牛去细胞骨基质的生物相容性研究

目的研究新型骨修复材料牛去细胞基质骨的生物相容性,为其在骨缺损修复领域中的临床应用提供实验依据。方法对牛去细胞骨基质进行急性毒性实验、热源实验、溶血实验、兔肌肉内种植实验和兔桡骨骨缺损修复实验研究。结果牛去细胞骨基质无毒性、无热源性、不引起溶血反应,植入兔肌肉后逐渐发生生物降解并被纤维组织取代,兔骨缺损区植入后可被骨组织取代。结论牛去细胞骨基质具有良好的生物相容性,是理想的骨支架材料。

25例先天性无阴道的手术治疗

目的探讨先天性无阴道患者的手术疗效。方法回顾性分析2006年1月-2011年6月我科就诊的25例先天性无阴道患者的临床资料,20例行脱细胞异体真皮补片人工阴道成形术,3例行腹会阴联合腹膜代阴道成形术,2例行羊膜代阴道成形术。结果 19例脱细胞异体真皮补片人工阴道成形术和1例腹膜阴道成形术者在术后8周人工阴道完全黏膜化,性生活满意率为90%。结论脱细胞异体真皮补片阴道成形术后阴道黏膜化时间短,满意率高,是一种值得推广的术式。

脱细胞异体真皮基质的遗传毒性研究

目的:检测医疗器械注册产品脱细胞异体真皮基质的遗传毒性。材料与方法:以产品浸提液为供试液,采用细菌回复突变试验(Ames试验)和小鼠淋巴瘤细胞试验(MLA),在非代谢活化(-S9)和代谢活化(+S9)条件下检测。Ames试验采用平板掺入法,检测了50、100、200μl/皿3个剂量组诱发鼠伤寒沙门氏菌TA98、TA100、TA1535、TA1537及大肠杆菌WP2 uvrA的回变菌落数;MLA检测了终浓度2.5%、5%、10%(V/V)3个浓度组,在+S9/3 h、-S9/3 h、-S9/24 h三种处理条件下诱发的L5178Y细胞TK基因突变频率(MF)和小集落突变百分率(SC%)。结果:未经复水处理所得样品浸提液诱发五株菌的回变菌落数,对比氯化钠注射液溶媒(阴性)对照组均无明显增加;-S9/3 h处理条件下诱发的MF明显增加(P<0.01),且具有浓度相关性;复水处理后所得样品浸提液,在-S9/3 h、24 h条件下诱发的MF均无明显增加。结论:脱细胞异体真皮基质对测试菌株his-/trp-无明显诱变作用,未经复水处理时在-S9条件下对测试细胞tk-+/-及染色体具明显损伤作用,经复水处理后无明显损伤作用。产品在非代谢活化条件下表现出的阳性结果可能与其附加的冷冻保护剂有关。

碳化二亚胺交联改性脱细胞异种猪肌腱修复跟腱缺损

背景:异体肌腱移植是目前修复肌腱缺损的理想方法,但移植后的排斥反应使其使用受到限制。目的:观察碳化二亚胺交联改性脱细胞处理的版纳近交系微型猪肌腱移植修复兔跟腱缺损的效果。方法:横向切除40只日本大白兔双侧跟腱,随机分组:实验组以碳化二亚胺交联改性脱细胞版纳近交系微型猪肌腱移植修复,对照组以自体肌腱移植修复。结果与结论:①组织学观察:两组新生组织内细胞主要都是单核的成纤维细胞和纤维细胞,术后1-4周主要是呈椭圆形或圆形的成纤维细胞,细胞聚集区的细胞周围有新生胶原形成,这些胶原的走向较紊乱;局灶性条索状成熟胶原呈岛状分布,形成所谓"胶原岛";术后12周时细胞越来越拉长,成为梭形和长条形的纤维细胞。②实验室检测:两组白细胞、C-反应蛋白水平、羟脯氨酸含量及抗拉强度差异均无显著性意义。说明碳化二亚胺交联改性的脱细胞版纳近交系微型猪肌腱能成功修复兔跟腱缺损,且具有组织相容性好、移植排斥反应轻、生物力学性能强的优点。

脱细胞角膜基质应用于组织工程角膜的研究

目的研究磷脂酶A2(phospholipase A2,PLA2)联合液氮缺氧冷冻法制备的脱细胞猪角膜(acellular porcine corneal,APC)基质作为组织工程角膜支架材料的可行性。方法使用200 U·mL-1PLA2和液氮缺氧冷冻处理正常猪角膜(native procine cornea,NPC)以制备APC,对制备的APC及NPC进行组织形态学及透射电镜观察。将实验分为两组,对照组为NPC组,实验组为APC组,分别对两组进行角膜厚度、吸水率、透光率、力学性质检测。结果 PLA2消化联合液氮缺氧冷冻法制备的APC高度透明,脱细胞完全,超微结构保持完整,除吸水率随时间变化的趋势与NPC比较差异有统计学意义(P<0.05)外,APC厚度(849.5±29.6)μm与NPC厚度(875.2±28.9)μm比较,以及透光率、力学性质与NPC比较,差异均无统计学意义(均为P>0.05)。结论 PLA2联合液氮缺氧冷冻法制备的APC生物和物理学特性与正常角膜相似,是一种适合组织工程角膜构建的良好支架材料。

羊膜衍生膜负载骨髓间充质干细胞修复软骨缺损的可行性研究

目的研究人羊膜衍生膜负载骨髓间充质干细胞修复兔膝关节非负重区软骨缺损的可行性。方法自2012年7月至2013年3月，体外分离、扩增兔BMSCs，以1．63×10^5／cm^2的密度接种于HAAM上，共培养7～8d后，行电镜、光镜检查及苏木精-伊红（HE）染色。24只兔股骨髁间窝制备直径4mm、深3mm的软骨缺损模型，随机分为A、B两组，每组12只，建立膝关节髁间窝非负重区关节软骨缺损模型，右膝为空白对照侧，不植入任何材料，左膝为实验侧。A组左膝植入BMSCs与HAAM复合体，B组左膝植入单纯HAAM。移植4、12周后取新生组织，以行大体观察、组织学检查。结果大体观察及组织学观察，术后4、12周A组BMSCs—HAAM侧再生组织色白、质软、表面光滑，可见透明软骨细胞。12周时修复组织与正常软骨平齐，修复部位表面较平整，界限模糊，接近正常软骨；修复组织全层可见透明软骨细胞。B组HAAM侧修复组织表面不平并有明显凹陷，主要由成纤维细胞组成。两组空白对照侧未见明显修复。结论人羊膜衍生膜负载BMSCs可以修复兔膝关节髁间窝非负重区关节软骨缺损。

去细胞异种肌腱复合IGF-Ⅰ修复肌腱缺损的实验研究

目的探索用去细胞异种肌腱复合胰岛素样生长因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)修复肌腱缺损的可行性提供理论依据,为肌腱组织工程的细胞生长支架提供实验依据。方法切取月龄(6个月)相同Leghorn鸡屈趾肌腱经化学去细胞处理后作为异种肌腱移植供体,健康成熟日本大耳白兔54只,建立双后肢跟腱中间束2 cm缺损模型,随机分为3组,每组18只。实验组为去细胞异种肌腱复合IGF-Ⅰ移植组(A组)、对照组Ⅰ为自体肌腱移植组(B组)、对照组Ⅱ为单纯去细胞异种肌腱移植组(C组)。术后伸直位管型石膏固定2周,术前3 d 10只兔及术后第3、7、14天每组10只兔取耳缘静脉血行血常规检测;2、4、9周每组取6只兔对标本行生物力学测定、组织学光镜检测及图像分析。结果 (1)在相同时期内,A、B、C三组血常规白细胞数两两比较差异无统计学意义(P>0.05)。(2)术后相同时间内三组生物力学两两比较,A组与B组之间无统计学差异(P>0.05),A、B组与C组之间差异有统计学意义(P<0.05),术后2周时肌腱最大抗拉力最差,9周时A、B两组最大抗拉力接近正常水平。(3)肌腱移植后总体上经历了细胞长入、胶原纤维再生、替代和再塑形的过程,术后相同时间内三组胶原纤维含量两两比较,A、B组与C组之间差异有统计学意义(P<0.05),A组与B组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 (1)化学去细胞肌腱可明显降低其免疫原性,移植后无明显的免疫排斥反应发生,其力学强度亦能满足肌腱移植的需要。(2)化学去细胞异种肌腱复合IGI-Ⅰ修复肌腱缺损的效果优于单纯化学去细胞异种肌腱的修复效果。

软骨脱细胞基质对软骨细胞生物学功能的影响

目的 检测软骨脱细胞基质（ACM）对软骨细胞的生物学作用,探讨其作为软骨组织工程支架的可行性.方法 切取健康的雄性日本大耳白兔膝关节的软骨,经低温粉碎成软骨颗粒,通过多步骤酶方法将软骨颗粒行脱细胞处理,并用含20%胎牛血清的DMEM研磨制成ACM液.再切取兔膝关节的软骨,制成碎屑后分离培养软骨细胞.取培养第2、3代的软骨细胞,分成对照A组和B、C、D3个实验组（分别加入0.5、1.0、5.0ms/ml的ACM液）.采用MTT法检测软骨细胞的活力,测定糖胺多糖的含量,以及H-胸腺嘧啶（3H-TdR）和3H-脯氨酸（3H-Pro）掺人法测定软骨细胞的增殖情况和胶原的合成能力.结果 ACM扫描电镜观察软骨巢内软骨细胞消失.软骨细胞在ACM液中生长良好,形态正常.B、C、D与A组相比,软骨细胞的生长活力分别增加了7.73%、13.50%、16.5%（P〈0.05或P〈0.01）.糖胺多糖的含量在B组与A组相比其差异无统计学意义（P〉0.05）;而C、D组比A组增加了51.15%、62.68%（P〈0.05或P〈0.01）.软骨细胞3H-TdR和3H-Pro掺入后,在B、C、D组中细胞的增殖及合成的胶原与A组相比,其差异均有统计学意义（P〈0.01）.结论 ACM能够提高软骨细胞的生长活力,增加糖胺多精的含量,刺激软骨细胞的增殖和胶原的合成,是可供选择的组织工程支架材料之一.

新型软骨脱细胞基质海绵的制备及生物相容性评价

目的探讨利用猪耳软骨脱细胞基质制备海绵状多孔支架材料的方法,及其用作组织工程关节软骨支架材料的可行性。方法取新鲜猪耳软骨低温粉碎后,筛取粒径90μm以下软骨微粒经低温脱细胞处理,冻干,用1.5%乙酸分散制备质量体积比为2%的胶状悬液,低温冻干成型。行理化性能检测测定其孔径、孔隙率及吸水率,并行组织学及扫描电镜观察。24只SD大鼠脊柱两侧皮下分别植入制备的软骨脱细胞基质海绵(实验组)和ColⅠ海绵(对照组);于术后1、2、4、8周取材行组织学观察,分析软骨脱细胞基质海绵在体内的吸收降解情况。取1周龄新西兰大白兔股骨骨髓,培养获取第3代BMSCs,分别采用浓度为50%(A组)及100%(B组)的软骨脱细胞基质海绵浸提液及DMEM培养液(C组)进行培养,于培养后2、4、6dMTT法测定细胞增殖。结果制备的软骨脱细胞基质海绵呈白色多孔状,组织学观察示材料中无软骨细胞碎片残留,主要由胶原构成。扫描电镜显示材料呈多孔蜂巢状,孔洞相互连接,孔径均匀。吸水率为2029%±253%,孔径为(90.66±21.26)μm,孔隙率为90.10%±2.42%。支架材料植入SD大鼠皮下后可见组织长入材料,血管生成,炎性反应较对照组轻,材料可按一定速率降解吸收。MTT法检测结果示,浸提液培养2、4d,3组间吸光度(A)值差异无统计学意义(P>0.05);6d,3组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论将软骨脱细胞基质进行改性处理制备的海绵支架材料脱细胞彻底,保留了软骨ECM主要成分,无毒,具备合适的孔径和孔隙率,孔隙分布均匀,生物相容性好,可作为软骨组织工程的支架材料。

去细胞真皮基质修复兔巨大肩袖损伤的生物力学研究

目的评价去细胞真皮基质对兔巨大肩袖损伤的修复效果。方法将42只成年雄性新西兰大白兔随机分为3组:巨大肩袖损伤常规手术组(对照组,n=18),去细胞真皮基质治疗组(实验组,n=18),正常组(正常组,n=6),对照组和实验组于术后4、8、12周分批随机取出各组12侧肩袖标本行生物力学测试;正常组于12周取出12侧肩袖标本行生物力学测试。结果生物力学测试显示:在术后各个时间点,实验组腱骨界面的断裂载荷显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01);但术后12周二者腱骨界面的断裂载荷仍显著低于正常组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论去细胞真皮基质修补巨大肩袖损伤可增强其腱骨界面的抗拉载荷,有利于巨大肩袖损伤的愈合。