芳香新塔花总黄酮通过调控PPARγ/LXRα/ABCA1通路对ApoE^(-/-)动脉粥样硬化小鼠肝脏脂质代谢紊乱的影响

目的探究芳香新塔花总黄酮对ApoE^(-/-)动脉粥样硬化小鼠肝脏脂质代谢及对PPARγ/LXRα/ABCA1通路的影响。方法60只ApoE^(-/-)小鼠给予高脂饲料喂养8周后随机分为模型组、阿托伐他汀组(3 mg/kg)及芳香新塔花总黄酮低、中、高剂量组(25、50、100 mg/kg),每组12只。灌胃给予相应剂量药物干预12周,给药同时继续饲喂高脂饲料;另取12只C57BL/6J小鼠为空白组,灌胃给予生理盐水,同时喂养普通饲料。给药结束后,油红O染色观察肝组织脂质沉积情况,HE染色观察主动脉斑块形态,全自动生化分析仪检测血脂水平,ELISA法检测血清IL-18、IL-1β、MCP-1水平,试剂盒检测肝组织TC、TG、NEFA、FC水平,Western blot法检测肝组织PPARγ、LXRα、ABCA1、ABCG1蛋白表达。结果与空白组比较,模型组肝脏脂滴面积增加(P<0.01),血清TC、TG、LDL-C、IL-18、IL-1β、MCP-1水平和肝组织TC、TG、NEFA、FC水平均升高(P<0.05,P<0.01),血清HDL-C水平和肝组织PPARγ、LXRα、ABCA1、ABCG1蛋白表达均降低(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,阿托伐他汀组和总黄酮中、高剂量组上述指标均有改善(P<0.05,P<0.01)。结论芳香新塔花总黄酮可抑制ApoE^(-/-)动脉粥样硬化小鼠肝脏脂质代谢水平,其机制可能与激活PPARγ/LXRα/ABCA1通路有关。

新疆芳香和帕米尔新塔花精油组成及其抗氧化的研究(英文)

优化水蒸气蒸馏法提取新疆芳香和帕米尔两种新塔花挥发油的最佳条件,利用气相色谱-质谱联用技术分析两种新塔花挥发油的化学成分和组成,研究两种新塔花挥发油的抗氧化能力。从芳香新塔花的地上部分提取的挥发油中分离鉴定出10种成分,占挥发油总量的99.7%以上。芳香新塔花的主要成分为长叶薄荷酮(80.7%)、薄荷酮(8.3%)、胡椒烯酮(4.9%)及异薄荷酮(2.6%)。从帕米尔新塔花的地上部分提取的挥发油中分离鉴定出29种成分,占挥发油总量的99.8%以上。帕米尔新塔花精油中主要含有长叶薄荷酮(45.9%)、异薄荷酮(24.1%)、(+)-新薄荷醇(10.1%)和百里香酚(9.4%)。通过与百里香酚,VC和BHT的对比,新塔花精油具有一定的抗氧化能力,能够有效清除DPPH·,超氧阴离子自由基和羟自由基;能够保护脂质体,抑制其过氧化;并且具有明显的清除亚硝酸盐的作用。结果表明,帕米尔新塔花精油的抗氧化效果优于芳香新塔花精油。

新塔花实时定量PCR内参基因的筛选和验证

目的:筛选出新塔花在不同组织(根、茎、叶、花)及脱落酸(ABA)处理不同时间的叶片中表达相对稳定的内参基因。方法:从新塔花转录组数据中搜索到5个看家基因ZbIF3G1、ZbGAPDH1、ZbEF1γ、ZbUBC9、ZbTUBα,将其作为新塔花相对实时定量PCR候选内参基因,并设计内参引物。利用实时荧光定量PCR获得5个候选内参基因的Ct值,通过3种基于不同算法的软件(GeNorm、NormFinder和BestKeeper)对内参基因稳定性进行分析。结果:ZbGAPDH1、ZbEF1γ的表达相对更为稳定,适合作为新塔花不同组织及ABA处理的基因表达研究的内参基因,并用新塔花ZbFLS、ZbCHI基因的表达分析实验进一步验证了上述预测。结论:确定ZbGAPDH1与ZbEF1γ为适合用于新塔花定量分析的内参基因,该研究为新塔花后续相关基因表达研究奠定了基础。

新塔花的组织培养与快速繁殖

以新疆特有药用植物新塔花(Ziziphora bungeana Juz.)幼嫩茎段为外植体材料,筛选初代培养、继代增殖与生根培养的条件,建立了新塔花组织培养与快速繁殖体系。结果表明:新塔花种子最适萌发培养基为MS+0.25 mg·L^(-1) NAA,萌发率达57.78%;茎段诱导腋芽最适培养基为MS+0.5 mg·L^(-1) 6-BA+0.1 mg·L^(-1) NAA,诱导率为90.47%;适宜芽增殖培养基为MS+0.5 mg·L^(-1 )6-BA+0.1 mg·L^(-1) NAA+0.3 mg·L^(-1) GA_3+35 g·L^(-1)蔗糖,20 d增殖系数达1.95;最佳诱导根生长培养基为1/2MS+0.5 mg·L^(-1) NAA+0.2%AC,生根率达60%,平均生根数为3.5,20 d株高达4.5 cm。移栽至混合基质(营养土:珍珠岩:蛭石=1:1:1)中,组培苗成活率为80.45%。

新塔花查耳酮合成酶基因克隆及表达分析

目的克隆新塔花Ziziphora bungena黄酮类化合物生物合成途径中关键酶查耳酮合成酶(chalcone synthase,CHS)基因,对其进行组织表达特异性分析,构建原核表达载体并进行重组蛋白诱导表达。方法结合新塔花转录组数据设计特异性引物,通过RT-PCR克隆新塔花查耳酮合成酶zbCHS基因,对其进行生物信息学分析,通过RT-PCR进一步分析其组织表达特异性,构建原核表达载体pET28a-chs,并转化至BL21(DE3)感受态细胞,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组蛋白的表达。结果zbCHS基因长1226 bp,包含一个长度为1176 bp的开放阅读框,编码319个氨基酸,其理论相对分子质量为42848.37。该编码蛋白定位于细胞质中,不存在跨膜区及信号肽,为非分泌蛋白,有1个糖基化位点和31个磷酸化位点。α-螺旋是该蛋白多肽链中大量的结构元件,散布于整个肽链之中。系统进化树分析表明,新塔花zbCHS基因与丹参、藿香、紫苏等亲缘关系最为接近。RT-PCR结果显示zbCHS基因在各组织中均有所表达,在叶中表达量较高,花相对表达量次之,根、茎中表达量相对较低。原核表达载体pET28a-chs在BL21(DE3)感受态细胞表达系统中,经IPTG诱导后,有明显的重组蛋白表达,其相对分子质量为42800,与预测相符合。结论通过对zbCHS基因的全长cDNA克隆、组织表达特异性分析和原核表达载体的构建,为进一步研究zbCHS基因在新塔花黄酮类化合物生物合成与基因调控提供依据,最终为该药材品质的提升奠定基础。