海马乙酰胆碱酯酶活性与氯胺酮对幼龄大鼠空间学习记忆功能影响的关系

目的:探讨海马乙酰胆碱酯酶(AchE)活性与氯胺酮对幼龄大鼠学习记忆功能的影响及其关系。方法:1月龄SD大鼠40只,随机分成2组:氯胺酮组(K组,n=20),对照组(C组,n=20)。K、C组又各分2个亚组,K1、K2组和C1、C2组(每组10只)。K组腹腔注射氯胺酮40mg/kg,随后每隔15min追加1/2首剂量,共追加3次。C组给予生理盐水5mL。K1、C1组于处理后第1周进行水迷宫测试,K2、C2组于处理后第3周进行水迷宫测试,连续7d。末次测试结束后断头处死取海马,行HE染色观察其形态学变化,比色法检测AchE活性。结果:K1组大鼠寻找平台的时间(潜伏期)明显大于C1组(P<0.05或P<0.01),K2组与C2组比较差异无统计学意义(P>0.05)。K1组对平台空间位置的记忆能力低于C1组(P<0.05),K2组与C2组结果相近(P>0.05)。K1组AchE活性明显低于C1组(P<0.01),K2组与C2组比较差异无统计学意义(P>0.05)。光镜下各组大鼠海马神经元结构未见明显异常。结论:腹腔注射氯胺酮可导致幼龄大鼠早期空间学习记忆的损害,但无长期影响,海马区AchE活性的下降可能与其早期影响有关。

分光光度法快速测定6种氨基甲酸酯类农药残留量

基于酶抑制法，提出了分光光度法测定6种氨基甲酸酯类农药残留量的方法。采用正交试验优化了获得乙酰胆碱酯酶最佳活性的条件：①酶与底物的浓度比为6比1；②显色剂用量为0．4mg；③缓冲溶液的pH为8．5；④反应温度为40℃。在优化的试验条件下，6种氨基甲酸酯类农药的质量浓度在一定的范围内与抑制率I呈线性关系。方法用于果蔬样品分析，并在此基础上进行加标回收试验，回收率在82．0％～109％之间，测定值的相对标准偏差（n=6）在2．4％～3．6％之间。

聪灵胶囊对血管性痴呆模型大鼠脑组织乙酰胆碱酯酶的影响

目的观察聪灵胶囊对血管性痴呆模型大鼠脑组织乙酰胆碱酯酶(AchE)的影响,分析聪灵胶囊改善血管性痴呆学习记忆能力的作用机制。方法采用永久性结扎双侧颈总动脉法复制大鼠血管性痴呆模型,聪灵胶囊大、中、小3个剂量组灌胃给药30d观察学习记忆能力后,测定脑组织AchE活性。结果聪灵胶囊大剂量组可改善AchE活性,与模型组比较显著性降低。结论聪灵胶囊可通过改善AchE活性,从而改善血管性痴呆学习记忆能力。

氯氰菊酯对雌性大鼠内分泌干扰和全血乙酰胆碱酯酶的影响

目的研究氯氰菊酯(CP)在低剂量染毒条件下对雌性大鼠内分泌干扰作用和全血乙酰胆碱酯酶(AChE)的影响。方法选体重90～110g刚断乳的健康SD雌性大鼠50只。按体重随机分为5组,每组10只,阴性对照组用花生油,低、中、高CP染毒组剂量分别为20、40、80mg/kg体重,阳性对照组用雌二醇(E2)100μg/kg体重。采用经济合作和发展组织(OECD)推荐的28d经口体内实验的标准方法进行。结果CP各剂量组染毒后大鼠的子宫重量及其脏器系数与阴性对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。CP各剂量组染毒后大鼠血清中E2含量与阴性对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。CP各剂量组染毒后大鼠全血AChE的水平与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);随染毒剂量的增加而降低,AChE活力与染毒剂量线性关系为y^=56.239-0.398x,rs=-0.682(P<0.05)。同时,经相关性分析发现,AChE水平与E2含量有明显的相关性,r=-0.866(P<0.05),线性关系为y^=70.612-0.010x。结论CP对雌性大鼠内分泌干扰作用具有一定的影响,全血AChE是CP的暴露标志物。

葡萄内酯对快速老化小鼠SAMP8学习记忆的影响及其机制研究

目的探讨葡萄内酯对快速老化小鼠学习记忆能力的影响及其机制。方法以SAMP8小鼠为研究对象,给予葡萄内酯,连续灌胃45 d。采用Morris水迷宫方法测定小鼠学习记忆能力,用比色法测定脑组织超氧化物歧化酶(SOD)和乙酰胆碱酯酶(AChE)活力、丙二醛(MDA)和谷氨酸(Glu)含量。结果葡萄内酯中、高剂量组到达平台的时间明显缩短,与模型对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);葡萄内酯剂量组AChE活性、MDA和Glu含量明显降低,与模型对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论葡萄内酯可以明显改善SAMP8小鼠学习记忆能力,其作用机制可能与抑制脑组织AChE活性有关。

10种南药植物提取物乙酰胆碱酯酶抑制活性的筛选模型研究

采用筛选模型对10种南药样品乙酸乙酯提取物的乙酰胆碱酯酶抑制活性进行了评价。结果表明:10种南药(益智、鸡血藤、决明子、巴戟天、溪黄草、金樱子、化橘红、佛手、绞股蓝、五指毛桃)均具有不同程度的乙酰胆碱酯酶抑制活性。当提取物浓度为1.0 mg/mL时,溪黄草、益智、化橘红、绞股蓝、五指毛桃表现出较强的抑制活性,平均抑制率大于50%,分别为89.59%,77.10%,67.54%,52.62%,52.29%,其他5种南药的平均抑制率在20.81%~49.81%之间;提取物浓度为0.1 mg/mL时,溪黄草、益智、佛手仍表现出相对较强的抑制活性,平均抑制率大于25%,其他7种南药的平均抑制率在6.07%~24.78%之间。应该深入研究复方中药治疗老年痴呆的药效物质基础,加大对南药资源的开发利用。

缺氧耐受形成中脑内乙酰胆碱含量和乙酰胆碱酯酶活性的变化

目的:从胆碱系统方面,探讨缺氧耐受形成过程中学习记忆改善的机制。方法:测定小鼠脑内乙酰胆碱和乙酰胆碱酯酶。结果:与1次缺氧组比,4次缺氧组小鼠脑内Ach含量明显降低,AchE活力明显升高(P<0.01)。结论:缺氧耐受中学习记忆的改善可能与脑内胆碱系统无关。

东莨菪内酯对家蚕乙酰胆碱酯酶活性的影响

用不同浓度天然产物东莨菪内酯处理桑叶饲喂家蚕(Bombyx mori)后,通过测定家蚕头部乙酰胆碱酯酶(AChE)活性,研究东莨菪内酯对家蚕的影响。结果表明,12 h时家蚕出现摆头、吐液等轻微中毒症状,24 h时中毒症状减轻,48 h时中毒症状消失,家蚕恢复正常;5龄第三天家蚕饲喂浸过不同浓度东莨菪内酯的桑叶后,头部AChE比活力变化趋势与对照变化趋势相反,且除了药后24 h时的比活力高于对照外,其余时间段比活力均显著低于对照,表现为抑制作用;在一定浓度范围内,东莨菪内酯对家蚕头部离体AChE活性的抑制作用呈剂量效应关系,且抑制率随东莨菪内酯浓度的升高而升高。5.0×10-2、2.5×10-2mol/L东莨菪内酯对家蚕头部离体AChE活性的抑制率分别达到99.4%、90.6%,当东莨菪内酯浓度小于5.0×10-4 mol/L时,其对家蚕头部离体AChE活性的抑制趋势逐渐变缓,抑制中浓度IC50为4.03×10-3mol/L。

丹皮酚对皮质下缺血性血管性痴呆小鼠认知功能的保护作用及机制

目的探讨丹皮酚对皮质下缺血性血管性痴呆(subcortical ischemic vascular dementia,SIVD)小鼠的认知功能的作用及机制。方法小鼠随机分为假手术组、模型组、丹皮酚低剂量与高剂量组,以永久性结扎小鼠单侧颈总动脉建立皮质下缺血性血管性痴呆模型,假手术组只分离右颈总动脉,不进行血管结扎。期间每天给予生理盐水或丹皮酚(20、40 mg/kg),以开放场实验、水迷宫等方法检测小鼠行为学变化,以分光光度计法检测海马组织匀浆胆碱乙酰转移酶(ChAT)、乙酰胆碱酯酶(AChE)活性。结果与假手术组比较,手术组小鼠的运动量没有改变(P>0.05)。与模型组比较,其中丹皮酚高剂量(40 mg/kg)能明显延长SIVD小鼠在中心区活动中的探索时间,并改善SIVD小鼠学习记忆能力下降,表现为丹皮酚(40 mg/kg)治疗后小鼠Morris水迷宫逃避潜伏期缩短,穿越原平台时间以及穿台次数均增多(P<0.05)。此外,与模型组比较,丹皮酚(40 mg/kg)治疗还能降低SIVD小鼠海马组织AChE活性,升高ChAT活性(P<0.05)。而与模型组比较,丹皮酚(20 mg/kg)治疗则各指标没有显著性差异(P>0.05)。结论丹皮酚对SIVD小鼠认知功能下降具有保护作用,其机制可能与增加胆碱递质合成,减少胆碱递质分解有关。

完全饥饿大鼠肠神经及肠道动力学改变研究

目的观察完全饥饿大鼠肠神经和肠传输功能改变,探讨饥饿对肠动力功能影响的肠神经机制。方法 50只雄性SD大鼠随机分为饥饿组(n=40)和对照组(n=10)。饥饿组按照饥饿时间(饥饿后3、57、、9d)分为4个亚组(n=10)。采用葡聚糖蓝染色法测定不同时相肠道色素的推进比率;采用免疫组织化学染色法测定各组相同部位回肠肌间神经丛内乙酰胆碱酯酶(AchE)、一氧化氮合酶(NOS)阳性神经元的分布密度。结果饥饿组各时间点肠道传输比率均明显低于对照组(P<0.01),且随饥饿时间延长呈进行性下降,于9d达最低点。饥饿组各时间点AchE阳性神经元分布密度明显低于对照组(P<0.01),并随时间延长进行性下降,于9d达最低点。饥饿组各时间点NOS阳性神经元分布密度与对照组相比明显升高(P<0.01),并随时间延长进行性升高,于9d达高峰。结论完全饥饿状态下,大鼠肠肌间神经丛胆碱能神经元及氮能神经元受损,肠道动力功能障碍,且与肠神经损伤变化基本一致。

乙酰胆碱酯酶与新型香豆素类二聚体抑制剂的作用研究

本文通过分子对接的方法研究了香豆素类二聚体作为AChE抑制剂在正常活性位点(Ser203、Glu334和His447)和外周阴离子活性位点(His287、Tyr72、Tyr441和Glu292)的作用情况.研究结果表明,此类抑制剂有两个负电性中心:抑制剂母体的内酯区和6位或7位的苄基区.由于这两部分负电作用比较强极易与周围蛋白质发生静电作用,从而导致氢键的形成.研究发现香豆素二聚体类抑制剂更容易结合在AChE的外周阴离子活性区域.这类抑制剂在外周阴离子活性位点有相同的作用模式.这使得香豆素类二聚体有可能成为一种有更好应用前景的乙酰胆碱酯酶抑制剂.

蚊虫乙酰胆碱酯酶的真核表达、纯化及活性测定

利用Trizol法从尖音库蚊中提取总RNA,构建cDNA文库,并克隆出乙酰胆碱酯酶外显子序列;利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统对蚊虫乙酰胆碱酯酶进行真核表达,并利用Ni-琼脂糖对酶进行纯化。采用SDS-PAGE对纯化产物进行检测,结果表明得到了纯度较高的乙酰胆碱酯酶。参照Ellman法对酶的活性进行测定,结果显示纯酶的活力为2.219×10-4 mol/(min.g)。

不同抗性培育下家蝇乙酰胆碱酯酶活性变化

目的探讨不同种类杀虫剂在不同施药方式下对家蝇的作用机制。方法分别在幼虫期和成虫期对家蝇施加杀虫剂,测量不同世代家蝇的半数致死量(LD50)并计算抗性指数,测量不同抗性水平下家蝇乙酰胆碱酯酶的活性。结果施加敌敌畏的2个品系家蝇乙酰胆碱酯酶(AChE)活性升高明显,施加高效氯氰菊酯的2个品系乙酰胆碱酯酶活性先升高后下降;幼虫期施加杀虫剂的品系抗性水平升高较快。结论乙酰胆碱酯酶是敌敌畏作用于家蝇的靶标;幼虫期施加杀虫剂抗性增加较快,因此,在家蝇的防治过程中应尽量避免在幼虫期施加杀虫剂。

海尔福对铝致老年痴呆症小鼠治疗效果的实验研究

目的探讨海尔福口服液对铝致老年痴呆症(AD)小鼠的治疗效果。方法建立铝致AD小鼠动物模型,将48只小鼠分为正常组、模型组、治疗1组(大剂量组)和治疗2组(小剂量组)。除正常组外,各组均进行铝染毒,用氯化铝水溶液拌饲料喂养和硝酸铝水溶液自由饮用,连续3个月。治疗1、2组在铝染毒2个月后同时给予海尔福口服液不同剂量灌胃,模型组和正常组用等量体积蒸馏水灌胃,直至实验结束。在实验前后分别测定血红蛋白(Hb)含量和进行水迷宫游水试验;实验后取血,测定血清中总钙、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、尿素的含量;处死小鼠取脑,称脑重量,取部分脑制成脑匀浆,离心取上清液,分别测定乙酰胆碱酯酶(AchE)、总巯基(-SH)、丙二醛(MDA)和超氧阴离子自由基(O2.-)清除率;另取部分脑用甲醛处理后作病理检查。结果 4个实验组的各种指标显示,AchE分别为(1.67±0.36)、(0.76±0.16)、(1.60±0.35)、(1.47±0.23)U/mg pro;-SH分别为(100.00±23.78)、(90.36±14.14)、(108.71±23.80)、(128.79±13.44)mmol/mg pro,与正常组比较,模型组偏低,差异有统计学意义(P<0.01);O2.-清除率分别为(17.63±3.05)%、(5.93±2.69)%、(16.20±2.36)%、(12.11±2.90)%,与正常组比较,模型组和治疗2组偏低,差异有统计学意义(P<0.01);大脑皮层病理检查显示,模型组有明显颗粒细胞数量减少,神经元萎缩、变性和凋亡现象。结论铝可致大脑神经元萎缩、变性和凋亡,导致AchE活力下降,抗氧化能力降低;中药海尔福通过排铝治疗对老年痴呆症有明显疗效。

红车轴草素对Aβ诱导大鼠认知障碍的保护作用

目的:探讨对β1-42淀粉样蛋白(Aβ1-42)诱导的大鼠认知障碍的保护作用及其机制。方法:10周龄Wistar大鼠随机分成假手术组、Aβ1-42模型组、阳性药(石杉碱甲0.05 mg/kg)对照组、红车轴草素10 mg/kg和20 mg/kg治疗组。采用侧脑室注射Aβ1-42建立大鼠认知障碍模型,治疗3周后,应用Morris水迷宫行为试验测试大鼠的学习记忆能力,利用Western blot法检测大鼠海马中Aβ1-42蛋白、突触可塑性相关蛋白(PSD-95、p-NMDAR1、p-Ca MKII、p-PKACβ、PKCγ、p-CREB)和BDNF蛋白的表达。Realtime PCR分析Aβ相关基因APP、BACE1、Cat B、NEP和IDE mRNA的表达。采用碱性羟胺比色法测定大鼠脑乙酰胆碱酯酶(ACh E)含量。结果:红车轴草素(10 mg/kg、20 mg/kg)可明显改善大鼠学习记忆能力,减轻海马神经元退化和凋亡,提示对Aβ1-42诱导的大鼠认知损伤有明显的改善作用。进一步的机制研究表明红车轴草素可增强PSD-95、p-NMDAR1、p-Ca MKII、p-PKACβ、PKCγ、pCREB和BDNF蛋白的表达;抑制APP、BACE1和Cat B mRNA的表达,但提高NEP和IDE mRNA的水平;降低β淀粉样多肽的含量和沉积;同时,能明显降低脑内胆碱酯酶的活性,增加乙酰胆碱的含量。结论:红车轴草素能改善Aβ1-42诱导的大鼠认知障碍,其作用机制可能与降低脑内Aβ蛋白、增强突触可塑性相关蛋白表达和降低胆碱酯酶的活性有关。

托吡酯对小鼠汗腺组织乙酰胆碱酯酶表达及其活性的影响

目的探讨托吡酯（TPM）对小鼠汗腺部位乙酰胆碱酯酶（AChE）的表达和活性的影响。方法2周龄的幼鼠每天经灌胃给予TPM（80mg／kg），连续给药1个月后，进行汗腺部位AChE免疫组织化学和蛋白免疫印迹检测，观察汗腺部位AChE活性的变化。结果经TPM处理后汗腺AChE免疫荧光表达的吸光度（4）值为I．094-0．03，与对照组（0．98±0．09）比较差异无统计学意义（t=0．572，P〉0．05）。蛋白免疫印迹表达结果亦差异无统计学意义（t=0．394，P〉0．05）；汗腺组织匀浆后2组的AChE活性值分别为（1．42±O．38）μmol／mg和（1．37±0．42）μmol／mg，2组比较差异无统计学意义（t=0．746，P〉0．05）。结论TPM处理对汗腺部位的AChE免疫组织化学和蛋白免疫印迹表达及汗腺局部组织AChE活性无明显影响。