日本血吸虫重组信号蛋白14-3-3(rSj14-3-3)及其单克隆抗体用于诊断的价值

目的探讨纯化的日本血吸虫重组信号蛋白14-3-3(rSj14-3-3)及其相应单克隆抗体对日本血吸虫病的诊断价值。方法利用纯化的rSj14-3-3抗原和可溶性虫卵抗原(SEA)间接ELISA方法检测急、慢性日本血吸虫病患者血清中特异性抗体;以纯化的抗rSj14-3-3单克隆抗体包板,以兔抗rSj14-3-3多抗和酶标羊抗兔多抗为检测系统的酶标夹心法检测患者血清中的循环抗原。结果用rSj14-3-3检测急、慢性血吸虫病患者血清中特异性抗体的阳性率分别为100%和933%,用抗rSj14-3-3单克隆抗体检测循环抗原的阳性率分别为100%和956%,两者联合检测的总阳性率分别为100%和978%;经治疗后2、4、6、12个月,抗体转阴率分别为387%、548%、75%、90%,血清循环抗原转阴率分别为177%、419%、55%、85%,两者联合检测的总转阴率分别为452%、63%、85%、90%;对正常人血清的检测未见假阳性反应,与华支睾吸虫病和钩虫病患者血清出现轻微的交叉反应;用SEA检测抗体的阳性率分别为978%和956%,与正常人及华支睾吸虫病和钩虫病患者血清均有不同程度的交叉反应,治疗后2、4、6、12个月阴转率分别为32%、65%、125%、15%。结论rSj14-3-3检测急慢性血吸虫病患者血清中的特异性抗体和利用抗rSj14-3-3单克隆抗体检测循环抗原具有高度的特异性和敏感性。

抗rSj14-3-3单克隆抗体检测循环抗原及疗效考核价值的初步研究

目的 探讨抗重组日本血吸虫 14 3 3(rSj14 3 3)的单克隆抗体检测血吸虫循环抗原对血吸虫病疗效考核的价值。方法 制备纯化的抗日本血吸虫 14 3 3的单克隆抗体 ,以纯化的兔抗rSj14 3 3多抗和酶标羊抗兔多抗为检测系统的酶联免疫吸附试验 (P M ELISA)法 ,分别对同批治疗前及治疗后 2、4、6、12个月的血吸虫病患者和感染兔血清进行检测 ,并与常规检测抗体的可溶性虫卵抗原 -酶联免疫吸附试验 (SEA ELISA)法比较。结果 P M ELISA法对治疗前血吸虫病患者检测阳性率为 98 2 % ,而检测抗体的SEA ELISA为 95 5 %。P M ELISA法对治愈后 2、4、6、12个月血清循环抗原检测阴转率分别为 17 7%、4 1 9%、5 5 %、85 % ,而检测抗体的SEA ELISA法分别为 3 2 %、6 5 %、12 5 %、15 %。结论 该法既有较好的诊断价值 ,又有较好的疗效考核价值。

血吸虫生殖产卵相关基因pcDNA3/Sj SDISP DNA在小鼠体内的组织分布及整合的观察

目的探讨日本血吸虫生殖产卵相关基因DNA在小鼠体内组织分布以及整合到宿主基因组上的可能性。方法将生殖产卵相关基因重组质粒pcDNA3/Sj SDISP经肌注免疫小鼠后,在注射后12h、1w、3w和6w取小鼠各组织,抽提其基因组DNA进行PCR扩增,然后纯化基因组DNA进行PCR扩增,结果经琼脂糖凝胶电泳分析。结果注射后12h,在血液、心、肝、脾、肺、肾及注射部位肌肉中可检测到pcDNA3/Sj SDISP,至第1w,仍可在部分小鼠中检测到,至第3w不再检出。未发现生殖产卵相关基因pcDNA3/Sj SDISP整合入小鼠基因组中。结论肌注pcDNA3/Sj SDISP后,可在组织中广泛分布,但并未持续存在体内。未发现与宿主细胞基因组整合的直接证据。

日本血吸虫(中国大陆株)信号蛋白14—3—3编码基因重组质粒pET28a一Sj14—3—3的构建和鉴定

目的构建日本血吸虫(中国大陆株)信号蛋白14-3-3编码基因原核表达质粒pET28a-Sj14-3-3,测定Sj14-3-3基因序列,并为中国大陆株Sj14-3-3的体外表达奠定基础。方法采用RT-PCR技术从日本血吸虫中国大陆株成虫总RNA中扩增出Sj14-3-3基因,扩增产物经纯化后。用BamH I+Xho I双酶切,定向克隆入pET28a质粒,转化大肠杆菌DH5a,再用BamH I+Xho I双酶切及PCR扩增对重组子进行鉴定。用Sanger双脱氧链终止法进行DNA序列测定,并应用在线软件进行同源性比较及预测抗原表位。结果 PCR扩增产物约为765bp,符合预计大小,并成功地定向克隆到原核表达质粒pET28a,对插入片段的测序结果表明,该序列和推测的氨基酸序列与GenBank收录的日本血吸虫14-3-3基因分别有99.5％和99.2％的同源性。序列分析显示,Sj14-3-3基因序列中可能有抗原表位存在。结论 pET28a-Sj14-3-3重组质粒构建成功,为日本血吸虫5j14-3-3分子疫苗及信号转导研究奠定基础。

张扬青春的激情——点击双健SJ125-3摩托车

在众多外观迷人、性能卓越的国产中排量摩托车中,广东南海市豪达摩托车有限公司新推出的双健SJ125-3以其超凡脱俗的魅力和卓越出众的品质赢得了广大消费者的喜爱.双健SJ125-3在原有车型的基础上,经过改造与完善,更具时尚感,成为摩托车市场上让人心动的一款靓车.

日本血吸虫信号蛋白14-3-3的虫体免疫定位

目的 研究抗重组日本血吸虫信号蛋白 1 4 3 3(rSj1 4 3 3)单克隆抗体对天然Sjl4 3 3的结合活性 ,观察Sj1 4 3 3在虫体内的定位。 方法 从阳性钉螺体内逸出尾蚴 ,感染家兔 ,分别于感染后 1 5d和 4 2d剖杀 ,静脉灌注法收集童虫和成虫制备冰冻切片。利用rSj1 4 3 3单克隆抗体 ,间接免疫荧光法探讨信号蛋白 1 4 3 3虫体内的分布。 结果 免疫荧光染色结果显示 ,rSj1 4 3 3单克隆抗体可特异性地结合天然Sj1 4 3 3抗原表位 ,背景清晰 ,Sj1 4 3 3广泛分布在雌、雄成虫的皮层、皮下层、肌层和实质层 ,前三种组织中特异性荧光呈线状分布 ,实质中特异性荧光弥散 ;童虫中Sj1 4 3 3也广泛的分布在皮层、皮下层、肌层和实质层。 结论 免疫荧光染色成功地确定了Sj1 4 3 3蛋白在成虫和 1

苎麻新品种中苎3号的选育

中苎3号是中国农业科学院麻类研究所从厚皮种S2×玉山麻S2杂交后代中选育出来的早熟苎麻新品种。全国区域试验中,中苎3号原麻产量2800.58 kg/ha,比对照中苎1号增产6.33%,居参试品种第一位;纤维支数2084 N_m/m·g^(-1),比对照中苎1号高179 Nm/m·g^(-1),纤维品质优良。中苎3号所有产量构成因素均超过对照,且适应性好,抗倒性强,抗花叶病,中抗根腐线虫病。

日本血吸虫(大陆株)14-3-3epsilon同型信号转导蛋白诱导小鼠保护性免疫的研究

目的 探索日本血吸虫新的疫苗候选分子对小鼠的保护性免疫效果。方法 利用已构建的真核表达质粒 p BK-Sj14 -3 -3在大肠杆菌 BL2 1内表达的日本血吸虫 (大陆株 ) 14 -3 -3 epsilon同型融合蛋白质 ,免疫 6周龄 BAL B/c雌性小鼠 ,免疫 3次 ,每次间隔 2周 ,第 3次免疫后 2周感染尾蚴。42 d后剖杀小鼠 ,计算其减虫率和肝减卵率。结果 各免疫组与对照组相比 ,均获得了部分抗血吸虫保护性免疫力 ,第 1、2、3各免疫组的减虫率分别为 3 2 .7% (P<0 .0 5 )、3 0 .7% (P<0 .0 5 )、2 7.5 %(P<0 .0 5 ) ;其肝减卵率分别是 48.5 % (P<0 .0 5 )、43 .1% (P<0 .0 5 )、2 8.2 % (P<0 .0 5 )。结论 首次证明日本血吸虫 14 -3 -3 epsilon同型重组融合蛋白可诱导小鼠抗血吸虫感染的部分保护性免疫力。

日本血吸虫GST蛋白和14-3-3蛋白的研究进展

血吸虫病是严重危害人类健康的人兽共患病之一,在全球范围内,血吸虫病曾在76个国家和地区流行,有超过2亿人感染了血吸虫病。目前,世界上采取了一些人畜同步治疗等综合防治措施,虽取得了一定的成效,但仍面临着成本高、再感染率高等一系列问题。因此,寻找新的治疗药物、疫苗候选分子以及开发高度特异且敏感的标准化免疫诊断试剂是当前日本血吸虫病基础研究的重要内容。主要对WHO提出的最具潜力的疫苗候选分子血吸虫GST蛋白以及参与血吸虫许多生物学功能的14-3-3蛋白的最新研究进展进行一些阐述。

粪肠球菌介导的日本血吸虫重组Efs-Sj14-3-3疫苗构建、鉴定及表达

目的 构建粪肠球菌(Efs)为载体的日本血吸虫(Sj)重组Efs-Sj14-3-3疫苗,并研究其表达效率。方法 制备重组质粒pGEX-Sj14-3-3和粪肠球菌ATCC47077株感受态。采用电穿孔技术将重组质粒pGEX-Sj14-3-3转化粪肠球菌ATCC47077株,构建重组Efs-Sj14-3-3疫苗。抽提质粒进行PCR扩增鉴定;经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达后用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫印迹对表达产物进行分析和鉴定。结果 以从重组Efs-Sj14-3-3抽提的质粒为模板进行PCR,可扩增出约399 bp的Sj14-3-3基因片段,SDSPAGE显示表达产物为40×103 Mr的融合蛋白,表达蛋白约占菌体总蛋白的18%;免疫印迹表明融合蛋白能被日本血吸虫感染的患者血清识别。结论 成功构建了日本血吸虫重组Efs-Sj14-3-3疫苗,表达的融合蛋白具有特异的抗原性。

针刺中渚、后溪治疗坐骨神经痛160例临床观察

目的:探讨针刺中渚后溪治疗坐骨神经痛的临床疗效。方法:选取符合坐骨神经痛诊断标准的受试者160例,随机分为对照组与治疗组各80例,治疗组采用针刺中渚配后溪治疗,对照采用速效坐骨神经痛丸治疗。采用积分法比较两组主要症状体征的差异。结果:经过治疗,治疗组的患者治疗改善率明显优于对照组(P<0.05);随访3个月,治疗组复发病例17例,对照组复发41例,治疗组复发率明显低于对照组。结论:中渚配后溪具有疏经通络、解痉止痛的作用,治疗坐骨神经痛效果显著。

针刺穴位的脑功能磁共振成像研究——针刺中渚穴和阳陵泉穴与大脑皮质兴奋性的关系

目的应用功能性磁共振成像(fMRI)技术观察针刺手少阳经中渚穴(SJ3)和足少阳经阳陵泉穴(GB34)时大脑皮质兴奋区的分布特点,初步探讨经络、穴位作用的中枢机制以及针刺穴位过程中,不同针灸刺激时相对大脑皮质兴奋性的影响。方法将42例健康受试者(右利手)随机分为SJ3和GB34两组,利用fMRI技术实时动态扫描针刺SJ3和GB34时脑功能区的变化,最终所获得的数据采用SPM2软件包分析其作用部位。结果针刺SJ3引起的脑内主要兴奋区依次为双侧的额叶、颞叶、小脑和枕叶,针刺GB34引起的主要兴奋区依次为双侧的枕叶、小脑、额叶和颞叶。结论针刺SJ3和GB34时均可引起双侧听觉、视觉相关大脑皮质和双侧躯体运动区大脑皮质及小脑兴奋,这可能是临床治疗相关病症的中枢作用基础。

Sjogren—Larsson综合征ALDH3A2突变研究基因

目的检测2例以先天性鱼鳞病、智力发育迟缓及痉挛性截瘫为主要表现的Sjogren-Larsson综合征患者的ALDH3A2基因突变情况。方法2例分别为2岁女性及1．5岁男性儿童，家族中均无类似疾病。提取2例患者及其6例相关亲属（每例患儿的父母及哥哥）外周血DNA，采用PCR扩增ALDH3A2基因编码区的全部外显子及其侧翼序列并测序。同时随机抽取100例无关健康人外周血基因组DNA作对照。结果基因检测发现，例1的ALDH3A2基因发生c．325G〉A纯合突变，导致氨基酸出现P．Glyl09Arg改变，其父母及其未受累的兄长为该突变的杂合携带者。例2的ALDH3A2基因发生c．1157A〉G及c．1294A〉T复合杂合突变，导致氨基酸出现P．Asn386Ser及p．Arg432X改变，突变分别来自父母。100例健康对照者均未见相同突变。结论在2例Sjtigren—Larsson综合征患者中检测到ALDH3A2基因的P．Glyl09Arg纯合突变及P．Asn386Ser与P．Arg432X复合杂合突变，该基因突变可能与患者临床表型相关。

日本血吸虫26kDa谷胱甘肽S-转移酶基因真核表达载体的构建及序列测定

目的 扩增日本血吸虫 2 6 k Da谷胱甘肽 S-转移酶 (Sj2 6 GST)基因片段 ,构建其重组真核表达载体 ,以研制Sj GST核酸疫苗。方法 根据已知基因序列设计一对引物 ,运用 RT- PCR技术扩增 Sj2 6 GST目的基因片段 ,将其克隆到pc DNA3质粒中 ,并经酶切、PCR鉴定 ,测序证实。结果 获得 GST- pc DNA3重组克隆。结论 :本实验获得 Sj2 6 GST重组克隆 。

两种血吸虫病疫苗候选分子在原核细胞的融合表达

目的 在原核细胞中表达 Sj GST和 Sj14- 3- 3的融合蛋白。 方法 RT- PCR法从日本血吸虫成虫总 RNA中扩增出 Sj14- 3- 3基因 ,亚克隆至原核表达载体 p GEX- 4T- 1,并转化 E.coli BL2 1 ,IPTG诱导表达 ,Western- blot鉴定表达产物。 结果 扩增产物约为 76 5 bp,重组质粒经 Bam H 和 Xho 双酶切后可得到一与 PCR产物大小相同的 DNA片段 ,经 IPTG诱导后在 5 5 ku附近出现一新增蛋白条带 ,Western- blot结果显示 ,表达产物可被兔抗鼠 14- 3- 3ε多克隆抗体识别。 结论 在原核细胞融合表达 Sj GST和 Sj14- 3- 3成功。

日本血吸虫重组Bb(pGEX-Sj14-3-3-Sj32)疫苗的构建及其表达

目的构建和鉴定日本血吸虫重组Bb(pGEX-Sj14-3-3-Sj32)疫苗,并研究日本血吸虫Sj14-3-3-Sj32融合基因在两歧双歧杆菌中的表达情况。方法将重组质粒pGEX-Sj14-3-3-Sj32电转化至两歧双歧杆菌中,构建重组Bb(pGEX-Sj14-3-3-Sj32)疫苗,用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,表达产物用SDS-PAGE和Western blot进行分析鉴定。结果酶切、PCR证实重组质粒pGEX-Sj14-3-3-Sj32成功转入两歧双歧杆菌中,SDS-PAGE分析显示,诱导表达产物为相对分子质量(Mr)约73kDa的重组蛋白,与预期结果相符,表达的蛋白占菌体总蛋白的8.2%。Western blot显示日本血吸虫感染的兔血清可识别所表达的重组蛋白。结论成功构建日本血吸虫重组Bb(pGEX-Sj14-3-3-Sj32)疫苗,双歧杆菌可表达具有特异的抗原性的Sj14-3-3-Sj32重组蛋白。

Sj14-3-3在日本血吸虫病免疫诊断方面的研究进展

日本血吸虫病是一种人兽共患寄生虫病。诊断在血吸虫病防治中具有极其重要的地位,免疫学诊断技术因其良好的敏感性、特异性及实用性,成为当前血吸虫病的常用诊断手段。本文对日本血吸虫14-3-3应用于日本血吸虫病免疫诊断的主要研究进展进行综述。

日本血吸虫Sj14-3-3疫苗研究进展

日本血吸虫病是由日本血吸虫引起的一类严重危害人类健康的人兽共患寄生虫病,研制疫苗防治该病是目前的研究热点.Sj14-3-3蛋白是一种有效的疫苗分子,该文就Sj14-3-3蛋白疫苗和核酸疫苗的研究进展进行综述.

中渚穴古代文献应用分析

目的整理古代文献关于中渚穴的论述,总结中渚穴的应用规律。方法以《中华医典》(第5版)收录的1156部古籍为检索源,对中渚穴主治病证、腧穴配伍、刺灸法等文献进行整理,建立数据库。结果总结出中渚穴临床应用涉及古籍41部,文献条文211条,中渚穴配伍的使用频次为153次,与中渚配伍的腧穴136个,主要归于大肠经、三焦经、小肠经、膀胱经。结论中渚单穴主治优势病证7种,配伍主治优势病证12种,中渚优势配穴14个,分别为液门、合谷、曲池、阳溪、腕骨、尺泽、阳谷、百会、手三里、支沟、昆仑、前谷、关冲、外关。常用的针刺深度为针入2分,常用的灸量为灸3壮。

血吸虫照射疫苗特异性抗原分子的研究进展

血吸虫照射尾蚴疫苗能诱导宿主产生高效的免疫保护力,其中一种或数种特异性的抗 原分子可能起重要作用。本文就已知的数种血吸虫照射尾蚴疫苗特异性抗原分子的结构、功能及 免疫学特性进行综述。