LncRNA PSMA3-AS1调节miR-140-3p/DDX5轴对肺癌细胞增殖、凋亡和上皮间质转化的影响

目的探讨长链非编码RNA人蛋白酶体α亚基3型的反义RNA1(PSMA3-AS1)调节miR-140-3p/DEAD box p68 RNA解旋酶(DDX5)轴对肺癌细胞增殖、凋亡和上皮间质转化(EMT)的影响。方法qRT-PCR、Western blot、免疫组化法分别检测40例肺癌组织和细胞系中PSMA3-AS1、miR-140-3p、DDX5表达。将A549细胞分为:control组、si-NC组、si-PSMA3-AS1组、si-PSMA3-AS1+inhibitor-NC组、si-PSMA3-AS1+miR-140-3p inhibitor组,qRT-PCR检测转染效率;MTT法、流式细胞仪、Transwell小室分别检测细胞增殖、凋亡、迁移与侵袭;Western blot方法检测增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、波形蛋白(vimentin)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)及DDX5蛋白的表达;双荧光素酶报告基因实验验证miR-140-3p与PSMA3-AS1和DDX5的关系;构建肺癌裸鼠模型,分为si-NC、si-PSMA3-AS1组,测量肿瘤质量与体积,qRT-PCR检测移植瘤组织中miR-140-3p表达,免疫组化法检测移植瘤组织Ki-67、DDX5蛋白表达。结果在肺癌组织/细胞系中,PSMA3-AS1 mRNA、DDX5蛋白表达升高,miR-140-3p mRNA表达水平降低(P<0.05);敲低PSMA3-AS1表达可显著抑制A549细胞增殖、迁移与侵袭,降低PCNA、MMP-2、vimentin、DDX蛋白表达,促进miR-140-3p、Bax、E-cadherin表达及细胞凋亡(P<0.05);下调miR-140-3p,可减弱敲低PSMA3-AS1对A549细胞增殖、迁移和侵袭能力的抑制作用及对细胞凋亡的促进作用(P<0.05);双荧光素酶报告基因实验证实miR-140-3p与PSMA3-AS1、miR-140-3p与DDX5存在靶向调控关系(P<0.05);体内实验显示,抑制PSMA3-AS1表达可显著降低移植瘤质量和体积,降低Ki-67、DDX5表达水平,升高miR-140-3p表达(P<0.05)。结论敲低PSMA3-AS可能通过调节miR-140-3p/DDX5轴,抑制肺癌细胞的增殖和EMT,促进细胞凋亡。

circVANGL1/miR-134-5p/CDCA3轴调控乳腺癌干细胞增殖、迁移、侵袭的机制研究

目的探讨circVANGL1/miR-134-5p/细胞分裂周期相关因子3(CDCA3)轴调控乳腺癌干细胞增殖、迁移、侵袭的机制。方法收集2021年2月至2023年11月治疗乳腺癌患者的乳腺癌组织及相对应癌旁组织。体外培养乳腺癌MCF-7细胞干细胞亚群,根据不同处理方法将其分为Con组、si-NC组、si-circVANGL1组、pcDNA组、pcDNA-circVANGL1组、miR-NC组、miR-134-5p组、anti-miR-NC组、anti-miR-134-5p组、si-circVANGL1+anti-miR-134-5p组、si-circVANGL1+pcDNA-CDCA3组。采用qRT-PCR检测circVANGL1、miR-134-5p和CDCA3 mRNA在乳腺癌组织、癌旁组织及各组乳腺癌干细胞中的表达水平;Western blot检测CDCA3、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达水平。双荧光素酶报告实验验证circVANGL1与miR-134-5p、miR-134-5p与CDCA3靶向关系;CCK-8实验检测乳腺癌干细胞增殖活性,划痕实验检测细胞迁移能力,克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,Transwell小室实验检测细胞侵袭能力。结果与癌旁组织比较,乳腺癌组织中circVANGL1、CDCA3 mRNA、CDCA3蛋白表达水平较高,miR-134-5p表达水平较低(P<0.05)。circVANGL1可靶向调控miR-134-5p的表达,miR-134-5p可靶向调控CDCA3蛋白的表达。干扰circVANGL1表达后,乳腺癌干细胞增殖活性、划痕愈合率、细胞克隆形成数、侵袭细胞数以及MMP-2、MMP-9蛋白表达水平均明显降低(P<0.05)。下调miR-134-5p表达或过表达CDCA3可部分逆转干扰circVANGL1对乳腺癌干细胞增殖、迁移、侵袭的作用(P<0.05)。结论circVANGL1可能通过miR-134-5p/CDCA3轴调控乳腺癌干细胞的增殖、迁移、侵袭。

LncRNA NEAT1通过miR-339-5p/ITGA3轴调控舌鳞状细胞癌增殖、迁移及侵袭的分子机制

目的:探讨LncRNA NEAT1通过miR-339-5p/ITGA3轴调控舌鳞状细胞癌细胞增殖、迁移及侵袭的分子机制.方法:采用qRT-PCR和Western免疫印迹检测25例人舌鳞状细胞癌组织、与其对应的癌旁组织、人正常口腔黏膜细胞株HOK和人舌鳞状细胞癌细胞株Tscca、CAL27、SCC15、HN13中NEAT1、miR-339-5p、ITGA3 mRNA和ITGA3蛋白的表达.分别构建抑制NEAT1和过表达miR-339-5p的CAL27细胞株.利用MTT法检测细胞活力,Transwell法检测细胞的迁移和侵袭能力,Western免疫印迹检测CyclinD1和MMP-9蛋白的表达.采用双荧光素酶报告基因验证NEAT1、miR-339-5p和ITGA3的靶向关系,通过Western免疫印迹和qRT-PCR检测其调控关系.采用SPSS 17.0软件包对数据进行统计学分析.结果:与人正常口腔黏膜细胞株HOK相比,人舌鳞状细胞癌细胞株中NEAT1和ITGA3表达上调,miR-339-5p表达下调.抑制NEAT1或过表达miR-339-5p均可显著抑制CAL27细胞的增殖、迁移和侵袭,显著抑制CyclinD1和MMP-9蛋白的表达.双荧光素酶报告基因证实NEAT1靶向作用miR-339-5p并下调其表达水平,miR-339-5p可靶向负调控ITGA3的表达.抑制NEAT1可逆转抑制miR-339-5p表达对CAL27细胞增殖、迁移及侵袭的抑制作用.结论:LncRNA NEAT1通过下调miR-339-5p/ITGA3轴,进而促进舌鳞状细胞癌细胞增殖、迁移及侵袭.

PDLIM5、SLC22A3和NKX3-1基因与前列腺癌患病风险的关联性研究

目的:探索PDLIM5基因(rs17021918,T)、SLC22A3基因(rs9364554,C)和NKX3-1基因(rs1512268,A)与中国人群前列腺癌(PCa)患病风险的关联。方法:采用病例-对照研究,包括124例PCa患者和138例正常对照者,对PDLIM5基因(rs17021918,T)﹑SLC22A3基因(rs9364554,C)和NKX3-1基因(rs1512268,A)进行两组间的等位基因及基因型差异分析,探讨各基因与患者的BMI、Gleason评分、PSA浓度、肿瘤分期、年龄等临床表型之间的关联。采用MDR方法进行基因-基因交互作用分析。结果:①PDLIM5﹑SLC22A3和NKX3-1基因的风险等位基因和基因型的频率在病例组和对照间组间的分布无显著性差异(P>0.05)。②3个位点与PCa的发病年龄、Gleason评分、PSA浓度以及病理分期等指标均无显著相关性(P>0.05)。③采用MDR方法分析PDLIM5基因、SLC22A3基因和NKX3-1基因的3个多态性位点的交互作用发现PDLIM5基因和NKX3-1基因之间,可能不存在有基因-基因交互作用,树状图分析说明PDLIM5基因与NKX3-1基因可能有协同作用。结论:PDLIM5、SLC22A3和NKX3-1基因可能与中国人群PCa患病风险无关联。而PDLIM5基因和NKX3-1基因之间对PCa患病风险的影响可能有协同作用。

热处理对喷射成形ZA35-3.5Mn合金电化学腐蚀性能的影响

为了探索热处理对喷射成形ZA35-3.5Mn合金电化学腐蚀性能的作用规律,采用组织观察、能谱分析及电位扫描技术对不同固溶和时效时间下合金的电化学行为进行了研究。结果表明:在3.5%NaCl溶液中,与未热处理合金相比,经过385℃/4 h固溶处理,富锰相全部回溶到基体,增大合金阳极极化,消除腐蚀微电池作用,腐蚀电流密度减小41.2%;再进行120℃/15 h时效处理,合金的腐蚀电流密度减小30.0%,耐腐蚀性增强。

ZA35-0.5Ni合金中的富镍相及合金电化学特性研究

为了确定ZA35-0.5Ni合金中析出相及其电化学特性,采用组织观察、XRD分析、极化曲线测定对ZA35-0.5Ni合金的富镍相进行了研究。结果表明:ZA35-0.5Ni合金中的富镍相为Ni3Al,在3.5%NaCl溶液中,α-Al最耐蚀,Ni3Al次之,η-Zn最差。ZA35-0.5Ni合金在NaCl溶液中发生电化学腐蚀的原因是晶内α-Al相和Ni3Al相作为阴极,而η-Zn相作为阳极,组成微电池,η-Zn相阳极溶解。

白头翁皂苷A3通过抑制巨噬细胞M2型极化增强结肠癌细胞对5-氟尿嘧的化疗敏感性

目的探讨白头翁皂苷A3通过调控巨噬细胞极化对5-氟尿嘧啶(5-FU)化疗敏感性的影响及其作用机制。方法利用白细胞介素(IL)-4和IL^(-1)3诱导巨噬细胞M2极化,采用CCK-8法检测白头翁皂苷A3对巨噬细胞增殖的影响;采用流式细胞术检测白头翁皂苷A3对巨噬细胞极化表型的影响;采用RT-PCR检测白头翁皂苷A3对巨噬细胞CD206,IL^(-1)0,CCL18,CCL22 mRNA表达的影响。收集M2巨噬细胞及白头翁皂苷A3干预M2巨噬细胞后的上清液作为条件培养基(CM)与5-FU共同作用于结肠癌SW480细胞。采用CCK-8法检测CM干预下5-FU对SW480细胞增殖的影响;采用Annexin-FITC/PI双染法及Western印迹法检测CM干预下5-FU对SW480细胞凋亡及凋亡蛋白Bax、活化的胱天蛋白酶3表达的影响。结果白头翁皂苷A3浓度<100 mg·L^(-1)时对巨噬细胞增殖无抑制作用,故选择50,75和100 mg·L^(-1)作为白头翁皂苷A3实验浓度。白头翁皂苷A3呈浓度依赖性降低CD206的阳性细胞表达比例,显著抑制M2巨噬细胞表面抗原CD206和极化因子IL^(-1)0,CCL18,CCL22 mRNA的表达(P<0.01)。白头翁皂苷A3100 mg·L^(-1)能明显提高了5-FU对SW480细胞的抑制率(P<0.05),同时提高了SW480细胞的凋亡率及促凋亡蛋白Bax和活化的胱天蛋白酶3的表达(P<0.05)。结论白头翁皂苷A3通过抑制巨噬细胞M2极化减弱了M2巨噬细胞对SW480细胞促凋亡蛋白Bax和活化的胱天蛋白酶3的抑制作用,从而降低M2巨噬细胞介导的SW480细胞对5-FU的化疗抵抗,提高了5-FU的化疗敏感性。

细胞色素P450诱导剂对Gibberella intermedia CA3-1双羟化去氢表雄酮的影响

3β,7α,15α-三羟基雄甾-5-烯-17-酮(7α,15α-diOH-DHEA)是女用口服避孕药"优思明"主要成分屈螺酮的关键中间体。为了提高目的产物7α,15α-diOH-DHEA的摩尔得率,研究不同细胞色素P450酶(CYP450)诱导剂对Gibberella intermedia CA3-1转化去氢表雄酮(DHEA)生成7α,15α-diOH-DHEA生物转化过程的影响。结果发现:己烷、DHEA和苯可以显著提高7α,15α-diOH-DHEA的摩尔得率,其中苯是最佳诱导剂。在以上工作基础上,建立了如下的诱导过程:将进入对数生长期(接种后24 h)的种子液以10%的接种量接种到新鲜的转化培养基中,转化12 h后添加体积分数0.8%的苯进行诱导,然后在对数生长期结束时(转化24 h)将8 g/L的底物加入转化培养基进行转化。采用以上诱导条件,在5 L发酵罐中进行了生物转化。与不添加苯的工艺相比,CYP450的浓度提高了43%,7α,15α-diOH-DHEA的摩尔产率提高到68.7%±1.37%,同时转化周期缩短了8 h,这为7α,15α-diOH-DHEA的工业化生产奠定基础。

拟南芥赤霉素相关突变体ga3-1和ga5-1营养生长时相转变

为探究营养时相转变过程中赤霉素所起到的作用,对拟南芥赤霉素相关晚花突变体ga3-1和ga5-1生长过程中叶片的形态,大小,远轴面表皮毛,茎顶端分生组织形态以及生长周期等特征进行研究。结果表明,在拟南芥营养时期时相转变过程中,ga5-1和ga3-1突变推迟开花,且延迟了幼龄期到成熟期的营养生长时相转变。

lncRNA GATA3-AS1靶向miR-515-5p对儿童急性淋巴细胞白血病细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨长链非编码RNA(lnc RNA)GATA3反义RNA1(GATA3-AS1)靶向mi R-515-5p对儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)细胞增殖和凋亡的影响。方法:RT-q PCR检测对照者和ALL患儿血浆中GATA3-AS1和mi R-515-5p的表达水平。将人ALL细胞Jurkat分为si-GATA3-AS1、si-NC、mi R-NC、mi R-515-5p、si-GATA3-AS1+anti-mi R-NC和si-GATA3-AS1+anti-mi R-515-5p共6组。CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术分析细胞凋亡,双荧光素酶报告实验用于确定GATA3-AS1和mi R-515-5p的靶向关系。结果:ALL患儿血浆中GATA3-AS1表达水平显著高于对照者(P<0.001),mi R-515-5p表达水平显著低于对照者(P<0.001)。与si-NC组比较,si-GATA3-AS1组细胞抑制率、凋亡率、mi R-515-5p表达水平显著升高(P<0.001)。与mi R-NC组比较,mi R-515-5p组细胞抑制率、凋亡率显著升高(P<0.001)。GATA3-AS1与mi R-515-5p直接特异性结合。与si-GATA3-AS1+anti-mi R-NC组比较,si-GATA3-AS1+anti-mi R-515-5p组细胞抑制率、凋亡率显著降低(P<0.001)。结论:下调GATA3-AS1可通过靶向上调mi R-515-5p的表达抑制儿童ALL细胞增殖,并诱导细胞凋亡。

lncRNA PSMA3-AS1靶向miR-3619-5p调控宫颈癌SiHa细胞增殖、迁移及侵袭的分子机制研究

目的探讨lncRNA PSMA3-AS1调控宫颈癌细胞增殖、迁移及侵袭的分子机制.方法收集2020年3月至2021年6月西安医学院第二附属医院收治的42例宫颈癌患者的癌组织及其癌旁组织标本,采用qRT-PCR法检测宫颈癌组织、癌旁组织、人宫颈上皮永生化细胞H8、与人宫颈癌细胞系SiHa、HeLa、Cas-ki中lncRNA PSMA3-AS1、miR-3619-5p的表达量;以SiHa细胞为研究对象,分组为:si-NC组、si-lncRNA PSMA3-AS1组、miR-NC组、miR-3619-5p组、anti-miR-NC+si-lncRNA PSMA3-AS1组、anti-miR-3619-5p+si-lncRNA PSMA3-AS1组;MTT法与Transwells实验分别检测每组SiHa细胞的增殖活力、迁移及侵袭能力;双荧光素酶报告实验检测miR-3619-5p过表达对野生型载体lncRNA PSMA3-AS1-WT、突变型载体lncRNA PS-MA3-AS1-MUT荧光素酶活性的影响;Western印迹检测MMP2、MMP9蛋白表达量.结果宫颈癌组织中lncRNA PSMA3-AS1的表达量比癌旁组织增加(P<0.01),miR-3619-5p的表达量比癌旁组织减少(P<0.01);与H8细胞比较,SiHa、HeLa、Caski细胞中lncRNA PSMA3-AS1的表达量升高(P<0.01),miR-3619-5p的表达量降低(P<0.01);与si-NC组比较,si-lncRNA PSMA3-AS1组细胞活力和MMP2、MMP9蛋白水平降低(P<0.05),迁移及侵袭细胞数减少(P<0.05);与miR-NC组比较,miR-3619-5p组细胞活力和MMP2、MMP9蛋白水平降低(P<0.01),迁移及侵袭细胞数减少(P<0.05);miR-3619-5p过表达可抑制lncRNA PSMA3-AS1-WT的荧光素酶活性(P<0.01),而未能影响lncRNA PSMA3-AS1-MUT的荧光素酶活性;与anti-miR-NC+si-lncRNA PSMA3-AS1组比较,anti-miR-3619-5p+si-lncRNA PSMA3-AS1组细胞活力和MMP2、MMP9蛋白水平升高(P<0.01),迁移及侵袭细胞数增多(P<0.01).结论干扰lncRNA PSMA3-AS1表达可通过促进miR-3619-5p而降低宫颈癌细胞增殖、迁移及侵袭能力.

腺苷A3受体活化对溃疡性结肠炎患者结肠黏膜5-羟色胺的影响

目的探讨腺苷A3受体(A3AR)对溃疡性结肠炎(UC)患者结肠黏膜5-羟色胺(5-HT)的影响及其机制。方法选择2016年6月—2018年1月在香港大学深圳医院就诊并行结肠镜检查的患者,其中活动期UC患者18例(UC组),健康体格检查者11名(对照组)。经结肠镜检查获取UC组和对照组的结肠黏膜组织,取部分UC组的结肠黏膜组织,在其培养基中加入1-[2-氯-6-[[(3-碘苯基)甲基]氨基]-9H-嘌呤-9-基]-1-脱氧-N-甲基-β-D-呋喃尿酰胺(2-Cl-IB-MECA,100 nmol/L)处理24 h(UC+2-Cl-IB-MECA组),对照组和另一部分UC组的结肠黏膜组织仅以培养基孵育。采用ELISA法测定结肠黏膜TNF-α和IL-1β水平、5-HT含量和释放量,采用免疫荧光法检测A3AR、5-HT和5-HT合成酶色氨酸羟化酶1(TPH1)在结肠黏膜中的表达,荧光显微镜下观察肠嗜铬细胞(EC细胞)数,采用Western印迹法定量检测A3AR和TPH1蛋白质的表达。结果 UC组结肠黏膜A3AR蛋白质相对表达量为1.27±0.19,显著低于对照组的2.43±0.25(P<0.01)。UC组和UC+2-Cl-IB-MECA组的TNF-α和IL-1β水平均显著高于对照组(P值均<0.01),而UC+2-Cl-IB-MECA组的TNF-α和IL-1β水平均显著低于UC组(P值均<0.01)。UC组和UC+2-Cl-IB-MECA组的EC细胞数和5-HT含量均显著多于对照组(P值均<0.01),而UC+2-Cl-IB-MECA组EC细胞数和5-HT含量均显著少于UC组(P值均<0.01)。UC组和UC+2-Cl-IB-MECA组结肠黏膜TPH1蛋白质水平均显著高于对照组(P值均<0.01),而UC+2-Cl-IB-MECA组结肠黏膜TPH1蛋白质水平显著低于UC组(P值均<0.01)。UC组和UC+2-Cl-IB-MECA组结肠黏膜5-HT释放量均显著高于对照组(P值均<0.01),而UC+2-Cl-IB-MECA组结肠黏膜5-HT释放量显著低于UC组(P<0.01)。结论 A3AR的激活可减轻UC患者的结肠黏膜炎性反应,其抗炎作用可能通过减少结肠黏膜5-HT的合成和释放而介导。A3AR可作为UC的治疗靶点。

miR-215-5p通过靶向NCOA3基因抑制固始鸡腹部前脂肪细胞的增殖和分化

为揭示miR-215-5p在固始鸡腹部脂肪沉积中的作用机制,本研究采用实时荧光定量PCR,分析了miR-215-5p在14周龄固始鸡8种组织和腹部前脂肪细胞分化过程的表达特征;通过miR-215-5p mimics和inhibitors转染试验,利用CCK-8、EdU、油红O染色、甘油三酯含量测定等方法,分别评价了miR-215-5p对固始鸡腹部前体脂肪细胞增殖和分化的影响。结果表明:miR-215-5p在固始鸡腹脂和皮脂等组织中高表达,在前脂肪细胞分化过程具明显时序表达特征;当转染miR-215-5p mimics后,前体脂肪细胞中增殖标志基因CDK1和PCNA表达水平极显著下降(P<0.01)、细胞周期阻滞因子p21表达水平极显著升高(P<0.01),EdU阳性细胞比例和前脂肪细胞总数极显著降低;同时,可显著抑制脂肪细胞分化标志基因PPARG、CEBPA、FABP4和LPL的表达,减少脂肪细胞内脂滴生成和甘油三酯含量。与此不同,miR-215-5p inhibitors转染前脂肪细胞后,在增殖和分化上获得与miR-215-5p mimics转染后相反的结果。同时,采用双荧光素酶报告基因系统,验证了mi-R-215-5p的靶基因,过表达miR-215-5p可抑制核受体辅激活因子3(nuclear receptor coactivator 3,NCOA3)基因3′-UTR区荧光活性,而突变NCOA3基因3′-UTR区与miR-215-5p种子序列的结合位点可解除其抑制效果。上述结果证明,miR-215-5p可抑制固始鸡腹部前脂肪细胞的增殖和分化,且在脂肪细胞分化过程中直接靶作用于NCOA3。因此,miR-215-5p是固始鸡腹部脂肪形成的一个负调控因子。

miR-186-5p负性调控CDCA3对高脂高糖诱导的胰岛β细胞具有保护作用

目的探讨miR-186-5p通过细胞分裂周期相关因子3 (cell division cycle associated 3 protein,CDCA3)调控高脂高糖诱导的胰岛β细胞增殖和凋亡的作用及机制。方法以胰岛β细胞NIT-1为对象,利用高脂高糖诱导损伤,CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术评估细胞凋亡,Western blot分析细胞核相关抗原Ki-67(Ki-67)、增殖细胞核抗原(PCNA)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达,实时定量PCR(qRT-PCR)测定miR-186-5p、CDCA3 mRNA表达。生物信息学预测和双荧光素酶活性检测miR-186-5p与CDCA3的靶向关系。在NIT-1细胞中转染miR-186-5p或si-CDCA3,并进行高脂高糖处理,观察其对细胞增殖、凋亡的影响。结果高脂高糖明显降低NIT-1细胞的细胞活力,Ki-67、PCNA、Bcl-2蛋白表达,以及miR-186-5p表达,同时显著提高细胞的凋亡率和Bax蛋白表达,以及CDCA3 mRNA和蛋白表达(P<0.05)。miR-186-5p靶向负调控基因CDCA3。过表达miR-186-5p或敲减CDCA3明显增加高脂高糖损伤的NIT-1细胞的细胞活力及Ki-67、PCNA、Bcl-2蛋白表达,显著降低高脂高糖损伤的NIT-1细胞的凋亡率和Bax蛋白表达(P<0.05)。结论 miR-186-5p通过靶向负性调控CDCA3基因表达,促进高脂高糖诱导的胰岛β细胞的增殖,抑制细胞凋亡,从而保护高脂高糖诱导的胰岛β细胞损伤。

酸枣仁提取物调控miR-7b-3p/5-羟色胺1A受体表达促进骨生长

背景:前期研究发现,酸枣仁提取物通过提高脑组织5-羟色胺1A受体(serotonin 1A receptor,5-HT1AR)表达,使之与5-羟色胺结合,延长小鼠慢波睡眠,促进生长激素的分泌,从而使骨生长。5-HT1AR作为一种蛋白质,其表达丰度受到miRNA的调控。作者推测酸枣仁提取物可能通过miRNA调控5-HT1AR的表达从而发挥药物作用。目的:观察酸枣仁提取物通过干预小鼠脑组织中miR-7b-3p/5-HT1AR通路对骨骼生长的影响。方法:①将昆明种小鼠分为正常对照组、用药组(灌胃酸枣仁提取物0.320 mg/g),阳性对照组(灌胃酸枣仁皂甙0.013 mg/g)和酸枣仁提取物+5-HT1AR抑制剂组(灌胃酸枣仁提取物最后3 d同时每天侧脑室注射5-HT1AR选择性抑制剂P-MPPF 8μg),25 d后观察酸枣仁提取物对小鼠骨生长、血清生长激素水平及脑组织5-HT1AR表达的影响;②基因芯片法筛选由酸枣仁提取物引起的骨生长小鼠与普通小鼠脑组织差异表达的miRNAs,并通过PCR验证和双荧光素酶报告基因实验证实筛选的miR-7b-3p与5-HT1AR的调控关系;③体外培养小鼠脑皮质细胞并鉴定,利用Western blot法观察酸枣仁提取物对脑皮质细胞中5-HT1AR表达的影响;④将昆明种小鼠分为正常对照组、用药组、miR-7b-3p inhibitor组、用药+miR-7b-3p mimics组、阳性对照组,观察各组小鼠脑组织5-HT1AR表达及5-羟色胺与5-HT1AR结合活性;⑤将SD大鼠分为正常对照组、用药组、miR-7b-3p inhibitor组、用药+miR-7b-3p mimics组、阳性对照组,观察各组大鼠慢波睡眠的变化。结果与结论:①酸枣仁提取物可以促进小鼠体长、胫骨增长,促进生长激素分泌,提高脑组织5-HT1AR含量;②基因芯片筛选出差异表达的miRNAs个数为16个,其中上调有13个,下调有3个;生物信息学预测下调miR-7b-3p可以调控5-HT1AR表达,且双荧光素酶报告基因实验证实二者有直接调控关系;③酸枣仁提取物和沉默脑皮质细胞中miR-7b-3p表达可以引起5-HT1AR高表达;沉默miR-7b-3p后小鼠脑组织5-HT1AR表达、5-羟色胺与5-HT1AR结合活性及生长激素分泌均升高;过表达miR-7b-3p后小鼠脑组织5-HT1AR表达、5-羟色胺与5-HT1AR结合活性及生长激素分泌均降低;大鼠慢波睡眠期也相应延长或缩短。结果表明,酸枣仁提取物能够降低脑组织的miR-7b-3p水平,同时增加5-HT1AR的表达量。这种机制有助于延长慢波睡眠周期,并且促进生长激素的生成,对骨骼生长有积极影响,为使用酸枣仁提取物作为促进骨骼生长的潜在手段提供了科学依据。

LncRNA PSMA3-AS1调节miR-186-5p/SOX4轴对神经母细胞瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探索长链非编码RNA人蛋白酶体α亚基3型的反义RNA1(long non-coding RNA PSMA3-AS1,lncRNA PSMA3-AS1)对神经母细胞瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响以及对微小RNA-186-5p(microRNA-186-5p,miR-186-5p)/性别决定区Y框蛋白4(sex determining region Y box protein 4,SOX4)轴的调控机制。方法利用LipofectamineTM3000试剂将si-PSMA3-AS1及其阴性对照、miR-186-5p inhibitor及其阴性对照分别转染至人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y中,随机分为Control组(未转染质粒)、si-NC组(转染si-PSMA3-AS1阴性对照)、si-PSMA3-AS1组(转染si-PSMA3-AS1)、si-PSMA3-AS1+miR-NC组(共转染si-PSMA3-AS1和miR-186-5p inhibitor阴性对照)、si-PSMA3-AS1+miR-186-5p inhibitor组(共转染si-PSMA3-AS1和miR-186-5p inhibitor)。采用qRT-PCR法检测各组细胞中PSMA3-AS1、miR-186-5p和SOX4 mRNA的表达水平;Western blot检测各组转染细胞中SOX4蛋白的表达水平。采用CCK-8法、Transwell实验检测各组转染细胞的增殖、迁移及侵袭能力。采用生物信息学方法预测和双荧光素酶报告基因实验验证miR-186-5p与PSMA3-AS1和SOX4之间的靶向关系。结果相较于Control组和si-NC组,si-PSMA3-AS1组细胞中的PSMA3-AS1表达水平、细胞存活率、迁移及侵袭细胞数均降低(均P<0.001)。双荧光素酶报告基因实验结果显示,PSMA3-AS1能靶向负调控miR-186-5p,而miR-186-5p能靶向负调控SOX4。敲低PSMA3-AS1后细胞的miR-186-5p表达水平升高,而SOX4 mRNA和蛋白表达水平均降低(均P<0.001)。回补实验发现,相较于si-PSMA3-AS1+miR-NC组,si-PSMA3-AS1+miR-186-5p inhibitor组SOX4 mRNA及蛋白表达水平、细胞存活率、迁移及侵袭细胞数均升高(均P<0.001),而miR-186-5p表达水平降低(P<0.001)。结论敲低PSMA3-AS1可能通过调节miR-186-5p/SOX4轴抑制神经母细胞瘤细胞的增殖、迁移及侵袭行为。

乳腺癌组织lncRNA CASC2、miR-532-3p表达水平与患者术后5年内生存的相关性

目的探究乳腺癌(BC)组织长链非编码RNA癌易感性候选基因2(lncRNA CASC2)、微小RNA-532-3p(miR-532-3p)表达与患者术后5年内生存的相关性。方法选择2015年1月—2018年6月大同市第五人民医院普通外科收治BC患者127例,术中收集BC组织及癌旁正常组织,荧光定量PCR法检测BC组织和癌旁正常组织中lncRNA CASC2、miR-532-3p表达;对BC患者术后进行为期5年的随访,记录患者5年内生存和死亡情况。比较癌旁正常组织和BC组织lncRNA CASC2及miR-532-3p表达,BC组织中lncRNA CASC2和miR-532-3p表达在不同临床病理特征中的差异,生存组和死亡组临床病理特征和BC组织中lncRNA CASC2及miR-532-3p表达的差异。分析BC组织lncRNA CASC2、miR-532-3p表达的相关性;BC组织中lncRNA CASC2和miR-532-3p表达与术后5年内生存的关系;影响BC患者术后5年内生存的因素;lncRNA CASC2、miR-532-3p对BC患者术后5年内生存的预测价值。结果BC组织中lncRNA CASC2表达水平低于癌旁正常组织,miR-532-3p表达水平高于癌旁正常组织(t/P=38.239/<0.001,49.406/<0.001);肿瘤直径≥2 cm、TNM分期Ⅲ期、肿瘤低分化、淋巴结转移者比例lncRNA CASC2低表达组高于高表达组,而miR-532-3p低表达组低于高表达组(lncRNA CASC2:χ^(2)/P=17.361/<0.001、17.052/<0.001、14.694/<0.001、13.173/<0.001;miR-532-3p:χ^(2)/P=10.733/0.001、9.813/0.002、10.134/0.001、7.444/0.006);127例BC患者术后随访5年,生存99例(生存组),死亡28例(死亡组),肿瘤直径≥2 cm、TNM分期Ⅲ期、肿瘤低分化、淋巴结转移者比例及miR-532-3p表达水平死亡组高于生存组,而lncRNA CASC2表达水平死亡组低于生存组[χ^(2)(t)/P=5.211/0.022、27.149/<0.001、27.990/<0.001、4.590/0.032、19.155/<0.001、10.818/<0.001];BC组织中lncRNA CASC2与miR-532-3p表达呈负相关(r/P=-0.561/<0.001);lncRNA CASC2高表达组BC患者术后5年内总生存率为89.23%(58/65),高于lncRNA CASC2低表达组66.13%(41/62)(χ^(2)/P=9.854/0.002);miR-532-3p高表达组BC患者术后5年内总生存率为65.57%(40/61),低于miR-532-3p低表达组89.39%(59/66)(χ^(2)/P=10.466/0.001);肿瘤直径≥2 cm、TNM分期Ⅲ期、肿瘤低分化、有淋巴结转移、lncRNA CASC2低表达、miR-532-3p高表达均是影响BC患者术后5年内生存的独立危险因素[HR(95%CI)=2.255(1.192~4.263)、2.143(1.252~3.666)、3.089(1.386~6.887)、2.219(1.223~4.026)、2.606(1.174~5.788)、2.855(1.592~5.120)];lncRNA CASC2、miR-532-3p及二者联合预测BC患者术后5年内生存的AUC分别为0.840、0.852、0.908,二者联合预测的AUC大于lncRNA CASC2、miR-532-3p各自单独预测的AUC(Z/P=2.246/0.025、2.033/0.042)。结论BC组织中lncRNA CASC2表达下调,miR-532-3p表达上调,且术后5年内死亡的BC患者较存活患者变化更显著,二者表达与临床病理特征相关,对预测BC患者术后5年内生存情况价值较高。

hsa-circ-002179靶向miR-143-3p调控自噬-凋亡平衡在胃癌5-氟尿嘧啶化疗耐药性中的作用研究

目的探究hsa-circ-002179靶向miR-143-3p调控自噬-凋亡平衡对胃癌的5-氟尿嘧啶(5-Fu)化疗耐药性的影响。方法通过5-Fu处理AGS细胞构建5-Fu耐药细胞模型(AGS/5-Fu),采用CCK8法检测5-Fu对AGS和AGS/5-Fu细胞活性的影响,采用荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞中hsa-circ-002179和miR-143-3p的表达;通过流式细胞术和Western blot分别检测细胞凋亡水平与自噬相关蛋白LC3、Beclin-1和p62的表达。同时,通过软件预测hsa-circ-002179与miR-143-3p的结合位点,并采用RIP和双荧光素酶实验验证其结合作用。结果与对照组比较,耐药组的细胞活性[(172.33±9.53)%比(106.00±6.16)%,P<0.01]和自噬水平升高、凋亡率(20.5%比43.8%,P<0.01)降低,hsa-circ-002179表达升高[(4.46±0.34)比(1.05±0.66),P<0.01];转染si-002179后,耐药细胞活性降低[(80.00±2.45)%比(102.67±7.13)%,P<0.05],而凋亡水平升高(31.3%比21.8%,P<0.05)。RIP和双荧光素酶报告实验证实hsa-circ-002179与miR-143-3p直接结合,且与对照组比较,耐药细胞中miR-143-3p的表达降低[(0.38±0.05)比(1.04±0.07),P<0.01]。并且,hsa-circ-002179能够调控miR-143-3p的水平。同时,miR-143-3p抑制剂处理能够升高转染si-002179后的耐药细胞自噬水平。自噬抑制剂处理降低了耐药细胞的自噬水平和细胞活性,升高凋亡水平;在此基础上转染OE-002179则升高自噬水平和细胞活性,降低凋亡水平,进一步转染miR-143-3p模拟物可以逆转以上变化。结论hsa-circ-002179靶向miR-143-3p可能可以调控自噬-凋亡平衡,进而影响胃癌细胞的5-Fu化疗耐药性。

腺苷A3受体激动剂对新生期母婴分离肠易激综合征大鼠内脏高敏感的作用

目的研究腺苷A3受体在新生期母婴分离肠易激综合征(IBS)大鼠模型内脏高敏感中的作用。方法采用新生期Sprague-Dawley雄性大鼠和母婴分离方法建立内脏高敏感模型,分别用腺苷A3受体激动剂2-Cl-IB-MECA及DMSO溶剂作用后,用行为学观察和腹部回缩反射评分来检测内脏痛反应,用免疫组化方法检测腰骶段脊髓背角神经元c-fos蛋白的表达数量和远端结肠中5-羟色胺阳性细胞数目,用ELISA方法检测远端结肠中5-羟色胺的含量。结肠行常规组织学检测。结果与DMSO组比较,2-Cl-IB-MECA组大鼠在40、60和80 mmHg结直肠压力扩张下的AWR评分显著减低(P<0.05),脊髓背角c-fos蛋白免疫反应阳性神经元数目显著减少(P<0.05),结肠黏膜5-羟色胺阳性细胞数目和5-羟色胺含量均显著减少(P<0.05)。两组大鼠在结直肠压力扩张前后,结肠均未见组织损伤或炎症。结论腺苷A3受体激活可能通过减少结肠5-羟色胺的作用未减轻IBS大鼠模型的内脏高敏感,腺苷A3受体可能是治疗IBS内脏高敏感的新靶点。

lncRNA HCP5靶向miR-409-3p对皮肤鳞状细胞癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的:探讨lncRNA HCP5靶向mlR-409-3p对皮肤鳞状细胞癌(CSCC)细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:采用qRT-PCR法检测CSCC细胞(SCC13、A431、HSC-5)中HCP5和miR-409-3p的表达情况,筛选用于实验的CSCC细胞。将抑制HCP5表达的质粒si-HCP5及其对照(si-NC)、过表达miR-409-3p的miR-409-3p模拟物及其对照(miR-NC)、抑制HCP5和miR-409-3p的si-HCP5+anti-miR-409-3p及其对照(si-HCP5+anti-miR-NC)分别转染SCC13细胞。采用CCK-8法和Transwell实验检测SCC13细胞增殖、迁移、侵袭能力,Western blot法检测细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶(MMP)2、MMP9蛋白表达水平。通过双荧光素酶报告基因实验验证HCP5和miR-409-3p的靶向关系。结果:SCC13细胞中HCP5表达最高,miR-409-3p表达最低(P<0.05)。抑制HCP5表达后SCC13细胞增殖能力降低,细胞迁移数和侵袭数减少,CycIinD1、MMP2、MMP9蛋白表达水平降低(P<0.05)。过表达miR-409-3p后SCC13细胞增殖能力降低,细胞迁移数和侵袭数减少,CycinD1、MMP2、MMP9蛋白表达水平降低(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验结果显示lncRNA HCP5和miR-409-3p存在靶向关系。抑制miR-409-3p表达可减弱HCP5低表达对SCC13细胞增殖以及迁移、侵袭能力的影响(P<0.05)。结论:抑制HCP5可通过靶向促进miR-409-3p表达来抑制CSCC细胞增殖、迁移和侵袭。