活化Jurkat细胞cDNA文库的构建及其初步筛选

本文报道以ＴＰＡ活化Ｊｕｒｋａｔ细胞ｍＲＮＡ为模板，逆转录合成ｃＤＮＡ第１链，在ＤＮＡ聚合酶Ⅰ作用下合成第２链，加上ＥｃｏＲＩ磷酸化接头，用离心式柱层析去除小于５００ｂｐ的ｃＤＮＡ片段和多余接头，再与去磷酸化λｇｔ（１１）ＤＮＡ连接，体外包装后感染大肠杆菌Ｙ１０９０。该文库效价５×１０５，重组率＞９０％。ＰＣＲ法鉴定阳性重组子均可见插入片段。用ＰＴＡ１ＭｃＡｂ为探针，对文库进行了免疫学筛选，初步获得４个阳性克隆。该文库的构建为ＰＴＡ１基因克隆奠定了基础。