质粒介导aac(6')-Ib基因检测与喹诺酮类耐药

目的了解大肠埃希菌临床株对喹诺酮类抗菌药物耐药情况并分析质粒介导aac(6')-Ib基因存在与喹诺酮类药物耐药性的关系。方法采用纸片扩散法(K-B)对临床中段尿分离所得121株大肠埃希菌进行耐药性检测,聚合酶链反应(PCR)法检测大肠埃希菌aac(6')-Ib基因,对aac(6')-Ib基因阳性菌株扩增片段进行DNA测序并确定基因型。结果大肠埃希菌临床株对萘啶酸、环丙沙星、诺氟沙星、左氧氟沙星4种喹诺酮类抗菌药物耐药率均高于75%。aac(6')-Ib基因检出率为14.0%(17/121),经DNA测序确定aac(6')-Ib基因变异体(cr)有14株,突变率为82.4%(14/17);aac(6')-Ib基因阳性株对氨苄西林-舒巴坦、哌拉西林-他唑巴坦、头孢唑啉、头孢克洛、头孢呋辛、阿米卡星、环丙沙星、诺氟沙星、左氧氟沙星耐药率高于阴性株且差异有统计学意义(P<0.05)。结论仁济医院临床分离大肠埃希菌对喹诺酮类抗菌药物耐药情况严重;质粒介导aac(6')-Ib基因的存在可使大肠埃希菌对喹诺酮类抗菌药物耐药性提高;质粒介导aac(6')-Ib基因还可能引起细菌对β-内酰胺酶抑制剂药物和头孢菌素类药物敏感性下降。

大肠埃希菌临床分离株aac(6)′-Ib-cr基因的检测

目的:了解温州地区大肠埃希菌临床株中质粒介导的喹诺酮类耐药基因aac(6)′-Ib-cr的分布、耐药情况。方法:收集温州医学院附属第一医院环丙沙星耐药的大肠埃希菌临床株60株,应用PCR方法检测其aac(6)′-Ib基因,琼脂稀释法检测菌株的耐药情况,DNA测序aac(6)′-Ib-cr基因变异体,用接合传递试验方法验证细菌质粒介导的耐药性的可转移性。结果:60株大肠埃希菌临床株检出10株aac(6)′-Ib,其扩增产物进行测序,结果表明4株菌在第223位(T→C或T→A)发生变异,均携带aac(6)′-Ib-cr基因;这4株菌接合传递试验成功,临床株对喹诺酮类的耐药性传递给了受体株。结论:温州地区aac(6)′-Ib-cr介导的喹诺酮类耐药的大肠埃希菌较普遍存在。

产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌中检出aac(6′)-Ⅰb-suzhou型基因

目的了解质粒介导的喹诺酮耐药基因在产超广谱β-内酰胺酶(ELBLs)大肠埃希菌的耐药特点及耐药机制。方法用纸片扩散法检测59株产ESBLs的大肠埃希菌对11种抗生素的敏感性,采用聚合酶链反应(PCR)检测qnrA、qnrB和qnrS、qnrC、aac(6′)-Ⅰb及qepA基因,并对扩增阳性基因qnrB、aac(6′)-Ⅰb测序后进行BLAST比对分析。结果 59株产超广谱β-内酰胺酶的大肠埃希菌共检出qnrB 3株(5.1%)、aac(6′)-Ⅰb 22株(37.3%),qnrB经测序证实为qnrB4,aac(6′)-Ⅰb经测序证实为aac(6′)-Ⅰb-cr型1株(1.7%)和aac(6′)-Ⅰb-suzhou型3株(5.1%)。结论大肠埃希菌多重耐药机制与产超广谱β-内酰胺酶及携带qnrB4、aac(6′)-Ⅰb和aac(6′)-Ⅰb-cr基因有关;本研究是国内首次从大肠埃希菌中检出aac(6′)-Ⅰb-suzhou型基因。

鲍曼不动杆菌耐药基因aac（6＇）-Ib和aac（6＇）-Ib-cr的检测

目的了解阿米卡星耐药的鲍曼不动杆菌中aac（6＇）-Ib-cr基因的分布情况。方法收集2007年1月2009年10月临床标本中分离对阿米卡星耐药的鲍曼不动杆菌73株，利用聚合酶链反应（PCR）方法扩增aac（6＇）-Ib基因，PCR产物进行电泳分析和测序，aac（6＇）-Ib基因阳性PCR产物用内切酶FOK酶切后电泳分析。统计菌株对亚胺培南等12种抗生素的耐药率。结果aac（6＇）-Ib基因的检出率为89．0％，其中7．7％为突变了的aac（6＇）-Ib-cr基因。所有菌株对除亚胺培南外的其它抗生素的耐药率均大于80％。结论aac（6’）．Ib基因广泛存在于这些耐药菌株中，突变成aac（6＇）-Ib-cr基因的发生率较低。这些对阿米卡星耐药的菌株，对其它抗生素的耐药也十分严重。

aac(6')-Ib-cr基因是微生物对喹诺酮类抗菌药的又一耐药途径

aac(6')-Ib-cr基因表达的氨基糖苷乙酰转移酶通过质粒介导方式对环丙沙星等乙酰化,使其抗菌生物活性降低,并与其他耐药因素产生协同作用,导致MIC值大幅升高。该基因分布范围广,检出率高,使得微生物对喹诺酮类抗菌药物耐药更加复杂。本文检索了近年来aac(6')-Ib-cr基因相关研究报道,归纳论述该基因在喹诺酮类抗菌药物耐药中的作用,提醒临床医务工作者应高度重视aac(6')-Ib-cr基因对临床用药的影响,以促进喹诺酮类抗菌药的合理应用。

鲍曼不动杆菌耐药基因aac（6’）－Ib和aac（6’）－Ib－cr的检测

目的了解阿米卡星耐药的鲍曼不动杆菌中aac（6’）－Ib—cr基因的分布情况。方法收集2007年1月到2009年10月临床标本中分离对阿米卡星耐药的鲍曼不动杆菌73株，利用聚合酶链反应（PCR）方法扩增aac（6’）-Ib基因，PCR产物进行电泳分析和测序，aac（6’）-Ib基因阳性PCR产物用内切酶FOKI酶切后电泳分析。统计菌株对亚胺培南等12种抗生素的耐药率。结果aac（6＇）-Ib基因的检出率为89．0％，其中7．7％为突变了的aac（6’）-Ib-cr基因。所有菌株对除亚胺培南外的其它抗生素的耐药率均大于80％。结论aac（6＇）-Ib基因广泛存在于这些耐药菌株中，突变成aac（6’）-Ib—cr基因的发生率较低。这些对阿米卡星耐药的菌株，对其它抗生素的耐药也十分严重。

大肠埃希菌连续分离株氨基糖苷类修饰酶aac(6′)-Ⅰb基因分型研究

目的了解临床连续分离的大肠埃希菌(ECO)氨基糖苷类饰酶aac(6′)-Ib基因及亚型存在状况。方法测定临床分离的60株ECO菌对19种抗菌药物的敏感性,采用PCR技术检测氨基糖苷类修饰酶aac(6′)-Ib基因。结果60株ECO菌连续分离株中aac(6′)-Ib基因阳性11株(18.3%),经DNA测序,2株为aac(6′)-Ib经典型,6株为aac(6′)-Ib-Cr型,另有2株为新亚型。结论检出氨基糖苷修饰酶aac(6′)-Ib基因新亚型,在一家医院ECO菌中同时检出aac(6′)-Ib型和aac(6′)-Ib-Cr型及新亚型三种亚型为国内首次报道。

环丙沙星耐药肠杆菌科细菌临床株qnr和aac（6’）-Ⅰb-cr基因的检测

目的了解温州地区环丙沙星耐药肠杆菌科细菌临床株的qnr、aac（6’）-Ⅰb-cr基因的分布情况。方法收集2005年8月-2008年4月间温州医学院附属第一医院环丙沙星耐药的肠杆菌科细菌共461株，其中大肠埃希菌370株，阴沟肠杆菌39株，克雷伯菌属细菌52株。应用PCR方法检测qnr和aac（6’）-Ⅰb基因，DNA测序检测qnrA、qnrB、qnrS和aac（6＇）-Ⅰb-cr基因；接合传递试验方法探讨细菌质粒介导的耐药性传递情况。结果461株环丙沙星耐药的肠杆菌科细菌临床株中检出含qnr基因阳性菌株15株（3．25％），包括qnrA基因阳性株5株（4株阴沟肠杆菌和1株解鸟氨酸克雷伯菌）、qnrB基因阳性株4株（2株肺炎克雷伯菌和2株大肠埃希菌）、qnrS基因阳性株6株（2株肺炎克雷伯菌和4株大肠埃希菌）；检出52株细菌（包括42株大肠埃希菌、4株阴沟肠杆菌和6株克雷伯菌属细菌）携带aac（6’）-Ⅰb-cr。15株qnr基因阳性的菌株同时携带aac（6’）-Ⅰb-cr，药敏结果显示对亚胺培南敏感但对多种抗生素耐药。15株qnr基因阳性的菌株中7株质粒接合传递试验成功，临床株对喹诺酮类和氨基糖苷类的耐药性部分传递给了受体株。结论qnr基因在温州地区环丙沙星耐药的肠杆菌科细菌临床株中较少见，而aac（6’）-Ⅰb-cr基因存在较普遍。

肠球菌耐药性研究

目的 明确各种肠球菌在临床标本中的分布及耐药情况 ,指导临床合理用药。方法 对 10 6株临床分离的肠球菌采用K -B法测定 13种抗菌药物的耐药性 ,用琼脂稀释法测定 3种抗菌药物的最低抑菌浓度(MIC) ,用琼脂筛选法筛选出庆大霉素高水平耐药的肠球菌 (HLGR) ,同时用PCR法检测HLGR的主要耐药基因aac(6 ) Ie aph(2 ) Ia,并与药敏结果进行比较。用头孢硝噻吩纸片法测定产β—内酰胺酶的状况。结果 10 6株肠球菌对利奈唑胺、万古霉素、替考拉宁没有耐药株 ;所有肠球菌均末检测到β—内酰胺酶 ;屎肠球菌对β—内酰胺类抗生素、喹诺酮类药物的耐药率明显高于粪肠球菌 ;奎奴普丁 /达福普汀对粪肠球菌的作用差 ,而对屎肠球菌有较强作用。 64 2 %的肠球菌对庆大霉素高度耐药。PCR检测出HLGR中aac(6 ) Ie aph(2 ) Ia ,基因阳性率为73 5 % (5 0 /68) ,克隆测序证实为aac(6 ) Ie aph(2 ) Ia特异性产物。结论 除了对利奈唑胺、万古霉素、替考拉宁高度敏感外 ,肠球菌对其它抗菌药物均存在不同程度的耐药性 ,其中HLGR占 64 2 %。HLGR的主要耐药机制是aac(6 ) Ie aph(2 ) Ia,基因编码的氨基糖苷类钝化酶AAC(6’) Ie (2’)

肺炎克雷伯菌质粒介导的喹诺酮类耐药基因aac(6')-Ib-cr的研究

目的调查本院临床所分离的产超广谱β-内酰胺酶的肺炎克雷伯菌中质粒介导的aac(6’)-Ib-cr基因的存在情况,为临床预防感染及合理使用抗菌药物提供依据。方法收集2007年7月～2008年12月本院临床分离的产超广谱β-内酰胺酶的肺炎克雷伯菌共57株,采用PCR技术检测aac(6’)-Ib基因,并对阳性菌株进行测序。以大肠埃希菌J53为受体菌,通过接合试验从aac(6’)-Ib-cr阳性菌株中获得的接合子,采用E-test方法测定菌株的药敏情况。结果 57株肺炎克雷伯菌中,aac(6’)-Ib基因阳性菌共12株,经测序全部为aac(6’)-Ib-cr基因,阳性率为21.1%。aac(6’)-Ib-cr基因阳性肺炎克雷伯菌中6株接合试验获得成功。环丙沙星对接合子的MIC值均为0.5μg/ml,左氧氟沙星对接合子的MIC值均为0.25μg/ml;接合子与受体菌MIC值比较,环丙沙星和左氧氟沙星的耐药性分别提高了63倍和17倍。结论本院产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌质粒介导的喹诺酮类耐药基因aac(6’)-Ib-cr携带率很高,临床上应加强喹诺酮类耐药基因的检测,以避免产aac(6’)-Ib-cr基因菌株感染的暴发流行。

连云港地区大肠埃希菌质粒介导喹诺酮类抗菌药耐药基因检测

目的了解连云港地区临床分离的大肠埃希菌质粒介导喹诺酮类抗菌药物耐药基因的携带状况，为临床喹诺酮类药物耐药的预防提供指导。方法采用PCR检测88株分离自连云港地区的大肠埃希菌株的质粒介导喹诺酮耐药基因qnrA，qnrB，qnrS和aac（6’）-Ib—cr，将阳性结果进行测序分析确认，并通过将aac（6’）一Ib序列与Genbank登记序列比对以确定aac（6’）-Ib-cr；分析基因阳性菌株的喹诺酮类药物的药敏结果。结果在检测的大肠埃希菌临床分离株中，共检出qnr基因阳性7株（7．95％），其中qnrB基因2株（2．27％），qnrS基因5株（5．68％），未检出qnrA基因阳性菌株。检出aac（6’）-Ib基因阳性菌株12株（13．64％），经测序确定其中6株（6．82％）为aac（6’）-Ib-cr基因。检测出的12株qnr和aac（6’）-Ib-cr基因阳性的大肠埃希菌中，8株对喹诺酮类耐药，3株对喹诺酮类敏感，1株对左旋氧氟沙星敏感但对环丙氟派酸耐药；有11株为产超广谱p内酰胺酶（ESBLs）菌株。结论连云港地区临床分离的大肠埃希菌中存在qnr和aac（6’）-Ib-cr基因阳性菌株的流行，喹诺酮类敏感菌株与耐药菌株中均有qnr基因和aac（69-Ib—cr基因的存在。qnr和aac（6’）-Ib—cr基因往往和ESBLs同时存在，应加强临床分离菌株的质粒介导喹诺酮类抗菌药物耐药基因监测，以防止其传播与流行。

临床尿液标本大肠埃希菌耐药基因qnrA和aac(6')-Ib的检测及耐药性分析

目的探讨本院临床尿液标本大肠埃希菌菌株耐药基因qnr A和aac(6')-Ib(-cr)的存在及其耐药特征。方法选择本院临床中段尿标本分离的110株大肠埃希菌菌株,用纸片扩散法进行药敏试验,PCR法扩增qnr A和aac(6')-Ib基因,扩增片段进行电泳分析及DNA测序,并分析耐药性。结果大肠埃希菌临床株对多种抗生素耐药,对喹诺酮类耐药率高于75%。110株大肠埃希菌菌株,检测出qnr A基因9株,aac(6')-Ib基因16株,其中13株为突变的aac(6')-Ib-cr基因,1株同时携带qnr A和aac(6')-Ib-cr基因。qnr A基因阳性与阴性菌株的耐药性比较虽有差异,但差异无统计学意义(P>0.05);aac(6')-Ib基因阳性菌株对喹诺酮类等多种抗生素的耐药率高于阴性菌株(P<0.05)。qnr A与aac(6')-Ib基因阳性菌株间对氨苄西林/舒巴坦、左氧氟沙星的耐药率差异有统计学意义(P<0.05)。结论本院尿标本大肠埃希菌临床分离株中,对喹诺酮类耐药率高于75%;qnr A与aac(6')-Ib基因均有检出,aac(6')-Ib基因阳性菌株对喹诺酮类等多种抗生素的耐药率高于阴性菌株,qnr A与aac(6')-Ib基因阳性菌株间耐药性有一定差异。临床要加强对耐药菌株检测。

非发酵菌和环丙沙星敏感肠杆菌科细菌中质粒介导喹诺酮类耐药基因的检测

目的了解3类质粒介导的喹诺酮类耐药基因在浙江省温州地区分离的非发酵菌和环丙沙星敏感肠杆菌科细菌中的分布情况。方法收集2008年1月至2013年6月温州地区分离的非发酵菌和环丙沙星敏感肠杆菌科细菌,共600株,其中非发酵菌419株,环丙沙星敏感肠杆菌科细菌181株。采用聚合酶链反应(PCR)检测qnrA、qnrB、qnrS、aac(6)-Ib以及qepA基因,并通过DNA测序确定qnr基因型和aac(6')-Ib-cr基因变异体;通过接合转移实验研究细菌质粒介导的耐药性传递情况。结果 419株非发酵菌临床株中未检测到qnrA、qnrB、qnrS、aac(6')-Ib和qepA等耐药基因。181株环丙沙星敏感的肠杆菌科细菌临床株中未检到qepA,检到2株qnrA1阳性株,分别为1株肺炎克雷伯菌和1株大肠埃希菌;2株qnrB4阳性株,均为阴沟肠杆菌复合菌;12株检测到aac(6')-Ib,分别为6株大肠埃希菌、3株阴沟肠杆菌复合菌和3株克雷伯菌属细菌。接合转移试验中,2株qnrA1阳性株和1株qnrB4阳性株接合转移成功,12株携带aac(6')-Ib-cr基因的阳性株中4株接合转移成功。结论温州地区,质粒介导的喹诺酮类耐药基因不仅存在于环丙沙星耐药株中,而且还存在于环丙沙星敏感的肠杆菌科细菌中,可能不存在于非发酵菌中。

肠杆菌科临床株质粒介导的喹诺酮类耐药机制的研究

目的了解天津地区肠杆菌科临床株中质粒介导的喹诺酮类耐药基因 qnrA、aac(6′)-Ib-cr 的分布并研究其耐药机制。方法从天津地区8家三甲医院收集环丙沙星耐药(CPLX,MIC≥4μg/ml)的肠杆菌科菌株共116株,包括77株大肠埃希菌、24株阴沟肠杆菌、15株克雷伯菌属细菌。应用 PCR 方法筛查所有临床株的 qnrA 基因,并对大肠埃希菌进行 aac(6′)-Ib 的检测;琼脂稀释法测菌株的药敏情况;DNA 测序检测 aac(6′)-Ib-cr 基因变异体;接合传递试验方法探讨细菌质粒介导的耐药性传递。结果 116株喹诺酮类耐药的肠杆菌科临床株中未发现 qnrA 基因阳性株;77株环丙沙星耐药的大肠埃希菌15株检出 aac(6′)-Ib,其中对卡那霉素耐药10株、中敏4株、敏感1株;选出对卡那霉素耐药表型不同的6株菌的 aac(6′)-Ib 扩增产物进行测序,结果表明5株菌在第223位(T→C或 T→A)和454位(G→T)发生变异,均携带 aac(6′)-Ib-cr;6株测序菌株中4株接合传递成功,临床株对喹诺酮类和氨基糖甙类的耐药性部分传递给了受体株。结论 qnrA 基因在天津地区116株肠杆菌科临床株中甚为罕见;首次在天津发现 aac(6′)-Ib-cr 介导的喹诺酮类耐药。

养殖动物及人分离大肠埃希菌染色体和质粒介导氟喹诺酮耐药机制的研究

目的探讨从养殖动物及周围人群分离的大肠埃希菌染色体和质粒介导氟喹诺酮耐药机制。方法纸片扩散法和肉汤稀释法检测氟喹诺酮抗菌药物及其他抗生素的耐药性表型。PCR扩增DNA解旋酶（gyrA和gyrB）和拓扑异构酶Ⅳ（parC和parE）基因的喹诺酮耐药决定区、导致喹诺酮类抗生素耐药质粒的部分基因（qnr）以及氨基糖苷类抗生素乙酰转移酶Ⅰb亚型cr变异体编码基因[aac（6’）-Ⅰb-cr]，PCR产物进行直接测序。接合试验确定aac（6’）-Ⅰb-cr酶的可转移性以及在氟喹诺酮耐药中的作用。结果鸡来源的大肠埃希菌对常用抗生素的耐药率明显高于猪和周围人群来源菌株。在PCR检测的64株大肠埃希菌中，环丙沙星MIC值大于1μg／ml以上的53株均存在gyrA和／或parC基因上出现两个位点突变和氨基酸替代，环丙沙星的MIC〉16μg/ml的菌株parE基因也发生了点突变及相应氨基酸替代。未发现gyrB亚单位有氨基酸替代。鸡来源28株菌和猪来源9株菌中分别有7株（25．0％）和1株（11．1％）携带有aac（6’）-Ⅰb-cr基因；aac（6’）-Ⅰb-cr基因可使环丙沙星、诺氟沙星乙酰化而降低药物抗菌活性。结论gyrA、parC和parE碱基突变导致氨基酸置换的数量与菌株对氟喹诺酮类耐药水平呈正相关，携带aac（6’）-Ⅰb-cr基因的质粒在细菌氟喹诺酮耐药上也具有一定作用。

肺炎克雷伯菌质粒介导的喹诺酮类耐药基因的研究

目的研究本地区质粒介导的喹诺酮类耐药基因aac(6’)-Ib-cr和qnr在肺炎克雷伯菌中的发生率及接合子对环丙沙星和左氧氟沙星不同耐药水平的发生机制。方法筛选2007年7月～2008年12月本院临床分离的产超广谱β-内酰胺酶的肺炎克雷伯菌共57株,采用PCR法检测qnrA、qnrB、qnrS和aac(6’)-Ib阳性菌株并对部分菌株进行测序。以大肠埃希菌J53为受体菌,通过接合试验从aac(6’)-Ib-cr和(或)qnr阳性菌株中获得接合子,采用E-test方法测定菌株的药敏情况。结果所分离的57株肺炎克雷伯菌中aac(6’)-Ib基因阳性菌12株,经测序全部为aac(6’)-Ib-cr基因,阳性检出率为21.1%;qnr基因阳性菌25株(43.9%),其中3株(5.3%)含qnrA基因,21株(36.8%)含qnrB基因,20株(35.1%)含qnrS基因;aac(6’)-Ib-cr、qnrA、qnrB和qnrS均阳性菌共3株(5.3%),qnrB和qnrS均阳性菌共13株(22.8%)。本研究中共有14株菌株接合试验获得成功,环丙沙星和左氧氟沙星对接合子的最低抑菌浓度(MIC)范围分别为0.25～0.5μg/ml和0.25～1μg/ml;接合子与受体菌的MIC值比较结果显示,环丙沙星耐药性提高了31～63倍,左氧氟沙星耐药性提高了17～63倍。结论本地区产超广谱β-内酰胺酶的肺炎克雷伯菌质粒介导的喹诺酮类耐药基因aac(6’)-Ib-cr和qnr携带率很高,部分菌株的喹诺酮类抗菌药物MIC值升高与喹诺酮类耐药基因aac(6’)-Ib-cr和(或)qnr有关。

质粒介导的耐氟喹诺酮类药物基因的研究

目的了解南昌大学第二附属医院质粒介导的耐氟喹诺酮类药物大肠埃希菌的流行情况和耐药机制。方法收集该院2009年1月至2011年12月常规培养的耐左氧氟沙星的大肠埃希菌株100株,提取DNA后PCR扩增qnrA、qnrB、qnrC、qnrD、qnrS、aac(6')-Ib和qepA基因,并对aac(6')-Ib阳性产物测序比对。结果 (1)7株细菌检测出qnr基因,其中qnrA2株,qnrS 5株,1株qnrS和qnrA同时阳性,qnrB、qnrC和qnrD均未检出。(2)5株检测出aac(6')-Ib基因,测序结果经BLAST比对均为野生型,未发现aac(6')-Ib-cr基因。(3)所有菌株均未检测出qepA基因。结论该院的氟喹诺酮类抗菌药的耐药机制主要还是靶位突变和细胞膜通透性改变导致的,但7%的质粒介导的耐药基因的检出率也提醒我们要密切关注质粒介导的耐药情况。