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Green Synthesis and Physical and Chemical Characterization of Chitosans with a High Degree of Deacetylation, Produced by a Binary Enzyme System
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作者 Laidson Paes Gomes Cristina Tristao Andrade +2 位作者 Joab Trajano Silva Eduardo Mere Del Aguila Vania Margaret Flosi Paschoalin 《Journal of Life Sciences》 2014年第3期276-282,共7页
Chitosan is a biopolymer obtained from chitin, where the N-acetylglucosamine monomer is in its deacetylated form; this polymer is useful for a wide variety of industrial applications. The properties and uses of chitos... Chitosan is a biopolymer obtained from chitin, where the N-acetylglucosamine monomer is in its deacetylated form; this polymer is useful for a wide variety of industrial applications. The properties and uses of chitosan depend on its physical and chemical characteristics, which result from the treatments used for its production. In this study, we report the preparation and characterization ofchitosan oligosaccharides by a green synthesis from crystalline shrimp chitin, using a sequential enzyme treatment by chitinase and chitin deacetylase. Chitinases were purified from grapes and used to rupture the crystalline shrimp chitin structure, modifying the crystallinity index from 57.6% to 15.9%. The resultant polymers were deacetylated using a recombinant chitin deacetylase from Saccharomyces cerevisiae, which was cloned and expressed in Pichia pastoris. The chitosans produced showed an estimated DA (degree of acetylation) of approximately 20%, and the molecular weights ranged from -7,600 to -3,700 after treatment in pH 3.0 and pH 6.0 for 10 min and 40 min, respectively. Physical and chemical characterization of the products indicated that enzyme fragmentation of chitin probably makes the acetamide groups more accessible to deacetylation, forming homogeneous polymers that are free of hazardous sub-products, have defined low molecular weights, and are highly deacetylated. 展开更多
关键词 CHITOSAN binary enzyme system CHITINASES recombinant chitin deacetylase low acetylation degree low molecular weight.
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Nonmetabolic functions of metabolic enzymes in cancer development 被引量:2
2
作者 Sean Lu Yugang Wang 《Cancer Communications》 SCIE 2018年第1期677-683,共7页
Metabolism is a fundamental biological process composed of a series of reactions catalyzed by metabolic enzymes.Emerging evidence demonstrates that the aberrant signaling in cancer cells induces nonmetabolic functions... Metabolism is a fundamental biological process composed of a series of reactions catalyzed by metabolic enzymes.Emerging evidence demonstrates that the aberrant signaling in cancer cells induces nonmetabolic functions of meta-bolic enzymes in many instrumental cellular activities,which involve metabolic enzyme-mediated protein post-trans-lational modifications,such as phosphorylation,acetylation,and succinylation.In the most well-researched literatures,metabolic enzymes phosphorylate proteins rather than their metabolites as substrates.Some metabolic enzymes have altered subcellular localization,which allows their metabolic products to directly participate in nonmetabolic activities.This review discusses how these findings have deepened our understanding on enzymes originally classi-fied as metabolic enzymes,by highlighting the nonmetabolic functions of several metabolic enzymes responsible for the development of cancer,and evaluates the potential for targeting these functions in cancer treatment. 展开更多
关键词 Metabolic enzymes Function Protein kinase Metabolite products PHOSPHORYLATION acetylATION SUCCINYLATION MITOCHONDRIA
原文传递
酿酒酵母代谢工程改造高效合成齐墩果酸
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作者 段丽娜 曾伟主 +1 位作者 孙旸 周景文 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2024年第18期67-74,共8页
齐墩果酸因其在保肝、抗炎和抗肿瘤等方面具有突出的生物活性,已被广泛应用于医药领域。目前,齐墩果酸植物提取法效率低,微生物合成法受途径中异源细胞色素P450酶表达水平低和电子传递不平衡等限制,导致齐墩果酸生产无法满足市场需求。... 齐墩果酸因其在保肝、抗炎和抗肿瘤等方面具有突出的生物活性,已被广泛应用于医药领域。目前,齐墩果酸植物提取法效率低,微生物合成法受途径中异源细胞色素P450酶表达水平低和电子传递不平衡等限制,导致齐墩果酸生产无法满足市场需求。该研究以实验室保存的一株敲除GAL 80的酿酒酵母菌株出发,构建了齐墩果酸前体物质β-香树脂醇的合成路径,并通过对甲羟戊酸途径及角鲨烯合成途径关键基因进行过量表达,得到一株β-香树脂醇产量为125.8 mg/L的菌株。以该菌株为底盘,导入适配性较高的产齐墩果酸的CYP716A12和ATR1基因,成功构建了齐墩果酸合成途径。通过平衡途径中CYP716A12和ATR1的表达,发现高的CYP716A12∶ATR1表达比率有利于提高齐墩果酸产量。结合增强乙酰辅酶A供应和NADPH再生,齐墩果酸摇瓶水平和5 L-发酵罐水平产量分别达到304.0 mg/L和680.8 mg/L,为目前报道最高产量。该研究为利用酿酒酵母合成齐墩果酸和下游产物相关研究奠定了基础。 展开更多
关键词 酿酒酵母 齐墩果酸 P450酶 乙酰辅酶A NADPH
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猪精液碱性N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的纯化与酶学性质研究 被引量:10
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作者 黄小红 罗忠宝 +1 位作者 李明伟 黄一帆 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期2843-2849,共7页
【目的】分离纯化猪精液碱性N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶制剂,研究其理化性质。【方法】采用硫酸铵沉淀分级分离、DEAE-32阴离子交换柱层析、Sephadex G-100分子筛柱层析和CM-52阳离子交换柱层析方法,分离纯化猪精液的N-乙酰-β-D-氨基... 【目的】分离纯化猪精液碱性N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶制剂,研究其理化性质。【方法】采用硫酸铵沉淀分级分离、DEAE-32阴离子交换柱层析、Sephadex G-100分子筛柱层析和CM-52阳离子交换柱层析方法,分离纯化猪精液的N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶;采用聚丙烯酰胺凝胶电泳和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法进行纯度鉴定和酶分子量测定;采用聚丙烯酰胺等电聚焦圆盘电泳法测定酶的等电点。【结果】经分离纯化获得比活力为17606.15U·mg-1、纯化倍数为270.53倍的聚丙烯酰胺凝胶电泳纯的N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶制剂。酶催化对-硝基苯-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖(pNP-NAG)水解的最适pH为5.5,最适温度为50℃。该酶在pH 3.0~8.9区域较稳定;在45℃以下处理30min,酶活力保持稳定。酶分子中亚基的分子量为58.03 kD,等电点为9.42。酶促反应动力学符合米氏双曲线方程,测得米氏常数Km为1.94mmol·L-1,最大反应速度Vm为27.53 μmol·L-1·min-1。酶催化pNP-NAG反应的活化能为88.73 kJ·mol-1。【结论】本试验选用的分离纯化的方法是可行的。 展开更多
关键词 猪精液 N-乙酰-Β-D-氨基葡萄糖苷酶 分离纯化 酶学特性
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一种新型胺基树脂的制备 被引量:8
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作者 朱建星 魏荣卿 +2 位作者 刘晓宁 卞国建 欧阳平凯 《过程工程学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2005年第1期49-53,共5页
以乙酰化聚苯乙烯微球为原料经Mannich反应制备了一种新型胺基树脂,该树脂可替代氯甲基树脂制备的阴离子交换树脂及酶固定化胺基载体,因此,避免了氯甲基树脂生产中使用氯甲醚等致癌物质及多取代、二次交联等副反应的问题.讨论了反应温... 以乙酰化聚苯乙烯微球为原料经Mannich反应制备了一种新型胺基树脂,该树脂可替代氯甲基树脂制备的阴离子交换树脂及酶固定化胺基载体,因此,避免了氯甲基树脂生产中使用氯甲醚等致癌物质及多取代、二次交联等副反应的问题.讨论了反应温度和时间、物料比、加料方式、介质中的水量等因素的影响.最佳反应条件为无水乙醇介质,胺:醛:盐酸:乙酰基(摩尔比)=10:10:3.3:1,反应温度100℃,反应时间12h,制备的胺基树脂氮含量为13.7mmol/g.机理研究显示乙酰基发生a-多取代反应. 展开更多
关键词 乙酰化聚苯乙烯 MANNICH反应 胺基树脂 阴离子交换树脂 酶固定化载体
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快速测定果蔬中农药残留量的方法研究 被引量:46
6
作者 赵建庄 康国瑞 《农业环境保护》 CSCD 北大核心 2002年第1期70-71,共2页
用自行研制的便携式农药残留速测仪,对果、蔬中农药残留毒性进行快速检测,可以直接显示有机磷和氨基甲酸酯类农药对乙酰胆碱酶的抑制率,确定农药残留毒性水平。
关键词 酶抑制率 农药残留 乙酰胆碱酯酶 快速测定 水果 蔬菜 作物监测 污染监测
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快速检测敌百虫浓度传感器酶电极的研究 被引量:10
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作者 宋昭 黄加栋 +3 位作者 胡敏 李二虎 王新 马维一 《传感器技术》 CSCD 北大核心 2005年第7期16-18,共3页
敌百虫是一种当前使用广泛的有机磷类农药,使用传统方法检测时,难以实现现场快速检测的需要。现以丝网印刷电极为载体,以明胶包埋为主要方法制备了基于乙酰胆碱酯酶和胆碱氧化酶的电流型生物传感器酶电极,并对其性能进行了一系列评价,... 敌百虫是一种当前使用广泛的有机磷类农药,使用传统方法检测时,难以实现现场快速检测的需要。现以丝网印刷电极为载体,以明胶包埋为主要方法制备了基于乙酰胆碱酯酶和胆碱氧化酶的电流型生物传感器酶电极,并对其性能进行了一系列评价,发现该酶电极在pH值为6.8,温度为37℃时对氯化乙酰胆碱有最大响应,其稳定期可达30d,测量的平均相对偏差为2.18%。利用敌百虫对酶电极的抑制作用,可实现传感器对其的快速检测,测定时间可控制在10min,其测量的线性范围为10-10~10-5mol/L,对敌百虫的检出限为1×10-10mol/L。 展开更多
关键词 敌百虫 丝网印刷电极 酶电极 乙酰胆碱酯酶 胆碱氧化酶
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尿RBP、NAG联合血清CysC检测在2型糖尿病早期肾损伤中的诊断价值 被引量:25
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作者 鲁丹 陈丽芳 蔡洁丹 《国际检验医学杂志》 CAS 2016年第7期928-929,932,共3页
目的探讨尿视黄醇结合蛋白(RBP)、β-N-乙酰葡萄糖苷酶(NAG)联合血清胱抑素C(CysC)检测在2型糖尿病早期肾损伤中的诊断价值。方法抽取该院T2DM糖尿病肾病患者58例(A组),T2DM单纯糖尿病患者54例(B组),健康体检者52例(C组)。利用免疫比浊... 目的探讨尿视黄醇结合蛋白(RBP)、β-N-乙酰葡萄糖苷酶(NAG)联合血清胱抑素C(CysC)检测在2型糖尿病早期肾损伤中的诊断价值。方法抽取该院T2DM糖尿病肾病患者58例(A组),T2DM单纯糖尿病患者54例(B组),健康体检者52例(C组)。利用免疫比浊法检测3组受试者尿RBP、NAG和血清CysC水平,比较其差异,探讨单项及联合检测诊断糖尿病早期肾损伤的阳性率。结果 A组尿RBP、NAG和血清CysC水平均显著高于B、C组,差异具有统计学意义(P<0.05);B组RBP、NAG和血清CysC水平均高于C组,差异具有统计学意义(P<0.05)。RBP、NAG、CysC单项检测阳性率分别为87.93%、86.21%、84.48%,联合3项指标检测的阳性率为94.83%,高于单项检测的阳性率,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论尿RBP、NAG及血清CysC是2型糖尿病早期肾损伤的灵敏指标,且联合3项指标检测的综合敏感性更好,具有较高的临床应用价值。 展开更多
关键词 糖尿病 肾脏损伤 视黄醇结合蛋白 β-N-乙酰葡萄糖苷酶 胱抑素C
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有机溶剂对棉铃虫N-乙酰氨基葡糖苷酶活力的影响 被引量:5
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作者 黄小红 陈清西 +1 位作者 王君 关雄 《福建农林大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2005年第1期78-81,共4页
以棉铃虫为材料,经 (NH4 )2SO4 分级沉淀、SephadexG 200分子筛凝胶过滤柱层析和DEAE 32离子交换柱层析分离纯化,获得棉铃虫N 乙酰氨基葡糖苷酶酶制剂.研究几种有机溶剂对棉铃虫N 乙酰氨基葡糖苷酶 (EC3. 2. 1. 14)的活力与构象的影响.... 以棉铃虫为材料,经 (NH4 )2SO4 分级沉淀、SephadexG 200分子筛凝胶过滤柱层析和DEAE 32离子交换柱层析分离纯化,获得棉铃虫N 乙酰氨基葡糖苷酶酶制剂.研究几种有机溶剂对棉铃虫N 乙酰氨基葡糖苷酶 (EC3. 2. 1. 14)的活力与构象的影响.结果表明:甲醇、乙醇和乙二醇对酶有先扬后抑的作用,正丙醇和丙三醇对酶有失活作用.低含量的丙酮 (体积分数为 12. 5% )对酶有可逆失活作用,随着丙酮含量的提高,其酶促反应的动力学参数也随之改变,Vmax值降低,Kmapp值不变.在 278nm波长激发下,天然酶内源荧光在 339nm处有特征的荧光发射,其强度随着丙酮含量的上升而减弱,荧光发射峰也逐渐蓝移.这表明丙酮改变了酶的构象. 展开更多
关键词 葡糖苷 改变 含量 离子交换柱层析 影响 有机溶剂 天然 丙酮 氨基 甲醇
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患红体病的凡纳滨对虾外壳膜NAGase基本性质的改变 被引量:5
10
作者 杜娟 谢晓兰 +2 位作者 石艳 黄乾生 陈清西 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期207-210,共4页
分别以健康和患红体病的凡纳滨对虾(Litopenaeus vanname)外壳膜为材料,抽提其N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(EC3.2.1.52,简称NAGase),测定分析两种来源对虾的外壳膜NAGase的活力和性质的差异.测得健康对虾NA-Gase的活力为34·80Umg-1... 分别以健康和患红体病的凡纳滨对虾(Litopenaeus vanname)外壳膜为材料,抽提其N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(EC3.2.1.52,简称NAGase),测定分析两种来源对虾的外壳膜NAGase的活力和性质的差异.测得健康对虾NA-Gase的活力为34·80Umg-1,而患红体病对虾的活力为38·32Umg-1.结果表明:两种来源对虾的NAGase活力、基本酶学性质等均存在差异.表明对虾患红体病后,外壳膜NAGase的活力、催化反应动力学常数Km和Vm值、活化能均较高,但其最适温度较低,pH稳定性及热稳定性较差. 展开更多
关键词 凡纳滨对虾 N-乙酰-Β-D-氨基葡萄糖苷酶 酶学性质 红体病
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红霉素对氧化应激下A549细胞的影响 被引量:5
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作者 傅钰雁 柳广南 +1 位作者 黄斯明 郑厚文 《广东医学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期340-344,共5页
目的探讨红霉素(EM)对氧化应激状态下肺腺癌细胞A549的影响。方法香烟烟雾提取物(CSE)和EM分别刺激A549细胞后显微镜下观察细胞生长情况;用MTT法检测各组细胞活性;ELISA检测各组细胞IL-8、TNF-α浓度;免疫组织化学法检测各组细胞组蛋白... 目的探讨红霉素(EM)对氧化应激状态下肺腺癌细胞A549的影响。方法香烟烟雾提取物(CSE)和EM分别刺激A549细胞后显微镜下观察细胞生长情况;用MTT法检测各组细胞活性;ELISA检测各组细胞IL-8、TNF-α浓度;免疫组织化学法检测各组细胞组蛋白去乙酰化酶2(HDAC2)的表达;real-time PCR分别检测各组细胞HDAC2 mRNA、IL-8 mRNA、TNF-αmRNA的相对表达量。结果 (1)与空白对照组比较,0.5%CSE或者10μg/mL EM处理细胞48 h,细胞生长未见明显抑制;1%CSE或者20μg/mL EM处理细胞48 h,细胞生长受到显著抑制,并且在一定范围内呈剂量和时间依赖性,浓度越大,时间越长,受抑制也越严重。(2)0.5%CSE处理细胞48 h,IL-8、TNF-α均增高,而1%CSE处理细胞48 h,IL-8、TNF-α均受抑制,且随着CSE浓度增高或培养时间延长,抑制程度越严重;不同浓度EM在不同时间处理细胞,IL-8、TNF-α分泌均受到不同程度抑制。(3)0.5%CSE下调A549细胞中HDAC2的表达(P<0.001),10μg/mL EM上调氧化应激下A549细胞HDAC2的表达(P<0.05)。(4)0.5%CSE刺激细胞后,IL-8 mRNA和TNF-αmRNA表达较空白对照组均增高(P<0.05),而10μg/mL EM可降低氧化应激下细胞IL-8 mRNA和TNF-αmRNA表达(P<0.05)。结论 CSE可使A549细胞产生炎症反应增强,而EM可抑制氧化应激状态下A549细胞的炎症反应,其作用机制可能是通过上调细胞HDAC2活性而产生作用。 展开更多
关键词 红霉素 香烟烟雾提取物 A549细胞 组蛋白去乙酰化酶2
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醋酸纤维膜固定过氧化氢酶电极的研究 被引量:3
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作者 林朝晖 沈国励 +1 位作者 俞汝勤 刘树庭 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 1994年第10期998-1001,共4页
本文将过氧化氢酶与经活化处理的醋酸纤维膜共价固定,并与氧电极偶合,研制成静态和流通二种过氧化氢生物电极.研究了醋酸纤维膜的活化、酶的固定化、测试介质等有关的实验条件和参数、测得静态和流通二种电极响应的线性范围分别为6.7... 本文将过氧化氢酶与经活化处理的醋酸纤维膜共价固定,并与氧电极偶合,研制成静态和流通二种过氧化氢生物电极.研究了醋酸纤维膜的活化、酶的固定化、测试介质等有关的实验条件和参数、测得静态和流通二种电极响应的线性范围分别为6.7×10^(-5)~2.0×10^(-3)mol/L和1.3×10^(-1)~1.0×10^(-3)mol/L.将电极用于实际试样中的回收率测定时,获得了较好的结果. 展开更多
关键词 醋酸纤维膜 过氧化氢 酶电极
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金属离子对锯缘青蟹NAGase活力的影响 被引量:5
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作者 杨学敏 谢进金 +2 位作者 张继平 林建成 陈清西 《台湾海峡》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期343-347,共5页
本文研究了几种金属离子对锯缘青蟹(Scylla serrata)N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)活力的影响.其结果表明:Li+、Na+和K+对酶活力没有明显影响,Mg2+、Ca2+和Ba2+对该酶均有激活作用,激活程度依次为Ca2+>Ba2+>Mg2+.A l3+、Fe3... 本文研究了几种金属离子对锯缘青蟹(Scylla serrata)N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)活力的影响.其结果表明:Li+、Na+和K+对酶活力没有明显影响,Mg2+、Ca2+和Ba2+对该酶均有激活作用,激活程度依次为Ca2+>Ba2+>Mg2+.A l3+、Fe3+、Cd2+、Pb2+和Hg2+对该酶具有一定的抑制作用,2.0μmol/dm3的Hg2+可以使酶活力完全丧失.Co2+对酶的效应是先激活后抑制,Mn2+对酶仅有轻微的激活作用.Cd2+和Fe3+对锯缘青蟹NAGase的抑制作用都呈竞争性-反竞争性混合Ⅱ型效应,Cd2+的抑制常数KI和KIS分别为23.9、5.0 mmol/dm3,Fe3+的抑制常数KI和KIS分别为395.5、135.6μmol/dm3.KI>KIS,说明酶-底物络合物(ES)与抑制剂的亲和力比游离酶(E)与抑制剂的亲和力大. 展开更多
关键词 海洋生物 N-乙酰-Β-D-氨基葡萄糖苷酶 锯缘青蟹 酶活力 金属离子 抑制机理
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养殖常用抗菌药物对凡纳滨对虾外壳膜N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶活力的影响 被引量:3
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作者 杜娟 安刚 +3 位作者 谢晓兰 黄乾生 王烨 陈清西 《厦门大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期883-886,共4页
研究几种抗菌药物对凡纳滨对虾壳膜N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase,EC 3.2.1.52)活力的影响.结果表明,诺氟沙星和磺胺甲噁唑对该酶活力有不同程度的抑制作用,盐酸环丙沙星对此酶有激活作用,而青霉素钾、链霉素、庆大霉素、卡那霉素... 研究几种抗菌药物对凡纳滨对虾壳膜N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase,EC 3.2.1.52)活力的影响.结果表明,诺氟沙星和磺胺甲噁唑对该酶活力有不同程度的抑制作用,盐酸环丙沙星对此酶有激活作用,而青霉素钾、链霉素、庆大霉素、卡那霉素、磺胺嘧啶等对酶活力基本上没有影响;磺胺甲噁唑的抑制作用最为显著,导致酶活力下降50%的抑制剂浓度(IC50)为0.094 mg/mL.抑制作用动力学研究结果表明,磺胺甲噁唑对酶的抑制作用为混合型可逆抑制,其抑制常数KI为5.98 mg/mL,对酶-底物络合物的抑制常数KIS为13.08 mg/mL.该研究对凡纳滨对虾的人工养殖具有一定的参考价值. 展开更多
关键词 凡纳滨对虾 N-乙酰-Β-D-氨基葡萄糖苷酶 抗菌类药物 酶活力 抑制机理
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基于乙酸气体传感器的海洛因快速测定方法 被引量:2
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作者 孙宇峰 王连超 +2 位作者 黄行九 吴仲城 刘锦淮 《传感器技术》 CSCD 北大核心 2004年第2期8-10,共3页
研究并制作了石英晶体(谐振式)乙酸气体传感器。这种传感器利用晶体表面活性酶吸附乙酸气体引起石英晶体振荡频率的变化实现对海洛因分子的快速检测。实验结果表明:乙酸激酶(aceticacidki nase简称AK)膜石英晶体传感器对乙酸气体的灵敏... 研究并制作了石英晶体(谐振式)乙酸气体传感器。这种传感器利用晶体表面活性酶吸附乙酸气体引起石英晶体振荡频率的变化实现对海洛因分子的快速检测。实验结果表明:乙酸激酶(aceticacidki nase简称AK)膜石英晶体传感器对乙酸气体的灵敏度为10-4;而乙酰辅酶A(acetyl-COA)合成酶膜及聚赖氨酸膜石英晶体传感器对乙酸气体的灵敏度为10-5。 展开更多
关键词 乙酸 气体传感器 海洛因 快速测定法 合成酶 聚赖氨酸
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猪精液酸性N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的纯化及性质 被引量:2
16
作者 黄小红 罗忠宝 +2 位作者 黄一帆 陈欣颖 黄俊平 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期819-823,共5页
以杜洛克猪精液为材料,采用硫酸铵分级沉淀、DEAE-32阴离子交换柱层析和SephadexG-100分子筛柱层析纯化,获得纯化倍数为27.64、比活力为1773.25Umg-1的酸性N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶纯酶制剂.经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定,纯酶两... 以杜洛克猪精液为材料,采用硫酸铵分级沉淀、DEAE-32阴离子交换柱层析和SephadexG-100分子筛柱层析纯化,获得纯化倍数为27.64、比活力为1773.25Umg-1的酸性N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶纯酶制剂.经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定,纯酶两种亚基相对分子质量分别为129.13×103和62.24×103.对其酶学性质的研究结果表明,酶的等电点为5.10,最适pH值为5.5,最适温度为60℃.酶在pH3.6~9.2、温度10℃~55℃的范围内较稳定.以对硝基苯-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷(pNP-NAG)为底物,测得米氏常数Km为0.455mmolL-1,最大反应速度Vm为17.34μmolL-1min-1|活化能为41.70kJmol-1. 展开更多
关键词 猪精液 酸性N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶 纯化 酶学性质
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灭非灵对尼罗罗非鱼乙酰胆碱酯酶和抗氧化酶活性的影响 被引量:2
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作者 马光明 顾党恩 +3 位作者 朱赟杰 牟希东 罗建仁 胡隐昌 《广东农业科学》 CAS 2015年第8期95-100,共6页
为了探究特异性防控药物灭非灵对外来物种尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)的毒杀机理,测定暴露在亚致死浓度的尼罗罗非鱼脑、鳃、肝脏和肌肉4种组织中乙酰胆碱酯酶(ACh E)和抗氧化酶活性的变化。结果显示:药物暴露之后,ACh E活性在... 为了探究特异性防控药物灭非灵对外来物种尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)的毒杀机理,测定暴露在亚致死浓度的尼罗罗非鱼脑、鳃、肝脏和肌肉4种组织中乙酰胆碱酯酶(ACh E)和抗氧化酶活性的变化。结果显示:药物暴露之后,ACh E活性在脑、鳃、肝脏和肌肉组织中均受到显著抑制。随着暴露时间的延长,超氧化物歧化酶(SOD)活性在脑和鳃中无显著性变化,而在肝脏和肌肉中显著升高;谷胱甘肽还原酶(GSH)含量在脑中显著下降,在肝脏中显著升高,在鳃和肌肉中先升高后降低;乳酸脱氢酶(LDH)活性在4种组织中均显著升高,且在肝脏中的增幅最大;谷胱甘肽S转移酶(GST)活性在肝脏中显著升高,由此推测鱼体内可能发生了氧化应激反应。试验结果表明,灭非灵可能是通过抑制尼罗罗非鱼体内ACh E活性,并促使鱼体内氧化应激反应的发生,从而达到其特异性防控的效果。 展开更多
关键词 灭非灵 尼罗罗非鱼 乙酰胆碱酯酶 抗氧化酶
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乙酰肉碱的化学合成与酶法拆分 被引量:1
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作者 丁天兵 王智 +4 位作者 翁良 于大海 郑良玉 曹淑桂 苟小军 《吉林大学学报(理学版)》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期399-401,共3页
采用化学方法以肉碱为底物,合成了外消旋乙酰肉碱,精制后可获得纯度99%以上的乙酰肉碱,收率为96%.利用蜗牛酶(SnailEnzyme)对其进行不对称酯水解反应,发现蜗牛酶对乙酰肉碱具有高度立体选择性,并且可得到光学纯度为98%的乙酰-L-肉碱.
关键词 乙酰肉碱 化学合成 酶法拆分 蜗牛酶 不对称酯水解反应 立体选择性 光学纯度
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中国明对虾体壁N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的分离纯化及酶学性质 被引量:3
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作者 林建城 林大河 林秀春 《海洋科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期52-58,共7页
为了探讨对虾 N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(EC3.2.1.52, NAGase)的分离纯化及其酶学性质,作者以中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)体壁为材料,通过硫酸铵沉淀分级分离、SephadexG-100柱层析和 DEAE-32离子交换柱层析纯化,获得... 为了探讨对虾 N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(EC3.2.1.52, NAGase)的分离纯化及其酶学性质,作者以中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)体壁为材料,通过硫酸铵沉淀分级分离、SephadexG-100柱层析和 DEAE-32离子交换柱层析纯化,获得聚丙烯酰胺凝胶电泳纯的 N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶酶制剂,纯化酶比活力为3938.56U/mg。通过SDS-PAGE凝胶电泳,测得该酶亚基分子量为48.88 kD。酶的最适pH为6.0,最适温度为45℃;该酶在pH 6.0~9.0区域较稳定,温度稳定性范围是20~35℃,45℃下处理1 h酶活力丧失65.04%。酶水解对硝基苯-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷的Km为0.229 mmol/L, Vmax为5.00μmol/(L?min)。进一步研究金属离子对酶活力的影响,结果表明: Li+、Na+和Ba2+对酶没有明显影响, Mg2+、Ca2+、Mn2+、Co2+、Fe3+和Al3+对酶均有不同程度的激活作用, Cu2+、Zn2+和Pb2+对酶呈抑制作用,1.0 mmol/L Hg2+对酶呈激活作用,而10 mmol/L Hg2+使酶活力降低42.37%。 展开更多
关键词 中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis) 体壁 N-乙酰-Β-D-氨基葡萄糖苷酶 分离纯化 酶学性质
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维生素对凡纳滨对虾N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的效应研究 被引量:2
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作者 杜娟 谢晓兰 +3 位作者 黄乾生 王烨 王丽琴 陈清西 《台湾海峡》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期422-426,共5页
以凡纳滨对虾中提取的N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase,EC 3.2.1.52)为研究对象,以对-硝基苯-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷(pNP-NAG)为底物,考察了几种养殖常用维生素对该酶活力的影响.结果表明,VB12、烟酸、核黄素等对酶活力基本上没... 以凡纳滨对虾中提取的N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase,EC 3.2.1.52)为研究对象,以对-硝基苯-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷(pNP-NAG)为底物,考察了几种养殖常用维生素对该酶活力的影响.结果表明,VB12、烟酸、核黄素等对酶活力基本上没有影响;而VB1、VB6、抗坏血酸等对该酶活力均有不同程度的抑制作用.随着抑制剂浓度增大,酶活力呈指数下降,测定导致酶活力下降50%的抑制剂浓度(IC50)分别为16.0、13.5、37.5mmol/dm3.进一步研究了VB6的抑制作用动力学,结果显示:VB6对酶的抑制作用为非竞争性可逆抑制,其对酶抑制常数(KI)为15.2mmol/dm3.该研究对凡纳滨对虾的人工养殖具有一定的参考价值. 展开更多
关键词 凡纳滨对虾 N-乙酰-Β-D-氨基葡萄糖苷酶 维生素 酶活力 抑制机理
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