基于网络药理学和实验验证探究左归丸抑制头颈部鳞状细胞癌的作用机制

目的基于网络药理学和体外实验探究左归丸作用于头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)的靶点并分析潜在机制。方法自2022年11月至2023年3月分别通过TCMSP、BATMAN-TCM、GeneCards、CTD、OMIM数据库筛选左归丸的活性成分并筛选左归丸作用于HNSCC的潜在靶点;使用String数据库构建潜在靶点互作网络,并进行多步拓扑分析筛选出核心靶点;使用DAVID和Metascape数据库对潜在靶点进行富集分析;最后运用Auto Dock Vina进行核心成分与靶点的分子对接并通过细胞计数试剂盒(CCK-8)、蛋白质印迹法验证左归丸对HNSCC的治疗作用及机制。结果左归丸的8种活性成分具有487个药物靶点,其中440个为HNSCC相关基因;两步拓扑结构分析得到表皮生长因子(EGFR)、细胞周期蛋白D1(CCND1)、热休克蛋白90α家族A类成员1(HSP90AA1)、核因子kappa B激酶亚基β抑制剂(IKBKB)和螺旋环螺旋结构域扩散激酶(CHUK)5个核心靶点;富集结果提示左归丸通过影响多种生物学功能和信号通路在HNSCC中发挥作用;分子对接结果显示,左归丸与核心靶点之间结合稳定。体外实验显示,与对照组相比,左归丸处理组显著抑制了WSU-HN6和CAL-27细胞增殖能力(P<0.001)并且可以降低CCND1,IKBKB和CHUK(P<0.05)的蛋白表达水平。结论左归丸能够靶向多条促癌信号通路从而对HNSCC起到抑制作用。

补肾方剂左归丸（汤）对小鼠早期胚胎发育的影响

本研究通过体外用药、体外用给药小鼠血清及在体用药三种方式，以酒精制成胚胎发育迟缓模型，以气血双补方八珍汤作对照，应用补肾阴方左归丸（汤），对体外培养的小鼠２细胞期（２ＣＥ）至囊胚期胚胎发育进行了动态观察。结果表明：用给药小鼠血清或在体应用左归汤者，体外培养的２ＣＥ至囊胚各期胚胎的发育率均显著高于酒精模型组，八珍汤组各期胚胎发育率略高于模型组，但无显著性差异；体外用药对早期胚胎发育未见明显作用。

阴虚阳亢小鼠Th1/Th2类细胞因子的漂移现象及中药左归丸的干预研究

目的:观察阴虚阳亢模型小鼠Th1/Th2两类细胞因子的漂移现象及中药左归丸的逆转作用?方法:采用甲状腺素合并番泻叶建立阴虚阳亢小鼠模型,并用中药左归丸对模型的建立进行干预(生理盐水做对照),RT-PCR法分别检测小鼠脾脏单个核细胞Th1类细胞因子(IFN-γ?IL-2)?Th2类细胞因子(IL-4?IL-10)的表达及中药左归丸的逆转作用?结果:正常小鼠可以同时表达IFN-γ?IL-2?IL-4?IL-10,处于Th1/Th2平衡状态;模型小鼠在表现明显的阴虚阳亢体征的同时,其Th1/Th2两类细胞因子mRNA的表达显著降低(P<0.01),但IFNγ/IL-10的比值明显升高(P<0.01),Th1类细胞因子处于相对优势状态,中药左归丸可显著提高IL-10的转录水平,使IFNγ/IL-10比值回落(P<0.05)?结论:中医阴虚阳亢小鼠处于Th1相对优势状态,中药左归丸可重建Th1/Th2的平衡状态?

左归丸和右归丸对自身免疫性脑脊髓炎大鼠中枢神经系统淋巴细胞亚群免疫组化表达的影响

目的通过观察左归丸与右归丸对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型大鼠脑、脊髓组织淋巴细胞亚群免疫组化表达的影响,探讨滋阴补肾法与温阳补肾法治疗EAE作用机制。方法应用髓鞘碱性蛋白与完全福氏佐剂,按体积比1:1制成抗原并于Lewis大鼠双后足垫下注射,建立EAE模型。120只Lewis大鼠随机分为正常组、模型组、激素组、左归丸组及右归丸组,每组24只,正常组和模型组给予生理盐水灌胃,3mL/(只·d);激素组免疫后给予生理盐水灌胃,3mL/(只·d),发病后改为醋酸泼尼松混悬液灌胃,5mg/(kg·d);左归丸组免疫后给予左归丸混悬液,2g/(kg·d);右归丸组免疫后给予右归丸混悬液,3g/(kg·d)。直至处死。分别于急性期(免疫后15d)和缓解期(免疫后27d)随机选取各组大鼠,取脑和脊髓组织切片进行CD4+、CD8+、CD3+、CD19+免疫组化染色。结果造模后第15日及第27日,模型组脑和脊髓组织中CD4+免疫组化表达均较正常组升高(P<0.01),CD8+表达降低(P<0.05),CD4+/CD8+比值升高(P<0.01);同模型组比较,左归丸组、右归丸组、激素组CD4+免疫组化表达均降低(P<0.01),且在造模后第27日,左归丸组和右归丸组脊髓组织CD4+表达较激素组显著降低(P<0.01);造模后第15日,右归丸组和激素组CD8+表达较模型组升高(P<0.01),造模后第27日,左归丸组和激素组CD8+表达较模型组升高(P<0.01);不同时点激素组、左归丸组及右归丸组CD4+/CD8+比值均显著低于模型组(P<0.05);造模后第15日及第27日,模型组中枢神经系统CD19+免疫组化表达均较正常组升高(P<0.01),急性期左归丸组、右归丸组、激素组脊髓组织CD19+表达较模型组降低(P<0.01),缓解期则见左归丸组和右归丸组CD19+表达减少(P<0.01)。结论 EAE大鼠CD4+/CD8+比值升高,这在EAE发病中发挥重要作用。滋阴补肾法和温阳补肾法可下调CD4+表达,下调CD4+/CD8+比值来治疗EAE。

左归丸对痴呆鼠抗氧化作用及尼氏体的影响

目的探讨左归丸对痴呆大鼠抗氧化作用及尼氏体的影响。方法将84只Wistar雄性大鼠随机分成6组:A组腹腔注射生理盐水再脑内海马注射生理盐水,B、C、D、E、F组以D-半乳糖腹腔注射合并β淀粉样蛋白1-40注射海马制备老年性痴呆(AD)动物模型,C、D、E、F组同时分别灌胃抗脑衰胶囊、哈伯因和左归丸[5.4和2.7g/(kg.d)]。采用生化法检测各组大鼠脑匀浆过氧化氢酶(CAT)、单胺氧化酶(MAO),尼氏染色观察各组大鼠海马神经元尼氏体及电镜观察各组超微结构变化。结果灌服后左归丸组均能明显提高AD大鼠脑组织CAT活性、抑制MAO活性(P<0.05);左归丸治疗组尼氏体溶解明显减少;F组神经纤维结构完好,尼氏体丰富,突触结构尚可。结论左归丸通过提高抗氧化能力和改善神经元细胞损害对AD大鼠有一定的防治作用。

补肾方药对老年大鼠下丘脑-垂体-肾上腺皮质所属组织结构形态变化的影响

目的:观察左归丸、右归丸对老年大鼠HPA轴所属组织形态结构变化的影响。方法:以自然衰老大鼠为肾虚证动物模型,HE染色,光镜观察HPA轴所属组织结构的增龄性变化,以及补肾方药(左、右归丸)的改善作用。结果:老年大鼠垂体、下丘脑、肾上腺皮质组织形态结构呈现明显的老年性退化,左归丸、右归丸能不同程度改善这些组织结构。结论:左归丸、右归丸能从组织结构形态方面延缓下丘脑-垂体-肾上腺皮质(HPA)轴的老年性变化。

左、右归丸通过TGF-β1/Smad4信号途径对大鼠骨髓间充质干细胞成骨诱导的影响

目的研究左、右归丸含药血清经转化生长因子(TGF)-β1/Smad4信号途径对骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨诱导的影响。方法以左归丸、右归丸水煎液和阳性对照药补佳乐、蒸馏水给SD大鼠灌胃后取血制备含药血清(含有10%含药血清的诱导剂),与诱导剂组共5种处理因素对BMSCs进行干预,选用Western印迹法检测碱性磷酸酶(ALP)蛋白的表达,用免疫组化SP法检测TGF-β1和Smad4蛋白的表达。结果左、右归丸与空白组和诱导剂组比可显著促进ALP蛋白的表达,增强TGF-β1和Smad4蛋白的表达(P<0.01),左归丸组与右归丸组比较可上调ALP、Smad4蛋白的表达(P<0.01)。结论左归丸与右归丸可能通过增强ALP、TGF-β1、Smad4蛋白的表达,影响TGF-β1/Smad4信号途径,从而协同诱导剂促进BMSCs的成骨诱导,并且左归丸较右归丸促进作用更明显。

左归丸促进骨髓形成肝细胞的分子机制研究

目的:探讨左归丸促进骨髓形成肝细胞的分子机制。方法:采用交叉性别骨髓移植模型,雌性BALB/c小鼠接受9.0Gy60Co源γ射线照射后,经尾静脉注射输入同种系雄性小鼠骨髓细胞,分左归丸组和模型组,6个月后处死实验动物,取肝组织标本。选用小鼠基因表达谱寡核苷酸芯片,观察实验小鼠肝组织基因表达谱的变化。结果:左归丸组小鼠在骨髓移植6个月后肝组织的基因表达谱与模型组比较有显著不同,差异表达基因有1147条,已知功能基因有533条,其中上调基因264条,下调基因269条。结论:左归丸可能是通过影响肝组织基因表达谱的变化促进骨髓形成肝细胞。

左归丸联合钙尔奇D治疗绝经后骨质疏松肾阴虚证的疗效评估

目的:评价左归丸联合钙尔奇D治疗绝经后骨质疏松(POMP)肾阴虚证的疗效。方法:选择2014年1月至2016年12月期间经我院诊疗的150例POMP肾阴虚证患者为研究对象,随机分为对照组和左归丸组2组各75例。左归丸组在对照组钙尔奇D同等治疗基础上加用左归丸治疗,治疗周期均为6个月,2组治疗结束后从疼痛积分(VAS)、骨密度(BMD)影像、血清雌二醇(E 2)、中医证候积分和治疗有效率方面进行比较。结果:治疗结束后,BMD影像提示左归丸较对照组明显改善患者的骨质疏松状态,与对照组比较左归丸可以明显改善患者腰背疼痛和血清雌二醇含量以及肾阴虚证候积分,上述各指标组间比较差异有统计学意义。结论:在原有治疗基础上加用左归丸治疗后不仅治疗有效率明显提升,还能显著改善肾阴虚证相关症状,且未出现明显不良反应,左归丸联合钙尔奇D治疗肾阴虚型POMP值得临床推广应用。

左归丸含药血清调节Runx2激活ALP、OPN蛋白促进BMSCs增殖和分化的研究

目的探讨左归丸(Zuoguiwan,ZGW)的补肾填精、益髓壮骨的作用,促进骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)的增殖和向成骨细胞方向分化。方法制备ZGW含药血清,设置10%FBS DMEM组、成骨诱导液组、2.5%空白大鼠血清-成骨诱导液组、2.5%ZGW含药血清-成骨诱导液组。采用MTT法观察各组对BMSCs的增殖,使用碱性磷酸酶钙钴染色法检测BMSCs向成骨细胞方向的分化能力,碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AKP)法检测细胞培养液中AKP的含量,Western blot检测BMSCs中Runt相关转录因子2(Runx2)、骨钙蛋白(osteocalcin,OPN)和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)蛋白的表达。结果2.5%ZGW含药血清-成骨诱导液组能够促进BMSCs的快速增殖,较早地进入平台期,促进BMSCs中AKP的分泌,提高ALP含量,上调BMSCs细胞中Runx2、ALP和OPN的蛋白表达水平。结论ZGW抗骨质疏松的分子机制,可能与调节Runx2激活ALP、OPN蛋白表达,促进BMSCs增殖和向成骨细胞方向分化有关。

CCK-8与MTT法检测左归丸含药血清干预BMSCs增殖条件的比较

目的探讨CCK-8与MTT法在检测左归丸含药血清干预大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)增殖时所需的最佳实验条件,并比较两种方法的优缺点。方法用左归丸含药血清进行干预P3 BMSCs,孵育结束后,分别加入CCK-8与MTT试剂,检测两种方法的最佳波长、培养时间、灵敏度和增殖时间。结果CCK-8法与MTT法检测BMSCs的最佳波长分别为450 nm和550 nm,孵育时间分别为3 h和4 h,细胞接种密度分别为0.1×10^(4)/孔和0.25×10^(4)/孔。CCK-8法与MTT法在BMSCs接种密度分别高于0.25×10^(4)/孔和0.5×10^(4)/孔时,两种方法检测所得OD值均提早进入平台期,易出现假S型增长曲线。而当密度分别低于0.05×10^(4)/孔和0.1×10^(4)/孔时,细胞增加缓慢,难以形成S型增长曲线,不能反映出BMSCs的增殖特性。与CCK-8法相比较,在细胞密度低于0.1×10^(4)/孔或高于2×10^(4)/孔时,MTT法对BMSCs在翻倍时OD值增加的响应量无明显变化,差异无统计学意义。而细胞密度为0.25×10^(4)/孔至1×10^(4)/孔时,MTT法对BMSCs在翻倍时OD值增加的响应量明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论MTT法更适用于左归丸含药血清干预BMSCs增殖和分化的研究。

左归丸与右归丸对EAE大鼠血浆Th1/Th2平衡的影响

目的探讨左归丸、右归丸对实验性自身免疫性脑脊髓炎(experi mental autoi mmune encephalomyelitis,EAE)大鼠病程及其血浆Th1/Th2(IFN-γ/IL-4)的影响。方法用MBP免疫Lewis大鼠诱导EAE模型,随机分为模型组、激素组、左归丸组、右归丸组及正常对照组,研究各组间发病率、死亡率、神经功能评分的差异,并分别在急性期(免疫后第15天)和缓解期(免疫后第27天)采集血样,检测血浆细胞因子水平。结果右归丸组发病率低于其他各处理组(P<0.05);急性期神经功能评分左归丸组和右归丸组均低于模型组和激素组(P<0.05);急性期左归丸组血浆Th1/Th2水平低于模型组(P<0.05);缓解期模型组、激素组Th1/Th2水平均低于对照组(P<0.05),左归丸组、右归丸组Th1/Th2水平均高于模型组和激素组(P<0.05),右归丸组Th1/Th2水平高于对照组(P<0.05);模型组Th1/Th2水平在缓解期下降(P<0.01),左归丸组和右归丸组Th1/Th2水平均在缓解期升高(P<0.01)。结论右归丸可降低EAE发病率;左归丸和右归丸均能减轻EAE疾病严重程度,治疗效果优于醋酸泼尼松;左归丸可下调EAE急性期血浆Th1/Th2水平;左归丸和右归丸均能上调EAE缓解期血浆Th1/Th2水平。

左归丸加黄芪对S180小鼠化疗后卵巢功能损害和抑瘤作用的研究

目的探讨左归丸加黄芪在干预环磷酰胺(CTX)联合顺铂(DDP)诱导的S180小鼠生殖内分泌功能损害的基础上对S180小鼠皮下肿瘤生长的影响。方法将80只C57BL/6雌性小鼠随机选取14只作为空白对照组,余皮下接种S180肿瘤细胞后随机分为3组,即模型对照组、化疗组、中药+化疗组,每组22只。动态观察肿瘤生长及动情周期,于用药前后分批处死小鼠,称取体质量、卵巢质量、肿瘤质量计算抑瘤率;采用酶联免疫吸附(ELISA)法动态检测各组小鼠血清的卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)及雌二醇(E2)水平。每组剩余小鼠按2∶1分别与成年雄性小鼠合笼,观察生育情况。结果①给药前各组血清FSH、LH、E2水平无显著性差异(P均>0.05);给药第11天及第26天,化疗组FSH、E2水平与各组比较均有显著性差异(P均<0.01),中药+化疗组与两对照组比较无明显性差异(P均>0.05)。LH水平化疗组与中药+化疗组比较无显著性差异(P>0.05);但化疗组与两对照组比较均有显著性差异(P均<0.01)。给药第26天,化疗组FSH、LH水平与各组比较均有显著性差异(P均<0.01),中药+化疗组与两对照组比较无显著性差异(P均>0.05)。化疗组和中药+化疗组E2水平无明显差异(P>0.05);化疗组明显低于两对照组(P<0.01)。②模型对照组肿瘤质量均明显高于化疗组和中药+化疗组(P均<0.01);化疗组和中药+化疗组间比较无显著性差异(P>0.05);化疗组和中药+化疗组抑瘤率均大于60%。结论左归丸加黄芪对化疗后小鼠卵巢生殖内分泌功能的损害有保护作用;并可增强化疗对肿瘤的抑制作用。

左归丸对EAE小鼠Th17细胞分化的影响

目的探讨左归丸对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)Th17细胞分化的影响。方法建立髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55(myelin oligodendrocyte glycoprotein peptide 35-55,MOG35-55)诱导C57BL/6小鼠EAE模型,随机分为模型组、泼尼松组、左归丸组,并设正常对照组。观察小鼠的发病情况、神经功能评分及体重变化,HE染色观察CNS病理损伤程度,ELISA法检测血清IL-4、IL-6、TGF-β、IL-17含量。结果与正常对照组比较,模型组IL-6、IL-17含量升高;IL-4、TGF-β含量降低,泼尼松及左归丸组小鼠IL-6、IL-17含量降低;IL-4、TGF-β含量升高(P<0.05,P<0.01)。结论左归丸能够抑制EAE小鼠Th17细胞分化而起到抗炎治疗作用。

左归丸对庆大霉素诱导的肾损伤大鼠MKK4、MKK7、JNK的影响

目的:探讨左归丸对庆大霉素诱导的肾损伤大鼠MKK4、MKK7、JNK的影响。方法:将40只雄性Wistar大鼠随机分为空白对照组、模型组、SP600125组、左归丸组,对照组给予腹腔注射0.9%生理盐水2.5ml·kg-1·d-1,模型组腹腔注射硫酸庆大霉素100ml·kg-1·d-1,SP600125组左侧腹腔注射硫酸庆大霉素100ml·kg-1·d-1,2h后右侧腹腔注射SP60012515ml·kg-1·d-1,左归丸组腹腔注射硫酸庆大霉素100ml·kg-1·d-1和灌胃左归丸水溶液2g·200g-1·d-1,4组大鼠连续给药10d。第11天测量各组大鼠尿NAG酶、血Scr、血BUN等生化指标;HE染色观察各种大鼠肾脏病理状况;以免疫组化技术检测各组大鼠肾脏MKK4、MKK7、JNK的表达,并采用Image pro-Plus6.0图像分析软件半定量分析;以Westernblot方法检测各组大鼠肾脏MKK4、MKK7、JNK蛋白的表达。结果:生化指标结果显示:与对照组比较,模型组的大鼠尿NAG酶、血Scr、血BUN值显著升高,差异具有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,SP600125组与左归丸组生化指标得到改善,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。免疫组化结果显示:与对照组比较,模型组MKK4、MKK7、JNK在肾小管大量表达,差异有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,SP600125组与左归丸组表达少量,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。Western blot方法结果显示:模型组MKK4、MKK7、JNK蛋白灰度值较对照组明显升高(P<0.01),SP600125组与左归丸组较模型组灰度值下降(P<0.05)。结论:左归丸对庆大霉素诱导肾损伤大鼠的保护作用可能与抑制MKK4、MKK7、JNK的表达有关。

雌激素受体拮抗剂对MCAO大鼠左归丸脑神经元保护作用的干预研究

目的观察雌激素受体拮抗剂对左归丸脑神经元保护作用的影响,初步探索中医学“肾脑相关”理论的物质基础。方法雌性SD大鼠108只,被随机分为6组,分别为假手术组(a组)、单纯脑缺血组(b组)、惊恐伤肾组(c组)、补肾中药组(d组)、雌激素受体拮抗剂组(e组)、脑复康组(f组),每组18只大鼠。除假手术组外,其余各组均用线栓法制备大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)模型。惊恐伤肾组、补肾中药组、雌激素受体拮抗剂组、脑复康组于MCAO手术前10 d进行高台恐吓,补肾中药组、雌激素受体拮抗剂组于MCAO前3 d开始分别给予左归丸汤剂1.62 g/kg灌胃,每日1次,连续给药10 d。脑复康组于MCAO前3 d开始分别给予脑复康悬液0.324 g/kg灌胃,每日1次,连续给药10 d。雌激素受体拮抗剂组于MCAO手术前3 d同时给予雌激素受体阻断剂ICI1827805 mg/kg腹腔注射,每日1次,连续给药10 d。采用平横木法检测各组大鼠的运动能力,新奇物认知法及跳台实验检测大鼠的记忆力,HE染色法观察大鼠脑组织形态学变化。结果与假手术组比较,单纯脑缺血组大鼠运动能力及记忆力均明显下降(P<0.01);与单纯脑缺血组比较,惊恐伤肾组大鼠运动能力及记忆力明显下降(P<0.05);与惊恐伤肾组比较,补肾中药组大鼠运动能力及记忆力明显提高(P<0.05);与补肾中药组比较,雌激素受体拮抗剂组大鼠运动能力及记忆力明显下降(P<0.05);与补肾中药组比较,脑复康组大鼠运动能力及记忆力无明显差异(P>0.05)。结论左归丸的脑神经元保护作用可以被雌激素受体拮抗剂阻断,提示左归丸通过雌激素及其受体对脑产生影响,“肾→雌激素及其受体→脑”可能是“肾通于脑”的关键通路之一。

左归丸合下瘀血汤治疗原发性骨质疏松症(肾虚血瘀型)临床疗效观察

目的:评价采用左归丸合下瘀血汤加减,补肾活血治疗对原发性骨质疏松人群的临床疗效意义。方法:收集2013年8月—2015年8月本院确诊为原发性骨质疏松症病例,筛选其中属肾虚血瘀型原发性骨质疏松症患者作为研究对象,在患者知情同意的情况下,予左归丸合下瘀血汤加减,补肾活血治疗,观察分析疗效,并与同期其他常规治疗的肾虚血瘀型原发性骨质疏松症病例进行对比,评估疗效。结果:治疗组患者治疗总有效率显著高于对照组的总有效率,差异具有统计学意义(P<0.05)。两组患者治疗前BMD值无明显差异(P>0.05),治疗后3个月及治疗后6个月,治疗组的BMD值显著高于对照组的总有效率,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:采用左归丸合下瘀血汤加减,补肾活血治疗对原发性骨质疏松,能够有效治疗原发性骨质疏松,并且能够有效增加骨密度,值得在临床上进行推广使用。

辨证分型联合针灸治疗原发性高血压

高血压属"头痛""眩晕"范畴,中医药辨证分型防治具有独特优势:肝阳上亢镇肝熄风汤配针灸,痰瘀阻络半夏白术天麻汤合通窍活血汤配针灸,气血亏虚归脾汤合补中益气汤配针灸,阴阳两虚左归丸或右归丸配针灸,均能获满意疗效。

均匀设计优选左归丸提取工艺条件

目的:明确左归丸中总黄酮的提取方法及其含量,为复方左归丸的进一步研究、开发利用提供科学依据。方法:用均匀设计U5(53)表安排左归丸总黄酮的多因素多水平提取实验,以浸膏得率为指标,确定醇提左归丸的数学模型,得出左归丸醇提浸膏得率与各因素之间的回归关系,并推算最佳提取工艺条件。并应用AlCl3-KAc法显色,利用分光光度法以芦丁为对照品对浸膏中总黄酮进行含量测定,对均匀设计结果进行验证。结果:醇提左归丸的最佳工艺条件为:复方左归丸混合粉末质量(g)与加入乙醇体积(mL)的配比=1∶12,乙醇体积分数为55%,提取时间为80 min,浸膏得率的最大值为(69.8±9.62)%。65%乙醇提取左归丸所得浸膏中总黄酮含量最高。结论:用U5(53)法得到的模型方程可在设立的因素水平范围内给出醇提左归丸浸膏得率的极大值,进而探讨各因素对醇提左归丸浸膏得率的影响机制。

左归丸对去势骨质疏松大鼠钙磷代谢和细胞核因子κB受体活化因子配体/骨保护素的影响

目的探讨左归丸对卵巢摘除大鼠钙磷代谢和细胞核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factorκB ligand,RANKL)/骨保护素(osteoprotegerin,OPG)的影响。方法 SD雌性大鼠60只,采用去卵巢法制备骨质疏松症大鼠模型,将大鼠分为假手术组,切除卵巢组,左归丸低、中、高剂量组,西药对照组(戊酸雌二醇片),每组10只。造模成功12周后给予药物干预,西药对照组给予戊酸雌二醇片0.09 mg/kg灌胃治疗,左归丸低、中、高剂量组按4.75、9.5、19 g/kg灌胃治疗,假手术组和切除卵巢组大鼠给予等体积蒸馏水灌胃,干预4周后股动脉采血处死大鼠。比色分析法检测血清钙(calcium,Ca)、磷(phosphorus,P)含量;ELISA法检测骨保护素(osteoprotegerin,OPG)、细胞核因子κB受体活化因子(receptor activator of nuclear factorκB,RANK)和RANKL含量;双能X骨密度仪分析测定大鼠股骨的骨密度(bone mineral density,BMD);AG-IX生物力学万能实验机检测最大载荷和弹性模量,比较各组间差异。结果假手术组,切除卵巢组,西药对照组,左归丸高、中、低剂量组的BMD分别为(0.145±0.004)、(0.116±0.007)、(0.146±0.006)、(0.142±0.004)、(0.134±0.002)、(0.129±0.001)g/cm2;这6组的体质量分别为(173.20±13.92)、(264.10±28.61)、(249.44±26.64)、(243.00±10.25)、(253.45±18.19)、(268.50±22.39)g;这6组的子宫指数分别为(1.62±0.34)、(0.45±0.09)、(0.89±0.22)、(1.03±0.23)、(0.91±0.13)、(0.46±0.07)mg/g;这6组Ca、P含量分别为(2.07±0.07/0.30±0.02)、(0.92±0.08/0.10±0.03)、(1.89±0.11/0.22±0.03)、(1.95±0.13/0.27±0.02)、(1.67±0.10/0.19±0.06)、(1.59±0.15/0.12±0.02)mmol/L;这6组OPG、RANKL和RANK含量分别为(755.00±58.05/5.73±0.27/10.68±0.69)、(493.67±36.77/10.24±0.33/18.62±0.74)、(653.00±56.93/7.37±0.19/12.23±0.76)、(731.00±38.49/6.77±0.65/11.52±0.39)、(704.33±62.92/7.97±0.41/14.69±0.86)、(555.00±97.09/9.31±0.75/15.04±0.52)pg/m L;这6组的最大载荷分别为(142.16±0.10)、(86.26±0.13)、(126.43±0.31)、(119.77±0.74)、(111.96±1.57)、(98.92±1.44)N;这6组弹性模量分别为(19.48±0.24)、(13.10±0.43)、(16.70±0.37)、(16.17±0.15)、(15.99±0.22)、(14.98±0.15)MPa。与假手术组比较,切除卵巢组大鼠的BMD、Ca、P、OPG、最大载荷和弹性模量水平均显著降低,而RANK和RANKL含量均明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);与切除卵巢组相比,左归丸各剂量干预组和西药对照组大鼠BMD和弹性模量均显著升高,RANK和RANKL含量明显降低,左归丸中、高剂量组和切除卵巢+西药对照组Ca、P、OPG含量和最大载荷显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论左归丸能升高去卵巢大鼠的骨密度,提高骨强度,并改善其力学性能,其机制可能与调节RANKL/OPG水平和Ca、P代谢有关。