组蛋白乙酰化调控异常与大鼠抑郁行为的关系研究

目的研究组蛋白乙酰化与慢性不可预见刺激(chronic unpredictable stress,CUS)致大鼠抑郁行为的关系。方法30只♂Sprague Dawley(SD)大鼠随机分为对照组和模型组,采用孤养结合CUS方式连续刺激28 d建立大鼠抑郁症模型;以开场实验和强迫游泳实验评价大鼠抑郁行为;采用实时荧光定量PCR法检测大鼠前脑皮层和海马组蛋白去乙酰化酶2(histone deacetylase 2,HDAC2)mRNA表达;采用Western blot法检测大鼠前脑皮层和海马组蛋白H3(histone3,H3)、组蛋白H4(histone 4,H4)、乙酰化组蛋白H3(actylation-histone 3,ac H3)及乙酰化组蛋白H4(actylation-histone4,ac H4)蛋白表达水平。结果与对照组大鼠相比,模型组大鼠开场实验得分明显降低(P<0.01)、强迫游泳实验不动时间明显延长(P<0.01)、前脑皮层和海马HDAC2 mRNA和蛋白表达明显增加(P<0.01)、组蛋白H3和组蛋白H4蛋白表达均无明显差异、ac H3及ac H4蛋白水平均明显降低(P<0.01)。结论 CUS诱导大鼠产生抑郁样行为改变,其机制可能与脑内HDAC表达增高致组蛋白乙酰化修饰水平降低有关。

一种微小染色质免疫共沉淀方法的建立

染色质免疫共沉淀(chromatin immunoprecipitation assay,ChIP)是目前研究蛋白与DNA相互作用的强有力的技术之一。然而传统的ChIP实验方法的最大缺陷是要求大量的细胞数,这限制了它应用于少量细胞数的样品。在传统ChIP实验的基础上综合国外文献建立了一种能在少量细胞样品中进行的染色质免疫共沉淀实验,称之为微小染色质免疫共沉淀(miniChIP)。并通过对诱导前后的MEL细胞中表达的β珠蛋白基因簇组蛋白H4乙酰化(acH4)的研究,证实了其可靠性和特异性。结果显示:高敏位点HS2和活跃基因β-maj的启动子区域存在一定的组蛋白H4乙酰化水平,DMSO诱导后显著增加,而不活跃基因Ey的启动子区域则检测到极低水平的组蛋白H4乙酰化,且诱导后无明显变化。

朝医三神散改善血管性痴呆模型大鼠认知功能障碍的机制研究

目的探讨朝医三神散对血管性痴呆模型大鼠认知功能障碍的作用机制。方法雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、朝医三神散高、低剂量组和西药盐酸多奈哌齐组,除假手术组外均采用“两血管阻断+硝普钠降压法”建立血管性痴呆(VD)模型。分别给药4周后,通过Morris水迷宫测试大鼠的学习记忆能力,HE染色法观察大鼠海马病理形态变化,用ELISA法检测大鼠血清中的AchE,Bax,Bcl-2的含量和炎性因子TNF-α、IL-6、IL-1β的分泌水平,Western blot法检测大鼠脑组织中TLR4的蛋白表达量、检测NF-κB信号通路关键蛋白NF-κBp65的表达水平。结果朝医三神散高剂量组在第3天开始明显比西药组上台潜伏期缩短;HE染色结果发现朝医三神散的高、低剂量组与模型组相比,细胞数量增多,细胞紧密结构完整;ELISA结果表明,朝医三神散高、低剂量组与模型组相比Bcl-2的含量则显著升高;West-ern blot法显示,朝医三神散可抑制VD大鼠脑组织TLR4及NF-κB p65的过度表达。结论朝医三神散可以提高痴呆模型大鼠的学习记忆能力,降低AchE、Bax表达含量,提高Bcl-2的表达含量,从而抑制神经细胞凋亡,通过调控TLR4/NF-κB信号转导通路抑制VD大鼠血清中TNF-α、IL-6和IL-1β的分泌,发挥其抗炎作用,起到提高血管性痴呆大鼠认知能力的作用。