点击化学制备AChE/MAO-B双抑制剂及活性评价

通过点击化学(Click)设计、合成了22个香豆素衍生物。多数化合物在微摩尔范围内表现出良好的AChE和MAO-B双抑制活性,具有良好的生物相容性。尤其是一种名为A2B5的化合物,对AChE和MAO-B的IC_(50)分别为(0.23±0.02)、(0.31±0.03)μmol/L,是最佳的AChE/MAO-B双抑制剂。实验结果表明香豆素基团是一类有效的AChE和MAO-B双抑制活性基团,羟基取代苯环的存在能够增强抑制活性。分子对接研究发现A2B5是双位点抑制剂,苯基部分结合到AChE的CAS位点,香豆素结合到PAS位点,三氮唑环占据两个活性位点的中间峡谷。A2B5的香豆素部分结合到MAO-B的入口空腔,苯基部分结合到底物空腔,并嵌入到Tyr435、Tyr398和FAD形成的“芳香笼”。总之,香豆素C7位置取代衍生物可以被开发为AChE/MAO-B双抑制剂,为进一步开发抗阿尔茨海默病的双靶点药物提供一个新的起点。

MCTSI、CTSI、MPV、HMGB-1、AChE活性与急性胰腺炎患者病情及预后的关系

目的 探讨改良CT严重指数(MCTSI)、CT严重指数(CTSI)、平均血小板体积(MPV)、高迁移率族蛋白-1(HMGB-1)、乙酰胆碱酯酶(AChE)活性与急性胰腺炎(AP)患者病情及预后的关系。方法 选取220例AP患者,根据病情将其分为轻症急性胰腺炎(MAP)组(n=63)、中重症急性胰腺炎(MSAP)组(n=85)和重症急性胰腺炎(SAP)组(n=72)。所有患者行MCTSI、CTSI评分,同时检测血清MPV、HMGB-1、AChE水平,采用Pearson法验证各指标的相关性。随访3个月,依据预后分组,比较不同预后AP患者MCTSI、CTSI评分及MPV、HMGB-1、AChE差异,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析上述指标对AP预后的预测价值。结果 三组MCTSI、CTSI评分、MPV、HMGB-1、AChE比较,差异均有统计学意义(F分别=34.90、154.62、230.50、92.35、101.20,P均<0.05),SAP组MCTSI、CTSI评分、MPV、HMGB-1明显高于MSAP组和MAP组(LSD-t分别=8.32、11.43、15.16、24.66、17.50、30.24、14.32、18.28,P均<0.05),AChE明显低于MSAP组和MAP组(LSD-t分别=13.08、19.79,P均<0.05)。AP患者MCTSI、CTSI评分分别与MPV、HMGB-1呈正相关(r分别=0.21、0.21、0.18、0.25,P均<0.05),与AChE呈负相关(r分别=-0.33、-0.34,P均<0.05)。预后不良组MCTSI、CTSI评分、MPV、HMGB-1高于预后良好组,AChE低于预后良好组,差异均有统计学意义(t分别=10.66、5.63、24.15、7.02、-14.54,P均<0.05)。ROC曲线显示,MCTSI、CTSI、MPV、HMGB-1、AChE联合预测AP患者不良预后的ROC曲线下面积(AUC)为0.91(95%CI 0.86~0.94),高于各指标单独预测(Z分别=2.78、3.39、2.78、2.44、2.89,P均<0.05)。结论 AP患者随着病情加重,MCTSI、CTSI评分及MPV、HMGB-1显著升高,AChE活性降低,联合检测MCTSI、CTSI、MPV、HMGB-1、AChE对AP患者病情及预后评估均有较高的应用价值。

颞三针治疗轻中度血管性痴呆及对血清血液流变学、ApoE、AchE的影响

目的观察颞三针联合康复训练治疗血管性痴呆(VD)的临床疗效及对血液流变学、载脂蛋白E(ApoE)及乙酰胆碱酯酶(AchE)的影响。方法选择2019年9月—2021年9月本院收治的70例VD患者作为研究对象,按随机数表法分为治疗组和对照两组,每组各35例。治疗组在常规基础药物治疗上采取颞三针联合康复训练治疗,对照组在常规基础药物治疗上采取康复训练治疗。分别在治疗前后采用日常生活能力评定量表(ADL)、简易智能量表(MMSE)评价其临床疗效,并检测血液流变学、血清AChE和ApoE水平的变化。结果与治疗前比较,两组患者治疗后MMSE、ADL评分均明显升高(P<0.01),而血清AChE、ApoE水平均降低(P<0.01),全血高切黏度、全血低切黏度和血浆黏度水平有不同程度降低(P<0.01,P<0.05);治疗组治疗后ADL、MMSE评分高于对照组(P<0.01,P<0.05),血清AChE、ApoE水平低于对照组(P<0.01,P<0.05),全血高切黏度、全血低切黏度和血浆黏度水平明显低于对照组(P<0.01)。结论颞三针结合康复训练治疗VD疗效肯定,能明显改善患者的认知障碍,提高日常生活水平能力,改善生活的质量,其认知能力的提高可能与调节血液流变学、血清AChE、ApoE水平有关。

氨基甲酸酯类化合物的合成及其AChE抑制活性研究

以松节油主要组分3-蒈烯为原料首先合成了3-异丙基-5-甲酚(1)和香芹酚(2),从这2个化合物出发通过异氰酸酯法(方法A)和氨基甲酰氯法(方法B)进一步制备了14个含异丙基甲酚结构的氨基甲酸酯类化合物,并测定了所合成16个化合物对乙酰胆碱脂酶(AChE)的抑制活性。研究结果表明:酚类化合物与异氰酸酯反应是制备氨基甲酸酯的高效合成工艺,其中异氰酸酯中N-取代基结构越大反应越容易发生,芳基取代产物的摩尔得率可达90%以上。在AChE抑制活性方面,3-异丙基-5-甲酚衍生物的抑制活性普遍高于香芹酚衍生物,N-脂基取代产物的抑制活性显著高于N-芳基取代产物,且短链脂基取代产物的抑制活性高于长链脂基和环脂基。3-异丙基-5-甲酚的N-甲基取代产物表现出优良的AChE抑制活性,抑制效率达到石杉碱甲的90.5%,超过同为氨基甲酸酯阳性对照利凡斯的明(89.6%),而其N,N-二甲基取代产物的抑制活性又明显高于N-甲基取代产物,抑制效率达到石杉碱甲的97.9%。浓度与抑制率关系表明:3-异丙基-5-甲基苯基-N,N-二甲基氨基甲酸酯(Ⅰ-2)在浓度大于1.25 mmol/L后表现出与石杉碱甲基本等同的AChE抑制活性,具有开发为阿尔兹海默症治疗药物或者杀虫剂的潜力。

雷贝拉唑联合微生态制剂治疗老年FD患者的效果及对血清GHR、AchE、MTL、GAS表达的影响

目的:分析雷贝拉唑联合微生态制剂治疗老年功能性消化不良(FD)患者的效果及对血清促生长素(GHR)、乙酰胆碱酯酶(AchE)、胃动素(MTL)、胃泌素(GAS)表达的影响。方法:选取厦门大学附属第一医院2019年6月—2022年8月收治的78例老年FD患者作为研究对象,以抽签法将其分为对照组与观察组,各39例。对照组使用雷贝拉唑治疗,观察组在对照组基础上另给予微生态制剂治疗,对比两组的症状评分、治疗效果、实验室指标、不良反应。结果:治疗后观察组症状评分低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组治疗总有效率为94.87%,高于对照组的76.92%,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后观察组实验室各指标高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组不良反应发生率为10.26%,虽低于对照组的15.38%,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论:雷贝拉唑联合微生态制剂治疗老年FD的效果确切且安全性尚可,能提高血清GHR、AchE、MTL、GAS表达水平,改善症状表现。

电针对AD模型大鼠梨状皮质GalR2和AchE表达的影响

目的:观察电针(EA)对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠梨状皮质甘丙肽受体2(GalR2)和乙酰胆碱酯酶(AchE)表达的影响,旨在探讨GalR2及AchE在电针治疗AD过程中的相互作用。方法:将雄性SD大鼠40只随机分为5组:对照组(C组)、模型组(M组)、EA+M1145组、EA组、EA+M871组。双侧海马内微量注射Aβ1-42,每侧5μL进行造模。EA组予以电针“大椎”“百会”“足三里”穴每天30 min,连续4周。EA+M1145组和EA+M871组分别经侧脑室注射M1145和M871后进行电针干预。水迷宫检测大鼠学习行为能力,组织学染色和Western blot法检测GalR2和AchE的表达。结果:M组平均逃避潜伏期延长(P<0.05),梨状皮质的细胞多呈空泡状,GalR2和AchE的表达均增强(P<0.05)。EA后,大鼠平均逃避潜伏期缩短(P<0.05),细胞形态趋于正常,GalR2的表达进一步增加(P<0.05),而AchE的表达降低(P<0.05),两者的变化以EA+M1145组最为明显(P<0.05)。结论:EA可能通过调节GalR2和AchE的表达改善AD模型大鼠的学习记忆能力,并且GalR2的高表达对AchE有抑制作用。

增液八珍汤对慢传输型便秘大鼠模型结肠肌5-HT、AchE、SP及VIP的影响

目的:观察增液八珍汤对慢传输型便秘大鼠结肠肌间神经丛中5-HT、AchE、VIP、SP的影响。方法:将72只SPF级大鼠随机分为空白对照组、模型组、麻仁软胶囊组、增液八珍汤低剂量组、增液八珍汤中剂量组和增液八珍汤高剂量组各12只。麻仁软胶囊组给予麻仁软胶囊内容物6.2 mL/(kg·d)灌胃,增液八珍汤低、中、高剂量组分别给予17、34、68 g/(kg·d)增液八珍汤灌胃,共给药14 d,空白对照组和模型组给等量的生理盐水。大鼠结肠组织给予HE染色及免疫组化染色,并对染色组化结果进行半定量积分分析。结果:与模型组比较,增液八珍汤各剂量组及麻仁软胶囊组结肠肌间神经丛神经元阳性表达和5-HT、AchE、VIP、SP定量分析显著增加(P<0.05);与麻仁软胶囊组比较,增液八珍汤各剂量组及麻仁软胶囊组结肠肌间神经丛神经元阳性表达和5-HT、AchE、VIP、SP定量分析显著增加(P<0.05),增液八珍汤中、高剂量组对结肠肌间神经丛5-HT、AchE、VIP、SP神经元增加的量均优于麻仁软胶囊组(P<0.05)。结论:增液八珍汤可通过增加便秘大鼠结肠中5-HT、AchE、VIP、SP表达神经细胞含量,刺激结肠收缩,增加结肠动力,加快结肠传导速度。

Ache、P-selectin、CDK5在病毒性脑炎中的表达及相关性研究

目的 探究乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase,Ache)、P-选择素(P-selectin)、细胞周期素依赖蛋白激酶5(cyclin-dependent kinase 5,CDK5)在病毒性脑炎(viral encephalitis,VE)中的表达及相关性。方法 本研究选取在本院健康体检及神经内科就诊治疗、住院治疗的病毒性脑炎患者130例作为研究对象,并纳入研究组,根据患者的病情时间将其分为急性期和恢复期,其中急性期组85例,恢复期组45例。根据患者的临床表现,将其分为轻度组和重度组,其中轻度组76例,重度组54例,选择同期在我院接受体检的健康患者60例作为对照组。应用丁酰硫代胆碱底物法检测Ache水平;酶联免疫吸附法检测血清P-selectin水平;CDK5分离试剂盒检测CDK5水平。观察研究组和对照组、急性期和恢复期及重度组和轻度组患者Ache、P-selectin、CDK5水平,分析病毒性脑炎患者Ache、P-selectin和CDK5之间相关性,利用ROC曲线比较Ache、P-selectin、CDK5单独检测及联合检测在VE中的诊断价值。结果 研究组Ache、P-selectin、CDK5水平显著高于对照组(P<0.05);急性期患者Ache、P-selectin、CDK5水平显著高于恢复期(P<0.05);重度组患者Ache、P-selectin、CDK5水平显著高于轻度组(P<0.05);Ache、P-selectin和CDK5蛋白表达两两之间均呈正相关(P<0.05);联合诊断的诊断价值显著高于Ache、P-selectin、CDK5单独诊断(Z=2.765、2.563、2.925,P均<0.05)。结论 Ache、P-selectin、CDK5均参与病毒性脑炎患者发病过程,在发病不同时期呈现不同水平表达,且两两指标之间呈现正相关,可以作为病毒性脑炎患者的诊断和治疗依据。

新型AChE抑制剂胡椒碱衍生物对阿尔茨海默病小鼠的治疗作用评价

目的研究胡椒碱衍生物4a对乙酰胆碱酯酶的抑制活性及对阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease,AD)小鼠的神经保护的作用。方法雄性C57BL/6J小鼠30只,随机分:(i)空白对照组,(ii)模型组,(iii)多奈哌齐(10 mg·kg^(-1),阳性对照)组,(iv)4a低浓度(20 mg·kg^(-1))组,(v)4a高浓度(40 mg·kg^(-1))组。iii至v组,小鼠给药东莨菪碱(3 mg·kg^(-1))30 min后,口服多奈哌齐和4a,连续10 d,Morris水迷宫实验观察由东莨菪碱诱导的认知功能障碍小鼠的记忆功能。体外实验采用硫黄素-T(ThT)荧光法测定溶液中Aβ的聚集能力,Western blot测定Tau蛋白磷酸化表达,并对化合物4a进行了抑制乙酰胆碱酯酶的动力学研究。结果化合物4a有效抑制AChE活性、Aβ的聚集和Tau蛋白的过度磷酸化,几乎使受损小鼠恢复正常的认知能力。结论化合物4a认为是一种潜在的治疗AD的候选化合物。

血清AChE、IL-17与单纯疱疹病毒性脑炎患者认知功能障碍的相关性

目的探讨血清乙酰胆碱酯酶(AChE)和白细胞介素(IL)17水平与单纯疱疹病毒性脑炎(HSE)患者认知功能障碍的相关性。方法选取2019年3月—2021年3月邯郸市中心医院HSE患者159例(HSE组),根据是否发生认知功能障碍将所有患者分为认知障碍组(69例)和认知正常组(90例),根据简易智能精神状态检查量表(MMSE)评分将认知功能障碍患者分为轻度组(23例,MMSE评分为20~25分)、中度组(30例,MMSE评分为11~19分)和重度组(16例,MMSE评分≤10分)。以健康体检者65名作为正常对照组。检测所有研究对象血清AChE、IL-17水平。采用Pearson相关分析评估AChE和IL-17与蒙特利尔认知评估量表(MoCA)评分和MMSE评分的相关性。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析AChE和IL-17诊断HSE患者认知功能障碍的效能。结果HSE组血清AChE、IL-17水平均显著高于正常对照组(P<0.05)。认知障碍组血清AChE、IL-17水平均高于认知正常组(P<0.05)。重度组血清AChE、IL-17水平高于中度组和轻度组(P<0.05),中度组血清AChE、IL-17水平高于轻度组(P<0.05)。认知障碍组血清AChE、IL-17水平与MoCA评分呈负相关(r值分别为-0.311、-0.480,P<0.01),与MMSE评分亦呈负相关(r值分别为-0.349、-0.447,P<0.01)。AChE、IL-17单项检测和联合检测诊断HSE患者认知功能障碍的曲线下面积(AUC)分别为0.689、0.724、0.893。结论HSE患者血清AChE和IL-17水平与认知功能障碍有关,且可用于评估认知功能障碍的严重程度。

帕金森病患者唾液中α-syn、DJ-1、HO-1、AchE水平变化及其辅助诊断价值

目的分析帕金森病患者唾液中α-突触核蛋白(α-syn)、DJ-1、血红素加氧酶-1(HO-1)、乙酰胆碱酯酶(AchE)水平变化及其辅助诊断价值。方法选取2021年8月至2022年8月该院收治的帕金森病患者96例作为帕金森病组,另选取同期在该院体检的健康人群80例作为健康对照组。根据蒙特利尔认知量表(MoCA)评分将帕金森病患者分为合并认知障碍组和无认知障碍组,采集所有受检者的唾液标本,采用酶联免疫吸附试验检测HO-1、α-syn、DJ-1水平,酶比色法检测AChE水平,比较各组受检者的唾液指标水平,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析α-syn、DJ-1、HO-1、AchE指标单独及联合诊断帕金森病的效能。结果帕金森病组患者唾液α-syn、DJ-1、HO-1水平低于健康对照组,AchE水平高于健康对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。合并认知障碍组患者唾液α-syn、DJ-1、HO-1水平低于无认知障碍组,AchE水平高于无认知障碍组,差异均有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,α-syn、DJ-1、HO-1、AchE单独检测诊断帕金森病的曲线下面积(AUC)分别为0.723、0.781、0.816、0.671,4项指标联合检测诊断帕金森病的AUC为0.876。结论帕金森病患者唾液中α-syn、DJ-1、HO-1、AchE水平呈明显异常,且与患者认知功能改变相关,4项指标在辅助诊断帕金森病方面具有一定价值。

新型双配基AChEI美普色胺改善东莨菪碱致小鼠学习记忆功能障碍的研究

目的探究左旋美普他酚与5-羟色胺的杂合物美普色胺[(-)-Mep-S]对东莨菪碱诱发小鼠学习记忆功能障碍的改善作用。方法应用分子对接技术分析(-)-Mep-S与hAChE之间的结合;利用体内外实验观察(-)-Mep-S对AChE活性的影响;通过Morris水迷宫行为学实验分析小鼠学习记忆能力;应用旷场试验检测(-)-Mep-S对小鼠运动能力影响。结果分子对接分析显示,(-)-Mep-S与hAChE的催化位点和外周阴离子位点存在较强结合。(-)-Mep-S明显抑制小鼠前脑来源和人SH-SY5Y细胞来源的AChE活性,其IC50值均低于阳性对照药利斯的明。在水迷宫实验中,(-)-Mep-S(2.5 mg/kg)治疗的小鼠在第4天的上台潜伏期显著缩短(P<0.05),且在第5天的空间探索试验中,小鼠在靶象限的游泳距离百分比和时间百分比显著升高(P<0.05);而0.5 mg/kg剂量下(-)-Mep-S未能表现出明显作用;(-)-Mep-S能显著抑制东莨菪碱所致的小鼠前脑AChE活性增强(P<0.05)。另外,旷场试验提示(-)-Mep-S改善东莨菪碱所致小鼠学习记忆功能障碍的作用并不是由于运动能力的差异所造成的。结论(-)-Mep-S能有效抑制AChE活性,从而改善东莨菪碱诱发小鼠学习记忆功能障碍。

基于分子对接和表面等离子体共振技术筛选肉苁蓉复方制剂中AChE抑制剂的研究

目的:虚拟筛选肉苁蓉复方制剂中潜在的乙酰胆碱酯酶(AChE)小分子抑制剂,为发现新型AChE抑制剂提供参考。方法:基于中药系统药理学技术平台(TCMSP)及文献检索建立肉苁蓉复方制剂即肉苁蓉、人参和黄芪虚拟筛选的数据库,运用Rosetta软件进行Glide分子对接,利用围绕AChE受体活性位点的氨基酸残基形成一个大范围的Box,应用不同类型的成分作为探针进行扫描,计算格点能量进行能量排名,之后对配体在Box范围内进行构象搜索,根据配体的不同构象、方向、位置及能量进行评分,对结果进行排序,并最终采用表面等离子共振(SPR)技术对主要活性成分和AChE蛋白进行结合力验证。结果:AChE蛋白与肉苁蓉、人参和黄芪中挑选出来的典型性先导化合物结合模式以及结合能量均较好。在所有化合物分子对接体系中,肉苁蓉能量评分在-9.397~-0.858 kcal/mol之间;人参能量评分在-9.929~-0.211 kcal/mol之间;黄芪能量评分在-9.408~-1.555 kcal/mol之间;所有化合物对接小分子能量均小于-7.0 kcal/mol。SPR亲和力验证结果发现,槲皮素、山奈酚和染料木素均可与AChE蛋白显示出较好的结合力。结论:基于分子对接技术筛选出肉苁蓉复方制剂中潜在的AChE抑制剂,结合SPR技术验证了AChE蛋白与活性成分之间良好的亲和力。

毒死蜱和三唑磷对斑马鱼头部AChE活性影响及在鱼体内的富集

采用半静态法，测定了在96h—Lc50的1／10、1／20、1／40及1／80作用剂量下慢性暴露，毒死蜱和三唑磷对斑马鱼头部乙酰胆碱酯酶（AChE）活性的抑制及两种农药在鱼体的富集作用，并研究解除30d后酶活性的恢复。结果表明，随暴露剂量增大、暴露时间延长，农药对AChE活性抑制越强。在96h—LC50的1／10作用剂量下连续暴露30d，毒死蜱和三唑磷处理组斑马鱼头部AChE活性分别为对照的42．25％和31．80％。毒死蜱不同剂量处理组酶活性在解除药剂后30d均可恢复到对照的90％以上，而三唑磷高剂量处理组（96h—LC50的1/10和1／20）分别只有对照的74．91％和71．46％。毒死蜱极容易在鱼体富集，慢性暴露30d富集系数达260．91～1320．03L·kg^-1，而三唑磷仅为8．23-26．84L·kg^-1。

海鱼AChE监测海水有机磷农药的可行性研究

有机磷农药 (OPs)对乙酰胆碱酯酶 (AChEEC 3.1 .1 .7)具有专一性抑制作用 ,因此AChE常作为淡水和土壤OPs污染的特异性标识物 (biomarker)。本文在海水背景下 ,通过测定两种有机磷农药 (马拉硫磷和甲基对硫磷 )对海洋鱼类—鲈鱼 [Lateolabraxjaponicus(cuvier) ]脑组织AChE的抑制效应 ,分析了海鱼AChE监测海水OPs的可行性。结果显示 ,抑制时间为 2 0min时 ,抑制程度达到相对稳定 ;在低浓度OPs抑制下 ,纯酶液比粗酶液表现出更好的敏感性 ,对马拉硫磷和甲基对硫磷的灵敏度分别达到 0 .2 8μg·L 1和 0 .2 μg·L 1;在一定浓度范围内 ,AChE活力对OPs具有显著的线性响应。研究表明 ,利用鲈鱼AChE指示和监测海水OPs的微污染是完全可行的。

镉对罗非鱼脑AChE及组织中代谢酶的影响

将尼罗罗非鱼分别在含0.5mg/LCd和5.0mg/LCd的水环境中染毒28d,对其脑乙酰胆碱脂酶(AChE)及鳃、肝脏和心脏中的乳酸脱氢酶(LDH)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)分别进行测定.结果表明,高浓度或长期的低浓度镉污染可抑制脑AChE的活性.高镉组中LDH在三个组织中都极显著下降,下降的程度依次为:肝脏>心脏>鳃,而在低镉组中LDH在后期显著升高;肝、心及鳃中ALT和AST在两组中匀显著下降,其中ALT下降程度依次为肝>心>鳃;AST依次为心>肝>鳃.可见,高浓度镉可引起鱼的神经机能紊乱和能量代谢障碍;使鱼的组织细胞受到不同程度的损害,其中对肝脏细胞的损害最为严重,其次是心脏和鳃.

电针穴位对脑缺血-再灌流大鼠海马和大脑皮层AChE活性的影响

目的:探讨电针穴位对脑缺血-再灌流损伤引起的脑海马及大脑皮层内乙酰胆碱酯酶(AChE)活性的影响.方法:采用夹闭大鼠双侧颈总动脉(CCAO)造成脑缺血-再灌流损伤模型,以改良Ellman法测定AChE.每日电针双侧"百会"、"风池"、"大钟"及"足三里"穴30min、7和14d,疏-密波频率:2～20Hz,强度2 0A.结果:实验后第7d,大鼠海马及大脑皮层内的AChE活性在缺血-再灌流组明显低于假手术组,而其电针组的AChE活性则基本恢复;第14d,缺血-再灌流及其电针组的大脑皮层AChE活性恢复,海马AChE活性有所恢复.结论:脑缺血-再灌流所致的脑损伤可能与脑内AChE的活性有关;电针能提高大鼠海马及大脑皮层内的AChE活性,从而可能对抗脑缺血-再灌流所致的脑损伤作用.

麦穗鱼脑乙酰胆碱酯酶(AChE)的纯化及其比较性研究

用 PEG2 0 0 0双水相萃取、DEAE- Sephadex A- 5 0和 Sephadex G- 2 0 0方法分离纯化麦穗鱼Pseudorasbora parva脑中的乙酰胆碱酯酶 (ACh E) ,然后比较分析纯酶液与粗酶液中鱼脑 ACh E的动力学特性和抗抑制性 ,以便更直接地了解底物与酶以及毒剂与酶的反应关系。研究结果表明 ,经过一系列步骤的纯化 ,最后所得的 ACh E是纯度较高的酶液 ;通过对 ACh E的动力学研究发现 ,纯化后的麦穗鱼脑 ACh E与底物之间的亲和力和其在粗酶状态时没有显著的差别 ,而且纯化后的鱼脑 ACh E对底物抑制作用更敏感 ;抗抑制性研究发现 ,纯化后的麦穗鱼脑 ACh E对经溴水氧化的马拉硫磷 (malathion)和三唑磷 (triazophos)的敏感性显著高于粗酶状态的 ACh E。

麦穗鱼脑AChE间接非竞争ELISA定量分析法的建立

用PEG2000双水相萃取、DEAE-SephadexA-50和SephadexG-200方法分离纯化麦穗鱼Pseudorasboraparva脑中的乙酰胆碱酯酶(AChE),并制备了兔抗麦穗鱼脑AChE抗血清。用兔抗麦穗鱼脑AChE抗体连接抗原,建立了定量分析麦穗鱼脑AChE的间接非竞争酶联免疫吸附法(Indirectandnon-competitiveELISA),此法操作简便、灵敏度高,适用于定量检测。该方法的建立有利于AChE在环境科学和农药学研究领域的进一步研究和应用。