三相法提取猪肝酯酶及其在制备D -7-ACA中的应用

酯酶广泛存在于动物、植物和微生物中,具有作用范围广、底物特异性高等特点。该酶能够催化许多含有酯、酰胺、硫酯或乙酰基的化合物的水解与合成,在生物催化领域具有重要的用途。对来源于猪肝中的酯酶采用三相分离的方法进行了提取,并利用猪肝酯酶的水解特性,研究了其催化7-氨基头孢烷酸(7-ACA)脱乙酰基制备去乙酰基-7-氨基头孢烷酸(D-7-ACA)的过程。主要研究结果:确立了三相法分离提取猪肝酯酶的方法,考察了有机溶剂种类、有机溶剂用量、硫酸铵浓度以及体系的pH和提取温度等条件对三相法分离提取猪肝酯酶的影响。实验结果表明在硫酸铵质量分数为45%、异丁醇与水相之比为1∶1、pH7.0、温度为30℃的条件下,酶活回收率为54.84%,纯化倍数为6.32倍。以猪肝酯酶为催化剂,研究了猪肝酯酶催化7-ACA脱乙酰基制备D-7-ACA,在pH7.5、温度35℃、底物浓度2%、酶添加量30 U/mL的反应条件下,7-ACA转化率达到94.33%。

幽门螺杆菌vacA基因重组表达的包涵体复性及ELISA方法的建立

目的:通过对vacA重组工程菌表达产物包涵体的变性、复性,提高表达产物的生物学活性,建立ELISA方法,讨论VacA抗原规模生产的可行性.方法:利用已经构建的表达VacA抗原的工程菌,用IPTG诱导,表达的包涵体通过系列条件的变性、复性、透析,并经活性鉴定.所制抗原用以包被ELISA板,建立ELISA方法并确定抗原的生物学活性.结果:重组工程菌可表达Mr3300的目的蛋白,表达形式为包涵体,条件优化后的包涵体经SDS-PAGE显示纯度达95%以上,活性经ELISA法测定正常人126例和blot电泳测定结果符合率为97.1%.结论:包涵体变性复性后生物活性大幅度提高,并且具有良好的重复性和稳定性,可作为幽门螺杆菌疫苗制备的候选抗原及临床检测的诸多方法的抗原原料.

巴西橡胶树ACA/ECA基因家族鉴定及分析

Ca^(2+)是植物细胞的第二信使,Ca^(2+)-ATPase(ACA/ECA)作为Ca^(2+)运输的重要蛋白,在保证细胞内钙离子的平衡和植物非生物胁迫方面发挥着至关重要的作用。为了研究巴西橡胶树中Ca^(2+)-ATPase(ACA/ECA)的生物学功能,以模式植物拟南芥的ACA/ECA蛋白序列为探针,从橡胶树基因组中鉴定得到45个ACA/ECA基因家族成员,其中ACA成员38个,ECA成员7个。利用Expasy、Plant-mPLoc等工具对45个成员的理化性质、基因结构、染色体定位、系统进化和表达进行全面分析。理化性质分析表明:各成员编码蛋白的氨基酸数目为86~1142个,氨基酸分子量在10048.04~125412.75 Da之间,蛋白产物多定位于细胞质膜,有少量成员定位于内质网、叶绿体、液泡和细胞核。在进化方面,ACA/ECA家族成员明显聚于ACA和ECA两个分枝,2个分支中橡胶树始终与木薯紧靠,表明在系统进化过程中橡胶树与木薯存在较近的亲缘关系。染色体定位结果显示:ACA/ECA家族的45个成员不均匀地分布在橡胶树的14条染色体和1个contig上,其中2号和9号染色体上成员分布最多,为11个。表达分析显示:部分成员在不同组织中的表达存在显著差异,HbACA31在叶片中表达丰度最高,HbACA36在胶乳中表达丰度最高,并且HbACA36经乙烯利刺激处理后在胶乳中的表达明显上调。另外,本研究还分析了割胶对ACA/ECA家族成员基因表达的影响,发现HbACA36在PR107和热研8-79两个橡胶树品种割胶过程中均处于较高的表达水平,并且在高产品种热研8-79开割过程中明显上调表达,推测HbACA36参与橡胶树产胶排胶调控,并在其中起重要作用。本研究结果首次揭示了橡胶树ACA/ECA家族成员的理化性质和表达模式,为进一步研究ACA/ECA基因在巴西橡胶树中的生物学功能,特别是橡胶树产胶调控方面的功能奠定基础。

国产固定化GL-7-ACA酰化酶制备7-ACA的工艺优化

通过对国产固定化GL-7-ACA酰化酶和游离酶的表观米氏常数(Km)及最大反应速度(Vm)的测定.结果表明:固定化GL-7-ACA酰化酶的Km和Vm值分别为8.69 mm o l.L-1和76μm o l.g-1m i-n 1,均较游离酶高;在对酶促反应的关键参数底物质量浓度、转化温度、转化pH进行优化后,用固定化GL-7-ACA酰化酶在底物GL-7-ACA质量浓度30 g.L-1、转化温度25℃、转化pH 8.0的条件下转化GL-7-ACA制备7-ACA可连续操作150批以上,转化率和收率均达95%以上.

溴乙酰-7-ACA合成过程中杂质的分析

目的剖析溴乙酰-7-ACA合成过程中主杂质的结构,解决产品质量问题。方法利用红外、核磁、质谱、元素分析等技术对未知物进行结构确证。结果该杂质为二溴乙酰-7-ACA。结论该杂质是原料质量控制不好而引起,并非是在实际生产过程中引入。

ACA基因启动子的克隆及功能初探

根据已知的ACA基因的 5 '端序列设计三个基因特异的反向引物 (GSP_1,GSP_2 ,GSP_3)分别与 11个简并引物 (AD1_AD11)配对 ,进行热不对称嵌套PCR(ThermalasymmetricinterlacedPCR ,TAIL_PCR)扩增 ,获得了ACA基因起始密码子上游约70 0bp的片段。为检测其表达特性 ,构建了该片段与Gus嵌合基因的表达载体pBpAG ,在真空条件下通过农杆菌介导 ,转化了植物的叶、果实、种子三种不同组织 ,Gus瞬时表达染色结果显示 ,该DNA片段具有种子特异的启动子活性。对该启动子的一些顺式元件进行了讨论。

头孢类抗生素的新型中间体D-7-ACA

目的:研究新型头孢中间体D-7-ACA的特点、性质和应用。方法:查阅现有文献和专利,研究、分析并总结出D-7-ACA在头孢抗生素合成中的应用。结果:D-7-ACA作为合成头孢类抗生素的中间体,可替代7-ACA,简化操作步骤。结论:新型头孢中间体D-7-ACA可用于多种头孢类抗生素的合成。

我国情报学研究分析：以ACA为方法

ACA属于同被引分析法，其全称是作者同被引分析（Author Co—citation Analysis）。这种方法从特定学科或特定领域的核心著者的同被引入手，探讨学科结构和流派等问题。本文以ACA为方法，选取1994—2005年间的数据，对我国情报学领域的核心著者进行了同被引分析，以此揭示出我国情报学学科的结构和研究状况。

ACA离子取代凝胶多价离子置换性能研究

考察了海藻酸 -壳聚糖 -海藻酸 ( ACA)离子取代凝胶对几种二价金属离子的置换行为。实验结果表明 ,海藻酸钙凝胶和海藻酸 -壳聚糖 -海藻酸凝胶微球 ( ACA- Ca)也能吸附 Pb2 +、Cu2 +和 Al3+,其中 Pb2 +、Cu2 +和 Al3+取代了凝胶中的 Ca2 +,并且其置换速率要大大快于离子交换树脂 ,而其平衡取代量与 ACA微胶囊相当 ,因此 ,海藻酸钙凝胶也能作为离子吸附剂应用于吸附某些重金属离子。此外 ,Pb2 +也能置换海藻酸锌中的 Zn2 +,Ca2 +能置换海藻酸亚铁中的 Fe2 +。Pb2 +对海藻酸钙凝胶中的 Ca2 +的置换不仅包括Pb2 +对 Ca2 +的置换 ,还存在对 Pb2

AsAb、AcA与反复自然流产关系的探讨

目的 探讨抗精子抗体 (AsAb) ,抗心磷脂抗体 (AcA)与反复自然流产的关系。方法 采用ELISA法测定反复自然流产病人血清中AsAb、AcA的含量。结果 流产组血清AsAb、AcA明显高于对照组 (P <0 .0 1) ,出现显著性差异。结论 抗精子抗体和抗心磷脂抗体与反复自然流产有着密切的关系。

β-葡萄糖苷酶ACA微胶囊固定化实验研究

对壳聚糖为壁材的共价交联固定、海藻酸钠为壁材的包埋固定及壳聚糖和海藻酸钠共用的新型复合载体(ACA)固定的β-葡萄糖苷酶进行了对比研究,得出ACA微胶囊固定化的酶具有较好的催化活性、重复使用和低温贮藏性能。醋酸和戊二醛及CaCl2的浓度、壳聚糖和海藻酸钠用量、引发和交联时间对ACA微胶囊固定酶的形态和性能影响较大,葡萄糖转化率随醋酸与戊二醛和CaCl2浓度的增加、壳聚糖和海藻酸钠用量的增大、交联和引发时间的延长呈先增大后减小的变化趋势,并于不同特定值达到最大。

头穴丛刺联合认知康复对脑梗死后认知障碍患者血UA、ACA及VEGF水平的影响

目的:探讨头穴丛刺和认知康复训练对脑梗死后认知障碍的效应。方法:将120例脑梗死伴认知障碍患者,随机分3组,各组40例。头穴丛刺组(A组)给予于氏头针治疗,认知康复组(B组)给予认知康复训练,联合治疗组(C组)给予上述2种方案联合治疗。每周6次,共治疗4周。治疗前后评价简易精神状态量表(MMSE),并检测血尿酸(UA)、血清抗心磷脂抗体(ACA)、血管内皮生长因子(VEGF)水平。结果:3组患者MMSE均有提高,治疗后C组认知功能评分提高明显高于A组和B组(P<0.01),且B组较A组对认知改善明显(P<0.05);血UA、ACA和VEGF水平治疗前各组比较差异无显著性,治疗前后比较A、C 2组差异有非常显著性(P<0.01),提示经治疗后血UA和ACA水平降低,VEGF水平升高,而B组治疗前后比较差异无显著性(P>0.05),提示单纯认知康复训练对血UA、ACA和VEGF水平影响甚微。A、C 2组治疗后比较差异无显著性(P>0.05),A、C 2组与B组比较差异非常显著(P<0.01),提示A组与C组均可以降低血UA、ACA水平,升高VEGF水平。结论:头穴丛刺联合认知康复训练对脑卒中后认知功能障碍有改善作用,降低血UA、ACA水平,升高VEGE水平。而单纯认知康复对血UA、ACA及VEGE水平影响甚微。

基于ACA的飞行仿真伺服系统LuGre摩擦参数辨识(英文)

针对 Lu Gre摩擦模型的高度非线性问题 ,提出了一种新型的基于 ACA的飞行仿真伺服系统摩擦参数辨识方法。ACA是近几年优化领域中新出现的一种仿生进化算法 ,该算法采用分布式正反馈并行计算机制。在简要介绍Lu Gre摩擦模型的基础上 ,推导了 ACA的 Lu Gre模型静态摩擦参数和动态摩擦参数辨识方法 ,并将该辨识方案应用于某型电动飞行仿真伺服系统。实例仿真验证了本文提出的基于 ACA的 Lu Gre模型摩擦参数辨识方案的可行性和有效性 ,该方案为辨识 Lu

ACA微胶囊固定化细胞发酵木糖醇

考察了以游离酵母细胞、海藻酸钠固定化细胞、壳聚糖 /海藻酸钠 (ACA)微胶囊固定化细胞的木糖醇发酵 ,发现与游离、海藻酸钠固定化发酵相比 ,微囊化发酵转化率更高、更稳定。其转化率稳定在 65 %左右 ,发酵周期约为 5 0h。

情报学学科结构的ABCA及ACA对比研究——以2000-2010年数据为例

以SCI&SSCI 2000-2010年间情报学的相关数据为样本,结合传统的ACA(作者共被引)方法,以ABCA(作者文献耦合分析)方法为研究视角,探析2000-2010情报学的学科结构,并进行ABCA与ACA的比较研究。研究探测到了情报学的几位具有较强研究活力以及广泛影响力的学者,如Thelwall,M、Leydesdorff,L、Cronin,B、White,HD、Meho,LI等。探寻到情报学的7个主要研究主题:科学计量学、网络资源管理与配置、信息检索、信息系统、知识管理、用户交互与服务、科学评价,其中科学计量学和网络资源管理与配置是2个主流研究主题;研究认为,各研究主题之间的融合还有待于进一步加强。在研究主题探测方面,ABCA是以当前活跃的作者的角度进行分析;ACA则是以对情报学产生持续影响的作者为角度。ABCA可以探寻到更多的研究主题,但ABCA与ACA探测到的主题内容没有太大出入。

GL-7-ACA酰化酶基因克隆及在大肠杆菌中的表达

本文报道了利用BamHI酶解的载体pBR322 DNA与Sau3A部分酶解的假单胞菌Ps.130染色体DNA片段构建重组质粒,并用^(32)P标记的寡核苷酸探针从3205个含有外源片段的重组质粒中检测得到7株阳性克隆株。进一步经^(125)I一标记的抗体/抗原放射免疫反应、GL-7-ACA酰化酶活力测定以及酶反应产物的纸谱色层分析,由上述7株阳性株中鉴定出3株能在大肠杆菌中表达酰化酶活力的基因克隆株。对该3株菌的重组质粒——pMR 5、pMR 6和pMR7 DNA的初步凝胶电泳分析表明,pMR 5和pMR 7质粒中插入片段的分子量为6.8kb,质粒pMR 6则带有5.7kb的外源片段。实验还比较了重级质粒pMR5在8株不同的大肠杆菌宿主菌中,GL-7-ACA酰化酶的表达水平。

金属螯合载体一步纯化与固定化GL-7ACA酰化酶

采用金属鳌合亲和层析技术,以EIP-ARG-IDA-Co^2＋为载体,从可溶性总蛋白中一步分离纯化具有His-tag标签的GL-7ACA酰化酶.在此基础上进行了固定化方面的研究,其固定化最适条件是150-200U/g给酶量与载体比,固定化时间16 h,固定化介质pH=7.0.固定化酶的最适反应温度为50℃,最适反应pH为8.0.同时还考察了固定化酶的热稳定性、重复利用性及载体的重复使用等特性.

产GL-7-ACA酰化酶重组大肠杆菌的构建和表达

为了实现GL 7 ACA酰化酶在大肠杆菌中的成功表达 ,将GL 7 ACA酰化酶基因用PCR的方法去除其信号肽序列 ,并将其连接到质粒pET 2 8a ,通过筛选得到了表达GL 7 ACA酰化酶的重组菌BL2 1 (DE3) /pET ACY。分别考察了诱导温度、菌浓 (OD60 0 )、诱导剂IPTG的用量等因素对重组菌表达GL 7 ACA酰化酶的影响。在优化条件下 ,GL 7 ACA酰化酶酶活可达 2 66U/L。GL 7 ACA酰化酶经一步DEAE Sepharose纯化即可达到 80 %的纯度 ,酶活收率为 5 0 %。

两个新的粟酒裂殖酵母boxH/ACAsnoRNA的鉴定、功能分析及进化意义

通过构建粟酒裂殖酵母核小分子RNA的CDNA文库,发现并鉴定了两个新的非编码RNA,分别命名为Sp15-70和Sp18-61.生物信息学分析揭示这两个RNA均具有典型的box H／ACA snoRNA二级结构特征和与rRNA互补的配对区,推测Sp15-70具有指导25S rRNA中U2401和U2298假尿嘧啶修饰的功能;Sp18-61具有指导18S rRNA中U208和25S rRNA中U2341假尿嘧啶修饰的功能.采用CMC-引物延伸法证实:在粟酒裂殖酵母rRNA中,这4个预测位点确实为假尿嘧啶修饰核苷酸.Sp15-70和Sp18-61均由单拷贝基因编码,分别位于粟酒裂殖酵母染色体Ⅰ和Ⅲ上蛋白质基因的间隔区,在其5'端上游均发现了典型的TATA box元件,表明它们都是独立转录的基因.比较分析这两个snoRNA在不同生物中的功能性同源分子,发现snoRNA基因在进化的过程中发生了广泛的分子重组和转位.

GL-7-ACA酰化酶基因片段的酶谱分析及基因定位

本文报道了从假单胞菌130菌株(Pseudomonas sp.130)染色体上克隆得到的6.8kb的GL-7-ACA酰化酶基因片段的限制酶谱,基因定位以及在不同的大肠杆菌基因启动子控制下酰化酶基因的表达水平。结果表明,所克隆的片段上,不存在EcoR Ⅰ、Hind Ⅱ、Cla Ⅰ切点,分别具有一个Hpa Ⅰ、两个Xho Ⅰ、三个BamH Ⅰ以及四个Pst Ⅰ切点,同时初步确定了这些酶切位点之间的相对位置。经过一系列次级克隆研究,GL-7-ACA酰化酶基因已被定位在3.0kb的B_2-B_3-Hpa Ⅰ片段上。实验比较了以pACYC184、pDR540、pUC10等为载体的次级克隆株(分别为pMR9、pMR10和pMR11)在大肠杆菌中酰化酶基因的表达水平,测定数据表明tac启动子的启动活力比tet启动子强,即pMR10的产酶量比pMR9高一倍,而当tac启动子前再串接一个lac启动子时(pMR11),产酶水平并不进一步提高。本文还对假单胞菌基因在大肠杆菌中的表达进行了讨论。