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急性单核细胞白血病新抗原基因MLAA-34启动子的克隆及其核心区鉴定 被引量:2
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作者 雷博 张王刚 +8 位作者 何爱丽 陈银霞 曹星梅 赵万红 王剑利 刘捷 马肖容 张鹏宇 白菊 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期641-645,共5页
目的:克隆急性单核细胞白血病新抗原基因MLAA-34上游启动子序列并检测其活性、鉴定核心区域。方法:PCR扩增MLAA-34基因启动子区全长片段,将其连接至p GL3-Basic载体,克隆重组质粒;构建一系列MLAA-34基因启动子5’侧翼区截短质粒;将含MLA... 目的:克隆急性单核细胞白血病新抗原基因MLAA-34上游启动子序列并检测其活性、鉴定核心区域。方法:PCR扩增MLAA-34基因启动子区全长片段,将其连接至p GL3-Basic载体,克隆重组质粒;构建一系列MLAA-34基因启动子5’侧翼区截短质粒;将含MLAA-34启动子序列的重组质粒及其截短型质粒转染至U937、HEK293细胞,应用双荧光素酶报告基因检测各片段的启动子活性,确定启动子最小活性区域,并通过生物信息学方法分析转录因子结合位点。结果:构建了含有MLAA-34启动子序列的重组质粒及其截短型质粒;与空载体相比,其启动子活性明显增加(P <0. 001)。MLAA-34最小活性区域位于转录起始位点-402 bp至-200 bp之间,其中包含E2F1,MZF-1,SP1,USF2和STAT3等多个转录因子结合位点。结论:成功构建急性单核细胞白血病新抗原基因MLAA-34不同缺失片段的启动子荧光素酶报告基因重组质粒,鉴定出核心启动子区,其中含有多个潜在的转录因子结合序列。 展开更多
关键词 急性单核细胞白血病 MLAA-34启动子 转录调控
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急性单核细胞白血病新抗原MLAA-34基因突变的检测及其与疗效相关性的研究 被引量:1
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作者 雷博 张王刚 +10 位作者 陈银霞 何爱丽 曹星梅 赵万红 王剑利 刘捷 马肖容 杨云 张鹏宇 罗静 蒙昕 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期97-104,共8页
目的:研究MLAA-34全外显子突变与白血病疗效的相关性。方法:对AML-M5组(40例)及健康对照组(5例),应用RT-PCR方法检测MLAA-34基因的表达水平,研究其对化疗疗效的影响。对该基因全部12个外显子进行测序,研究MLAA-34突变对M5患者OS和PFS的... 目的:研究MLAA-34全外显子突变与白血病疗效的相关性。方法:对AML-M5组(40例)及健康对照组(5例),应用RT-PCR方法检测MLAA-34基因的表达水平,研究其对化疗疗效的影响。对该基因全部12个外显子进行测序,研究MLAA-34突变对M5患者OS和PFS的影响;分析白血病重要的5个预后基因突变与MLAA-34基因突变的相关性。结果:M5组MLAA-34基因表达显著高于正常对照组,高表达的患者化疗疗效差。E2外显子第59号碱基存在多态性,C59T位点突变的患者具有更高的MLAA-34基因表达。MLAA-34基因C59T位点突变与重要的分子标志基因FLT-3和DNMT3A的突变显著相关。结论:MLAA-34基因C59T位点突变为白血病复发的高危因素,并可成为一个白血病治疗的候选靶点。 展开更多
关键词 急性单核细胞白血病 MLAA-34基因 基因突变 白血病复发
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新抗原基因MLAA-34在急性单核细胞白血病患者的表达及意义 被引量:2
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作者 赵建强 张王刚 +2 位作者 何爱丽 张文娟 古流芳 《山西医科大学学报》 CAS 2011年第2期152-156,共5页
目的探讨白血病新肿瘤抗原基因MLAA-34在急性单核细胞白血病(AML-M5)初诊患者中的表达水平,分析其与临床特征及预后的关系。方法采用基于TaqMan探针的实时荧光定量RT-PCR方法检测MLAA-34在35例AML-M5患者、40例非AML-M5急性髓细胞白血... 目的探讨白血病新肿瘤抗原基因MLAA-34在急性单核细胞白血病(AML-M5)初诊患者中的表达水平,分析其与临床特征及预后的关系。方法采用基于TaqMan探针的实时荧光定量RT-PCR方法检测MLAA-34在35例AML-M5患者、40例非AML-M5急性髓细胞白血病患者、12例非白血病的血液疾病患者骨髓标本以及10例健康志愿者(正常对照)外周血单个核细胞中的表达水平并进行比较。结果初治AML-M5患者MLAA-34 mRNA表达水平较正常对照、非AML-M5白血病及非白血病疾病患者明显增高(P<0.05);完全缓解的M5患者MLAA-34 mRNA表达水平较治疗前明显下降(P<0.05),复发的M5患者MLAA-34 mRNA表达水平再次增高;对8例复发的AML-M5患者进行MLAA-34基因表达水平动态监测,发现复发前MLAA-34基因表达水平有上升趋势。结论 MLAA-34基因的过表达参与了急性单核细胞白血病的发病,在AML-M5中的表达具有较高的特异性,动态监测其表达水平在AML-M5的疗效评估、预后判断及复发预测方面具有一定的临床意义。 展开更多
关键词 MLAA-34 急性单核细胞白血病 RT-PCR 预后
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转录因子MZF-1对急性单核细胞白血病新抗原基因MLAA-34的转录调控研究
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作者 雷博 张王刚 +9 位作者 何爱丽 陈银霞 曹星梅 张鹏宇 赵万红 王剑利 刘捷 马肖容 张彦平 张卉 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期1463-1468,共6页
目的:探讨转录因子MZF-1对急性单核细胞白血病新抗原基因MLAA-34的转录调控作用。方法:利用双萤光素酶报告基因检测系统及定点突变技术分析MZF-1对MLAA-34基因启动子转录活性的影响。通过凝胶电泳迁移率变动检测(electrophoretic mobili... 目的:探讨转录因子MZF-1对急性单核细胞白血病新抗原基因MLAA-34的转录调控作用。方法:利用双萤光素酶报告基因检测系统及定点突变技术分析MZF-1对MLAA-34基因启动子转录活性的影响。通过凝胶电泳迁移率变动检测(electrophoretic mobility slift assay,EMSA)和染色质免疫沉淀检测(chromatin immunoprecipitation,Ch IP)实验,验证MZF-1是否与MLAA-34启动子核心区直接特异性结合。构建MZF-1真核表达载体和干涉载体,转染U937细胞,应用RT-PCR和Western blot法检测MLAA-34基因的转录和表达变化。结果:转录因子MZF-1对MLAA-34基因表达具有调控作用,MZF-1结合序列点突变后,相对荧光素酶活性降低(P<0.01)。EMSA和Ch IP实验从细胞内、外水平分别证明MZF-1可与MLAA-34启动子直接结合而发挥调控作用。在过表达试验中,MZF-1的增加可上调MLAA-34的表达(P<0.05);在干涉试验中,MZF-1的降低可下调MLAA-34的表达(P<0.05)。结论:转录因子MZF-1可与MLAA-34基因启动子上的转录调控区结合,并促进急性单核细胞白血病细胞中MLAA-34基因的转录。 展开更多
关键词 急性单核细胞白血病 MLAA-34 MZF-1 转录调控
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转录因子E2F1对急性单核细胞白血病新抗原基因MLAA-34的转录调控作用
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作者 雷博 张王刚 +9 位作者 何爱丽 陈银霞 曹星梅 张鹏宇 赵万红 王剑利 刘捷 马肖容 张彦平 刘海玲 《现代肿瘤医学》 CAS 2019年第20期3560-3565,共6页
目的:探讨转录因子E2F1对急性单核细胞白血病新抗原基因MLAA-34的转录调控作用。方法:利用双荧光素酶报告基因检测系统及定点突变技术分析E2F1对MLAA-34基因启动子转录活性的影响。通过凝胶迁移实验(EMSA)和染色质免疫共沉淀(ChIP)实验... 目的:探讨转录因子E2F1对急性单核细胞白血病新抗原基因MLAA-34的转录调控作用。方法:利用双荧光素酶报告基因检测系统及定点突变技术分析E2F1对MLAA-34基因启动子转录活性的影响。通过凝胶迁移实验(EMSA)和染色质免疫共沉淀(ChIP)实验,验证E2F1是否与MLAA-34启动子核心区直接特异性结合。构建E2F1真核表达载体和干涉载体,转染U937细胞,RT-PCR和Western Blot检测MLAA-34基因的转录和表达变化。结果:转录因子E2F1对MLAA-34基因表达具有调控作用,E2F1结合序列点突变后,相对荧光素酶活性升高(P<0.01),绿色荧光蛋白的表达增高。EMSA和ChIP实验,从细胞内、外水平分别证明E2F1可与MLAA-34启动子直接结合而发挥调控作用。在过表达试验中,E2F1的增加可下调MLAA-34的表达(P<0.05);在干涉试验中,E2F1的降低可上调MLAA-34的表达(P<0.05)。结论:转录因子E2F1可与MLAA-34基因启动子上的转录调控区结合,并抑制急性单核细胞白血病细胞中MLAA-34基因的转录。 展开更多
关键词 急性单核细胞白血病 MLAA-34 E2F1 转录调控
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IL-34对人急性单核细胞白血病细胞恶性生物学行为的影响 被引量:3
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作者 胡雨婷 王丽娜 +5 位作者 王荣 杨斐斐 王昊 刘晓礼 任倩 郑国光 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期447-454,共8页
目的:探讨过表达IL-34对急性单核细胞白血病(acute monocytic leukemia,AMo L)细胞恶性生物学行为的影响。方法:构建IL-34过表达载体,制备慢病毒载体p CDH-GFP,感染AMo L细胞系THP1和MOLM-13,通过细胞增殖实验、集落形成实验、PI染色检... 目的:探讨过表达IL-34对急性单核细胞白血病(acute monocytic leukemia,AMo L)细胞恶性生物学行为的影响。方法:构建IL-34过表达载体,制备慢病毒载体p CDH-GFP,感染AMo L细胞系THP1和MOLM-13,通过细胞增殖实验、集落形成实验、PI染色检测细胞周期法和Annexin-V/PI法检测IL-34对AMo L细胞的增殖、集落形成、细胞周期和凋亡的影响,通过流式细胞术分析过表达IL-34对细胞分化表型的影响,通过裸鼠皮下成瘤模型观察肿瘤大小、质量差异和巨噬细胞募集情况。结果:实验组THP1和MOLM-13细胞IL-34 m RNA表达水平分别比对照组提高近4 000倍和近3 000倍(均P<0.01),表明已成功构建稳定过表达IL-34的AMo L细胞系。体外细胞实验结果显示,过表达IL-34提高THP1和MOLM-13细胞的增殖[72 h:(0.738±0.003)vs(0.646±0.008),(0.290±0.004)vs(0.247±0.004);均P<0.01]和集落形成能力[(127.00±3.37)vs(86.00±4.08)个,(160.70±4.70)vs(116.70±3.93)个;均P<0.01],对细胞的凋亡没有显著影响(均P>0.05);单核-巨噬细胞分化标志物CD11b和CD14表达水平升高,未成熟细胞标志物CD71表达水平减低,表明IL-34促进了AMo L细胞向单核-巨噬细胞方向分化(均P<0.05)。裸鼠体内荷瘤实验可见,过表达IL-34促进瘤组织内巨噬细胞募集(P<0.01)。结论:过表达IL-34提高AMo L细胞的增殖和集落形成能力,促进细胞向单核-巨噬细胞分化,并促进肿瘤内巨噬细胞的募集。 展开更多
关键词 白介素-34基因 急性单核细胞白血病 细胞增殖 细胞分化 巨噬细胞
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核酸疫苗p EGFPN1-MLAA34-B7H4IgV的构建及其免疫活性观察
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作者 赵臣 王婉莹 +3 位作者 赵佳琪 刘爽 王丽 张梦凡 《山东医药》 CAS 2018年第42期28-31,共4页
目的构建p EGFPN1-MLAA34-B7H4IgV核酸疫苗,并检测其免疫活性,探讨核酸疫苗抗白血病效应。方法采用重叠延伸PCR技术扩增急性白血病相关抗原基因MLAA34和负性共刺激分子B7H4的融合基因(MLAA34-B7H4IgV),并构建核酸疫苗p EGFPN1-MLAA34-B7... 目的构建p EGFPN1-MLAA34-B7H4IgV核酸疫苗,并检测其免疫活性,探讨核酸疫苗抗白血病效应。方法采用重叠延伸PCR技术扩增急性白血病相关抗原基因MLAA34和负性共刺激分子B7H4的融合基因(MLAA34-B7H4IgV),并构建核酸疫苗p EGFPN1-MLAA34-B7H4IgV。将28只BALB/c小鼠随机分为P、M、B、MB组各7只,分别在小鼠两侧股四头肌内侧肌内注射磷酸盐缓冲液p EGFPN1、p EGFPN1-MLAA34、p EGFPN1-B7H4IgV、p EGFPN1-MLAA34-B7H4IgV质粒100μg,在0、2、4周各行1次同剂量加强免疫;分别于0、4、8周眼球取血,8周取血后处死小鼠并摘取脾脏。ELISA法检测免疫8周血清中抗体Ig G1、Ig G2a以及免疫0、4、8周血清细胞因子IL-2、IL-4、IFN-γ,MMT法检测小鼠脾淋巴细胞对单核巨噬细胞THP-1的增殖抑制作用。结果 MLAA34-B7H4IgV融合基因PCR产物电泳检测约为2 000 bp,与理论值(1 922 bp)相符; p EGFPN1-MLAA34-B7H4IgV酶切后电泳检测为5 000~7 500 bp,与理论值(6 655 bp)相符。与同组免疫0周时、同时点P组比较,免疫4、8周时M、B、MB组血清细胞因子IL-2、IL-4水平升高而IFN-γ水平降低(P均<0. 05或<0. 01)。与同时点M、B组比较,MB组血清细胞因子IL-2、IL-4水平升高而IFN-γ水平降低(P均<0. 05); M、B组同时点比较,差异无统计学意义。免疫8周,MB组血清Ig G1水平高于其他各组(P均<0. 05),其他各组间差异均无统计学意义(P均> 0. 05);各组血清Ig G2a水平差异均无统计学意义(P均> 0. 05)。MB组THP-1细胞增殖抑制率高于同效靶比其他各组(P均<0. 05或<0. 01);效靶比为50∶1和25∶1时,M组和B组THP-1细胞增殖抑制率高于高于P组(P均<0. 05),两组之间无差异;效靶比为12. 5∶1时,B组THP-1细胞增殖抑制率高于M组、P组(P均<0. 05)。结论成功构建了核酸疫苗p EGFPN1-MLAA34-B7H4IgV,该疫苗激活了小鼠体内的细胞免疫和体液免疫,具有明显的抗白血病效应。 展开更多
关键词 急性白血病 核酸疫苗 急性白血病相关抗原 MLAA34基因 负性共刺激分子 B7H4基因 免疫活性
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急性髓系白血病免疫治疗的研究进展与展望 被引量:8
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作者 张王刚 白菊 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期573-579,共7页
大多数急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者化疗诱导缓解后不可避免地面临复发。异基因造血干细胞移植作为AML最有效的治疗,通过免疫介导的移植物抗白血病效应根除白血病细胞,能有效预防AML复发。移植技术和单倍体移植模式... 大多数急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者化疗诱导缓解后不可避免地面临复发。异基因造血干细胞移植作为AML最有效的治疗,通过免疫介导的移植物抗白血病效应根除白血病细胞,能有效预防AML复发。移植技术和单倍体移植模式进展使得"人人都能进行造血干细胞移植"。靶向治疗,如基因工程T细胞(嵌合抗原受体T细胞)、单克隆抗体、新型双特异性单抗,能特异性杀伤表达特殊抗原的白血病细胞,而不伤害正常细胞,将成为AML免疫治疗的新策略。研究发现高表达于急性单核细胞白血病细胞的新抗原急性单核细胞白血病相关抗原-34(monocytic leukemia associated antigen-34,MLAA-34)具有抗白血病细胞凋亡作用,且MLAA-34多肽可诱导特异性CTL杀伤活性,具有较强的免疫原性,MLAA-34可作为急性单核细胞白血病免疫治疗新的理想靶抗原。总之,新近进展有价值的免疫治疗白血病相关抗原的鉴定有可能根除化疗后白血病微小残留病变,有望降低AML复发,延长AML患者生存。 展开更多
关键词 急性髓系白血病 造血干细胞移植 嵌合抗原受体T细胞 单克隆抗体 新型双特异性单抗 急性单核细胞白血病相关抗原-34
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mda7-/IL2-4和IL2-4delE5诱导急性髓系白血病细胞向单核细胞分化 被引量:3
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作者 姚兴荣 马小彤 +2 位作者 杨宾霞 段永娟 林永敏 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期244-250,共7页
目的:研究人黑素瘤分化相关基因-7(melanoma differentiation associated gene-7,mda-7;又称IL-24)及其剪接体IL-24 delE5与急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)细胞分化的关系。方法:十四烷酰佛波醇-乙酯(12-O-tetrade-canoylp... 目的:研究人黑素瘤分化相关基因-7(melanoma differentiation associated gene-7,mda-7;又称IL-24)及其剪接体IL-24 delE5与急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)细胞分化的关系。方法:十四烷酰佛波醇-乙酯(12-O-tetrade-canoylphorbol-13-acetate,TPA)处理人急性髓系白血病细胞系U937、HL-60,real-time PCR及Western blotting检测细胞中mda-7/IL-24和IL-24 delE5的表达,FACS检测细胞表面CD11b、CD14和CD115的表达。siRNA干扰U937、HL-60细胞中mda-7/IL-24和IL-24 delE5的表达后,再以TPA诱导细胞分化,FACS检测CD11b、CD14和CD115的表达。用前期构建的mda-7/IL-24和IL-24 delE5载体转染U937、HL-60及AML-M5患者的原代白血病细胞,观察异位过表达mda-7/IL-24和IL-24 delE5能否诱导白血病细胞向单核细胞分化。结果:TPA在诱导U937、HL-60细胞向单核细胞分化过程中显著促进mda-7/IL-24及其剪接体IL-24 delE5的表达,用siRNA干扰mda-7/IL-24及IL-24 delE5的表达后,TPA诱导U937、HL-60细胞向单核细胞分化的作用也被阻断。异位过表达mda-7/IL-24和IL-24 delE5可诱导U937、HL-60以及原代AML细胞向单核细胞分化:U937、HL-60细胞表面CD11b和CD14表达均显著升高,CD115表达仅在U937细胞有显著升高;3例AML-M5患者的原代AML细胞中CD11b、CD14及CD115表达均有不同程度升高,细胞呈现单核细胞的形态特征。结论:TPA可通过上调mda-7/IL-24及其剪接体IL-24 delE5的表达诱导白血病细胞向单核细胞分化。 展开更多
关键词 黑素瘤分化相关基因-7(mda-7/IL-24) IL-24delE5 十四烷酰佛波醇-乙酯 急性髓系白血病 单核细胞 分化
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Bioinformatic prediction and functional characterization of human KIAA0100 gene 被引量:1
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作者 He Cui Xi Lan +2 位作者 Shemin Lu Fujun Zhang Wanggang Zhang 《Journal of Pharmaceutical Analysis》 SCIE CAS CSCD 2017年第1期10-18,共9页
Our previous study demonstrated that human KIAA0100 gene is a novel acute monocytic leukemia-associated antigen(MLAA) gene. But the functional characterization of human KIAA0100 gene has remained unknown to date. Here... Our previous study demonstrated that human KIAA0100 gene is a novel acute monocytic leukemia-associated antigen(MLAA) gene. But the functional characterization of human KIAA0100 gene has remained unknown to date. Here, firstly, bioinformatic prediction of human KIAA0100 gene was carried out using online software;Secondly, human KIAA0100 gene expression was downregulated by the clustered regularly interspaced short palindromic repeats(CRISPR)/CRISPR-associated(Cas) 9 system in U937 cells. Cell proliferation and apoptosis were next evaluated in KIAA0100-knockdown U937 cells. The bioinformatic prediction showed that human KIAA0100 gene was located on 17q11.2, and human KIAA0100 protein was located in the secretory pathway. Besides, human KIAA0100 protein contained a signal peptide, a transmembrane region, three types of secondary structures(alpha helix, extended strand, and random coil), and four domains from mitochondrial protein 27(FMP27). The observation on functional characterization of human KIAA0100 gene revealed that its downregulation inhibited cell proliferation, and promoted cell apoptosis in U937 cells. To summarize, these results suggest human KIAA0100 gene possibly comes within mitochondrial genome; moreover, it is a novel anti-apoptotic factor related to carcinogenesis or progression in acute monocytic leukemia, and may be a potential target for immunotherapy against acute monocytic leukemia. 展开更多
关键词 HUMAN KIAA0100 GENE BIOINFORMATIC PREDICTION acute monocytic leukemia associated antigen CRISPR/Cas9 system CELL proliferation CELL apoptosis
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基于SOE-PCR的核酸疫苗pIRES2-MLAA34-HSP70的构建及免疫效果研究 被引量:2
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作者 赵佳琪 王婉莹 +4 位作者 范业宁 马春平 张东红 吕扬 赵臣 《重庆医学》 CAS 北大核心 2017年第19期2612-2614,共3页
目的构建pIRES2-MLAA34-HSP70重组质粒,并检测其免疫效果。方法采用逆转录PCR(RT-PCR)的方法提取急性单核细胞白血病相关抗原基因MLAA-34和热休克蛋白(HSP)70基因,设计特异性重叠引物,以重叠延伸PCR(SOEPCR)技术扩增MLAA34-HSP70融合基... 目的构建pIRES2-MLAA34-HSP70重组质粒,并检测其免疫效果。方法采用逆转录PCR(RT-PCR)的方法提取急性单核细胞白血病相关抗原基因MLAA-34和热休克蛋白(HSP)70基因,设计特异性重叠引物,以重叠延伸PCR(SOEPCR)技术扩增MLAA34-HSP70融合基因,构建核酸疫苗pIRES2-MLAA34-HSP70。将核酸疫苗免疫BALB/c小鼠,检测小鼠脾淋巴细胞对U937细胞的杀伤作用及小鼠脾细胞悬液中白细胞介素(IL)-2、IL-4和γ干扰素(IFN-γ)水平。结果扩增出MLAA34-HSP70融合基因2 956bp,成功构建了核酸疫苗pIRES2-MLAA34-HSP70,经鉴定与预期结果一致;脾淋巴细胞杀伤活性结果显示,核酸疫苗pIRES2-MLAA34-HSP70对U937细胞的杀伤效率明显高于其他实验组及对照组(P<0.01);核酸疫苗pIRES2-MLAA34-HSP70组细胞因子IL-2、IL-4和IFN-γ水平亦明显高于其他实验组及对照组(P<0.01)。结论成功构建了pIRES2-MLAA34-HSP70核酸疫苗,该核酸疫苗能诱发强烈的体液免疫,增强机体对肿瘤细胞的免疫应答,对MLAA34阳性细胞具有特异性杀伤作用。 展开更多
关键词 疫苗 DNA 重叠延伸PCR 白血病 单核细胞 急性 MLAA-34 热休克蛋白质类70
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肿瘤相关成纤维细胞可介导急性髓系白血病细胞抵抗化疗 被引量:2
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作者 尹春荣 翁巍 +1 位作者 何高芬 侯海珠 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期758-764,834,共8页
目的 :研究骨髓中肿瘤相关成纤维细胞(carcinoma-associated fi broblast,CAF)在急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)化疗抵抗中的作用,并初步探讨其作用机制。方法 :首先用重组人转化生长因子β1(recombinant human transformi... 目的 :研究骨髓中肿瘤相关成纤维细胞(carcinoma-associated fi broblast,CAF)在急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)化疗抵抗中的作用,并初步探讨其作用机制。方法 :首先用重组人转化生长因子β1(recombinant human transforming growth factorβ1,rh TGFβ1)体外诱导AML患者的骨髓间充质干细胞(bone marrow-mesenchymal stem cells,BM-MSCs)形成CAF,蛋白质印迹法检测CAF中α-平滑肌肌动蛋白(alpha-smooth muscle actin,α-SMA)、成纤维细胞激活蛋白(f ibroblast activation protein,FAP)、Ⅰ型胶原蛋白(collagenⅠ)及Ⅲ型胶原蛋白(collagenⅢ)的分泌水平。然后构建CAF与AML细胞系THP-1或K562的共培养模型,锥虫蓝染色法检测经阿糖胞苷(cytosine arabinoside,Ara-C)化疗后白血病细胞的活性变化,FCM法分析白血病细胞的凋亡率和细胞周期分布情况。进一步应用TGFβ受体拮抗剂SB431542处理人白血病细胞系THP-1或K562,然后再与CAF共培养,采用锥虫蓝染色法检测CAF对白血病细胞抵抗Ara-C化疗的保护作用。结果 :TGFβ1可在体外诱导BM-MSCs分化形成CAF;与BM-MSCs相比,CAF高分泌α-SMA、FAP、collagenⅠ和collagenⅢ蛋白(P值均<0.01)。共培养实验结果表明,CAF细胞可明显减弱白血病THP-1和K562细胞对Ara-C的敏感性(P值均<0.01);此外,经Ara-C作用48 h后,CAF共培养组THP-1细胞的G0/G1期所占比例为(60.94±3.67)%,相比THP-1单独培养组的(37.20±3.91)%明显升高(P<0.05)。受体拮抗实验表明,SB431542处理能够显著减弱CAF对白血病细胞抵抗化疗的保护作用(P<0.001)。结论 :CAF可保护白血病细胞抵抗化疗,其机制可能与TGFβ通路密切相关,并通过维持白血病细胞处于静止状态而逃避化疗药物的杀伤作用。 展开更多
关键词 白血病 单核细胞 急性 成纤维细胞 肿瘤相关 化学疗法 阿糖胞苷
原文传递
人急性单核细胞白血病相关抗原22RNA干扰序列的筛选及鉴定
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作者 古流芳 张鹏宇 +1 位作者 曹星梅 张王刚 《白血病.淋巴瘤》 CAS 2018年第3期149-153,共5页
目的筛选获得急性单核细胞白血病相关抗原22(MLAA-22)最佳RNA干扰序列,为后期MLAA-22功能研究奠定基础。方法采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)克隆MLAA-22蛋白质编码区序列(CDS),将测序正确的MLAA-22CDS插入pEGFP-N1-3FLAG载体... 目的筛选获得急性单核细胞白血病相关抗原22(MLAA-22)最佳RNA干扰序列,为后期MLAA-22功能研究奠定基础。方法采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)克隆MLAA-22蛋白质编码区序列(CDS),将测序正确的MLAA-22CDS插入pEGFP-N1-3FLAG载体,构建真核pEGFP-N1-3FLAG表达载体,同时构建4个MLAA-22靶向RNA干扰载体,共转染293T细胞后通过细胞荧光强度分析及蛋白印迹法筛选最佳MLAA-22RNA干扰序列。结果成功构建了MIJAA-22真核pEGFP-N1-3FLAG表达载体,同时构建了4个RNA干扰载体,共转染293T细胞后筛选获得KD2为最佳干扰序列。结论KD2是靶向MLAA-22抗原基因的最佳RNA干扰序列。 展开更多
关键词 白血病 单核细胞 急性 RNA干扰 急性单核细胞白血病相关抗原22
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