时间点处死取材，伊文思蓝（ EB）外渗分光光度分析法检测血脑屏障通透性；RT-PCR法测定脑组织ZO-1 mRNA表达、Western-blot免疫印迹方法检测ZO-1表达。结果脓毒症组各时间点大鼠脑内EB含量均明显高于假手术组（ P＜0．01）；脓毒症各时间点组大鼠脑内ZO-1 mRNA、ZO-1的表达均明显下降，与假手术组比较差异有统计学意义（P＜0．01），且随着脓毒症时间延长下降越明显。结论脓毒症大鼠脑内ZO-1 mRNA、ZO-1的表达均显著下降，可能是脓毒症血脑屏障受损的机制之一。

感染后肠易激综合征小鼠IL-17、occludin和ZO-1的动态改变

【目的】观察感染后肠易激综合征小鼠肠组织中IL-17、occludin和ZO-1的动态改变。【方法】40只C57BL/6小鼠随机分为对照组、感染组(感染后2、4、6、8周组)。感染组小鼠用0.2 mL含400~500条旋毛虫的生理盐水灌胃。于感染后2、4、6、8周,记录小鼠体质量,检测腹壁撤退反射(AWR),连续8 h收集小鼠粪便,计算粪便含水百分数。HE染色观察肠道病理改变,免疫组织化学法及Western blotting检测回盲部和结肠中IL-17、occludin和ZO-1的表达。【结果】感染后第2周小鼠肠道出现急性炎症反应,体质量显著降低(P=0.000);至第8周肠道炎症和小鼠体质量基本恢复至正常。结直肠扩张容量为0.35和0.5 mL时,感染组AWR评分均高于对照组(P<0.01)。感染组粪便含水百分数均高于对照组(P<0.05)。免疫组化及Western blotting结果显示:与对照组相比,感染后2周组IL-17降低(P<0.05),感染后8周组IL-17增高(P<0.05);感染组occludin和ZO-1均低于对照组(P<0.05)。【结论】IL-17的动态改变及紧密连接蛋白occludin和ZO-1的减少可能是导致PI-IBS小鼠内脏高敏感性和粪便含水百分数增高的原因之一,参与了PI-IBS的发生。

ZO-1基因甲基化状态在非霍奇金淋巴瘤骨髓检测中的临床意义

目的探讨紧密连接蛋白-1(ZO-1)基因启动子区甲基化状态在非霍奇金淋巴瘤(NHL)检测中的临床意义。方法采用甲基化特异性PCR方法(MS-PCR)分析10例非血液系统肿瘤者骨髓及45例NHL患者骨髓标本的ZO-1基因启动子区甲基化状况。结果ZO-1基因在10例良性血液病及正常人中呈完全非甲基化状态,在39例初治、复发、未完全缓解的淋巴瘤患者中甲基化阳性率53.85%(P<0.05)。在39例初治或复发或未达到完全缓解的NHL患者中28例Ⅲ、Ⅳ期的NHL患者ZO-1基因甲基化阳性率64.29%,11例Ⅰ、Ⅱ期的NHL患者ZO-1基因甲基化阳性率27.27%(P<0.05)。初治、复发患者28例中甲基化阳性16例(57.14%),经治疗达到部分缓解的11例患者中甲基化阳性5例(45.45%),临床缓解的6例患者均为完全非甲基化。结论ZO-1基因启动子区高甲基化与疾病分期及缓解明显相关,它可以作为判断NHL进展和评价预后的辅助指标,并以此指导临床治疗。

诱导型多能干细胞通过修复ZO-1蛋白改善脓毒症小鼠肠黏膜通透性和细菌移位

【目的】探讨诱导型多能干细胞(i PS-MSC)对脓毒症小鼠肠黏膜通透性的改善作用和对肠道菌群移位的影响。【方法】采用尾静脉注射脂多糖(LPS,10 mg/Kg)建立小鼠脓毒症模型。常规培养及传代i PS-MSC。在脓毒症建立2 h和6 h经小鼠尾静脉注射进行治疗干预(1×106/只)。利用基因重组技术制备新质粒p ET28b(+)-EGFP,转染大肠杆菌,并在脓毒症后连续2 d予小鼠进行灌胃处理。在脓毒症发生72 h后,取各组小鼠腹水及肠系膜淋巴结匀浆于Kan抗性的LB培养基培养鉴定,计算和比较菌群负荷。通过透射电镜观察小鼠小肠黏膜上皮细胞超微结构的变化。Western blotting法检测各组小鼠肠黏膜ZO-1蛋白的表达。荧光显微镜下观察带有GFP绿色荧光蛋白的ips-MSC在损伤肠黏膜的移行和归巢情况。【结果】成功构建表达绿色荧光的重组大肠杆菌p ET-28b(+)-EGFP作为实验用示踪菌。灌胃处理后,ips-MSC治疗的小鼠腹水和肠系膜淋巴结的示踪菌的菌负荷较脓毒症组明显降低,其中ips-MSC 2 h治疗组较6 h治疗组降低的更明显。透射电镜观察发现脓毒症小鼠肠系膜上皮细胞间紧密连接结构破坏,细胞间缝隙增宽,而经i PS-MSC治疗的小鼠细胞间紧密连接结构破坏明显改善,在2 h治疗组表现更为明显,伴随紧密连接蛋白ZO-1的表达水平升高。【结论】静脉注射i PS-MSC能够向脓毒症小鼠损伤的肠黏膜移行,通过提高连接蛋白ZO-1的表达,修复紧密连接,改善脓毒症小鼠肠黏膜的通透性,减少脓毒症时肠道菌群的移位。

铅暴露对体外血脑脊液屏障功能及ZO-1和闭合蛋白表达的影响

目的通过建立体外血脑脊液屏障(BCB)模型,研究铅诱导BCB损伤的可能机制。方法使用Z310细胞建立BCB体外细胞模型,分别加入Pb(AC)22.5,5.0和10.0 mmol·L-1,暴露24,48和72 h。采用跨内皮电阻(TEER)检测法及葡聚糖法检测BCB模型通透性;Western蛋白印迹法和免疫荧光法检测BCB中紧密连接蛋白ZO-1和闭合蛋白表达及分布。结果与细胞对照组相比,Pb(AC)22.5,5.0和10.0 mmol·L-1暴露48 h对Z310细胞存活率和密度均无明显影响。暴露后第12天,与细胞对照组比较,Pb(AC)25.0和10.0 mmol·L-1组TEER值明显降低(P<0.05),葡聚糖通过率显著增高(P<0.05)。Western蛋白印迹法和免疫荧光法检测结果显示,与细胞对照组相比,Pb(AC)2各浓度暴露48 h后,ZO-1和闭合蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。结论铅暴露能够破坏BCB模型的通透性,其机制可能与抑制紧密连接蛋白的表达有关。