乙酰紫草素药理作用的研究进展

乙酰紫草素是由传统中草药紫草提取出的一种具有抗菌、抗感染、抗过敏、抗病毒、抗肿瘤等生物活性的萘醌类化合物。紫草及其衍生物乙酰紫草素在抗癌、抗病毒等研究中发挥着重要作用,有少数研究报道了乙酰紫草素对肝、心肌细胞毒性的不利影响,需进一步研究乙酰紫草素的毒性和药代动力学。本文主要对乙酰紫草素的理化性质、药理作用及机制与其潜在毒性进行总结和归纳,旨在为乙酰紫草素深入研究提供思路。

乙酰紫草素联合奥沙利铂对人结肠癌HT29细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨乙酰紫草素联合奥沙利铂对人结肠癌HT29细胞增殖及凋亡的影响。方法将人结肠癌HT29细胞分为空白组、乙酰紫草素组(10μmol/L)、奥沙利铂组(1μmol/L)和联合给药组(10μmol/L乙酰紫草素+1μmol/L奥沙利铂),MTT法检测HT29细胞增殖抑制率,流式细胞术检测HT29细胞凋亡率、qRT-PCR法检测HT29细胞Ki-67、Bcl-2及Bax mRNA表达,Western blot法检测磷酸化磷脂酰肌醇-3-羟激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B (p-Akt)蛋白表达。结果人结肠癌HT29细胞经乙酰紫草素、奥沙利铂和联合给药处理24、48、72 h后,细胞增殖抑制率均增加,其中联合给药组细胞增殖抑制率最高(P<0. 05)。药物处理HT29细胞48 h后,与空白组比较,乙酰紫草素组、奥沙利铂组和联合给药组凋亡率、Bax mRNA表达增加(P<0. 05),而Ki-67、Bcl-2 mRNA表达及p-PI3K、p-Akt蛋白表达降低(P<0. 05);联合给药组的细胞凋亡率、Bax mRNA表达均高于乙酰紫草素组和奥沙利铂组,Ki-67、Bcl-2 mRNA表达及p-PI3K、p-Akt蛋白表达低于乙酰紫草素组和奥沙利铂组。结论乙酰紫草素和奥沙利铂对人结肠癌HT29细胞均具有抑制增殖及诱导凋亡作用,可能与调控PI3K/Akt信号通路有关,且两者联用时效果更好。

HPLC测定不同产地硬萼软紫草根中4种萘醌类成分的含量

采用HPLC测定10个产地硬萼软紫草根中4种萘醌类成分含量,比较其差异。以乙酰紫草素、去氧紫草素、异丁酰紫草素、(2-甲基正丁酰基)紫草素为对照品,采用Agilent-C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-0.05%甲酸水溶液(70∶30)为流动相,1 m L/min,检测波长275 nm,柱温30℃。4种成分分离良好,线性、重复性以及回收率均符合要求。不同产地的样品中4种化学成分含量存在差异,可能与植物的生境及采收时间有关,活性成分乙酰紫草素、(2-甲基正丁酰基)紫草素在各样品中含量较高,推断其可作为天然抗肿瘤成分及其衍生物的备选资源,为其资源开发利用提供参考依据。

乙酰紫草素对黑色素瘤A375细胞增殖和凋亡作用研究

目的研究乙酰紫草素对黑色素瘤A375细胞增殖和凋亡的影响。方法采用CCK-8法观察不同浓度乙酰紫草素对A375细胞的增殖抑制情况;在倒置显微镜下观察乙酰紫草素处理48 h后,A375细胞形态的变化;采用Hoechst 33342荧光染色法在荧光显微镜下观察乙酰紫草素干预后A375细胞的凋亡现象;流式细胞术检测乙酰紫草素对A375细胞凋亡水平的影响;采用Western blot法检测乙酰紫草素处理A375细胞后,凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Cleaved caspase-9的表达。结果乙酰紫草素能明显抑制A375细胞的增殖,且呈时间依赖性与剂量依赖性;形态学观察与流式细胞术以及Hoechst 33342荧光染色法结果显示,与对照组比较,乙酰紫草素低、中、高剂量组A375细胞凋亡率升高,差异有统计学意义(P<0.05);Western blot结果显示,与对照组相比,乙酰紫草素低、中、高剂量A375细胞中Bcl-2表达降低,Bax、Cleaved caspase-9表达升高,Bax/Bcl-2比值增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论乙酰紫草素能够呈剂量依赖性抑制A375细胞的增殖,上调促凋亡蛋白Bax、Cleaved caspase-9的表达,抑制抑凋亡蛋白Bcl-2蛋白的表达,促进A375细胞的凋亡。

乙酰紫草素对HCV复制的影响及其作用机制研究

目的探讨乙酰紫草素对HCV复制的影响及其作用机制。方法 (1)体外培养Huh7细胞,用不同浓度乙酰紫草素溶液与Huh7细胞进行共同培养,采用MTS法检测细胞的相对活力,观察乙酰紫草素对Huh7细胞的毒性作用。(2)采用JFH-1毒株感染Huh7细胞后,用不同浓度(0、0. 1、0. 2、0. 4、0. 8μM)的乙酰紫草素溶液进行处理,检测HCV RNA以及HCV core蛋白的表达水平,观察乙酰紫草素对Huh7细胞中HCV JFH-1复制的影响。(3)取JFH-1感染的Huh7细胞分为HCV组和HCV+乙酰紫草素组,HCV+乙酰紫草素组用0. 8μM乙酰紫草素处理,HCV组不处理;取未感染JFH-1的Huh7细胞,分为乙酰紫草素组和对照组,乙酰紫草素组用0. 8μM乙酰紫草素处理,对照组不处理。通过检测LC3 mRNA以及LC3B蛋白的表达水平,观察乙酰紫草素对细胞自噬标志因子LC3表达的影响。结果 (1)乙酰紫草素浓度在1. 0μM或更低时对Huh7细胞生长影响很小或没有影响,在2. 50μM以上时表现出明显的细胞毒性作用。(2)不同浓度乙酰紫草素(0. 1、0. 2、0. 4、0. 8μM)处理组细胞内HCV RNA水平均显著低于未用乙酰紫草素处理组,差异有统计学意义(P <0. 05),HCV core蛋白的表达量均显著低于未用乙酰紫草素处理组。(3)在基因水平上,LC3 mRNA的表达水平表现为HCV组>对照组> HCV+乙酰紫草素组>乙酰紫草素组,差异有统计学意义(P <0. 05);在蛋白水平上,LC3B蛋白的表达水平表现为HCV组>对照组> HCV+乙酰紫草素组>乙酰紫草素组。结论乙酰紫草素可以抑制HCV复制,同时下调自噬标志因子LC3的表达,可通过调节细胞自噬途径影响HCV病毒的复制。

紫草提取物有效成分测定及对骨骼肌自由基代谢和抗疲劳能力影响的实验研究

目的:通过建立小鼠游泳和大鼠跑台2个训练实验模型,研究紫草提取物对骨骼肌自由基代谢的影响以及抗疲劳作用;并测定紫草提取物中的有效成分。方法:选取雄性小鼠和大鼠各24只,将小鼠随机分为游泳训练组(a组)、游泳力竭组(b组)和游泳加药组(c组),每组各8只;将大鼠随机分为跑台训练组(A组)、跑台力竭组(B组)、跑台加药组(C组),每组各8只。小鼠和大鼠按照不同的训练模型分别进行游泳和跑台训练,在训练方案的最后1天,a、A组动物不进行训练,在安静状态下处死制备待测样本,并通过试剂盒测定骨骼肌超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)、巯基(-SH)、丙二醛(MDA)指标;b、B、c、C组动物进行一次力竭运动,力竭后即刻处死并进行样本处理和上述指标测定。结果:训练对照组(b、B组)动物在游泳和跑台力竭运动后,骨骼肌组织抗氧化酶活性显著下降(P<0.05),自由基代谢产物MDA含量显著升高(P<0.05);补充紫草提取物组(c、C组)动物在力竭运动后,与训练对照组动物(b、B)相比,骨骼肌组织抗氧化酶活性显著升高(P<0.05),自由基代谢产物MDA含量显著降低(P<0.05),运动至力竭的时间明显延长(P<0.05)。结论:外源性补充紫草提取物可以改善骨骼肌组织自由基清除和代谢水平,延缓运动疲劳的产生。

乙酰紫草素的潜在毒性机理研究及毒性评价

为了研究乙酰紫草素的潜在毒性机理,使用双荧光探针法和共振散射光谱法,研究其与DNA的相互作用。结果表明,乙酰紫草素不仅能键合进DNA的小沟槽,还能和DNA发生较弱的嵌入结合,产生毒性作用。试验使用结合饱和值,快速评价了乙酰紫草素的潜在毒性,求得其与DNA的结合饱和值为1.6 7,与溴化乙锭,阿霉素,茜素和1-羟基蒽醌进行比较发现,其值虽远小于溴化乙锭和阿霉素,但大于茜素和1-羟基蒽醌,说明乙酰紫草素存在一定毒性。还分别考察了氯化钠,氯化钙,葡萄糖,异亮氨酸,组氨酸和维生素C这6种可能同食的环境共存物对乙酰紫草素-DNA结合饱和值的影响。在环境共存物影响程度最大时,测定乙酰紫草素-DNA的结合饱和值分别为1.43,1.33,1.54,1.67,1.82和1.54。

一测多评法同时测定新疆软紫草中6种萘醌类成分

目的建立新疆软紫草Arnebia euchroma中紫草素、乙酰紫草素、去氧紫草素、异丁酰紫草素、β-乙酰氧基异戊酰紫草素和β,β′-二甲基丙烯酰紫草素6种萘醌类成分的一测多评测定方法。方法采用高分辨LC-MS对软紫草药材中的主要萘醌类色谱峰进行鉴定。采用HPLC法,以乙酰紫草素为内参物,建立了乙酰紫草素与紫草素、去氧紫草素、异丁酰紫草素、β-乙酰氧基异戊酰紫草素和β,β′-二甲基丙烯酰紫草素的相对校正因子,并考察了相对校正因子的耐用性和重现性。比较了外标法和一测多评法对新疆软紫草中6种成分的测定结果。结果各相对校正因子重复性良好,一测多评法测定结果与外标法测定结果无显著差异。结论建立同时测定6种成分的一测多评法控制新疆软紫草药材的质量是准确、可靠的。