缺氧刺激后大鼠大脑皮层神经元GABA和ACh表达的动态变化

目的研究大脑皮层神经元中枢神经疲劳过程中γ-氨基丁酸(GABA)和乙酰胆碱(ACh)神经递质表达的变化及其特点。方法借助体外培养大鼠大脑皮层神经元,并利用Western Blotting、HPLC等方法研究60 min缺氧刺激对神经元HIF-1α、GABA和ACh表达的影响。结果缺氧刺激后HIF-1α、GABA和ACh的表达均有显著变化,两种递质的变化呈现异向同步性;24-48 h后,二者的变化基本恢复正常。结论缺氧可以诱导大鼠大脑皮层神经元GA-BA和ACh的表达升高和降低,二者协同作用可以诱导神经元的自我保护效应。

转CpTI基因杨树对美国白蛾幼虫中肠解毒酶及乙酰胆碱酯酶的影响

以转CpTI基因毛白杨回交杂种 [(Populustomentosa×Populusbolleana)×Populustomentosa]叶片饲喂 4～ 5龄美国白蛾 (HyphantriacuneaDrury)幼虫 ,对其中肠解毒酶和乙酰胆碱酯酶活性进行了测定。结果表明 ,酯酶、羧酸酯酶的活力受到明显抑制 ,且随时间的延长抑制强度增加 ,饲喂 48h后 ,上述两种酶的活力分别比对照降低 76 .42 %和 73.91% ;多功能氧化酶在饲喂的前 12h ,表现为受到抑制 ,最大抑制率为 35 .78% ,2 4h后酶活力反而高于对照 ;谷胱甘肽S -转移酶和乙酰胆碱酯酶活力受到抑制 ,而且两者表现极为相似 ,均在饲喂后 4h抑制作用最强 ,酶活力分别比对照降低 5 1.40 %和 40 .5 7% ,但在整个试验过程中 ,均没有表现出随时间加强的趋势。

寄主植物对烟粉虱后代种群抗性相关酶活性的影响

比较了取食不同寄主植物的烟粉虱后代羧酸酯酶和乙酰胆碱酯酶的活力。结果表明:寄主植物对烟粉虱羧酸酯酶和乙酰胆碱酯酶(AChE)活力影响显著,取食不同寄主植物的烟粉虱后代羧酸酯酶和AChE活力差异显著。在试验的甘蓝、花菜、小白菜和苘麻4种寄主中,取食小白菜、甘蓝的烟粉虱后代种群羧酸酯酶的酶活力显著高于取食花菜和苘麻的,取食小白菜的酶活力最高,是取食苘麻的3.90倍。取食甘蓝的后代种群AChE的酶活力最高,取食苘麻的后代种群酶活力最低;取食花菜与小白菜、小白菜与苘麻之间没有明显差异,但甘蓝与其他寄主上的烟粉虱后代种群之间的差异均达到了极显著水平。取食甘蓝、花菜、小白菜的后代AChE OD值分别为取食苘麻的2.85、2.39倍和1.07倍。

蔬菜中有机磷农药残留的两种酶抑制快速检测方法的比较研究

本实验比较了快速测定蔬菜中有机磷农残的两种酶抑制法即胆碱酯酶抑制法和植物酯酶抑制法,通过正交实验优化了两种酶抑制法的测定条件。对实际蔬菜样品的磷农残测定结果表明:这两种酶抑制快速测定方法均可用于蔬菜中有机磷农残的测定,其加标回收率都达到85%以上。但植物酯酶法测量精密度较好(3%以下),酶源易得,提取、保存方便,在有机磷的快速测定中有更广泛的应用价值。

大鼠脊髓损伤后运动终板内乙酰胆碱酯酶和降钙素基因相关肽的变化

目的观察大鼠不同类型脊髓损伤后降钙素基因相关肽(CGRP)与乙酰胆碱酯酶(AChE)在后肢腓肠肌运动终板内的变化,以探讨不同类型脊髓损伤后CGRP和AChE与运动终板退变的关系。方法60只成年Wistar大鼠随机分为假手术组(A组)、切割型脊髓损伤组(B组)和撞击型脊髓损伤组(C组),术后1、2、4、10周分别用Karnovsky-Roots直接法染色检测AChE、免疫组化法检测CGRP的变化。结果两损伤组大鼠术后运动终板中CGRP和AChE浓度均下降,但C组10周时有了明显恢复,而B组一直处于较低水平;CGRP的改变早于AChE。结论在大鼠不同类型脊髓损伤后,CGRP和AChE的活性和浓度与运动终板退变的程度不同。

开心散有效部位对小鼠学习记忆功能的影响

用药理研究指导植化分离 ,寻找中药复方开心散有效部位 (KXS) ,探讨其益智作用及机理。采用氢溴酸东莨菪碱造模 ,用跳台法和水迷宫测试小鼠的学习记忆能力 ,测定小鼠大脑组织乙酰胆碱酯酶 (AchE)和超氧化物歧化酶 (SOD)活性以探讨其作用机理。跳台法测试表明模型组正确区时间 (Ts)缩短 ,KXS能延长Ts ,水迷宫实验结果显示 ,模型小鼠游泳时间明显延长 ,KXS能缩短游泳时间。KXS能逆转模型小鼠AchE活性的升高和SOD活性的降低。实验结果提示KXS对模型小鼠的学习记忆能力有一定的改善作用。

乙酰胆碱对人心房肌脱敏作用的研究

目的探讨乙酰胆碱(ACh)对人心房肌的脱敏作用及其机制。方法取30例心脏手术患者的右心耳,部分用酶解法分离成单细胞,分别应用标准微电极技术、肌力换能器和全细胞膜片钳技术记录组织动作电位、心肌收缩力和单细胞乙酰胆碱敏感钾电流(IK,ACh),并观察乙酰胆碱的作用。结果10μmol/L乙酰胆碱可降低心房肌收缩力,缩短动作电位时程,随着时间推移效应逐步减小,即出现脱敏现象。乙酰胆碱敏感钾电流(IK,ACh)出现类似的脱敏现象。结论ACh降低心房肌组织收缩力的作用有脱敏现象,脱敏的发生可能与心房肌细胞动作电位时程(APD)的脱敏及IK,ACh的脱敏有关。

异氟烷和七氟烷对老年小鼠认知功能的影响及其机制研究

目的探讨异氟烷和七氟烷对老年小鼠认知功能的影响及与胆碱能系统的关系。方法健康雌性18个月龄C57BL/6J老年小鼠30只,分为3组,每组10只。1.2%异氟烷(异氟烷组)或2.6%七氟烷(七氟烷组)麻醉6h(同时吸入30%氧气和70%氮气混合气体),未麻醉组为对照组。麻醉后2周行Morris水迷宫实验检测认知功能。水迷宫实验结束后取脑组织测定乙酰胆碱酯酶(AchE)和乙酰胆碱转移酶(ChAT)的活性和含量。结果与对照组比较,异氟烷组潜伏期和游泳路程均延长(P<0.05),小鼠脑组织内ChAT含量降低;七氟烷组潜伏期和游泳路程均无显著变化(P>0.05),AchE和ChAT的活性及含量均无显著变化。3组之间目标象限的时间和路程百分比均无显著性差异(P>0.05)。结论异氟烷麻醉后老年小鼠出现术后认知功能障碍(POCD),可能与ChAT含量减少有关。七氟烷麻醉后老年小鼠未出现POCD,且AchE和ChAT的活性及含量均无变化。

大鼠脊髓损伤后运动功能的恢复及前角运动神经元功能的改变

目的观察大鼠不同方式脊髓损伤后损伤下段脊髓前角运动神经元内降钙素基因相关肽（CGRP）与乙酰胆碱酯酶（AChE）的变化,并对损伤后后肢运动功能的恢复情况进行比较。方法60只成年Wistar大鼠随机分为假手术组、切割型脊髓损伤组和撞击型脊髓损伤组,采用联合均分（ACOS）神经行为学评定观察损伤后大鼠运动功能的恢复,术后1、2、4、10周,用Karnovsky-Roots直接法染色检测L2～L4段脊髓AChE、免疫组化方法检测CGRP的水平。结果术后1～10周内,撞击组大鼠ACOS得分明显高于切割组,两损伤组大鼠术后前角运动神经元CGRP和AChE的含量均下降,但撞击组10周时有了明显恢复,而切割组一直处于较低水平,且CGRP的改变早于AChE。结论在大鼠不同脊髓损伤后,运动功能变化与前角运动神经元的功能状态具有一定联系;CGRP和AChE可能在对脊髓损伤后运动功能的恢复中起一定作用。

职业性接触苯并(a)芘对焦炉工人胆碱能系统的影响

[目的]探讨职业性接触苯并(a)芘[B(a)P]对焦炉作业工人胆碱能系统的影响。[方法]根据183名男性焦炉工人的工作性质分为炉底组、炉侧组和炉顶组3个组:分别有28、57、57人。41名对照组从该企业的原材料处选择。用高效液相色谱法测定各组工作场所空气中B(a)P的浓度,并对工人尿中1-羟基芘(1-OH-Py)的水平进行检测;分别用碱性羟胺比色法和二硫代二硝基苯甲酸(DTNB)法测定全血滤液中乙酰胆碱(ACh)的含量和红细胞乙酰胆碱酯酶(AChE)的活性。[结果]焦化厂空气中B(a)P的浓度明显高于原材料处(10.2±7.6)ng/m3,并且呈现炉顶(1623.5±435.8)ng/m3高于炉侧(185.9±38.6)ng/m3;炉侧高于炉底(19.5±13.2)ng/m3的趋势;焦炉工1-OH-Py水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01);与对照组相比,接触组红细胞AChE的活力明显降低,全血ACh的含量升高,差异有统计学意义(P<0.01)。相关分析结果显示尿1-OH-Py与ACh之间呈正相关(r=0.184,P=0.012);1-OH-Py与AChE之间呈负相关(r=-0.163,P=0.027)。[结论]职业接触B(a)P能够抑制外周血红细胞AChE的活力,使外周血ACh的水平升高,从而造成胆碱能系统的功能紊乱。

低浓度甲氰菊酯对黄鳝乙酰胆碱酯酶活性的影响

[目的]了解甲氰菊酯对鱼类的毒副作用,为拟除虫菊酯类农药的污染监测提供参考。[方法]以低浓度甲氰菊酯(0.01、0.05、0.10、0.50、1.00μg/L)为供试药剂,采用接触染毒法研究不同作用时间下其对黄鳝肌肉乙酰胆碱酯酶(AChE)活性的影响。[结果]0.01μg/L甲氰菊酯对黄鳝肌肉AChE活性具有一定的诱导作用,随着甲氰菊酯浓度的升高,其对黄鳝肌肉AChE活性逐渐产生抑制作用,且其浓度越高对黄鳝肌肉AChE活性的抑制作用越强;连续暴露20d后,0.50、1.00μg/L甲氰菊酯处理组黄鳝肌肉AChE活性显著降低;随着染毒时间的延长,黄鳝肌肉AChE活性有逐渐降低的趋势。[结论]低浓度甲氰菊酯长时间处理可降低黄鳝肌肉AChE活性。

消瘿强肌汤对甲亢肌病骨骼肌运动终板的影响

目的观察消瘿强肌汤对甲亢肌病大鼠骨骼肌运动终板超微结构的影响和乙酰胆碱酯酶活性的变化。方法36只健康雌性Wistar大鼠随机分为正常对照组(n=6)和模型组、中药治疗组、生理盐水对照组(均n=10),后3组腹腔注射甲状腺激素钠盐制作甲亢肌病模型,中药治疗组注射甲状腺激素后再灌服中药方剂消瘿强肌汤。光、电镜观察运动终板乙酰胆碱酯酶活性变化及运动终板超微结构的变化。结果模型组各型骨骼肌纤维运动终板乙酰胆碱脂酶活性均较正常对照组明显减弱,酶反应产物减少,分布不均,超微结构显示突触间隙电子密度高低不等,接头褶减少、变短,轴突终末内线粒体空泡化。中药治疗组运动终板乙酰胆碱酯酶活性明显恢复,接头褶结构、轴突终末内部分线粒体结构恢复正常。结论消瘿强肌汤可恢复甲亢肌病骨骼肌运动终板乙酰胆碱酯酶活性,改善骨骼肌运动终板超微结构。

对药剂敏感性不同的烟蚜体内几种关键性酶活性的比较分析

对吡虫啉和氧化乐果在三明地区和合肥地区烟蚜的毒力进行了测定,并对两地烟蚜的羧酸酯酶、乙酰胆碱酯酶和谷胱甘肽转移酶的活性进行了研究。结果表明吡虫啉对两地烟蚜的生物活性远高于氧化乐果,三明烟蚜对两种药剂的敏感性都比合肥烟蚜的低,三明烟蚜种群的毒力方程b值低,存在一定的异质性;两地烟蚜的羧酸酯酶、乙酰胆碱酯酶活性差异不显著,但三明地区烟蚜的谷胱甘肽转移酶活性显著高于合肥地区烟蚜。

不同品系淡色库蚊各发育阶段的非特异性酯酶和乙酰胆碱酯酶活力变化

研究并探讨非特异性酯酶 (NSE)和乙酰胆碱酯酶 (ACh E)活力在不同品系淡色库蚊 (Culespipiens pallens)各发育阶段的变化 ,为应用生物化学方法检测蚊虫抗药性及科学合理地进行蚊虫化学防治提供依据。用微量滴定板法测定单个蚊虫 NSE和 ACh E活力 ,结果显示 ,敏感品系、DDVP抗性品系和残杀威抗性品系淡色库蚊 NSE活力水平在不同发育阶段有变化 , ～ 龄幼虫较低 , 龄幼虫、蛹和 3日龄雌成蚊较高 ,在各发育阶段均是 DDVP抗性品系 NSE活力最高 ,残杀威抗性品系次之 ,敏感品系最低 ,其中 龄幼虫、蛹和 3日龄雌成蚊阶段三个品系间 NSE活力差别更明显 ;三个品系淡色库蚊 ACh E活力在 ～ 龄幼虫和蛹期较低 ,3日龄雌成蚊较高 ,三个品系间 ACh E活力稍有差异 ,从高到低依次为残杀威抗性品系、DDVP抗性品系和敏感品系。测定蚊虫 NSE活力判断抗药性可选择 龄幼虫、蛹和 3日龄未吸血雌成蚊 ;测定蚊虫 ACh E不敏感性判断抗药性可选择 3日龄未吸血雌成蚊 ;

寄主植物对南美斑潜蝇羧酸酯酶及乙酰胆碱酯酶活力的影响

比较了取食不同寄主植物的南美斑潜蝇后代羧酸酯酶和乙酰胆碱酯酶的活力,结果表明:寄主植物对南美斑潜蝇羧酸酯酶和乙酰胆碱酯酶活力影响显著,取食不同寄主植物的南美斑潜蝇后代羧酸酯酶和乙酰胆碱酯酶活力差异显著。

用于农残快速检测的离心式微流控芯片研制

基于酶抑制原理结合光度分析方法,研制一种预存储生化试剂的离心式微流控芯片。设计制作的一次性微流控CD芯片集成进样、酶抑制反应、显色反应及检测单元,结合自行研制的便携式分析装置,可以同时检测12个样品,能够实现对大批量农产品中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留进行现场、快速、高通量检测。结果表明:与传统农残快速测定仪比较,微流控芯片农残速测系统操作单元集成度高,可以实现农残检测流程的自动化,样品及试剂消耗量降至传统速测方法的约1/20,同时检测灵敏度、重复性和准确性整体优于传统农残快速测定仪,可以满足基层非专业人员针对大批量样品农药残留的筛查需求。

重酒石酸利斯的明的合成

3-甲氧基苯乙酮经还原胺化、(S)-扁桃酸拆分、Eschweiler-Clark反应及48%氢溴酸脱甲基,得到(S)-3-[(1-二甲胺基)乙基]苯酚,再与N-乙基-N-甲基氨甲酰氯经酰化后,与L-酒石酸成盐制得重酒石酸利斯的明,总收率约20%。

脊髓重建管对T8损伤大鼠后肢运动终板的调节与维持

目的观察大鼠脊髓损伤后及脊髓重建管诱导脊髓再生修复过程中后肢骨骼肌运动终板形态结构与不同类型肌纤维终板区乙酰胆碱酯酶(AChE)的变化情况。方法43只成年Wistar大鼠随机分为脊髓T8单纯损伤组(Cx组)、脊髓T8损伤+脊髓重建管移植修复组(CxTp组)和正常对照组(Co组),术后2周、4周、3个月、6个月、12个月经灌注固定后取出大鼠双下肢腓肠肌、比目鱼肌和趾长伸肌,分别用氯化金染色(压片法)观察运动终板结构形态和Karnovsky-Roots直接法染色检测AChE的变化。结果Cx组和CxTp组大鼠术后运动终板结构形态与AChE活性均发生改变。Cx组终板自术后3个月起发生明显的退行性改变,AChE活性亦呈线性下降;CxTp组终板结构与形态相对稳定,没有退变迹象,术后3个月起AChE活性显著高于同时间点Cx组。结论大鼠脊髓损伤后,运动终板发生进行性退变,脊髓重建管移植修复可以阻止终板的退行性变,使其向着利于神经康复的方向发生着AChE的复活与结构形态的可塑性变化。

绿茶提取物EGCG对老年痴呆鼠和肥胖鼠的改善作用研究

以老年痴呆症和肥胖症模型小鼠为实验对象,每天用50 mg/kg的绿茶提取物(-)表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)喂食30 d,分别从实验鼠的外形、生化指标和组织切片等指标进行分析,探讨EGCG对老年痴呆症和肥胖的改善作用。结果表明,EGCG能改善老年痴呆症小鼠大脑认知水平,作用机制可能与脑组织胆碱乙酰转移酶(ChAT)和乙酰胆碱酯酶(AchE)酶活、丙二醛(MDA)含量和β-淀粉样蛋白-42(Aβ42)沉积有关。EGCG具有抑制肥胖功效,其作用机制可能与体内血清脂肪酶和淀粉酶活力有关,影响脂肪和能量代谢。同时,EGCG还具有一定的修复肥胖引起的肝损伤的作用。这一研究成果为绿茶功能食品的开发奠定了理论基础。

瓜-棉蚜对有机磷及氨基甲酸酯杀虫剂抗性机制研究

从1983年开始就北京及河北省廊坊、香河和涿鹿县四个地区瓜-棉蚜(Aphis gossypiiGlov.)对18种有机磷及2种氨基甲酸酯杀虫药剂进行了抗性系统监测,与苏联瓜蚜(A.gos-sypii Glov.)敏感系毒力值(LC_(50))进行比较,抗蚜威最高达7887.7倍,马拉硫磷357.8倍,乐果128.6倍,敌敌畏83.5倍,乙酰甲胺磷72.1倍;而对喹硫磷、甲基辛硫磷、呋喃丹及溴氯磷则相当敏感,LC_(50)值在45.2—186.0 ppm之间。其抗性谱大致呈交叉型交互抗性。酶系测定结果表明,瓜-棉蚜的乙酰胆碱酯酶(AChE)敏感性降低与抗药性关系最为密切,氧化乐果和抗蚜威对AChE的I_(50)值与其Log LC_(50)(ppm)呈显著相关(P<0.05)。四个地区的瓜-棉蚜AChE对底物(乙酰硫代胆碱ATCh)的米氏常数(Km)及最大反应速度(Vmax)值均无明显差异,但ATCh浓度超过10^(-2)mol/L时,对AChE还没有明显的抑制作用。瓜-棉蚜α-乙酸萘酯羧酸酯酶与对久效磷的抗性呈正相关,面与抗性较高的乐果则无相关性。多功能氧化酶活性的高低与抗药性水平有关,乐果加PB(1:1)也有一定增效作用。GSH-S-转移酶活性与瓜-棉蚜抗性不相关。