Synthesis and Crystal Structure of a Novel Ethyl 5-(4-(2-Phenylacetamido)phenyl)-1H-pyrazole-3-carboxylate as an Acrosin Inhibitor

The title compound （ethyl5-（4-（2-phenylacetamido）phenyl）-lH-pyrazole-3-carboxylate, C20H19N3O3） was synthesized by the reaction of Claisen condensation, cyclization, reduction and acylation. The structure was characterized by X-ray diffraction, MS, NMR and IR. It belongs to the monoclinic system, space group C2/c with a = 22.723（9）, b = 9.324（4）, c = 18.890（8） A, β = 114.259（6）°, V = 3649（3） A^3, Dc = 1.272 Mg·m^3, Z = 8, Mr = 349.38, p = 0.087 mm^-1, F（000） = 1472, the final R = 0.0615 and wR = 0.1643. The biological test shows that the title compound has a moderate acrosin inhibition activity.

顶体蛋白酶抑制剂4-胍基苯甲酸盐对人精子功能的影响

目的 :研究顶体蛋白酶抑制剂 4-胍基苯甲酸盐 (KF- 95 0 )对人精子功能的影响。方法 :体外用不同浓度的 KF- 95 0作用于人精子 ,观察其活动率 ;用免疫组化 ABC法观察 KF- 95 0对精子顶体结构的影响。结果 :KF- 95 0对人精子的作用与其浓度和作用时间有关。经≥ 0 .2 mg/ ml KF- 95 0处理 ,随着时间的延长以精子活动率明显下降 ,精子膜功能有不同程度的损害 ,顶体脱落率以及已发生顶体反应的精子死亡率明显上升。 结论 :KF- 95

顶体酶抑制剂KF-950对兔的抗生育作用

本文观察ＫＦ－９５０对兔的抗生育作用。ＫＦ－９５０对家兔阴道给药５ｍｉｎ后人工授精，１０～１４ｄ后剖腹计数黄体数和宫内胚胎数。结果示 ＫＦ－９５０ ３ ｍｇ组家兔卵受精率１０％（溶剂对照组１００％，两组相差显著，Ｐ＜０．０５），避孕率７１．４３％（溶剂对照组避孕率为０，两组相差显著，Ｐ＜０．０１）。ＫＦ－９５０ ６ ｍｇ组避孕率１００％。研究认为 ＫＦ－９５０在体内有明确避孕效果。

顶体蛋白酶抑制剂KF-950对大鼠精子的影响

本文采用体外杀精实验检查ＫＦ－９５０对大鼠精子活力的影响和明胶底物膜法测定 ＫＦ－９５０对精子顶体蛋白酶活性的抑制作用。结果表明，ＫＦ－９５０与大鼠精液作用 ２０ ｓｅｅ 及 １２０ ｓｅｅ，最低杀精浓度分别为 １． ５６±０． １３ ｍｇ／ｍｌ和 ０． ７３±０． ０７ ｍｇ／ｍｌ，其杀精能力 明显低于壬苯醇醚（Ｐ＜０．０１）；当ＫＦ－９５０浓度为１× １０－１２ｍｇ／ｍｌ时，平均晕轮阳性率 （％）及平均晕轮直径（μｍ）分别为８３．００±７．１０及１８．２７±１．９４（与对照组比较Ｐ＜ ０．０１），完全抑制浓度为 １×１０－３ｍｇ／ｍｌ。抑制平均晕轮阳性率和平均晕轮直径的半数有效 浓度ＥＤ５０分别为４．１５×１０－７ｍｇ／ｍｌ和２．３４×１０-7 ｍｇ／ｍｌ。本实验证明ＫＦ－９５０对精子顶 体蛋白酶具有高效抑制作用，而杀精子作用较弱，是一种新型的顶体蛋白酶抑制剂。

南德士抑制人精子顶体酶活性的实验研究

目的:研究顶体酶抑制剂南德士对人精子顶体酶的抑制作用。方法:利用10例已生育的健康男性精子,分别与0.100、0.120、0.144、0.173、0.207、0.249、0.299、0.358、0.430mmol/L浓度的南德士在30℃条件下孵育5min,通过改良的Kennedy法检测其残余顶体酶活性。对照组使用经典的顶体酶抑制剂盐酸-N2-对甲苯磺酰-L-赖氨酸甲基甲酮(TLCK),其浓度分别是150.0、189.8、213.6、240.3、270.3、304.1、342.1mmol/L。结果:残余顶体酶活性与南德士的浓度呈负相关(r=-0.9881);南德士对顶体酶的抑制能力比TLCK高近800倍。结论:南德士能高效抑制人精子顶体酶活性。

对胍基苯甲酸盐酸盐的制备及衍生物卡莫他特甲磺酸盐的合成

以对氨基苯甲酸为起始原料,水浴加热至50℃,与单氰胺进行反应,然后加入w(HCl)=5%的水溶液使产品析出,一步合成对胍基苯甲酸盐酸盐(收率为76 4%);它与对羟基苯乙酸N,N 二甲基氨基甲酰甲酯在25℃、二环己基碳二亚胺(DCC)存在下酯化缩合,再转化成碳酸盐进行精制,所得产物和水形成的悬浮液用甲磺酸调pH=3,得到卡莫他特甲磺酸盐(总收率为64 4%)。操作简单,原料易得,条件温和,有工业化前景。

新型喹唑啉酮类先导物的设计、合成及抑制人顶体酶活性研究

目的基于人精子顶体酶活性位点的三维结构设计并合成新型3-取代喹唑啉酮类化合物。方法计算机模拟设计及化学合成。结果设计并合成了7个3-取代喹唑啉酮类先导物,进行了抑酶活性测试。结论所有合成的化合物具有较好的抑酶活性,其中化合物3 g是对照物Nα-对甲苯磺酰-L-赖氨酸氯甲基酮(TLCK)的229倍。

桃胶多糖降糖机制研究

目的:研究桃胶多糖降低糖尿病大鼠血糖的可能机制。方法:采用水提、梯度醇沉的方法提取3种桃胶多糖,小剂量四氧嘧啶+高糖饲料复制糖尿病模型,桃胶多糖按4 g(/kg.d)晚上灌胃,阿卡波糖作为对照2周后,测定空腹血糖、胰岛素(Ins)、C肽、餐后2 h血糖;分别予淀粉、蔗糖、麦芽糖混合桃胶多糖灌胃后测定0、10、30、60、90、120 min血糖水平。结果:桃胶多糖不能被消化酶分解;与模型组相比,3种桃胶多糖均能降低糖尿病大鼠空腹及餐后血糖水平(P<0.05),Ins及C肽差异无统计学意义(P>0.05);3种分子量桃胶多糖降糖效果差异无统计学意义(P>0.05);与对照组相比桃胶多糖能延缓餐后血糖升高水平。结论:桃胶多糖降糖机制可能与抑制消化酶活性,延缓葡萄糖吸收相关。

顶体蛋白酶抑制剂KF-950对人精子功能的影响

本文研究了顶体蛋白酶抑制剂KF-950对人精子功能的影响。结果表明:KF-950对人精子的作用与其浓度和作用时间有关。经≥0.21ml KF-950处理,随着时间的延长,精子活率和活力明显下降;精子膜功能有不同程度的损害,且对精子头部膜的损害较其对尾部膜的损害严重,顶体脱落率及已发生顶体反应的精子死亡率明显上升。KF-950可通过破坏精子膜而影响精子的功能。

对-羟基苯甲酸丁酯对人精子顶体蛋白酶的抑制作用及其对精子膜功能的影响

本文用明胶玻片法研究对-羟基苯甲酸丁酯对人类精子顶体蛋白酶水解活性的抑制作用,较典型的顶体蛋白酶抑制剂TLCK 的抑制活性强20倍。应用精子尾低渗膨胀实验方法和曙红染色方法,还证明了对-羟基苯甲酸丁酯对精子膜功能有破坏作用;用不同浓度的对-羟基苯甲酸丁酯处理精子1min 后,精子尾低渗膨胀百分率与存活精子百分率具有很好的正相关性(r=0.92)。这说明此化合物的杀精子作用可能是由于对精子膜功能的损伤所致。由于这种化合物能够强烈地抑制人类精子顶体蛋白酶的蛋白水解活性。并对精子膜功能产生不可逆转的损伤,所以很有希望开发成为新型的阴道避孕药。

顶体蛋白酶抑制剂KF950急性毒性和致突变作用

目的与方法 :本文研究顶体蛋白酶抑制剂KF - 950对小鼠的急性毒性作用 ,以及Ames试验观察其致突变作用。结果与结论 :结果表明 ,小鼠致死的LD50 >50 0 0mg/kg .bw ,远大于体内外抑制受精的药物量 ;无论在加与不加S9条件下 ,对TA97、TA98、TA1 0 0、TA1 0 2的致突变作用阴性。

赤小豆胰蛋白酶抑制剂对人体精子体外抑制作用及其作用机理的初步探讨

本文首次报道,用从中药赤小豆(Phaseolus calcaratus Roxb)中提纯的胰蛋白酶抑制剂,剂量在400μg/0.2ml以上,在体外能全部抑制人体精子。该抑制剂对人体精子顶体粒蛋白亦有较强的抑制作用,初步探讨了它对人体精子顶体粒蛋白的抑制作用机理。通过进一步研究,赤小豆抑制荆可望成为一种新型的避孕药。

蛋白酶抑制剂抑制哺乳类精子顶体蛋白酶活性

用酶的抑制剂使精子顶体蛋白酶失活,为目前避孕方法中的一种途径。本文报道用明胶薄层作为蛋白质底物进行酶活性测定的结果,表明慈菇蛋白酶抑制剂及天花粉蛋白酶抑制剂对人、免、大鼠、仓鼠及小鼠精子顶体蛋白酶有明显的抑制作用,并随着剂量增加抑制效应呈增强的趋势。用笨甲酰精氨酸乙酯(BAEE)作底物同样证明慈菇蛋白酶抑制剂对人精子顶体蛋白酶有强的抑制效应。

人顶体酶活性腔性质及与抑制剂的结合模式

顶体酶是目前抗生育药物的一个潜在靶点.在前期同源模建人顶体酶三维结构复合物的基础上,采用多重拷贝同时搜寻(MCSS)等方法对人顶体酶活性腔进行分析.结果显示,活性腔的P1,P2和G3个区域均具有较大极性,且P1对抑制剂结合尤为重要.另外,G和P1边缘及P2底部还具有一定疏水性,且其中的部分重要残基还能与配体形成氢键作用和静电作用.MCSS计算结果确定的关键配体结合位点与人顶体酶复合物结构和定点突变实验结果相吻合.在此基础上用分子对接方法将6个人顶体酶代表性抑制剂对接入活性腔,阐明其结合模式,确定与配体结合相关的关键残基.

避孕药精子顶体蛋白酶抑制剂阴道泡腾栓的研究

精子顶体酶是一种受精过程所必须的蛋白酶，４－胍基苯甲酸－４’－苯甲酸乙酯（ＥＧＢ）能够抑制该酶的活性，精子顶体酶抑制ＥＧＢ阴道栓极有可能发展成为一种非激素类外用避孕药。

9-取代-2-氨基-6-胍基嘌呤类精子顶体酶抑制剂的设计、合成及活性评价

顶体酶是存在于精子顶体内的一种胰蛋白酶样的丝氨酸水解酶,是目前男性抗生育药物设计的潜在靶点之一.在前期对精子顶体酶同源模建的基础上,根据活性腔结构和活性位点性质,以KF950为先导化合物,设计合成了一类胍基鸟嘌呤化合物,采用核磁共振氢谱、质谱、红外光谱和元素分析等手段对其结构进行了表征,其中中间体5m的结构经X射线单晶衍射分析确证.以N-甲苯磺酰-L-赖氨酸-氯甲基酮(TLCK)为阳性对照,分别测定了目标化合物对精子顶体酶的体外抑制活性.结果表明,化合物6a～6z的酶抑制活性均强于TLCK,其中化合物6z抑制活性与KF950相当.

KF-950对人精子顶体素活性及顶体的影响

目的 :研究顶体素抑制剂 4 胍基苯甲酸盐 (KF 95 0 )对人精子顶体素的抑制作用和对顶体的影响。 方法 :醋酸抽提并纯化人精子顶体素 ,BAEE/ADH法测定不同剂量KF 95 0作用后残余酶的活性。以生物素标记的豌豆凝集素为探针 ,采用ABC染色法观察KF 95 0对完整精子顶体的影响。 结果 :①正常人精子顶体素活性为(37.6 5± 4 .4 7)U/L(pH 8.5 ,2 5℃ ) ;②残余酶活性与KF 95 0剂量呈负相关 (r =- 0 .998) ,并呈量 效依赖关系 ,回归方程 :Y =7.5 7- 1.895X ;③随药物浓度的增加和作用时间的延长 ,顶体完整着色率均明显下降 (P <0 .0 1)。结论 :KF 95 0能直接抑制顶体素活性 ,推测对精子顶体也有明显的破坏作用 ,是一种新型、高效的精子顶体素抑制剂。

避孕药胍苯酸酯(EGB)精子顶体蛋白酶抑制剂的合成

本文报道了一种新型避孕药——精子顶体蛋白酶抑制剂4-胍基苯甲酸-(4′-苯甲酸苯乙酯(EGB)(4-Carboethoxyphenyl-4′-Guanidinobenzoate·HCl)的合成方法。

赤小豆胰蛋白酶抑制剂的分离纯化及其性质研究

用酸抽提、2.5％TCA热处理、硫酸铵盐析、凝胶层析和DEAE纤维素离子交换层析等方法,从中药赤小豆中分离得到一种胰蛋白酶抑制剂。聚丙烯酰胺凝胶电泳呈单一谱带。经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定,其分子量为7400。N-末端分析和氨基酸组成测定结果表明,赤小豆胰蛋白酶抑制剂不含半胱氨酸和胱氨酸,是以酪氨酸为N-末端,由54个氨基酸残基组成的单一多肽链。它仅对胰蛋白酶有较强的抑制作用,对胰凝乳蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶和木瓜蛋白酶均无明显的抑制活力,对热及酸碱亦较稳定。

抗血栓素Ⅲ抑制精子顶体素活性及其对小鼠体外受精能力的影响

通过免疫转移吸附试验，我们检出精浆内有抗血栓素Ⅲ抗原的存在，含量约为血浆的百分之一，分子量约５７ｋＤ。体外实验证明，纯抗血栓素Ⅲ能抑制人、猪和小鼠精子顶体素活性，其中抑制猪顶体素的二级速率常数为Ｍ－１ｓ－１，这种抑制反应是通过在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上形成稳定的复合物而起作用的。小鼠体外受精试验表明，在培养基中加入抗血栓素Ⅲ能抑制精－卵结合和受精率。本研究提示，抗血栓素Ⅲ不仅存在于血凝过程中，而且还可能是生殖过程的调节因子。