aadA叶绿体转化烟草对根际微土壤生物的影响

为研究叶绿体转基因烟草对土壤根际微生物的影响,以aadA叶绿体转基因烟草和对照烟草为实验材料,对苗期、花期、成熟期烟草根际细菌、放线菌及真菌的菌落数进行统计,利用Biolog法分析微生物群落功能多样性.结果表明:在相同生育期,aadA叶绿体转基因烟草与对照烟草相比,根际土壤细菌、放线菌及真菌数量均无显著差异;根际土壤微生物群落的代谢相似,转基因烟草对微生物群落功能的影响不显著.aadA叶绿体转基因烟草没有对土壤微生物数量和功能多样性产生显著的影响.

苏云金芽孢杆菌(Bt)晶体毒蛋白基因在烟草叶绿体中的表达

将全长３．５ｋｂ的Ｂｔ基因３'端缺失，得到长为２．１ｋｂ、１．８ｋｂ的基因。分别将这３个长度 （１．８ｋｂ２．１ｋｂ、３．５ｋｂ）的基因置于水稻叶绿体ｐｓｂＡ基因的启动于和终止子调控之下，并与选择 标记基因ａａｄＡ（编码氨基糖苷－３'－腺苷酸转移酶，具壮观霉素抗性）表达盒相连５以烟草叶绿 体基因ｔｒｎＨ－ｐｓｂＡ－ｔｒｎＫ为同源片段，构建成叶绿体转化载体ｐＢＴ３、ｐＢＴ８和ｐＢＴ２２。用基因枪 把Ｂｔ基因导入烟草叶绿体中，以壮观霉素筛选，获得转化再生植株。经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ、Ｗｅｓｔｅｒｎ检测 分析证明Ｂｔ基因已整合进入烟草叶绿体基因组中并得到表达。且子代呈现壮观霉素抗性，即 外源基因得到稳定的遗传。利用转基因植株叶片对棉铃虫进行杀虫实验，有些转化植株表现 出较强的抗虫性。总体上来说，转Ｂｔ全长基因的烟草植株，其杀虫效果最好，其余两种差异不 大。首次报道将Ｂｔ基因成功转入高等植物叶绿体并获得表达。

丙肝病毒融合抗原基因NS_3-C定点整合入衣藻叶绿体基因组的研究

用ＰＣＲ 方法从丙型肝炎病毒（ＨＣＶ） ｃＤＮＡ 文库中克隆了两段ＤＮＡ 片段，即ＨＣＶ 基因组非结构ＮＳ３区抗原基因（约０．７ ｋｂ）和核心抗原Ｃ区抗原基因（约０．６ ｋｂ）的ｃＤＮＡ 片段。在两段ｃＤＮＡ 间加入连接肽Ｓｅｒ－ Ｐｒｏ－ Ｇｌｙ－ Ｓｅｒ 的密码子序列，构建成融合抗原基因ＮＳ３－ Ｃ。将该融合基因与衣藻叶绿体基因ａｔｐＡ 的启动子和ｒｂｃＬ 基因的３′末端连接，得到丙肝病毒融合抗原基因ＮＳ３－ Ｃ表达盒，再将该表达盒与选择标记基因ａａｄＡ 表达盒和衣藻叶绿体基因组同源片段连接，构建成衣藻叶绿体转化载体ｐＳＳ６。基因枪法转化衣藻叶绿体，经壮观霉素筛选获得转化再生的单藻落，对转基因衣藻的ＰＣＲ 和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ 杂交分析表明，融合抗原基因ＮＳ３－ Ｃ已整合到衣藻叶绿体基因组中。

定点整合抗虫基因到油菜叶绿体基因组并获得转基因植株

以基因枪法进行了油菜叶绿体基因组的定点转化。载体 pNRAB携带抗壮观霉素的筛选标记基因aadA和抗虫基因cry1Aa10 ,基因的两侧被添加了可用于同源重组的叶绿体DNA序列。基因枪轰击过的油菜子叶柄经植株再生和壮观霉素筛选 ,获得了 36株抗性植株。PCR检测和Southern杂交显示 ,其中 4株的叶绿体基因组已被转化 ,外源基因已被定点整合进叶绿体基因组的rps7和ndhB基因之间。用转基因植株的叶片饲喂二龄小菜蛾 ,1周后幼虫死亡率达33%～ 47% ,存活幼虫的生长明显减慢 。