产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌中检出aac(6′)-Ⅰb-suzhou型基因

目的了解质粒介导的喹诺酮耐药基因在产超广谱β-内酰胺酶(ELBLs)大肠埃希菌的耐药特点及耐药机制。方法用纸片扩散法检测59株产ESBLs的大肠埃希菌对11种抗生素的敏感性,采用聚合酶链反应(PCR)检测qnrA、qnrB和qnrS、qnrC、aac(6′)-Ⅰb及qepA基因,并对扩增阳性基因qnrB、aac(6′)-Ⅰb测序后进行BLAST比对分析。结果 59株产超广谱β-内酰胺酶的大肠埃希菌共检出qnrB 3株(5.1%)、aac(6′)-Ⅰb 22株(37.3%),qnrB经测序证实为qnrB4,aac(6′)-Ⅰb经测序证实为aac(6′)-Ⅰb-cr型1株(1.7%)和aac(6′)-Ⅰb-suzhou型3株(5.1%)。结论大肠埃希菌多重耐药机制与产超广谱β-内酰胺酶及携带qnrB4、aac(6′)-Ⅰb和aac(6′)-Ⅰb-cr基因有关;本研究是国内首次从大肠埃希菌中检出aac(6′)-Ⅰb-suzhou型基因。

一株产超广谱β-内酰胺酶同时携带qnrB4和aac(6')-Ⅰb-suzhou型基因大肠埃希菌的鉴定

目的了解1株产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)同时携带qnrB4和aac(6')-Ⅰb-suzhou型基因大肠埃希菌的耐药机制。方法采用纸片扩散法检测1株分离于血液标本的大肠埃希菌对19种抗菌药物的敏感性,采用聚合酶链反应(PCR)检测6种耐药基因[qnrA、qnrB、qnrC、qnrS、qepA、aac(6')-Ⅰb],并对qnrB、aac(6')-Ⅰb基因测序后进行Blast比对分析。结果该菌株除对碳青霉烯类、酶抑制剂复合抗菌药物类敏感外,其余药物全部耐药;PCR发现该菌株同时携带qnrB和aac(6')-Ⅰb基因,经测序并分别与已在美国国立信息中心[NCBI]登录的DQ303921(qnrB4)和EF375621[aac(6')-Ⅰb-suzhou]型比对,同源性均>99%。结论该菌株多重耐药的机制与产ESBLs及携带qnrB4和aac(6')-Ⅰb基因有关。

大肠埃希菌连续分离株氨基糖苷类修饰酶aac(6′)-Ⅰb基因分型研究

目的了解临床连续分离的大肠埃希菌(ECO)氨基糖苷类饰酶aac(6′)-Ib基因及亚型存在状况。方法测定临床分离的60株ECO菌对19种抗菌药物的敏感性,采用PCR技术检测氨基糖苷类修饰酶aac(6′)-Ib基因。结果60株ECO菌连续分离株中aac(6′)-Ib基因阳性11株(18.3%),经DNA测序,2株为aac(6′)-Ib经典型,6株为aac(6′)-Ib-Cr型,另有2株为新亚型。结论检出氨基糖苷修饰酶aac(6′)-Ib基因新亚型,在一家医院ECO菌中同时检出aac(6′)-Ib型和aac(6′)-Ib-Cr型及新亚型三种亚型为国内首次报道。

新生儿败血症血清高迁移率族蛋白B1、线粒体偶联因子-6表达及其与炎症反应及心肌损害的关系

目的探讨新生儿败血症血清高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、线粒体偶联因子-6(CF-6)表达及其与炎症反应的关系和对心肌损害的预测价值。方法选取2016年3月至2019年3月洛阳市第一人民医院收治的新生儿败血症病儿94例,根据新生儿危重症评分结果分非危重组(39例)、危重组(26例)、极危重组(29例)。对比三组血清HMGB1、CF-6、炎性因子[C反应蛋白(CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]、心肌损害标志物[心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ)、心型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)]水平,Pearson相关系数分析血清HMGB1、CF-6与炎性因子、心肌损害标志物相关性,ROC曲线分析血清HMGB1、CF-6对心肌损害预测价值。结果随病情加重,血清HMGB1、CF-6、CRP、TNF-α、cTnⅠ、H-FABP水平呈升高趋势。Pearson相关系数分析显示,新生儿败血症病儿血清HMGB1、CF-6表达与CRP、TNF-α、cTnⅠ、H-FABP呈正相关(P<0.05)。血清HMGB1、CF-6对心肌损害的预测价值较高,其中CF-6指标敏感度最高(0.922),HMGB1的特异度最高(0.869)。血清HMGB1、CF-6联合检测对心肌损害的预测价值更高:灵敏度和特异度分别为0.944和0.925。结论新生儿败血症病儿存在血清HMGB1、CF-6表达异常升高情况,且与病儿炎症反应、心肌损害严重程度关系密切,可作为心肌损害的预测因子,对指导临床合理制定治疗方案具有重要意义。

环丙沙星耐药肠杆菌科细菌临床株qnr和aac（6’）-Ⅰb-cr基因的检测

目的了解温州地区环丙沙星耐药肠杆菌科细菌临床株的qnr、aac（6’）-Ⅰb-cr基因的分布情况。方法收集2005年8月-2008年4月间温州医学院附属第一医院环丙沙星耐药的肠杆菌科细菌共461株，其中大肠埃希菌370株，阴沟肠杆菌39株，克雷伯菌属细菌52株。应用PCR方法检测qnr和aac（6’）-Ⅰb基因，DNA测序检测qnrA、qnrB、qnrS和aac（6＇）-Ⅰb-cr基因；接合传递试验方法探讨细菌质粒介导的耐药性传递情况。结果461株环丙沙星耐药的肠杆菌科细菌临床株中检出含qnr基因阳性菌株15株（3．25％），包括qnrA基因阳性株5株（4株阴沟肠杆菌和1株解鸟氨酸克雷伯菌）、qnrB基因阳性株4株（2株肺炎克雷伯菌和2株大肠埃希菌）、qnrS基因阳性株6株（2株肺炎克雷伯菌和4株大肠埃希菌）；检出52株细菌（包括42株大肠埃希菌、4株阴沟肠杆菌和6株克雷伯菌属细菌）携带aac（6’）-Ⅰb-cr。15株qnr基因阳性的菌株同时携带aac（6’）-Ⅰb-cr，药敏结果显示对亚胺培南敏感但对多种抗生素耐药。15株qnr基因阳性的菌株中7株质粒接合传递试验成功，临床株对喹诺酮类和氨基糖苷类的耐药性部分传递给了受体株。结论qnr基因在温州地区环丙沙星耐药的肠杆菌科细菌临床株中较少见，而aac（6’）-Ⅰb-cr基因存在较普遍。

1株携带qnrB4及aac(6′)-Ⅰb-suzhou型基因同时产ESBLs、AmpC酶多药耐药大肠埃希菌的调查

目的了解1株产ESBLs、AmpC酶大肠埃希菌的耐药机制。方法采用纸片扩散法检测1株大肠埃希菌对19种抗菌药物的敏感性,采用聚合酶链反应(PCR)检测6种耐药基因:qnrA、qnrB、qnrC、qnrS、qepA、aac(6′)-Ⅰb,并对qnrB、aac(6′)-Ⅰb基因测序后进行BLAST比对分析。结果该菌株除对碳青霉烯类、酶抑制剂复合抗菌药物类敏感外,对其余药物均耐药;PCR发现该菌株同时携带qnrB和aac(6′)-Ⅰb,经测序并分别与已在美国国立信息中心登录的DQ303921(qnrB4)和EF375621[aac(6′)-Ⅰb-suzhou]型比对,同源性均>99.0%。结论该菌株多药耐药的机制与产ESBLs、AmpC酶及携带qnrB4和aac(6′)-Ⅰb基因有关;该研究是第一篇从1株产ESBLs、AmpC酶大肠埃希菌中检出同时携带qnrB4和aac(6′)-Ⅰb-suzhou型基因的报道。

携带质粒介导喹诺酮基因aac-(6′)-Ib-cr的大肠埃希菌遗传学特征分析

目的阐明携带质粒介导喹诺酮基因aac-(6′)-Ⅰb-cr的大肠埃希菌遗传学特征。方法通过PCR方法,从8所3级甲等医院送检的579株大肠埃希菌中筛选出aac-(6′)-Ⅰb-cr基因阳性菌41株,对此41株大肠埃希菌进行了耐药谱测定、质粒介导喹诺酮耐药机制、喹诺酮耐药决定区突变、β-内酰胺酶基因和毒力基因分析,并运用脉冲场凝胶电泳(PFGE)方法对此41株菌进行了分子分型。结果 41株aac-(6′)-Ⅰb-cr基因阳性菌对萘啶酸、环丙沙星、左氧氟沙星的敏感率分别为2.4%、2.4%、4.8%,对三代头孢菌素的敏感率<33.0%,对阿米卡星敏感率为88.1%;检出ESBLs阴性菌13株,占31.7%,ESBLs阳性菌占68.3%;aac-(6′)-Ⅰb-cr基因阳性菌主要分布在A群43.9%和D群46.3%,而B群仅为9.8%,其中3株为B2群,1株为B1群;38株在喹诺酮耐药决定区中至少在GyrA和ParC上存在3或4个点突变,仅3株菌在GyrA上检出1个点突变;对41株aac-(6′)-Ⅰb-cr基因阳性菌进行PFGE分析显示,这些菌株在遗传学上存在较大差异。结论 aac-(6′)-Ⅰb-cr基因存在于不同基因型的大肠埃希菌中,且多数菌株为多药耐药株。

基于HPLC-QAMS法对清热通淋丸中7种成分的质量控制研究

目的建立高效液相一测多评法(HPLC-QAMS)同时测定清热通淋丸中三叶豆紫檀苷、苦参醇I、苦参酮、槐属二氢黄酮G、6′-羟基爵床脂素B、6′-羟基爵床脂素A和爵床脂素B的含量。方法采用高效液相色谱法,以Agilent Zorbax SB-C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm)为色谱柱,流动相为乙腈-水,梯度洗脱,流速为1.0 ml/min,柱温为30℃。以苦参酮为内参物,建立其他6个成分的相对校正因子,计算含量。结果三叶豆紫檀苷、苦参醇Ⅰ、苦参酮、槐属二氢黄酮G、6′-羟基爵床脂素B、6′-羟基爵床脂素A和爵床脂素B的质量浓度分别在0.91~22.75μg/ml(r=0.999 5)、1.89~47.25μg/ml (r=0.999 3)、5.67~141.75μg/ml (r=0.999 7)、1.29~32.25μg/ml (r=0.999 5)、1.48~37.00μg/ml (r=0.999 6)、2.56~64.00μg/ml (r=0.999 4)、4.09~102.25μg/ml (r=0.999 8)范围内线性关系良好,平均加样回收率(RSD)分别为97.99%(1.42%)、98.44%(0.85%)、99.47%(0.92%)、96.98%(1.21%)、99.50%(0.74%)、100.00%(1.04%)和98.39%(1.32%),建立的高效液相一测多评法用于测定清热通淋丸中7种指标性成分的含量,一测多评法所得结果与外标法无明显差异。结论所建立的HPLC-QAMS法结果准确,可用于清热通淋丸的质量控制。

金黄杆菌属检出aac(6′)-Ⅱ和ant(2″)-Ⅰ耐药基因研究

目的研究金黄杆菌属临床分离株6种氨基糖苷类耐药机制。方法应用法国生物梅里埃公司的API鉴定条/PSE5.0药敏条进行细菌鉴定和药敏试验,应用PCR法检测两株金黄杆菌属临床分离株6种氨基糖苷类修饰酶基因(AMEs)耐药基因,并对PCR阳性产物测序和同源性分析。结果在两株临床分离菌株均检出2种AMEs基因(aac(6′)-Ⅱ、ant(2″)-Ⅰ),同源性分析证实为2种AMEs基因,GenBank注册号分别为EU252512,EU252513,EU252514,EU252515;其他4种AMEs基因(aac(6′)-Ⅰb、aac(3)-Ⅱ、ant(3″)-Ⅰ、aac(3)-Ⅰ)均阴性。结论金黄杆菌属临床分离株存在AMEs基因,且为两种基因共存。

IL-17单克隆抗体对肺纤维化大鼠的保护作用及部分机制研究

目的探讨白介素(IL)-17单克隆抗体(m Ab)对博莱霉素所致大鼠肺纤维化的保护作用及相关机制。方法将♂SD大鼠75只随机分为正常对照组、假手术组、模型组、非特异性Ig G组、IL-17 m Ab组,各组15只,后3组大鼠予以博莱霉素A5气管内注入构建肺纤维化模型,而假手术组给予等量生理盐水气管内注入。后2组于d 7、14、21分别给予非特异性IgG、IL-17 mAb尾静脉注射,其余3组给予等量生理盐水尾静脉注射。所有大鼠d 28处死,留取肺组织,行HE和Masson染色,通过酶联免疫吸附法(ELISA)测定肺组织IL-17、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,Western blot分析肺组织胞核核因子-κB(NF-κB)p65以及细胞Ⅰ型胶原(ColⅠ)、Ⅲ型胶原(ColⅢ)蛋白表达情况,荧光实时定量PCR检测肺组织ColⅠ、ColⅢmRNA表达水平,分离血清,采用ELISA检测血清Ⅰ型前胶原羧基端前肽(PICP)、Ⅲ型前胶原氨基端前肽(PIIINP)浓度。结果 IL-17m Ab组肺泡炎症和肺纤维化程度明显轻于模型组及非特异性Ig G组(P<0.01)。模型组和非特异性Ig G组肺组织IL-17、IL-6、TNF-α含量、胞核NF-κB p65蛋白表达、ColⅠ、ColⅢmRNA和蛋白表达以及血清PICP、PIIINP浓度较正常对照组及假手术组明显升高(P<0.01)。经IL-17 m Ab处理后,上述指标相比模型组和非特异性IgG组明显降低(P<0.01)。但非特异性Ig G组与模型组以及假手术组与正常对照组上述指标比较无差异(P>0.05)。结论 IL-17 mAb通过下调NF-κB表达,抑制肺组织炎症反应及减少胶原蛋白合成,对肺纤维化大鼠产生保护作用。

化纤散结复方颗粒通过PI3K/AKT/NF-κB信号通路改善大鼠矽肺纤维化

目的研究化纤散结复方颗粒改善大鼠矽肺纤维化的作用及其机制。方法将无特定病原体级雄性SD大鼠随机分为对照组、矽肺模型组和干预组,每组6只。采用一次性呼吸机联合非暴露式气管内滴注法,矽肺模型组和干预组大鼠均予1.0 mL质量浓度为50.0 g/L的二氧化硅悬浊液建立染矽尘大鼠模型,对照组大鼠予等体积0.9%氯化钠溶液。染尘24 h后,干预组大鼠予剂量为10 mL/kg体质量的化纤散结复方颗粒混悬液(质量浓度为212.5 g/L)灌胃,对照组和矽肺模型组大鼠均予等体积0.9%氯化钠溶液灌胃,每日1次。分别于染尘后第14和28天处死各组大鼠3只,进行肺组织病理学检查;以酶联免疫吸附实验检测大鼠血清和肺组织中白细胞介素-6(IL-6)、转化生长因子-β1(TGF-β1)水平,以蛋白质印迹法检查肺组织中磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、核转录因子-κB(NF-κB)和Ⅰ型胶原(COLⅠ)蛋白相对表达水平。结果肺组织病理学检查结果显示,与同时间点矽肺模型组比较,干预组大鼠肺组织炎症反应、纤维结节、胶原纤维均明显减少,纤维化明显减轻。矽肺模型组大鼠第14和28天血清中IL-6和肺组织中IL-6、TGF-β1的水平均高于同时间点对照组(P值均<0.05),且第28天的上述指标均高于第14天(P值均<0.05)。矽肺模型组大鼠血清中TGF-β1水平和肺组织中PI3K、AKT、NF-κB、COLⅠ蛋白相对表达水平均高于对照组(P值均<0.05)。干预组大鼠第14和28天血清中IL-6和肺组织中IL-6、TGF-β1的水平均低于同时间点矽肺模型组(P值均<0.05);且干预组大鼠血清中TGF-β1水平和肺组织中PI3K、AKT、NF-κB、COLⅠ蛋白相对表达水平均高于对照组(P值均<0.05)。结论化纤散结复方颗粒可通过PI3K/AKT/NF-κB信号通路延缓和拮抗矽肺大鼠肺纤维化。

养殖动物及人分离大肠埃希菌染色体和质粒介导氟喹诺酮耐药机制的研究

目的探讨从养殖动物及周围人群分离的大肠埃希菌染色体和质粒介导氟喹诺酮耐药机制。方法纸片扩散法和肉汤稀释法检测氟喹诺酮抗菌药物及其他抗生素的耐药性表型。PCR扩增DNA解旋酶（gyrA和gyrB）和拓扑异构酶Ⅳ（parC和parE）基因的喹诺酮耐药决定区、导致喹诺酮类抗生素耐药质粒的部分基因（qnr）以及氨基糖苷类抗生素乙酰转移酶Ⅰb亚型cr变异体编码基因[aac（6’）-Ⅰb-cr]，PCR产物进行直接测序。接合试验确定aac（6’）-Ⅰb-cr酶的可转移性以及在氟喹诺酮耐药中的作用。结果鸡来源的大肠埃希菌对常用抗生素的耐药率明显高于猪和周围人群来源菌株。在PCR检测的64株大肠埃希菌中，环丙沙星MIC值大于1μg／ml以上的53株均存在gyrA和／或parC基因上出现两个位点突变和氨基酸替代，环丙沙星的MIC〉16μg/ml的菌株parE基因也发生了点突变及相应氨基酸替代。未发现gyrB亚单位有氨基酸替代。鸡来源28株菌和猪来源9株菌中分别有7株（25．0％）和1株（11．1％）携带有aac（6’）-Ⅰb-cr基因；aac（6’）-Ⅰb-cr基因可使环丙沙星、诺氟沙星乙酰化而降低药物抗菌活性。结论gyrA、parC和parE碱基突变导致氨基酸置换的数量与菌株对氟喹诺酮类耐药水平呈正相关，携带aac（6’）-Ⅰb-cr基因的质粒在细菌氟喹诺酮耐药上也具有一定作用。