玉米ZmPti1在转基因拟南芥中的亚细胞定位

Pti基因不但在植物的抗病信号传导中起着非常重要的作用,而且玉米中一个类Pti1基因——ZmPti1还参与了植物抗盐的信号传递。为研究ZmPti1在植物体内亚细胞水平上的分布情况,进而对ZmPti1基因功能提供更全面的信息,利用绿色荧光蛋白基因(GFP)为报告基因,分别构建了以35S为启动子表达ZmPti1-GFP融合蛋白和GFP游离蛋白的植物表达载体pGreen0029-35S∷ZmPti1-GFP和pGreen0029-35S∷GFP。构建好的植物表达载体首先转化感受态的农杆菌菌株GV3101,再通过花浸蘸法侵染拟南芥,结果得到62株转基因拟南芥株系。在共聚焦激光扫描显微镜下观察ZmPti1在转基因拟南芥细胞中的定位。结果表明:ZmPti1是一个可溶性蛋白,定位在细胞质内。

玉米ZmPti1基因表达载体的构建及遗传转化

Pti1基因在植物的抗病信号传导中起着非常重要的作用。为了研究玉米中一个类Pti1基因ZmPti1的功能,把ZmPti1的cDNA连接到植物表达载体pGreen0029中,通过农杆菌介导转入拟南芥中进行过量表达。PCR及Western-blot分析表明,ZmPti1已经转入到拟南芥中,并且在大多数转化植株中稳定表达。通过试验,为以后对ZmPti1的生物学功能验证打下基础。

ZmPti1基因正义和RNAi表达载体的构建及其转化玉米的研究

构建了ZmPti1基因的正义表达载体和RNAi载体,以bar基因为抗性筛选标记,通过花粉管通道法将构建的两个表达载体分别转化到玉米自交系178。收获的种子播种于营养钵中,出苗后,经0.1%的草丁膦筛选得到40株草丁膦抗性植株,进一步用PCR鉴定与PCR-Southern检测得到33株转基因植株,其中15株是转化正义表达载体的转基因植株,18株是转化RNAi表达载体的转基因植株。并对转化方法和ZmPti1基因的功能进行了讨论。