人关节软骨脱细胞基质的制备

目的制备人关节软骨脱细胞基质。方法切取人关节软骨,对之冷冻干燥后,采取化学去污剂TritonX100及DNA酶和RNA酶等试剂制备脱细胞的人关节软骨。做HE、番红0及软骨蛋白聚糖(aggrecan)免疫组化染色等方法进行检测。结果HE染色、番红0染色均显示细胞陷窝内己无细胞结构番红花0染色阳性;软骨蛋白聚糖免疫组化染色阳性。结论人关节软骨冻干后,经去污剂酶等处理方法可脱去软骨的细胞成分,并且保留了软骨细胞外基质,成功制备了人关节软骨脱细胞基质。

兔半月板脱细胞基质的制备

目的制备兔半月板脱细胞基质并研究其组织形态结构及生物力学特性。方法将切取的兔半月板用双氧水浸泡、蒸馏水洗涤后,采取Triton X-100及脱氧胆酸钠等试剂制备脱细胞的兔半月板,观察其色泽、质地,用苏木精-伊红(HE)、甲苯胺蓝、番红花O、Hoechst-33258荧光染色及Ⅰ型胶原免疫组化染色等方法进行组织学检测,用倒置相差显微镜观察其微观三维结构,用生物力学机测定其在不同压缩比率下的瞬时形变恢复率、最大形变恢复率及最大受压强度。结果兔脱细胞半月板呈乳白色,结构蓬松,HE、甲苯胺蓝和番红花O染色均显示细胞陷窝内已无细胞结构,Hoechst-33258荧光染色呈阴性,Ⅰ型胶原免疫组化染色呈阳性。倒置相差显微镜观察到脱细胞半月板基质内部结构疏松,微孔较多。生物力学测定其压缩40%时,最大瞬时形变恢复率为(76.65±4.61)%,最大形变恢复率为100%,最大强度是(4.51±0.69)N。结论成功制备的兔半月板脱细胞基质有较多微孔,形变恢复好,有利于细胞附着生长,可作为组织工程支架。

同种脱细胞软骨基质与软骨细胞复合物修复兔甲状软骨缺损的实验研究

目的探讨脱细胞软骨基质(acelluarcartilaginousmatrix,ACM)与软骨细胞复合后植入兔体内,能否形成软骨修复甲状软骨缺损。方法分离培养兔甲状软骨细胞,与ACM体外复合培养,形成ACM-软骨细胞复合物,进行组织学分析及用于修复兔甲状软骨缺损。新西兰大白兔18只,制成两侧甲状软骨缺损模型,随机分为3组,每组6只。对照组:只制备缺损,不作修复;ACM修复组:采用单纯ACM修复缺损;实验组:用ACM-软骨细胞复合物修复。术后8周处死动物,取出标本,进行大体和组织学观察。结果体外培养时,软骨细胞能在ACM表面生长,未长入基质内。动物实验结果,对照组:甲状软骨缺损处被肌肉、结缔组织充填;ACM修复组:ACM内炎性细胞浸润,轻度吸收变形;实验组:复合物植入体内后8周未形成软骨,甲状软骨缺损修复不理想。结论ACM体外培养和体内植入均未能为软骨细胞生长提供支持,作为一种天然细胞培养支架,尚有待进一步改进与完善。

NaOH消蚀法制备胎儿脱细胞真皮基质的研究

目的:探索NaOH消蚀法对胎儿真皮基质的成分及其形态结构的影响。方法:使用NaOH消蚀法制备胎儿皮肤的脱细胞真皮基质(ADM),应用组织化学和免疫组织化学染色方法检测细胞的余留及细胞外基质成分的破坏情况,应用扫描电镜观察ADM的构筑。结果:NaOH消蚀处理16h即可去除真皮细胞成分。制备的ADM韧性好,勿需戊二醛交联。弹性纤维的含量有所减少而胶原纤维形态完整,排列正常,保留了基本的真皮构筑。HLA-DR呈阴性,Fibronectin(FN)呈弱阳性,Laminin(LN)和Ⅳ型胶原均呈阴性。结论:NaOH消蚀法简易经济,去除细胞成分较彻底,所制备的ADM韧性好,胶原纤维形态完整,排列正常,但对基膜的成分及结构破坏较重。

脱细胞异种真皮皮下埋植的实验研究

目的 :观察胰蛋白酶及冻融法制备的脱细胞真皮能否为构建人工复合皮提供一种理想的真皮替代物。方法 :将胰蛋白酶消化和冻融法制备的脱细胞异种真皮 ( 2cm× 2cm)埋入SD大鼠皮下 ,分别于术后 2、4、6、8周活检行组织学检查。结果 :术后 4周脱细胞真皮内有明显的微血管和成纤维细胞长入。结论 :胰蛋白酶消化和冻融法制备的脱细胞异种真皮能诱导宿主微血管和成纤维细胞长入 ,为其上培养的表皮或重叠移植的自体薄皮片提供营养 ,是一种理想的真皮替代物。

复合人工皮肤修复猪全层皮肤缺损

目的:探讨复合人工皮肤在修复中国小型猪全层皮肤缺损中的作用。方法:16头中国实验用小型猪于背部正中分别切除全层皮肤至深筋膜的3个创面,3个创面以数字表法分成复合皮移植组(实验组),刃厚皮移植组(对照组1)及全厚皮移植组(对照组2),术后定期留取创面组织进行组织学检测。结果:人工复合皮肤具有表皮,真皮双层结构,在愈合过程中表皮细胞逐步增殖、分化、发育形成基底层、棘细胞层、颗粒层和角质层。结论:表皮细胞悬液与脱细胞真皮基质重组的复合皮由于含有真皮与表皮双层结构,其组织学形态与超微结构与天然皮肤极为相似;通过表皮细胞培养可扩大皮源,为大面积深度烧伤患者提供了皮源。利用组织工程技术构建人工复合皮肤,可用于皮肤缺损者的治疗,解决了自体供皮不足。

季铵盐改性脱细胞猪真皮基质的研究

采用不同用量(1%、5%、10%)的十二烷基三甲基氯化铵(DTAC)浸渍脱细胞猪真皮基质(pADM),测定了改性后pADM的接触角、吸湿率、溶胀率、毛细管吸水率以及对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的抑菌性能。结果显示:通过DTAC处理后的pADM,接触角随DTAC用量的增大而减小,吸湿率、溶胀率与毛细管吸水率随DTAC用量的增加呈现先升高后减小的趋势。随着DTAC用量的增大,抑菌圈直径也增大,抑菌性能增强。

异种（猪）脱细胞真皮基质敷料在门诊烧伤患者中的应用

目的探讨应用异种（猪）脱细胞真皮基质包扎治疗门诊小面积烧伤患者的可行性。方法2006年11月至2012年11月门诊收治的63例小面积烧伤患者分别应用异种（猪）脱细胞真皮基质治疗和传统聚维酮碘乳膏纱布换药治疗，根据烧伤的深浅和处理方法的不同分成四组：真皮基质治疗浅Ⅱ°组（13例）、聚维酮碘乳膏治疗浅Ⅱ°组（17例）、真皮基质治疗深Ⅱ°组（19例）、聚维酮碘乳膏治疗深Ⅱ°组（14例）。观察创面愈合时间、换药次数、创面疼痛情况、患者依从性等。结果真皮基质治疗小面积浅Ⅱ°创面，创面平均愈合时间为（6．23±2．21）天，真皮基质治疗小面积深Ⅱ°创面，创面平均愈合时间为（12．46±3．57）天；聚维酮碘乳膏治疗小面积浅Ⅱ°创面，创面平均愈合时间为（8．37±4．39）天，聚维酮碘乳膏治疗小面积深Ⅱ°创面，创面平均愈合时间为（15．45±6．32）天。真皮基质治疗小面积浅Ⅱ°创面，平均换药次数为（3．34±1．45），真皮基质治疗小面积深Ⅱ°创面，平均换药次数为（3．69±2．48）；聚维酮碘乳膏治疗小面积浅Ⅱ°创面，平均换药次数为（6．67±3．72），聚维酮碘乳膏治疗小面积深Ⅱo创面，平均换药次数为（8．54±6．21）。结论真皮基质能够有效促进创面愈合，减少换药次数，适合门诊应用。

脱细胞异体真皮与自体刃厚皮复合移植的手术配合

目的探讨脱细胞异体真皮与自体刃厚皮复合移植的手术配合方法。方法对167例脱细胞异体真皮与自体刃厚皮复合移植手术患者的术前、术中、术后的资料进行总结并作回顾性分析。结果167例均顺利完成手术,其中瘢痕切除植皮者成活率为97.8%±1.4%,烧伤创面及糖尿病足创面成活率为92.6%±4.6%,术后无并发症。结论充分做好术前准备,术中妥善保管脱细胞异体真皮、正确固定复合皮片、熟练做好术中配合是手术成功的关键。

脱细胞真皮基质和聚丙烯补片修补大鼠腹壁疝的实验研究

目的 探讨复合消蚀法制备的脱细胞真皮基质（ADM）和聚丙烯补片（Marlex网）修补大鼠腹壁疝的应用价值.方法 用全厚猪皮制备ADM,选用SD雄性大鼠45只,完全随机分为腹壁疝组7只、Marlex网组10只和ADM组28只,观察3组术后1周时有无腹壁疝的发生,术后第5周Marlex网组和ADM组随机选取6只用于抗张力试验.结果 术后1周时,ADM组与Marlex网组腹壁疝发生率均明显低于腹壁疝组（分别为0.04%、0.00%、100.00%,P＜0.01）,但ADM组与Marlex网组差异无统计学意义（P＞0.05）.将单独ADM片与Marlex网行抗张力试验,Marlex网的抗张力远高于ADM[（417±44）N比（111±27）N,P＜0.01].但植入体内5周后,ADM-筋膜组织的抗张力高于Marlex-筋膜组织[（103±27）N比（71±19）N,P＜0.05].结论 复合消蚀法制备的ADM可能比聚丙烯补片更适合作为疝修补材料.

脱细胞真皮基质材料的研究及应用

本文对脱细胞真皮基质材料的制备方法、作用机制、免疫原性及临床应用做一综述。

异种(牛)脱细胞真皮基质在开放性乳突根治术中应用的疗效观察

目的探讨异种脱细胞真皮基质在开放性乳突根治术中的临床应用及其意义。方法回顾性总结分析128例行开放性乳突根治术的患者病历资料,其中实验组60例术腔应用异种脱细胞真皮基质覆盖,对照组68例术腔未应用任何贴覆物。对比两组患者术后术腔愈合情况及上皮化时间。结果术后实验组术腔光滑、渗液少,易清理,平均上皮化时间为4.2周,对照组术腔渗出较多,清理困难、换药频繁,平均上皮化时间11.5周;两组术后上皮化时间行t检验(P<0.001),差异有统计学意义。结论开放性乳突根治术中异种脱细胞真皮基质贴覆的术腔,上皮化时间短、干耳快,抗感染能力强、减少术后复发。

脱细胞真皮包裹PHEMA水凝胶义眼台的实验研究

目的:研究脱细胞真皮包裹的水凝胶义眼台复合物的制备方法,评价其生物学性能。方法:材料制备:用MMA和HEMA的聚合物单体加入NaCl成孔剂制备多孔水凝胶义眼台,750mL/L乙醇浸泡制备同种异体巩膜包裹物。动物实验:新西兰白兔32只,右眼球摘除术后,16只植入脱细胞真皮包裹的直径为12mm的水凝胶义眼台作为实验组,16只植入保存异体巩膜包裹的直径为12mm的水凝胶义眼台作为对照组,术后在不同时间点(2,4,8,12wk)取材作病理检查,比较不同包裹材料对义眼台血管化程度和义眼台植入并发症发生率影响的差别。结果:MMA和HEMA的聚合物单体体积膨胀率为1.2,孔隙率为72%,孔径大小为450～520μm,且多为通孔。不同材料包裹PHEMA多孔水凝胶义眼台植入兔眶腔术后,所有32眼无肉芽肿发生及义眼台排出。光镜结果显示纤维血管组织2wk时从植入物外周长入,4～8wk时孔隙内胶原纤维逐渐致密,12wk时完成纤维血管化,扫描电镜显示植入物孔隙内逐渐被纤维血管组织填充,2wk时纤维血管组织附壁生长,12wk时孔隙内被纤维血管组织充满且孔间相连。对各组植入物纤维血管化程度进行测量,结果进行多因素方差分析,实验组较对照组血管化速度快(P=0.01)。结论:PHEMA水凝胶义眼台和脱细胞真皮生物相容性好,是一种安全可靠的眶内植入物,符合临床应用的要求,具有潜在的实际应用价值。

hIGF-1促进软骨细胞在脱细胞软骨基质材料中的增殖及黏附

目的探究脱细胞软骨基质(ACM)作为天然细胞支架的可行性及人胰岛素样生长因子1(hIGF-1)对软骨细胞在ACM上的增殖及黏附作用的影响。方法兔耳软骨细胞原代培养,取第3代细胞备用。将脱细胞处理获得的ACM进行HE染色、Masson染色及电镜下观察,用CCK-8法检测支架浸提液的毒性。将软骨细胞接种至ACM中,实验组加入57.14μg/L的hIGF-1,培养7 d后于电镜下观察细胞在ACM上的增殖及黏附。结果1)ACM疏松多孔,电镜下孔径(3.48±1.39)μm,孔隙率(90.13±2.52)%。2)实验组软骨细胞增殖旺盛,细胞占据绝大部分支架空穴。而对照组软骨细胞增殖较缓慢,且仅有少量细胞进入材料空穴内。结论实验制备的ACM是一种可靠的天然细胞支架。且hIGF-1能促进软骨细胞在ACM上的增殖及黏附。

双矢量小切口(短瘢痕)面部提升术

目的:寻找一种安全可靠、操作简单、恢复快捷、切口短小、效果持久的面部提升手术方法。方法:选择2019年1月-2021年12月就诊的47例就医者为研究对象,通过综合经典小切口(短瘢痕)和颞部小切口的术式,应用皮下、表浅肌肉腱膜系统(Superfacial Musculo Apponurotic System,SMAS)、SMAS下平面(sub-SMAS)以及骨平面等层面,在眶颧、眶下、梨状孔、颧肌、面颊、下颌缘及颈阔肌等部位,松解释放包括颧韧带、眶韧带、眼轮匝肌下限制韧带、颧骨皮韧带、颊上颌韧带、腮腺咬肌韧带、颈阔肌限制韧带等,通过单叶或双叶SMAS瓣悬吊、限制性叠瓦状固定、可吸收拉提带双平面拉提等方法,对面部组织进行外上和垂直双矢量强力提升,达到全方位面部年轻化的效果。结果:该方法对面部衰老发生原理、老化病损的症状和表现进行针对性的处理,47例就医者面部松垂的典型表现如眉眼周围松垂、颧脂肪垫位置下移、睑颊沟鼻唇沟加深、颊部松垂、“羊腮”显现、下颌缘臃肿不清晰、颈部松弛等均有不同程度地改善,达到了面部提升的效果。结论:双矢量小切口面部提升术通过经典小切口或短瘢痕术式有限操作空间进行操作,实现瘢痕最小化的效果;加用颞部小切口,通过骨膜层面安全便捷的完成延展性面部提升的预期和操作,规避了手术的风险;应用SMAS瓣垂直矢量提升和叠瓦状外上矢量提紧固定,真正意义上实现垂直矢量强化组织下垂的有效的提升、外上矢量加强面部松弛的自然紧致效果,达到双矢量面部提升的目的。

异种（猪）脱细胞真皮基质在瘢痕整形中的应用

目的 探讨异种（猪）脱细胞真皮基质在切除瘢痕后做为真皮替代物的临床作用。方法 采用DR脱细胞猪皮和大张自体刃厚皮复合移植（一步法和二步法）覆盖切除瘢痕后的创面。结果 对47例瘢痕患者中的22例进行异种（猪）脱细胞真皮基质移植7d左右，再植大张自体刃厚皮的二步法复合移植，其中在脂肪层上复合移植成活率（88．3±3．7）％，在深筋膜层上复合移植成活率为（89．7±3．4）％。25例采用异种（猪）脱细胞真皮基质＋自体刃厚皮同时复合移植的一步法，在脂肪层上复合移植成活率（92．5±4．1）％，在深筋膜层上复合移植成活率为（93．2±5．2）％。复合移植成活后，创面颜色淡红，表面平坦光滑，柔韧性好。最长随访时间90d，复合区皮肤近似正常，皮肤结实、光滑、平整，可捏起，仅见移植边缘有少许轻微瘢痕增生，功能好。结论 一步法复合移植比二步法成活率高，且脂肪层上的复合移植皮比深筋膜上的复合移植皮肤弹性较好，也更柔软、丰满，两者在功能上则无区别。异种（猪）脱细胞真皮基质是覆盖瘢痕切除后创面的较理想的真皮替代物。

同种异体脱细胞真皮替代同种异体巩膜在眼窝填充中的实验研究

目的①了解同种异体脱细胞真皮植入兔眼窝后的组织相容性。②比较两种不同材料包裹羟基磷灰石(hydroxyapatite,HA)植入的结果,包裹材料及HA的血管化进程。方法随机将24只新西兰大白兔平均分为两组,于球后间隙内分别植入以同种异体巩膜、同种异体脱细胞真皮作为包裹材料的HA,观察大体情况并分别于植入后1、4、8、12周取出,光镜及电镜检查组织学改变。结果大体显示同种异体脱细胞真皮组植入后无一例出现排斥,但其血管化速度较同种异体巩膜组缓慢。结论同种异体脱细胞真皮作为包裹材料有较好的组织相容性,并能逐渐引导被包裹材料的血管化。

同种和异种脱细胞半月板的制备及生物力学研究

目的探讨人脱细胞半月板和兔脱细胞半月板的制备方法,比较两者生物力学性能差异。方法随机切取16个人半月板组成人脱细胞半月板组,随机切取16个兔半月板组成兔脱细胞半月板组,蒸馏水冲洗后采取Triton X-100和脱氧胆酸钠等试剂制备两组脱细胞半月板。用番红花O、甲苯胺蓝、AB染色和天狼星红染色等方法,分别对两组脱细胞半月板进行组织学观察,扫描电镜观察;用生物力学机测定两组脱细胞半月板在不同压缩比率下的瞬时形变恢复率,最大形变恢复率及最大受压强度。结果各种染色均显示两组脱细胞半月板的细胞陷窝内已无细胞结构,天狼星红染色均为阳性。电镜检查示人脱细胞半月板组和兔脱细胞半月板组表面均有大量空虚的陷窝。压缩比率在40%时,人脱细胞半月板组的瞬时形变恢复率为(78.99±1.36)%,兔脱细胞半月板组的瞬时形变恢复率为(78.32±2.21)%,两组的差异无统计学意义(F=1.597,P>0.05)。在形变≤40%的情况下,两组最大形变恢复率均为100%。在压缩比率为20%(F=39.030)、30%(F=47.732)和40%(F=56.436)时,人脱细胞半月板组的最大强度均大于兔脱细胞半月板组的最大强度(P<0.05)。结论人半月板和兔半月板经去污剂等处理后,去除了细胞成分,保留了三维立体的细胞外基质,成功制备了人脱细胞半月板和兔脱细胞半月板。人脱细胞半月板的力学性能优于兔脱细胞半月板,可作为组织工程支架材料。

胎膜来源的间充质干细胞促进烧伤愈合的研究

目的:研究胎膜来源的间充质干细胞在治疗SD大鼠Ⅲ度烧伤中的作用。方法:用胰酶消化法分离足月产胎膜细胞,加入Amino-MAXⅡ培养基进行培养。流式细胞仪检测细胞表面标志物CD29、CD73、CD14、CD45。分别用浓度为3mg/ml、5mg/ml、7mg/ml、9mg/ml的明胶溶液包被脱细胞真皮(ADM),以5×106/ml的密度将细胞种植在包被和未包被的ADM表面,2小时后收集未贴附在ADM上的细胞,计算细胞种植效率。实验组:以7mg/ml的明胶包被ADM,以5×106/ml的密度种植第2～3代细胞,培养3～5天后,移植至SD大鼠Ⅲ度烧伤创面;对照组Ⅰ移植单纯的ADM,对照组Ⅱ未进行移植,术后定期观察创面大体情况,计算创面收缩率、表皮再生面积比例,第5周切取新生皮肤组织行HE染色。结果:胎膜分离的细胞以长梭形为主,表达与间充质干细胞相关的表面抗原标志物CD29、CD73,极少表达造血细胞标志物CD14、CD45。不同浓度明胶溶液包被和未包被的ADM,其细胞种植效率均无明显区别(P>0.05);相比对照组,实验组移植物成活时间更长,创面再上皮化时间较早,创面收缩率较小,再生表皮面积亦较多(P<0.05);再生表皮更厚,有明显的表皮突,真皮层毛细血管丰富。结论:成功分离、培养了胎膜来源的间充质干细胞。胎膜来源间充质干细胞复合ADM可促进SD大鼠Ⅲ烧伤创面表皮再生,加速创伤愈合,抑制创面收缩。

异种(牛)脱细胞真皮基质在喉部分切除术中应用的临床观察

目的:探讨异种(牛)脱细胞真皮基质在喉癌喉部分切除术中的应用及术后修复喉部组织缺损的临床效果。方法:收集应用异种(牛)脱细胞真皮基质修复喉组织缺损的58例喉癌患者资料,对术后喉部创面愈合情况、患者吞咽功能、呼吸功能及发声功能的恢复情况进行随访观察。结果:分别于术后1、2、3个月随访,58例患者喉腔修复创面无明显瘢痕及挛缩,无排异反应发生,进食正常,顺利拔管,均能恢复发声功能。结论:应用异种(牛)脱细胞真皮基质修复喉部分切除术中的组织缺损,能促进上皮形成,减轻瘢痕生成,有利于喉功能恢复,临床效果满意。