凯氏定氮法与杜马斯燃烧法检测三氯乙酸沉淀大豆和小麦蛋白中蛋白氮含量研究

目的检验尿素干扰下三氯乙酸沉淀分离大豆和小麦蛋白质的效果。方法本研究以牛奶、大豆蛋白、小麦水溶性组分为参试样品,分别在去离子水、尿素溶液2种溶液体系下分散样品,参考国家标准采用三氯乙酸沉淀蛋白氮,2种蛋白检测方法(凯氏定氮法、杜马斯燃烧法)检测氮含量,并计算氮检测回收率评估三氯乙酸对大豆蛋白、小麦水溶性组分等植物性蛋白的适用性。结果去离子水(无外源氮)分散的上清液经三氯乙酸沉淀,凯氏定氮法和杜马斯燃烧法检测牛奶的回收率分别为114%、101%,大豆的回收率分别为96%、98%,小麦的回收率分别为104%、105%。尿素溶液(有外源氮)分散的上清液经三氯乙酸沉淀,牛奶的回收率分别为99%、94%,大豆的回收率分别为95%、92%,小麦的回收率分别为101%、92%。结论有无尿素干扰时,三氯乙酸均可以沉淀大豆蛋白、小麦水溶性组分中蛋白氮,并可以采用凯氏定氮法、杜马斯燃烧法检测,回收率较好。

基于蛋白沉淀光谱分析的核桃涩味评价技术研究

【目的】建立核桃内种皮涩味综合评价体系,为鲜食核桃品种选育提供理论依据。【方法】选用涩味差异明显的6个核桃品种(系),通过感官评价、内种皮水浸法和蛋白质化学沉淀法相结合的评价方式,初步建立核桃内种皮涩味综合评价技术体系。【结果】6个品种(系)的直接口感涩味值为5.83~9.27,分为差异显著的3类。水浸出物浓度为10 mg/mL时,依据水浸出物涩味值‘汾核4号’和‘ND-2’为一类,其余4个品种(系)各为一类。内种皮提取液浓度为20μl/mL时,蛋白沉淀在222 nm波长下吸光值差异最大,可将6个品种(系)分为差异显著的4类。内种皮化学沉淀吸光值与直接口感涩味值的相关系数为0.96,内种皮化学沉淀吸光值与10 mg/mL内种皮水浸出物涩味值相关系数为0.97,均呈极显著正相关。【结论】核桃内种皮提取液浓度为20μl/mL,222 nm波长条件下,通过蛋白质沉淀全光谱扫描,结合感官评价,可对核桃内种皮涩味进行有效评价。

不同提取方法对菜籽蛋白和亚麻籽蛋白品质特性的影响

旨在为菜籽蛋白和亚麻籽蛋白后续实际生产及加工应用提供参考依据,以菜籽饼和亚麻籽饼为原料,采用碱溶酸沉、乙醇浸提、酶解和盐析4种方法提取菜籽蛋白和亚麻籽蛋白,探讨了不同提取方法对菜籽蛋白和亚麻籽蛋白理化特性、结构特性及功能特性的影响。结果表明:乙醇浸提法提取的菜籽蛋白和亚麻籽蛋白提取率最高,分别为47.01%和48.19%,酶解法提取的菜籽蛋白和亚麻籽蛋白的纯度最高,分别为89.30%和83.20%;4种方法提取的菜籽蛋白和亚麻籽蛋白等电点均为4.4;不同提取方法对蛋白质的结构有不同程度的影响;盐析法提取的菜籽蛋白和亚麻籽蛋白的功能特性更佳,提取的两种蛋白的溶解度分别为68.19%和64.90%,持水性分别为58.00%和40.33%,持油性分别为57.00%和35.83%,起泡性分别为91.67%和89.29%,乳化性分别为71.38 m^(2)/g和32.75 m^(2)/g,乳化稳定性分别为65.33%和65.37%。综上,盐析法是一种适合工业化生产优质菜籽蛋白和亚麻籽蛋白的提取方法。

高效液相色谱法测定犬血浆中美洛昔康含量及其在生物等效性研究上的应用

建立沉淀蛋白法结合高效液相色谱法灵敏检测犬血浆中美洛昔康含量的分析方法,并将此方法成功应用于美洛昔康在犬体内的药动学和生物等效性研究。血浆样品采用乙腈沉淀蛋白处理后,采用Agilent SB C18(150 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱进行分离,以乙腈-1%甲酸水(80∶20,V∶V)为流动相进行梯度洗脱,检测波长为355 nm。应用该方法测定18只比格犬随机交叉进行颈部皮下注射0.2 mg/kg·bw的国产制剂和进口制剂的美洛昔康注射剂后的血药浓度,并计算药动学参数。结果显示:美洛昔康在0.050~3.2μg/mL的浓度范围内呈现良好线性关系(R^(2)≥0.999),回收率在98.7%~108.2%以内,批内、批间精密度均小于12%,样品稳定性良好,均满足分析检测要求。单剂量皮下注射美洛昔康注射液受试制剂AUC0-t、AUC0-∞、Cmax的90%CI为参比制剂相应参数的80.00%~125.00%范围内,受试制剂和参比制剂具有生物等效性。结果表明,建立的犬血浆中美洛昔康浓度测定方法准确、灵敏、选择性好、重现性高,可用于美洛昔康注射液在犬体内的生物等效性研究。

辣椒籽分离蛋白超滤提取工艺优化及特性表征

辣椒籽作为辣椒加工过程中的主要副产物,富含蛋白等营养物质,却未能得到有效利用。基于此,该研究以益都红辣椒籽为原料,采用超滤辅助碱溶酸沉法提取辣椒籽分离蛋白,并与传统碱溶酸沉法提取的辣椒籽分离蛋白的综合提取率、物料投入以及理化和功能特性进行对比。传统碱溶酸沉工艺提取辣椒籽分离蛋白的最佳工艺参数为料液比1∶40、提取温度40℃、提取时间180 min、浸提次数1次、碱溶pH 10。为提高蛋白提取量,减少调节pH的酸碱用量,改善分离蛋白的理化特性,采用5 kDa和10 kDa的双级膜超滤技术辅助碱溶酸沉法获得3个超滤组分,包括>10 kDa蛋白、5~10 kDa蛋白和<5 kDa蛋白,蛋白提取量较传统碱溶酸沉法提高5.28%,盐酸用量较传统碱溶酸沉法减少19.48%。相比于传统碱溶酸沉法提取的蛋白,>10 kDa蛋白的溶解度、持水力、乳化稳定性分别显著提高了9.88%、78.66%、22.69%,说明超滤辅助碱溶酸沉法能够获得理化特性更佳的辣椒籽分离蛋白,是一种具有应用前景的辣椒籽分离蛋白提取手段。

Liquid-liquid extraction pretreatment samples method used for pharmacokinetic study of rhubarb in rats after oral administrated

Objective:Pretreatment of biological samples is the most critical step in pharmacokinetic studies,especially pre-treatment of plasma samples.The pretreatment of biological samples in pharmacokinetic study of Traditional Chinese Medicines (TCM) is difficult due to the complexity of the ingredients.An organic solvent system ethyl acetate:acetone (10:1) solution used for liquid-liquid extraction has been developed in this study and compared with the commonly used protein precipitation method.Methods:Rats,Beagle dogs and humans plasma samples were adopted in this study in order to demonstrate the universality of the pretreatment method.Feasibility of this pretreatment method was also verified through its application to the pharmacokinetics of rhubarb in rats.Results:According to the results of extraction recovery matrix effect,it was indicated that the liquid-liquid extraction methods with new organic solvent might be suitable for variety of structures of compounds and various types of plasma samples.The pharmacokinetic study result showed that the developed pretreatment method could successfully be used for simultaneous determination of three active compounds modin,emodin-8-O-β-D-glucopyranoside (EDG) and rhein in rat plasma with high sensitivity,accuracy,and recovery by liquid chromatography tandem mass spectrometry (LC-MS/MS).Conclusion:The pretreatment method of liquid-liquid extraction methods with new organic solvent could be successfully applied for multi-component pharmacokinetics of TCM.

羊奶乳清蛋白的分离提取研究

为获得品质更好的羊奶乳清蛋白,以鲜羊奶为原料,分别采用离心法、酸等电点沉淀法(盐酸法、乙酸法和柠檬酸法)和乙醇分级沉淀法对羊奶中的乳清蛋白进行分离提取,通过测定所得乳清蛋白性质,评估各方法的分离提取效果。结果表明,酸沉淀法分离的乳清酪蛋白残留量较少,其中盐酸法提取的乳清酪蛋白去除率为(75.90±0.30)%。乙酸法获得乳清的粒径显著高于其他4种方法(P<0.05)。3种酸沉淀法提取乳清的Zeta电位无显著差异(P>0.05)。经过酸法提取的乳清中β-折叠结构转向了α-螺旋结构。离心和盐酸法提取的乳清中游离巯基含量显著高于乙酸法获得乳清(P<0.05)。综上,乙酸分离提取效果最佳,提取的乳清品质最好,是一种有效的、科学的羊奶乳清蛋白分离方法。

脱脂南极磷虾蛋白质提取条件优化

为探究脱脂南极磷虾蛋白质(Defatted Antarctic Krill Protein,DAKP)最佳提取条件,提高脱脂南极磷虾粉附加值。以脱脂南极磷虾粉为原料,采用碱溶酸沉法提取其蛋白质,以蛋白质得率为指标,对提取温度、提取时间、料液比、NaOH百分比浓度4个影响因素进行单因素试验并采用响应面法对提取工艺进行分析与优化。结果显示:通过响应面法优化得到DAKP实际最佳的提取条件为提取温度69℃、提取时间65 min、料液比1∶15、NaOH百分比浓度2.2%,通过验证试验得出此提取条件下实际蛋白质得率为31.93%±0.35%,与理论值32.32%相对误差为1.19%±1.01%。研究表明,该回归模型预测准确,可以用于指导生产实践,有利于提高脱脂南极磷虾粉附加值,推动南极磷虾产业的可持续发展。

植物蛋白提取技术研究进展

近年来,人们对食用蛋白的需求量日益增大,然而动物蛋白潜在的安全、环保等问题愈发凸显,因此性能优异且营养价值高的植物蛋白逐渐受到追捧。而植物蛋白通常被纤维薄膜包裹,难以被人体直接吸收,因此植物蛋白提取技术应运而生。本文从蛋白特性、植物来源、提取技术3方面对植物蛋白进行综述,重点总结了传统以及新兴的植物蛋白提取技术的原理、特征以及应用进展,旨在为植物蛋白提取技术的快速发展提供参考依据。

沉淀方法对污泥提取蛋白质的选择性及结构的影响分析

为提升污泥蛋白质的资源化利用,分别采用等电点沉淀法(Isoelectric Point Precipitation,IPP)、乙醇沉淀法(Ethanol Precipitation,EP)、硫酸铵沉淀法(Ammonium Sulfate precipitation,AS)以及联用沉淀法(Combined Precipitation,CP)分离蛋白质,用选择性因子α建立蛋白质、多糖、腐殖酸3者之间的数量关系,以考察不同沉淀方法中主导因素对蛋白质的选择性,并结合红外光谱分析其对蛋白质二级结构的影响以及蛋白质的应用潜能。结果表明:沉淀方法中的主导因素会对蛋白质的选择性及结构产生影响且所得蛋白质具有多重性。在主导因素pH=4.0、乙醇体积分数为40%、硫酸铵溶液饱和度为50%以及联用沉淀法时,蛋白质沉淀效率分别为84.76%、64.17%、65.84%和72.55%,选择性因子αPN/PS分别为3.11、4.22、3.80和6.51,均能显著分离蛋白质。在IPP、AS和CP分离得到的蛋白质中,污泥蛋白质以β-折叠结构为主。同时主导因素pH值与蛋白质中含醇羟基氨基酸的含量呈正相关;乙醇体积分数增加,蛋白质中含苯环氨基酸的含量减少,醇羟基氨基酸增加,且主要结构从β-折叠向α-螺旋转变;硫酸铵溶液饱和度的改变对蛋白质二级结构影响不显著。

香蕉皮蛋白质的制备及其组成分析

采用碱溶酸沉法提取香蕉皮粗蛋白,通过单因素试验考察液料比、提取液pH值、超声时间和提取温度4个因素对粗蛋白提取率的影响,在此基础上利用响应面法对提取条件进行优化。结果表明,香蕉皮粗蛋白最佳提取条件为:液料比5.5∶1 (mL/g),提取液pH值11.50,超声时间102 min,提取温度42℃,粗蛋白实际提取率为(52.27±1.35)%,相对误差为2.26%。香蕉皮粗蛋白纯度为(28.75±0.04)%,主要分子量为18 kDa~23 kDa,氨基酸种类和含量与香蕉果肉极为相似,具有抗氧化能力。

桑树叶蛋白提取及蛋白粉制备工艺

桑叶蛋白质的氨基酸种类齐全,是营养均衡的优质蛋白质资源。以桑叶粉为原料提取蛋白质并制备蛋白粉,选择桑叶干燥方法、桑叶蛋白浸提剂种类、桑叶蛋白提取液中的蛋白质沉淀分离方法等工艺条件进行单因素试验。结果表明,将桑叶自然晾干粉碎,以5 g/L Na OH溶液作为浸提剂,设定料液质量浓度为40 g/L,经超声波处理20 min后在40℃下浸提1 h获得桑叶蛋白提取液,再以1 mol/L HCl沉淀分离蛋白质,可使桑叶蛋白质的提取率达到14.42%,其中粗蛋白的质量分数可达49.58%,冷冻干燥获得的桑叶蛋白粉中总黄酮与多糖的质量比分别达到60.97 mg/g和12.32 mg/g。采用上述优化的工艺技术条件,可以提高桑叶蛋白质的提取率和制备出品质较优的桑叶蛋白粉。

不同等电点沉淀法和超速离心法提取牛奶乳清蛋白的双向电泳分析

为探索牛奶乳清蛋白提取的最适方法,以生鲜荷斯坦牛奶为对象,采用不同等电点(pH 4.6和pH 4.8)沉淀法和超速离心法提取牛奶乳清蛋白样品,并对提取效果进行双向凝胶电泳(two-dimensional electrophoresis,2-DE)图谱分析。依据凝胶图谱上蛋白斑点比较图谱质量,采用PDQuest 8.0凝胶图像分析软件进行凝胶图谱分析。结果显示:2种方法均能有效提取牛奶乳清蛋白,且获得的2-DE凝胶图谱背景清晰、蛋白点个体独立、无明显的拖尾现象,且重复性强,但都存在一定的酪蛋白残留。与超速离心法相比,pH 4.6沉淀法和pH 4.8沉淀法提取乳清蛋白的2-DE凝胶图谱可检测到较多的蛋白质斑点。pH 4.6沉淀法提取乳清蛋白制备的2-DE凝胶图谱中蛋白点的表达丰度略高于pH 4.8沉淀法。研究表明:pH 4.6沉淀法提取乳清蛋白制备2-DE凝胶图谱略优于pH 4.8沉淀法和超速离心法。但2种等电点沉淀法和超速离心法都可有效去除牛奶中的高丰度酪蛋白,提高低丰度蛋白的检出敏感性。

燕麦蛋白理化性质研究

以燕麦为原料,对碱提酸沉法提取的燕麦蛋白进行理化性质研究,分析了燕麦蛋白的溶解性、起泡性质、乳化性质、分子量分布、氨基酸组成和热变性。结果表明,在接近燕麦蛋白等电点处,溶解度最低,随pH增大溶解度逐渐升高。在等电点处,燕麦蛋白的起泡性最差,泡沫稳定性最好;偏离等电点燕麦蛋白的起泡性随着pH的增大先增加后减小,而泡沫稳定性稍有下降。燕麦蛋白的乳化性随pH的升高先减小后增大,在等电点附近乳化性最低;而乳化稳定性的变化规律正好相反。燕麦蛋白分子量分布主要集中在18.4~25.0 kDa和25.0~35.0 kDa 2个区间。燕麦蛋白氨基酸种类齐全,配比合理,是一种优质植物蛋白。运用DSC测出了燕麦蛋白的变性温度为102℃。

高效液相色谱法测定血浆中甲磺酸加替沙星的含量

目的 建立测定血浆中甲磺酸加替沙星浓度的高效液相色谱法。方法 待测血浆中加入内标环丙沙星后 ,以甲醇直接沉淀蛋白 ,进行高效液相荧光检测 ,色谱柱为ZorbaxSB C18,流动相为 0 .1mol·L-1磷酸盐缓冲液 甲醇 (6 8∶32 ) ,0 .1mol·L-1磷酸盐缓冲液中含有 0 .0 0 5mol·L-1离子对试剂氢氧化四丁基铵 (IPR A) ,pH值为 2 .35。流速 1.0mL·min-1,激发波长 2 95nm ,发射波长 4 95nm。结果 本测定方法的线形范围为 0 .0 6 2 5～ 1.0 0 0 0 μg·mL-1,r =0 .9990 ,日内、日间RSD均小于10 % ,回收率为 93.1%～ 94 .0 % ,血浆中甲磺酸加替沙星的最低检测限为 0 .0 313μg·mL-1。结论 本法精密、准确 ,适用于临床上血药浓度监测 ,人体药动学和生物利用度研究。

三氯醋酸-丙酮沉淀法用于骨组织蛋白的提取

目的探讨三氯醋酸-丙酮沉淀法提取骨组织蛋白的可行性和效率。方法采用盐酸脱钙法和三氯醋酸-丙酮沉淀法,分别用于骨组织蛋白的提取,并对两种方法的提取效率进行对比。结果三氯醋酸-丙酮沉淀法可获得较高的骨蛋白提取率,与盐酸脱钙法相比,分子条带分布范围相近,且不受骨髓造血组织影响。结论三氯醋酸-丙酮沉淀法可以用于骨组织蛋白质组的研究。

不同方式提取的燕麦蛋白功能特性比较

以燕麦粉为原料,分析碱提酸沉法提取的燕麦蛋白(AOP)和酶法提取的燕麦蛋白(EOP)的溶解性、起泡性、乳化性、氨基酸组成等功能特性。结果表明,在蛋白等电点,AOP与EOP的溶解性、起泡性和乳化性均达最小值,而乳化稳定性最高;AOP与EOP的溶解性、起泡性、泡沫稳定性和乳化性随NaCl浓度的增加基本都呈先升高后下降的趋势,而乳化稳定性随NaCl浓度的增加逐渐降低;AOP与EOP的氨基酸总量分别为57.27%,22.82%;EOP的溶解性、乳化性高于AOP,而AOP起泡性、泡沫稳定性、乳化稳定性及氨基酸总量均高于EOP。

HPLC法测定人血浆中吉非替尼的浓度

目的:建立一种简便、快速的高效液相色谱法测定人血浆中吉非替尼的浓度。方法:在100μL含待测药物的血浆中加入内标厄洛替尼和乙腈混匀沉淀蛋白。采用Agilent Eclipse XDB-C18柱(4.6 mm×150 mm,5μm),流动相为甲醇-10mmol.L-1醋酸铵溶液(70∶30),流速为1.0 mL.min-1,进样量为20μL,柱温为室温,分析时间为12 min。结果:吉非替尼在89.38～8938 ng.mL-1的浓度范围内线性关系良好(r>0.999),日内与日间精密度(RSD)<7.02%,准确度(RE)<±8.84%,所有稳定性考察结果均符合要求。结论:本文采用蛋白沉淀预处理方法以及高效液相色谱法测定人血浆中吉非替尼的浓度,能够满足临床试验中生物样品分析的需要。

燕麦蛋白提取分离的研究进展

全面介绍国内外燕麦蛋白质提取的研究动态,对碱提酸沉法、酶法、膜分离、复合提取法等方法进行了比较研究,分析了各自的优缺点。同时探讨了超声波、超滤、超临界萃取等新技术在燕麦蛋白质提取研究中的应用,并对今后燕麦蛋白的研究提出几点展望。

蛋白质沉淀－光度法测定橡子淀粉中单宁的含量

本文报道了用蛋白质沉淀—光度法测定橡子淀粉中单宁的含量，单宁在０～５０μｇ·ｍＬ￣（－１）范围内与吸光度值呈良好的线性关系（ｒ＝０．９９９５）；实验结果，其回收率为９８．１６％～１００．６６％，变异系数小于０．１７％（ｎ＝９）．与经典方法（目视比色法）相比．具有快速、简便、精确、样品用量少的特点，易于推广．