回医扎里奴思方对痰热腑实证脑缺血再灌注大鼠肿瘤坏死因子-α和内皮素-1表达的影响

目的探讨扎里奴思方对痰热腑实证脑缺血再灌注大鼠脑内肿瘤坏死因子(TNF)-α和内皮素(ET)-1表达的影响。方法将60只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、尼莫地平组、扎里奴思方组,每组15只。除假手术组外,其余各组均给予高脂喂养4 w后,再给予10%的自体粪便1 ml/100 g灌胃,1次/d,连续3 d,造成痰热腑实证模型;再采用线栓法制备大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)。大鼠给药剂量为尼莫地平组10.8 mg/kg、扎里奴思方组1.54 g/0.1 kg,制备MCAO模型前3 d灌胃给药。大鼠分别于缺血再灌注后1、3、7 d取脑;取材前进行脑组织含水量测定,采用免疫组化法检测脑缺血侧海马区TNF-α、ET-1表达,RT-PCR检测TNF-α mRNA和ET-1 mRNA的表达。结果与假手术组比较,模型组脑组织含水量增高(P<0.01)、TNF-α、ET-1阳性细胞和TNF-α mRNA、ET-1 mRNA表达明显增高(P<0.01);与模型组比较,尼莫地平组和扎里奴思方组脑组织含水量降低、TNF-α、ET-1阳性细胞数减少,TNF-α mRNA、ET-1 mRNA表达降低(P<0.01)。与尼莫地平组比较,扎里奴思方7 d组脑组织含水量降低、TNF-α、ET-1阳性细胞数减少和TNF-α mRNA、ET-1 mRNA表达降低(P<0.05)。结论扎里奴思方对痰热腑实证脑缺血再灌注大鼠脑神经元起保护作用,其机制可能与抑制大鼠脑内TNF-α和ET-1的表达有关。

回医扎里奴思方对痰热腑实证脑缺血再灌注大鼠脑内细胞间黏附分子1和血管间黏附分子1表达的影响

目的探讨扎里奴思方对痰热腑实证脑缺血再灌注大鼠脑内细胞间黏附分子(ICAM)-1和血管间黏附分子(VCAM)-1表达的影响。方法将60只雄性大鼠随机分为假手术组、模型组、尼莫地平组、扎里奴思方组,每组15只;除假手术组外,其余各组均给予高脂喂养4 w后,予10%的自体粪便1 ml/100 g灌胃,1次/d,连续3 d,造成痰热腑实证模型,再采用线栓法制备大脑中动脉阻塞(MCAO)模型;大鼠给药剂量尼莫地平组10.8 mg/kg、扎里奴思方组1.54 g/ml,制备MCAO模型前3 d灌胃给药。大鼠分别于缺血再灌注后1、3、7 d取脑,取材前进行脑组织含水量测定,采用免疫组化法检测缺血侧海马区ICAM-1、VCAM-1的表达,RT-PCR检测ICAM-1 mRNA和VCAM-1 mRNA的表达。结果与假手术组比较,模型组脑组织含水量增高(P<0.01);ICAM-1、VCAM-1阳性细胞,ICAM-1 mRNA、VCAM-1 mRNA表达明显增高(P<0.01)。与模型组比较,尼莫地平组和扎里奴思方组脑组织含水量降低;ICAM-1、VCAM-1阳性细胞数减少,ICAM-1 mRNA、VCAM-1 mRNA表达降低(P<0.01)。与尼莫地平组比较,扎里奴思方7 d组脑组织含水量降低,ICAM-1、VCAM-1阳性细胞数减少,ICAM-1 mRNA、VCAM-1 mRNA表达降低(P<0.05)。结论扎里奴思方对痰热腑实证脑缺血再灌注大鼠脑神经元起保护作用,其机制可能与抑制大鼠脑内ICAM-1和VCAM-1的表达有关。

扎里奴思方对MCAO缺血-再灌注损伤大鼠凝血及纤溶系统功能的影响

目的观察扎里奴思方对MCAO缺血-再灌注损伤大鼠凝血及纤溶系统功能的影响。方法应用改良的线栓法建立大鼠MCAO缺血-再灌注损伤模型。按神经功能评分随机分为空白对照组、假手术组、模型组,扎里奴思方低、中、高剂量组(剂量分别为0.35、0.70和1.40 g/kg,连续灌胃给药,于术后第7天采用重量法计算梗死区重量占全脑重量的比重,取血检测凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)、活化部分凝血酶原时间(APTT)、纤维蛋白原(Fib)、抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)及纤维蛋白(原)降解产物(FDP)含量。结果扎里奴思方中、高剂量组明显降低脑梗死比率(P<0.05)。与假手术组比较,模型组大鼠的TT、APTT时间明显缩短,AT-Ⅲ活性增强,Fib、FDP含量明显增高(P<0.05);与模型组比较,扎里奴思方组显著延长TT、APTT时间,减弱AT-Ⅲ活性,降低Fib、FDP含量(P<0.05),尤以扎里奴思方中、高剂量组作用显著。结论扎里奴思方可改善脑缺血再灌注损伤之后凝血-纤溶系统功能紊乱,这可能是其减小脑梗死的体积,减轻脑梗死后继发性的脑损伤,发挥治疗和保护脑缺血损伤作用的机制之一。

回药扎里奴思方UPLC指纹图谱结合多成分含量测定的质控方法研究

目的建立扎里奴思方的UPLC-PDA指纹图谱及多成分含量测定方法。方法采用Waters ACQUITY UHPLC T 3(2.1 mm×100 mm,1.7μm)色谱柱,流动相为乙腈(A)-0.1%甲酸水溶液(B),梯度洗脱,流速0.4 mL/min,柱温30℃,检测波长317 nm;采用UPLC-PDA对其中9种物质进行含量测定。结果共确定扎里奴思方指纹图谱13个共有色谱峰,通过对照品比对出其中9个共有峰。10批样品指纹图谱相似度为0.923~0.983。9种物质在一定浓度范围内呈良好线性关系,r值均大于0.9990;含量测定结果表明肉桂酸、没食子酸含量较高。各物质回收率在98.82%~102.91%之间,RSD均小于2.52%;样品在24 h内稳定,重复性良好。结论建立了扎里奴思方指纹图谱分析方法及含量测定方法,该方法简便、重复性良好,可为进一步完善扎里奴思方质量控制方法提供参考。

扎里奴思方对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠血脑屏障通透性的影响

目的：研究扎里奴思方对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠血脑屏障通透性的影响。方法：SD大鼠随机分为假手术组、模型组、尼莫地平组、扎里奴思方组；线栓法制备大脑中动脉阻塞缺血再灌注模型；大鼠灌胃给药，于缺血再灌注后1，3，7，14d取脑，评价神经功能积分，干湿重法测脑含水量，免疫组化法测IgG表达变化。结果：与假手术组比较，缺血再灌注后脑含水量、IgG表达显著增高（P〈0．01，P〈0．05），神经功能积分明显降低（P〈0．01）；与模型组比较，尼莫地平组脑含水量、神经功能积分均有不同程度改善（P〈0．05），IgG表达有所下降，尤以3，7d明显（P〈0．01）；与尼莫地平组比较，扎里奴思方组脑含水量、IgG表达呈不同程度下调（P〈0．05），神经功能积分增大，尤以3，7d明显；扎里奴思方3，7d组与1d比较，IgG含量显著降低（P〈0．05）。结论：脑缺血再灌注损伤后1～7d可引起血脑屏障通透性增加，7d以后血脑屏障通透性逐渐恢复；扎里奴思方可有效降低缺血再灌注脑含水量及改善脑缺血后神经功能积分，降低IgG在脑内的表达量；其机制可能是通过调控血脑屏障的通透性，抑制有害物质进人脑内，从而发挥脑保护作用。

扎里奴思方对急性脑梗死患者血清NSE水平的影响

目的探讨扎里奴思方治疗急性脑梗死的疗效及可能机制。方法将同期收治的84例急性脑梗死患者随机分为治疗组及对照组各42例,两组均予甘露醇、拜阿司匹林、丹参酮等常规治疗,在此基础上治疗组予扎里奴思方1付/d,14 d为一疗程,总共治疗两个疗程;对照组给予尼莫地平片30mg/次,1/d。治疗前后分别行神经功能评估并据此判定疗效,同时检测治疗前后血清神经元特异性烯醇化酶(NSE)水平改变。结果两组治疗7、14、28 d后进行比较,治疗组总有效率显著高于对照组(P<0.05);治疗后两组血清NSE水平均降低,尤以治疗14d组为显著(P均<0.01)。结论扎里奴思方治疗急性脑梗死可显著改善患者预后,其可能机制与下调NSE的表达、促进神经元功能的修复有关。

扎里奴思方对脑缺血再灌注损伤后大鼠脑内NGF表达的影响

目的:观察扎里奴思方对脑缺血再灌注损伤后大鼠脑内神经生长因子(NGF)表达的影响。方法:线栓法制备局灶性脑缺血再灌注大鼠模型。实验动物随机分为假手术组、模型组、扎里奴思方组、尼莫地平组。取材前进行神经功能评分。术后各组分别在1,3,7,14 d各个时间点取材,HE染色法观察大鼠脑组织病理学改变;免疫组织化学法测定大鼠脑内NGF的表达。结果:模型组大鼠神经功能评分降低,神经元数量减少,大小不均,病理损伤显著;与模型组比较,尼莫地平和扎里奴思方组神经评分增高,神经元数量增多,脑组织病理损伤减轻明显,NGF表达增高(P<0.01,P<0.05);与尼莫地平组比较,扎里奴思方14 d组神经功能评分和NGF表达明显升高(P<0.05)。结论:扎里奴思方可对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑组织神经元起保护作用,扎里奴思方14天组的脑保护作用更强,其脑保护作用机制可能与调节大鼠脑组织NGF表达有关。

回族药扎里奴思方联合骨髓间充质干细胞移植对脑缺血再灌注大鼠神经元及P-糖蛋白的影响

目的:观察扎里奴思方联合骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对脑缺血再灌注(MCAO)模型大鼠神经元及P-糖蛋白(P-gp)表达的影响。方法:250只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、扎方组(扎里奴思方组)、移植组和联合组(扎里奴思方和移植组),除假手术组10只外,其余各组再分为1,3,7,14 d组,分别为15只。大鼠术前4 d开始ig给药(14.6 g·kg-1·d-1,假手术组、模型组和移植组给予等体积的生理盐水),线栓法制备大鼠MCAO模型,体外全骨髓贴壁筛选法培养及扩增BMSCs,术后24 h,BMSCs悬浮液经颈内动脉移植入脑(2×106个/200μL);移植后1,3,7,14 d取材,观察海马CA1区神经元密度(ND)和脑组织病理损伤、免疫组化法测P-gp表达变化。结果:模型大鼠海马CA1区ND较假手术组明显降低(P<0.01),病理损伤明显(P<0.01,P<0.05),P-gp表达明显增高(P<0.01);与模型组比较,扎方、移植组3,7,14 d及联合各组ND增加(P<0.01,P<0.05),各组病理损伤减轻,以扎方、移植、联合组7,14 d明显(P<0.01,P<0.05),扎方、移植、联合各组P-gp表达降低(P<0.01);与移植组比较,扎方组1 d ND增高(P<0.01),14 d降低(P<0.05),联合各组ND均增高(P<0.01),联合组7,14 d病理损伤减轻(P<0.05),扎方组1,3,7 d P-gp表达降低,以1 d降低明显(P<0.05),14 d P-gp表达增高(P<0.05),联合各组P-gp表达均降低(P<0.01);扎方与联合组比较,联合各组上述指标均改善(P<0.01,P<0.05);同组间比较,均以7 d变化显著,14 d有明显改善(P<0.01)。结论:脑缺血后脑组织海马CA1区神经元密度及组织病理学均出现不同程度损伤;扎里奴思方和BMSCs移植均可不同程度改善脑缺血后脑组织神经元存活数量及状态,以二者联合作用显著,其机制可能与干预P-gp动态表达有关。

扎里奴思方干预骨髓间充质干细胞移植对脑缺血再灌注损伤大鼠突触结构可塑性的影响

目的:观察扎里奴思方(扎方)干预骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对大脑中动脉阻塞(MCAO)模型大鼠突触结构可塑性的影响,并探讨其机制。方法:SD大鼠随机分为假手术组、模型组、扎方组、移植组和联合组;线栓法制备大鼠MCAO模型,体外全骨髓贴壁筛选法培养及扩增BMSCs;大鼠灌胃给药(14.6 g·kg^(-1)·d^(-1)),BMSCs悬浮液经颈内动脉移植入脑;移植后1,3,7,14 d取材,透射电镜观察神经元突触超微结构,蛋白质免疫印迹(Western blot)检测突触素(SYN),突触后致密蛋白-95(PSD-95)蛋白表达。结果:假手术组突触结构完整,前后膜轮廓及突触间隙清晰,可见多个突触小泡,均匀分布,模型各组突触数量减少,结构破坏,突触间隙模糊,突触小泡数量减少甚至消失。扎方组突触数量增多,结构接近正常,可见凹型及U型突触,3,7,14 d组突触小泡增多,14 d组突触间隙增宽。移植组突触超微结构变化与扎方组大致相同。联合组突触损伤明显减轻,突触数量增多,7,14 d可见多个凹型突触,突触小泡明显增多。模型各组SYN及PSD-95较假手术组减低(P<0.01);与模型组比较,联合各组及扎方、移植各7 d组SYN表达增高(P<0.01),扎方、移植各3,7,14 d组及联合各组PSD-95表达增高(P<0.01);与移植组比较,联合各组SYN,PSD-95表达增高(P<0.01,P<0.05),扎方3 d组PSD-95表达减低(P<0.01);扎方与联合组比较,联合各组SYN,PSD-95表达增高(P<0.01);同组间比较,模型、扎方、移植及联合各3 d组SYN表达较其他组减低(P<0.01),各7 d组PSD-95表达达高峰(P<0.01),各14 d组PSD表达较3 d组增高(P<0.01,P<0.05),扎方及移植各14 d组SYN表达较7 d组减低(P<0.01)。结论:扎方可显著提高脑缺血再灌注损伤BMSCs移植后神经元突触结构可塑性,以二者联合作用显著,其机制可能与干预损伤后SYN,PSD-95的动态表达有关。

扎里奴思方干预骨髓间充质干细胞移植对脑缺血再灌注损伤大鼠黏附分子及NeuN表达的影响

目的:观察扎里奴思方(扎方)干预骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对大脑中动脉阻塞(MCAO)模型大鼠黏附分子及神经元核抗原(Neu N)表达的影响,并探讨其作用机制。方法:SD大鼠随机分为假手术组、模型组、扎方组、移植组和联合组;线栓法制备大鼠MCAO模型,体外全骨髓贴壁筛选法培养及扩增BMSCs;大鼠ig给药(14.6 g·kg^(-1)·d^(-1)),BMSCs悬浮液经颈内动脉移植入脑;移植后1,3,7,14 d取材,评价神经功能积分(NS),逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术检测血管细胞间黏附分子^(-1)(VCAM^(-1))和整合素α4mRNA表达,免疫组化法测Neu N表达。结果:MCAO模型大鼠NS及Neu N表达较假手术组显著降低(P<0.01),VCAM^(-1)及整合素α4mRNA表达显著增高(P<0.01);与模型组比较,扎方1,3,14 d移植3,7,14 d及联合各组NS增加(P<0.01,P<0.05),扎方、移植及联合各组Neu N增加(P<0.01),VCAM^(-1)及整合素α4mRNA降低(P<0.01);与移植组比较,扎方7 d组NS减小(P<0.05),联合1,3,14 d组NS增加(P<0.01),扎方1,3 d组VCAM^(-1)mRNA减少(P<0.01),扎方1,7,14 d组整合素α4mRNA减少(P<0.01),联合各组VCAM^(-1)及整合素α4mRNA均降低(P<0.01),扎方及联合各组Neu N增高(P<0.01);扎方与联合组比较,联合各组NS及Neu N表达增加(P<0.01),VCAM^(-1)和整合素α4mRNA表达降低(P<0.01);同组间比较,各组NS,Neu N及VCAM^(-1) mRNA均以7 d组变化显著,14 d有明显改善(P<0.01),整合素α4mRNA以3 d组变化显著,14 d可改善(P<0.01)。结论:脑缺血后神经功能及神经元均出现不同程度损伤;扎方和BMSCs移植均可不同程度改善脑缺血后神经功能及脑组织神经元状态,以二者联合作用显著,其机制可能与干预VCAM^(-1)及整合素α4动态表达有关。

扎里奴思方干预骨髓间充质干细胞移植对脑缺血再灌注损伤大鼠神经轴突再生的影响

目的:观察扎里奴思方(扎方)干预骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对大脑中动脉阻塞(MCAO)大鼠神经轴突再生的影响,并探讨其机制。方法:SD大鼠随机分为假手术组、模型组、扎方组、移植组和联合组;线栓法制备大鼠MCAO模型,体外全骨髓贴壁筛选法培养及扩增BMSCs;大鼠灌胃给药(14.6 g·kg^(-1)·d^(-1)),BMSCs经颈内动脉移植入脑;移植后1,3,7,14 d取材,蛋白质免疫印迹(Western blot)检测生长相关蛋白(GAP-43),神经微丝蛋白(NF^(-2)00),髓磷脂相关糖蛋白(MAG)和勿动蛋白-A(Nogo-A)蛋白表达。结果:模型组GAP-43,MAG及Nogo-A蛋白表达较假手术组明显增高(P<0.01),NF^(-2)00降低(P<0.01);与模型组比较,扎方3,14 d组、移植3,7,14 d组及联合各组GAP-43表达增高(P<0.05,P<0.01),扎方、移植及联合各组NF^(-2)00表达增高(P<0.01),MAG及Nogo-A降低(P<0.01);与移植组比较,扎方14 d组GAP-43,7 d组NF^(-2)00及1,3,14 d组MAG表达降低(P<0.05,P<0.01),3 d组Nogo-A降低(P<0.01),7 d组增高(P<0.05),联合各组GAP-43及1,14 d组NF^(-2)00表达增高(P<0.01),MAG,Nogo-A及7 d组NF^(-2)00表达降低(P<0.01);扎方与联合组比较,联合3,7,14 d组GAP-43及14 d组NF^(-2)00表达增高(P<0.01),各组MAG及Nogo-A表达降低(P<0.01);同组间比较,模型7 d组GAP-43及MAG表达增高(P<0.05,P<0.01),3 d组NF^(-2)00表达较1 d组增高(P<0.01),3 d组Nogo-A达高峰(P<0.01),扎方、移植及联合各14 d组GAP-43表达较7 d组增高(P<0.01),扎方及移植各7 d组NF^(-2)00表达较3,14 d组增高(P<0.01,P<0.05),联合3 d组NF^(-2)00表达较低(P<0.01),后逐渐增高(P<0.05),扎方、移植及联合各组MAG及Nogo-A表达呈先增后减趋势。结论:扎方可显著促进脑缺血再灌注损伤BMSCs移植后神经轴突再生,以二者联合作用显著,其机制可能与干预损伤后GAP-43,NF^(-2)00及MAG,Nogo-A的动态表达有关。

扎里奴思方对气虚血瘀型脑缺血再灌注大鼠宏观表征、血液流变学及神经细胞凋亡相关机制的影响

目的:通过建立气虚血瘀型脑缺血再灌注大鼠模型,探讨回药扎里奴思方对气虚血瘀型脑缺血再灌注大鼠宏观表征、血液流变学及神经细胞凋亡等相关机制的影响。方法:将170只SD大鼠随机分为正常组,假手术组,模型组,尼莫地平组,扎里奴思方高、中、低剂量组(29.2,14.6,7.3 g·kg-1);正常组、假手术组各10只,其余各组根据时间点分为3,7 d组,每组15只;除正常组外,其余各组均采用饥饿、疲劳、寒湿、惊恐及高脂饮食等多因素制备气虚血瘀型大鼠模型,于4周证候模型完成,给予大鼠ig给药4 d(正常组、假手术组及模型组给予等体积的生理盐水),复制局灶性脑缺血(MCAO)再灌注模型,观察各组大鼠的神经精神状况、体重、进食、舌质变化及排便情况;心脏取血进行血液流变学检测;原位末端转移酶标记法(TUNEL)法检测脑组织皮质区神经细胞凋亡情况。结果:与正常组比较,假手术组通过宏观表征的观察及血液流变学指标的检测,出现明显的气虚血瘀证候,说明证候模型复制成功;与假手术组比较,模型组在气虚血瘀的基础上出现明显的偏瘫样症状,神经功能评分显著升高(P<0.01),全血黏度明显升高(P<0.05,P<0.01),红细胞变形性指数明显降低(P<0.05)及红细胞聚集性指数和红细胞压积显著升高(P<0.01),大鼠神经细胞凋亡较显著(P<0.01);与模型组比较,扎里奴思方可显著改善气虚血瘀型脑缺血再灌注大鼠宏观表征,降低模型大鼠全血黏度、血红细胞压积、红细胞聚集性,提高红细胞变形性,并抑制脑组织细胞凋亡,尤以扎里奴思方高剂量7 d组作用显著(P<0.05,P<0.01)。结论:扎里奴思方对气虚血瘀型脑缺血再灌注大鼠损伤具有良好的保护作用,其机制可能与改善模型大鼠血液流变学、抑制脑组织神经细胞凋亡密切相关。