扎里奴思方对急性脑梗死患者血清NSE水平的影响

目的探讨扎里奴思方治疗急性脑梗死的疗效及可能机制。方法将同期收治的84例急性脑梗死患者随机分为治疗组及对照组各42例,两组均予甘露醇、拜阿司匹林、丹参酮等常规治疗,在此基础上治疗组予扎里奴思方1付/d,14 d为一疗程,总共治疗两个疗程;对照组给予尼莫地平片30mg/次,1/d。治疗前后分别行神经功能评估并据此判定疗效,同时检测治疗前后血清神经元特异性烯醇化酶(NSE)水平改变。结果两组治疗7、14、28 d后进行比较,治疗组总有效率显著高于对照组(P<0.05);治疗后两组血清NSE水平均降低,尤以治疗14d组为显著(P均<0.01)。结论扎里奴思方治疗急性脑梗死可显著改善患者预后,其可能机制与下调NSE的表达、促进神经元功能的修复有关。

回药扎里奴思方联合BMSCs移植对脑缺血再灌注大鼠BBB紧密连接蛋白的影响

目的观察扎里奴思方联合BMSCs移植对MCAO模型大鼠BBB上Occludin和Claudin mRNA表达的影响。方法 250只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、扎方组、移植组和联合组,除假手术组10只外,其余各组15只;线栓法制备MCAO模型,体外全骨髓贴壁法培养及扩增BMSCs;大鼠灌胃给药[14.6 g/(kg·d)],BMSCs悬浮液经颈内动脉移植入脑(2×106/200μl);移植后1 d、3 d、7 d、14 d取材,干湿重法检测脑含水量,Real timePCR技术检测Occludin和Claudin mRNA表达。结果模型大鼠脑含水量较假手术组增加(P<0.01),Occludin和Claudin mRNA表达降低(P<0.01);与模型组比较,扎方、移植及联合各3 d、7 d、14 d组脑含水量降低(P<0.01),各组各时间点Occludin和Claudin mRNA表达增高(P<0.01);与移植组比较,扎方1 d组脑含水量降低(P<0.05),3 d组Occludin mRNA表达增高(P<0.01),7 d组表达降低(P<0.01),扎方1 d组Claudin mRNA表达增高(P<0.05),7 d、14 d组表达降低(P<0.01),联合各组脑含水量均降低,以1 d、14 d明显(P<0.01),各组Occludin和Claudin mRNA表达均增高(P<0.01);扎方与联合组比较,联合各组脑含水量降低,以7 d、14 d组明显(P<0.01,P<0.05),Occludin和Claudin mRNA表达增高(P<0.01);同组间比较,均以7 d组变化显著,脑含水量呈先增后减趋势,Occludin和Claudin mRNA表达呈先减后增趋势,14 d有明显改善(P<0.01)。结论脑缺血再灌注损伤后BBB受损,通透性改变,脑水肿形成,以7 d最为明显;扎里奴思方和BMSCs移植均可不同程度改善脑缺血后脑水肿程度,以二者联合应用作用显著,其机制可能与干预Occludin和Claudin mRNA动态表达有关。

回医扎里奴思方对痰热腑实证脑缺血再灌注大鼠脑内细胞间黏附分子1和血管间黏附分子1表达的影响

目的探讨扎里奴思方对痰热腑实证脑缺血再灌注大鼠脑内细胞间黏附分子(ICAM)-1和血管间黏附分子(VCAM)-1表达的影响。方法将60只雄性大鼠随机分为假手术组、模型组、尼莫地平组、扎里奴思方组,每组15只;除假手术组外,其余各组均给予高脂喂养4 w后,予10%的自体粪便1 ml/100 g灌胃,1次/d,连续3 d,造成痰热腑实证模型,再采用线栓法制备大脑中动脉阻塞(MCAO)模型;大鼠给药剂量尼莫地平组10.8 mg/kg、扎里奴思方组1.54 g/ml,制备MCAO模型前3 d灌胃给药。大鼠分别于缺血再灌注后1、3、7 d取脑,取材前进行脑组织含水量测定,采用免疫组化法检测缺血侧海马区ICAM-1、VCAM-1的表达,RT-PCR检测ICAM-1 mRNA和VCAM-1 mRNA的表达。结果与假手术组比较,模型组脑组织含水量增高(P<0.01);ICAM-1、VCAM-1阳性细胞,ICAM-1 mRNA、VCAM-1 mRNA表达明显增高(P<0.01)。与模型组比较,尼莫地平组和扎里奴思方组脑组织含水量降低;ICAM-1、VCAM-1阳性细胞数减少,ICAM-1 mRNA、VCAM-1 mRNA表达降低(P<0.01)。与尼莫地平组比较,扎里奴思方7 d组脑组织含水量降低,ICAM-1、VCAM-1阳性细胞数减少,ICAM-1 mRNA、VCAM-1 mRNA表达降低(P<0.05)。结论扎里奴思方对痰热腑实证脑缺血再灌注大鼠脑神经元起保护作用,其机制可能与抑制大鼠脑内ICAM-1和VCAM-1的表达有关。

回医扎里奴思方对痰热腑实证脑缺血再灌注大鼠肿瘤坏死因子-α和内皮素-1表达的影响

目的探讨扎里奴思方对痰热腑实证脑缺血再灌注大鼠脑内肿瘤坏死因子(TNF)-α和内皮素(ET)-1表达的影响。方法将60只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、尼莫地平组、扎里奴思方组,每组15只。除假手术组外,其余各组均给予高脂喂养4 w后,再给予10%的自体粪便1 ml/100 g灌胃,1次/d,连续3 d,造成痰热腑实证模型;再采用线栓法制备大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)。大鼠给药剂量为尼莫地平组10.8 mg/kg、扎里奴思方组1.54 g/0.1 kg,制备MCAO模型前3 d灌胃给药。大鼠分别于缺血再灌注后1、3、7 d取脑;取材前进行脑组织含水量测定,采用免疫组化法检测脑缺血侧海马区TNF-α、ET-1表达,RT-PCR检测TNF-α mRNA和ET-1 mRNA的表达。结果与假手术组比较,模型组脑组织含水量增高(P<0.01)、TNF-α、ET-1阳性细胞和TNF-α mRNA、ET-1 mRNA表达明显增高(P<0.01);与模型组比较,尼莫地平组和扎里奴思方组脑组织含水量降低、TNF-α、ET-1阳性细胞数减少,TNF-α mRNA、ET-1 mRNA表达降低(P<0.01)。与尼莫地平组比较,扎里奴思方7 d组脑组织含水量降低、TNF-α、ET-1阳性细胞数减少和TNF-α mRNA、ET-1 mRNA表达降低(P<0.05)。结论扎里奴思方对痰热腑实证脑缺血再灌注大鼠脑神经元起保护作用,其机制可能与抑制大鼠脑内TNF-α和ET-1的表达有关。

扎里奴思方对MCAO缺血-再灌注损伤大鼠凝血及纤溶系统功能的影响

目的观察扎里奴思方对MCAO缺血-再灌注损伤大鼠凝血及纤溶系统功能的影响。方法应用改良的线栓法建立大鼠MCAO缺血-再灌注损伤模型。按神经功能评分随机分为空白对照组、假手术组、模型组,扎里奴思方低、中、高剂量组(剂量分别为0.35、0.70和1.40 g/kg,连续灌胃给药,于术后第7天采用重量法计算梗死区重量占全脑重量的比重,取血检测凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)、活化部分凝血酶原时间(APTT)、纤维蛋白原(Fib)、抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)及纤维蛋白(原)降解产物(FDP)含量。结果扎里奴思方中、高剂量组明显降低脑梗死比率(P<0.05)。与假手术组比较,模型组大鼠的TT、APTT时间明显缩短,AT-Ⅲ活性增强,Fib、FDP含量明显增高(P<0.05);与模型组比较,扎里奴思方组显著延长TT、APTT时间,减弱AT-Ⅲ活性,降低Fib、FDP含量(P<0.05),尤以扎里奴思方中、高剂量组作用显著。结论扎里奴思方可改善脑缺血再灌注损伤之后凝血-纤溶系统功能紊乱,这可能是其减小脑梗死的体积,减轻脑梗死后继发性的脑损伤,发挥治疗和保护脑缺血损伤作用的机制之一。

扎里奴思方对痰瘀互结型脑缺血再灌注大鼠血液流变学、血脂及自由基代谢的影响

【目的】探讨扎里奴思方对痰瘀互结型脑缺血再灌注大鼠血液流变学、血脂代谢的改善作用,以及对脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)含量的影响。【方法】将90只大鼠随机分为假手术组,模型组,尼莫地平组(剂量为10.8 mg/kg),扎里奴思方高、中、低剂量组(剂量分别为30、15、7.5 g/kg),每组15只;除假手术组外,其余各组均给予脂肪乳剂灌胃4周后,采用栓线法复制局灶性脑缺血(MCAO)再灌注模型。术后给药7 d,观察各组大鼠的一般情况、神经缺失症状、脑组织含水量,采用苏木素—伊红(HE)染色法观察脑组织病理学形态,腹主动脉取血进行血液流变学、血脂的检测,脑组织匀浆测定自由基代谢的水平。【结果】与假手术组比较,模型组大鼠神经功能评分显著升高,脑组织含水量显著增加,大鼠海马神经元出现典型缺血损伤表现,血液流变学中全血黏度、血浆黏度、红细胞压积、红细胞聚集指数显著升高,红细胞变形指数显著下降,血清中总胆固醇(TG)、甘油三脂(TC)、低密度脂蛋白(LDL-C)水平显著升高,高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)显著降低,脑组织中SOD、GSH-Px活性显著降低,MDA含量显著升高(均P<0.05或P<0.01);与模型组比较,扎里奴思方各剂量组均能改善痰瘀互结型脑缺血再灌注大鼠一般情况,改善神经功能学评分,减轻脑组织含水量,促进脑缺血组织细胞形态恢复;并能降低模型大鼠全血黏度、血浆黏度、红细胞压积、红细胞聚集性,提高红细胞变形性,降低血清TG、TC、LDL-C水平,提高缺血脑组织SOD、GSH-Px活性,降低MDA含量(均P<0.05或P<0.01),尤以扎里奴思方高剂量组作用显著。【结论】扎里奴思方对痰瘀互结型脑缺血再灌注大鼠损伤具有良好的保护作用,其机制可能与改善模型大鼠血液流变学、血脂和自由基代谢密切相关。

回药扎里奴思方对痰热腑实脑缺血模型大鼠血脂、血浆同型半胱氨酸及内皮素-1的影响

目的探讨回药扎里奴思方对痰热腑实脑缺血急性期再灌注模型大鼠脂质代谢、血浆同型半胱氨酸(Hcy)及内皮素(ET)-1的影响。方法将SD大鼠随机分为正常组,假手术组,单纯脑梗死组,痰热腑实模型组,尼莫地平组,扎里奴思方组,采用10%的自体粪便灌胃加高脂饮食的方法复制痰热腑实动物模型,采用改良线栓法复制脑缺血再灌注(MCAO)模型。再灌注2 h后按相应分组灌胃给药,观察大鼠神经功能评分及行为学改变,心尖取血测其血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、Hcy含量,免疫组化法及酶联免疫标记法测定脑组织中ET-1的含量。结果与模型组比较,各用药组神经功能缺损及痰热腑实症状明显改善,血清中TC、TG、HDL-C、LDL-C、Hcy及ET-1含量显著降低。结论扎里奴思方可降低痰热腑实脑缺血再灌注模型大鼠急性期血脂及Hcy水平,减少ET-1的表达,具有保护脑神经细胞的作用,并对痰热腑实型脑缺血有明显的改善作用。

回药扎里奴思方对脑缺血再灌注大鼠脑内ICAM-1与TNF-α表达的影响

目的:研究扎里奴思方对脑缺血急性期再灌注大鼠脑内细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和肿瘤细胞坏死因子-α(TNF-α)表达的影响。方法:将180只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、尼莫地平组、扎里奴思方组,每组45只,在第1天、第3天、第7天每个时间点各15只。除假手术组外,其余各组采用线栓法制备大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)模型,所有动物于手术前3天预防性给药,造模清醒后2 h按相应分组灌胃给药直至取材,给药剂量为尼莫地平组10.8 mg/kg,扎里奴思方组1.54 g/0.1 kg,模型组和假手术组以生理盐水灌胃,每天1次。采用ELISA法检测脑内ICAM-1和TNF-α的含量;RT-PCR法检测脑内ICAM-1 m RNA、TNF-αm RNA的表达。结果:与假手术组比较,模型组ICAM-1、ICAM-1 m RNA和TNF-α、TNF-αm RNA的表达明显增高,差异均有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,尼莫地平组和扎里奴思方组ICAM-1、ICAM-1m RNA和TNF-α、TNF-αm RNA的表达均降低,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01);与尼莫地平组比较,扎里奴思方1天、7天组ICAM-1、ICAM-1 m RNA和TNF-α、TNF-αm RNA的表达显著降低,扎里奴思方3天组ICAM-1、ICAM-1 m RNA、TNF-α的表达显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论:扎里奴思方对脑缺血再灌注大鼠脑神经元起保护作用,其机制可能与抑制大鼠脑内ICAM-1和TNF-α的表达有关。

回药扎里奴思方UPLC指纹图谱结合多成分含量测定的质控方法研究

目的建立扎里奴思方的UPLC-PDA指纹图谱及多成分含量测定方法。方法采用Waters ACQUITY UHPLC T 3(2.1 mm×100 mm,1.7μm)色谱柱,流动相为乙腈(A)-0.1%甲酸水溶液(B),梯度洗脱,流速0.4 mL/min,柱温30℃,检测波长317 nm;采用UPLC-PDA对其中9种物质进行含量测定。结果共确定扎里奴思方指纹图谱13个共有色谱峰,通过对照品比对出其中9个共有峰。10批样品指纹图谱相似度为0.923~0.983。9种物质在一定浓度范围内呈良好线性关系,r值均大于0.9990;含量测定结果表明肉桂酸、没食子酸含量较高。各物质回收率在98.82%~102.91%之间,RSD均小于2.52%;样品在24 h内稳定,重复性良好。结论建立了扎里奴思方指纹图谱分析方法及含量测定方法,该方法简便、重复性良好,可为进一步完善扎里奴思方质量控制方法提供参考。

扎里奴思方对脑梗死患者血管内皮功能的影响

目的:检测急性脑梗死患者使用扎里奴思方前后颈动脉内中膜厚度(IMT)、血管内皮依赖性舒张功能(FMD)、血清一氧化氮(NO)和血管内皮素-1 (ET-1)含量,观察扎里奴思方对急性脑梗死血管内皮功能的影响并阐明其作用机制。方法:选择动脉粥样硬化性脑梗死患者120例,随机分为2组各60例,2组均常规予以内科基础治疗,药物组加用扎里奴思方,每天1剂。运用美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评价用药前及用药12周后患者神经功能缺损程度;彩色超声诊断仪测定IMT;计算反应性充血后FMD;硝酸还原酶法测定血清NO水平;放免法测定血浆ET-1水平。结果:与治疗前比较,治疗后2组NIHSS评分均显著降低,差异均有统计学意义(P <0.01);与对照组比较,药物组患者NIHSS评分明显降低,差异有统计学意义(P <0.05)。与治疗前比较,治疗后2组NO、FMD水平均明显升高,ET-1、IMT水平明显降低,差异均有统计学意义(P <0.01,P <0.05);与对照组治疗后比较,药物组NO、FMD水平均明显升高,ET-1、IMT水平均显著降低,差异均有统计学意义(P <0.05,P <0.01)。结论:扎里奴思方治疗脑梗死疗效肯定,其作用机制可能与改善血管内皮功能有关。

扎里努思方对急性脑梗死患者血液流变学及血流动力学的影响

目的:评价扎里努思方对急性脑梗死患者血液流变学及血流动力学影响。方法:选取2018年6月-2020年6月宁夏医科大学第二附属医院神经内科及中医科收治的急性脑梗死患者作为研究对象,根据随机数表法分为扎里努思方治疗组(治疗组)65例和常规治疗组(对照组)65例。对照组采用内科常规基础治疗加服银杏叶提取物片,治疗组在对照组的基础上给予扎里奴思方治疗,两组均以14 d为1个疗程,治疗2个疗程,在治疗后的3个月随访1次。治疗前后采用美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评估并比较两组神经功能缺损程度,比较两组临床疗效、血液流变学指标水平及血流动力学指标。结果:治疗后,两组NIHSS评分均低于治疗前,且治疗组NIHSS评分明显低于对照组(P<0.05)。治疗组治疗总有效率高于对照组(P<0.05)。治疗后,两组血液流变学指标血沉、纤维蛋白原、血浆比黏度、全血还原黏度、全血低切黏度、全血高切黏度、血小板黏附率均低于治疗前,且治疗组均低于对照组(P<0.05)。结论:在常规西药治疗的基础上加用扎里努思方可进一步提高急性脑梗死疗效,降低血液黏度并提高脑部血流速度,进而改善神经功能。

扎里奴思方对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠血脑屏障通透性的影响

目的：研究扎里奴思方对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠血脑屏障通透性的影响。方法：SD大鼠随机分为假手术组、模型组、尼莫地平组、扎里奴思方组；线栓法制备大脑中动脉阻塞缺血再灌注模型；大鼠灌胃给药，于缺血再灌注后1，3，7，14d取脑，评价神经功能积分，干湿重法测脑含水量，免疫组化法测IgG表达变化。结果：与假手术组比较，缺血再灌注后脑含水量、IgG表达显著增高（P〈0．01，P〈0．05），神经功能积分明显降低（P〈0．01）；与模型组比较，尼莫地平组脑含水量、神经功能积分均有不同程度改善（P〈0．05），IgG表达有所下降，尤以3，7d明显（P〈0．01）；与尼莫地平组比较，扎里奴思方组脑含水量、IgG表达呈不同程度下调（P〈0．05），神经功能积分增大，尤以3，7d明显；扎里奴思方3，7d组与1d比较，IgG含量显著降低（P〈0．05）。结论：脑缺血再灌注损伤后1～7d可引起血脑屏障通透性增加，7d以后血脑屏障通透性逐渐恢复；扎里奴思方可有效降低缺血再灌注脑含水量及改善脑缺血后神经功能积分，降低IgG在脑内的表达量；其机制可能是通过调控血脑屏障的通透性，抑制有害物质进人脑内，从而发挥脑保护作用。

扎里奴思方对脑缺血再灌注损伤后大鼠脑内NGF表达的影响

目的:观察扎里奴思方对脑缺血再灌注损伤后大鼠脑内神经生长因子(NGF)表达的影响。方法:线栓法制备局灶性脑缺血再灌注大鼠模型。实验动物随机分为假手术组、模型组、扎里奴思方组、尼莫地平组。取材前进行神经功能评分。术后各组分别在1,3,7,14 d各个时间点取材,HE染色法观察大鼠脑组织病理学改变;免疫组织化学法测定大鼠脑内NGF的表达。结果:模型组大鼠神经功能评分降低,神经元数量减少,大小不均,病理损伤显著;与模型组比较,尼莫地平和扎里奴思方组神经评分增高,神经元数量增多,脑组织病理损伤减轻明显,NGF表达增高(P<0.01,P<0.05);与尼莫地平组比较,扎里奴思方14 d组神经功能评分和NGF表达明显升高(P<0.05)。结论:扎里奴思方可对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑组织神经元起保护作用,扎里奴思方14天组的脑保护作用更强,其脑保护作用机制可能与调节大鼠脑组织NGF表达有关。

回族药扎里奴思方联合骨髓间充质干细胞移植对脑缺血再灌注大鼠神经元及P-糖蛋白的影响

目的:观察扎里奴思方联合骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对脑缺血再灌注(MCAO)模型大鼠神经元及P-糖蛋白(P-gp)表达的影响。方法:250只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、扎方组(扎里奴思方组)、移植组和联合组(扎里奴思方和移植组),除假手术组10只外,其余各组再分为1,3,7,14 d组,分别为15只。大鼠术前4 d开始ig给药(14.6 g·kg-1·d-1,假手术组、模型组和移植组给予等体积的生理盐水),线栓法制备大鼠MCAO模型,体外全骨髓贴壁筛选法培养及扩增BMSCs,术后24 h,BMSCs悬浮液经颈内动脉移植入脑(2×106个/200μL);移植后1,3,7,14 d取材,观察海马CA1区神经元密度(ND)和脑组织病理损伤、免疫组化法测P-gp表达变化。结果:模型大鼠海马CA1区ND较假手术组明显降低(P<0.01),病理损伤明显(P<0.01,P<0.05),P-gp表达明显增高(P<0.01);与模型组比较,扎方、移植组3,7,14 d及联合各组ND增加(P<0.01,P<0.05),各组病理损伤减轻,以扎方、移植、联合组7,14 d明显(P<0.01,P<0.05),扎方、移植、联合各组P-gp表达降低(P<0.01);与移植组比较,扎方组1 d ND增高(P<0.01),14 d降低(P<0.05),联合各组ND均增高(P<0.01),联合组7,14 d病理损伤减轻(P<0.05),扎方组1,3,7 d P-gp表达降低,以1 d降低明显(P<0.05),14 d P-gp表达增高(P<0.05),联合各组P-gp表达均降低(P<0.01);扎方与联合组比较,联合各组上述指标均改善(P<0.01,P<0.05);同组间比较,均以7 d变化显著,14 d有明显改善(P<0.01)。结论:脑缺血后脑组织海马CA1区神经元密度及组织病理学均出现不同程度损伤;扎里奴思方和BMSCs移植均可不同程度改善脑缺血后脑组织神经元存活数量及状态,以二者联合作用显著,其机制可能与干预P-gp动态表达有关。

扎里奴思方水提液在大鼠血浆、胆汁、尿液和粪便中代谢产物鉴定

研究扎里奴思方在大鼠体内的代谢产物。采用超高效液相色谱-线性离子肼-静电轨道肼串联质谱联用方法(UHPLC-LTQ-Orbitrap-MS)对扎里奴思方在大鼠体内的代谢产物进行分析鉴定。采用ACQUITY UPLC BEH T3色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm),以0.1%甲酸水(A)-乙腈(B)为流动相进行梯度洗脱,在电喷雾质谱负离子模式下对生物样品进行分析。建立了大鼠给药后生物样品的分析方法,共鉴定了8个原型成分和36个代谢产物。结果表明,扎里奴思方主要成分在大鼠体内的代谢途径主要包括甲基化、葡萄糖醛酸化、硫酸化等。为进一步探讨扎里奴思方体内过程,阐明其功效物质基础提供依据。

扎里奴思方干预骨髓间充质干细胞移植对脑缺血再灌注损伤大鼠突触结构可塑性的影响

目的:观察扎里奴思方(扎方)干预骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对大脑中动脉阻塞(MCAO)模型大鼠突触结构可塑性的影响,并探讨其机制。方法:SD大鼠随机分为假手术组、模型组、扎方组、移植组和联合组;线栓法制备大鼠MCAO模型,体外全骨髓贴壁筛选法培养及扩增BMSCs;大鼠灌胃给药(14.6 g·kg^(-1)·d^(-1)),BMSCs悬浮液经颈内动脉移植入脑;移植后1,3,7,14 d取材,透射电镜观察神经元突触超微结构,蛋白质免疫印迹(Western blot)检测突触素(SYN),突触后致密蛋白-95(PSD-95)蛋白表达。结果:假手术组突触结构完整,前后膜轮廓及突触间隙清晰,可见多个突触小泡,均匀分布,模型各组突触数量减少,结构破坏,突触间隙模糊,突触小泡数量减少甚至消失。扎方组突触数量增多,结构接近正常,可见凹型及U型突触,3,7,14 d组突触小泡增多,14 d组突触间隙增宽。移植组突触超微结构变化与扎方组大致相同。联合组突触损伤明显减轻,突触数量增多,7,14 d可见多个凹型突触,突触小泡明显增多。模型各组SYN及PSD-95较假手术组减低(P<0.01);与模型组比较,联合各组及扎方、移植各7 d组SYN表达增高(P<0.01),扎方、移植各3,7,14 d组及联合各组PSD-95表达增高(P<0.01);与移植组比较,联合各组SYN,PSD-95表达增高(P<0.01,P<0.05),扎方3 d组PSD-95表达减低(P<0.01);扎方与联合组比较,联合各组SYN,PSD-95表达增高(P<0.01);同组间比较,模型、扎方、移植及联合各3 d组SYN表达较其他组减低(P<0.01),各7 d组PSD-95表达达高峰(P<0.01),各14 d组PSD表达较3 d组增高(P<0.01,P<0.05),扎方及移植各14 d组SYN表达较7 d组减低(P<0.01)。结论:扎方可显著提高脑缺血再灌注损伤BMSCs移植后神经元突触结构可塑性,以二者联合作用显著,其机制可能与干预损伤后SYN,PSD-95的动态表达有关。

回医扎里奴思方对脑缺血再灌注损伤大鼠骨髓间充质干细胞移植向神经样细胞分化的影响

目的:观察扎里奴思方对脑缺血再灌注损伤(CIRI)大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植向神经样细胞分化的影响。方法:SD大鼠随机分为假手术组、模型组、扎方组、移植组和联合组;线栓法制备大鼠MCAO模型,体外全骨髓贴壁筛选法培养及扩增BMSCs并于移植前48h用Brdu标记;大鼠灌胃给药(1.46g·100g^(-1)·d^(-1)),BMSCs悬浮液经颈内动脉移植入脑(2×106/200μL);移植后1、3、7、14d取材,免疫荧光双标检测Brdu、Brdu/NSE、Brdu/GFAP表达,Western blot检测NGF、GDNF蛋白表达。结果:模型各组NSE、GFAP、GDNF表达较假手术组增高(P<0.01),与本组1d比较,3、14d NGF表达升高(P<0.01);与模型组同期比较,扎方组3、7d NSE表达减低(P<0.01),14d增高(P<0.01),扎方组1、7、14d GFAP和GDNF表达增高(P<0.01),各组NGF表达增高(P<0.01),移植各组NSE、NGF、GDNF表达增高(P<0.01,P<0.05),3、7、14d组GFAP表达增高(P<0.01),联合各组以上指标均增高(P<0.01),移植及联合各组见Brdu、Brdu/NSE、Brdu/GFAP表达;与移植组比较,扎方组3、7、14d NSE和GFAP表达减低(P<0.01),扎方组1、3d NGF减低(P<0.01),各组GDNF减低(P<0.01),联合各组NSE和GFAP表达增高(P<0.01),Brdu、Brdu/NSE、Brdu/GFAP增多,各组NGF和GDNF表达增高,以1、14d组明显(P<0.01,P<0.05);扎方与联合组比较,联合各组以上指标均增高(P<0.01);同组间比较,各组NSE、GFAP和NGF均随时间增高,GFAP 7d达高峰,NGF 3d达高峰(P<0.01),模型和联合各组GDNF呈先增后减趋势,3d达高峰(P<0.01),扎方和移植各组呈递减趋势(P<0.01)。结论:扎里奴思方可显著促进CIRI后BMSCs脑内移植并向神经样细胞分化,促进损伤后神经再生修复,其机制可能与干预脑内NGF和GDNF的动态表达有关。

回药扎里奴思方联合骨髓间充质干细胞移植对脑缺血再灌注大鼠脑水肿及水通道蛋白4表达的影响

目的:观察扎里奴思方联合BMSCs移植对MCAO模型大鼠脑水肿及AQP4表达的影响。方法:SD大鼠随机分为假手术组、模型组、扎方组、移植组和联合组;线栓法制备大鼠MCAO模型,体外全骨髓贴壁筛选法培养及扩增BMSCs;大鼠灌胃给药,BMSCs悬浮液经颈内动脉移植入脑;移植后1、3、7、14d取材,评价神经功能积分,干湿重法测脑含水量、免疫组化法测AQP4表达变化。结果:模型大鼠神经功能评分较假手术组显著降低(P<0.01),脑含水量、AQP4表达显著增高(P<0.01);与模型组比较,扎方组1、3、14d,移植组3、7、14d及联合各组神经功能评分增高(P<0.01,P<0.05),扎方、移植及联合组各3、7、14d脑含水量及AQP4表达降低(P<0.01);与移植组比较,扎方组7d及联合组1、3、14d神经功能评分增高(P<0.01,P<0.05),扎方组1d、联合组1、14d脑含水量降低(P<0.05),联合各组AQP4表达降低(P<0.01);扎方组与联合组比较,联合组上述指标均明显改善,以7、14d变化显著(P<0.01);同组间比较,均以7d组变化显著,14d有显著改善(P<0.01)。结论:脑缺血后神经功能损伤,脑水肿和AQP4表达均呈先增后减变化趋势;扎里奴思方和BMSCs移植均可不同程度改善脑缺血后神经功能损伤和脑水肿程度,以二者联合应用作用显著,其机制可能与干预AQP4动态表达有关。

扎里奴思方干预骨髓间充质干细胞移植对脑缺血再灌注损伤大鼠黏附分子及NeuN表达的影响

目的:观察扎里奴思方(扎方)干预骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对大脑中动脉阻塞(MCAO)模型大鼠黏附分子及神经元核抗原(Neu N)表达的影响,并探讨其作用机制。方法:SD大鼠随机分为假手术组、模型组、扎方组、移植组和联合组;线栓法制备大鼠MCAO模型,体外全骨髓贴壁筛选法培养及扩增BMSCs;大鼠ig给药(14.6 g·kg^(-1)·d^(-1)),BMSCs悬浮液经颈内动脉移植入脑;移植后1,3,7,14 d取材,评价神经功能积分(NS),逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术检测血管细胞间黏附分子^(-1)(VCAM^(-1))和整合素α4mRNA表达,免疫组化法测Neu N表达。结果:MCAO模型大鼠NS及Neu N表达较假手术组显著降低(P<0.01),VCAM^(-1)及整合素α4mRNA表达显著增高(P<0.01);与模型组比较,扎方1,3,14 d移植3,7,14 d及联合各组NS增加(P<0.01,P<0.05),扎方、移植及联合各组Neu N增加(P<0.01),VCAM^(-1)及整合素α4mRNA降低(P<0.01);与移植组比较,扎方7 d组NS减小(P<0.05),联合1,3,14 d组NS增加(P<0.01),扎方1,3 d组VCAM^(-1)mRNA减少(P<0.01),扎方1,7,14 d组整合素α4mRNA减少(P<0.01),联合各组VCAM^(-1)及整合素α4mRNA均降低(P<0.01),扎方及联合各组Neu N增高(P<0.01);扎方与联合组比较,联合各组NS及Neu N表达增加(P<0.01),VCAM^(-1)和整合素α4mRNA表达降低(P<0.01);同组间比较,各组NS,Neu N及VCAM^(-1) mRNA均以7 d组变化显著,14 d有明显改善(P<0.01),整合素α4mRNA以3 d组变化显著,14 d可改善(P<0.01)。结论:脑缺血后神经功能及神经元均出现不同程度损伤;扎方和BMSCs移植均可不同程度改善脑缺血后神经功能及脑组织神经元状态,以二者联合作用显著,其机制可能与干预VCAM^(-1)及整合素α4动态表达有关。

扎里奴思方干预骨髓间充质干细胞移植对脑缺血再灌注损伤大鼠神经轴突再生的影响

目的:观察扎里奴思方(扎方)干预骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对大脑中动脉阻塞(MCAO)大鼠神经轴突再生的影响,并探讨其机制。方法:SD大鼠随机分为假手术组、模型组、扎方组、移植组和联合组;线栓法制备大鼠MCAO模型,体外全骨髓贴壁筛选法培养及扩增BMSCs;大鼠灌胃给药(14.6 g·kg^(-1)·d^(-1)),BMSCs经颈内动脉移植入脑;移植后1,3,7,14 d取材,蛋白质免疫印迹(Western blot)检测生长相关蛋白(GAP-43),神经微丝蛋白(NF^(-2)00),髓磷脂相关糖蛋白(MAG)和勿动蛋白-A(Nogo-A)蛋白表达。结果:模型组GAP-43,MAG及Nogo-A蛋白表达较假手术组明显增高(P<0.01),NF^(-2)00降低(P<0.01);与模型组比较,扎方3,14 d组、移植3,7,14 d组及联合各组GAP-43表达增高(P<0.05,P<0.01),扎方、移植及联合各组NF^(-2)00表达增高(P<0.01),MAG及Nogo-A降低(P<0.01);与移植组比较,扎方14 d组GAP-43,7 d组NF^(-2)00及1,3,14 d组MAG表达降低(P<0.05,P<0.01),3 d组Nogo-A降低(P<0.01),7 d组增高(P<0.05),联合各组GAP-43及1,14 d组NF^(-2)00表达增高(P<0.01),MAG,Nogo-A及7 d组NF^(-2)00表达降低(P<0.01);扎方与联合组比较,联合3,7,14 d组GAP-43及14 d组NF^(-2)00表达增高(P<0.01),各组MAG及Nogo-A表达降低(P<0.01);同组间比较,模型7 d组GAP-43及MAG表达增高(P<0.05,P<0.01),3 d组NF^(-2)00表达较1 d组增高(P<0.01),3 d组Nogo-A达高峰(P<0.01),扎方、移植及联合各14 d组GAP-43表达较7 d组增高(P<0.01),扎方及移植各7 d组NF^(-2)00表达较3,14 d组增高(P<0.01,P<0.05),联合3 d组NF^(-2)00表达较低(P<0.01),后逐渐增高(P<0.05),扎方、移植及联合各组MAG及Nogo-A表达呈先增后减趋势。结论:扎方可显著促进脑缺血再灌注损伤BMSCs移植后神经轴突再生,以二者联合作用显著,其机制可能与干预损伤后GAP-43,NF^(-2)00及MAG,Nogo-A的动态表达有关。