鲍曼不动杆菌AdeABC外排泵与其对替加环素耐药的研究进展

随着耐替加环素鲍曼不动杆菌的出现,给临床抗感染治疗带来了极大的挑战。鲍曼不动杆菌对抗菌药物产生的耐药机制较为复杂,其中外排泵可减少菌体内药物的聚集并提高最低抑菌浓度,在鲍曼不动杆菌耐药中发挥着重要作用。AdeABC外排泵是鲍曼不动杆菌最主要的外排泵。本文旨在对鲍曼不动杆菌AdeABC外排泵的遗传结构、表达调控、介导替加环素耐药等方面的研究进展进行综述,以期为相关研究提供参考。

AdeABC外排泵系统与鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类药物耐药的关系

目的:探讨外排泵AdeABC系统与鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类药物耐药的关系。方法:采用美罗培南多步法体外诱导敏感鲍曼不动杆菌获得对碳青霉烯类药物耐药的菌株;采用E-test法定量检测诱导前后菌株的敏感性;羰基氰化物间氯苯腙(carbonylcyanide-m-chlorophenylhydrazone,CCCP)抑制试验筛查外排泵;PCR及测序分析诱导前后AdeABC系统的调控基因adeS,adeR及主要碳青霉烯酶基因的变化;荧光定量PCR检测诱导前后adeA,adeB,adeR和adeS基因m RNA的表达量。结果:亲代敏感菌株S25595和S7257的美罗培南最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)分别为0.38和0.25μg/m L,诱导后MIC均>32μg/m L;与亲代敏感株相比,诱导耐药株adeA,adeB,adeR和adeS基因的m RNA表达量上升2.45~9.44倍,但调控基因adeS和adeR没有基因突变或插入序列。结论:外排泵AdeABC系统高表达与鲍曼不动杆菌对美罗培南耐药密切相关,其表达水平升高不是由调控基因adeS和adeR序列中基因突变或插入序列引起,可能存在其他机制。

adeABC基因对鲍氏不动杆菌耐药性的影响

目的探讨临床分离鲍氏不动杆菌adeABC基因的表达及其对鲍氏不动杆菌耐药性的作用。方法采用E-test法对临床分离的鲍氏不动杆菌进行耐药性检测,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测adeABC基因的表达。结果鲍氏不动杆菌对不同抗菌药物的耐药率如下:哌拉西林97.6%,头孢吡肟60.8%,头孢噻肟75.2%,头孢他啶75.2%,环丙沙星80.0%,左氧氟沙星79.2%,阿米卡星60.8%,庆大霉素50.4%,亚胺培南35.2%,多黏菌素B0.0%,哌拉西林/他唑巴坦48.8%。多重耐药鲍氏不动杆菌的adeB基因携带率为95.0%,调控基因adeR、adeS携带率分别为90%、90%;敏感株的adeB基因携带率为58.1%,调控基因adeR、adeS携带率分别为49.5%、50.4%。结论 adeABC基因表达增强是鲍氏不动杆菌产生耐药性的重要机制。

外排AdeABC和AdeIJK系统与鲍曼不动杆菌耐药性的相关研究进展

鲍曼不动杆菌是医院感染及免疫缺陷者感染的重要致病菌之一。近年来,临床分离率逐年上升,耐药性日益严重,其耐药性与多种机制有关,其中主动外排AdeABC和AdeIJK系统的结构、功能及表达调节在多重耐药过程中起重要作用,也是研究的热点之一。

多重耐药鲍曼不动杆菌AdeABC外排泵的作用机制研究

目的探讨临床分离多重耐药鲍曼不动杆菌AdeABC型主动外排系统在耐药性产生中的作用,为研制有效抗菌药物及指导临床合理用药提供科学依据。方法对临床分离的鲍曼不动杆菌进行耐药性检测后收集多重耐药菌株,监测AdeABC型主动外排系统的表达及使用泵抑制剂后的耐药情况。结果多重耐药鲍曼不动杆菌AdeABC外排系统表达增强,而使用泵抑制剂后其表达水平下降,耐药性降低。结论 AdeABC外排泵表达增强是鲍曼不动杆菌产生耐药性的重要机制。

鲍曼不动杆菌双组份系统调控AdeABC外排泵表达的研究

鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii,AB)是一种革兰阴性菌(Gram negative bacterium),是引发院内感染的主要致病菌之一。AB耐药机制复杂,其中AdeABC外排泵是AB的主要耐药机制之一。双组份系统(two component system, TCS)是AB的信号转导系统,TCS AdeRS和TCS BaeSR可以调控AdeABC外排泵表达,有很大潜力成为AB的抗菌药物靶点。现就TCS对AdeABC外排泵的调控机制及TCS抑制剂的研究进展作一概述。

亚胺培南耐药的鲍氏不动杆菌OXA、AdeABC、CarO基因及生物膜的研究

目的通过对临床分离的亚胺培南耐药和敏感鲍氏不动杆菌OXA、AdeABC、CarO基因及生物膜形成分布进行调查,进一步分析鲍氏不动杆菌对亚胺培南的耐药机制。方法对2014年11月-2015年10月医院临床分离106株亚胺培南耐药和102株亚胺培南敏感的鲍氏不动杆菌运用PCR技术分别进行OXA、AdeABC、CarO基因的检测;采用96孔微量滴定板法体外构建生物膜并对其进行定量。结果在所有检测菌株中亚胺培南耐药和敏感菌株OXA-23检出率分别为99.1%和2.9%,差异有统计学意义(P<0.05);OXA-24基因仅在1株耐药菌株中检出;OXA-51基因均为阳性,而OXA-58基因均为阴性;而AdeABC基因在耐药和敏感菌株分布具有较大差异。结论 OXA-23基因是最流行的基因,是医院耐亚胺培南鲍氏不动杆菌的最主要OXA亚型;临床鲍氏不动杆菌所引发的感染多数与生物膜的形成有关,对医院临床治疗提供了有效的科学依据。

耐替加环素鲍曼不动杆菌中外排泵AdeB与Bfs过表达生物膜形成的关系

目的研究生物内被膜相关基因和向外排水泵基因之间在对耐替加环素鲍曼不动杆菌抗性上的相互作用。方法根据替加环素药敏敏感试验,将72株临床分离的鲍曼不动杆菌分为耐替加环素鲍曼不动杆菌组和替加环素敏感鲍曼不动杆菌组。采用结晶紫染色法观察两株菌的生物被膜形成情况。用RT-PCR方法分析生物被膜相关基因和外排泵基因。结果耐替加环素组生物被膜形成率为82.2%,替加环素敏感组生物被膜形成率为14.8%。转录水平上,耐药组生物被膜合成基因BfmS阳性率明显高于敏感组(P<0.01)。替加环素的最小抑菌浓度生物被膜组明显高于生物被膜缺失组(P<0.01)。外排泵AdeB基因在生物被膜形成组阳性率为95.2%,生物被膜缺失组为38.7%。结论BfS基因和AdeB外排泵基因的共表达可能与鲍曼不动杆菌生物被膜的形成有关。AdeB与BfS转录水平的提高促进了生物膜的形成,从而提高了鲍曼不动杆菌对替加环素的抗性。

鲍曼不动杆菌对喹诺酮类药物的耐药机制研究

目的探讨鲍曼不动杆菌对喹诺酮类药物的耐药机制。方法收集我院2006年5月—2007年2月不同患者痰培养标本中分离的鲍曼不动杆菌80株,剔除重复菌株用肉汤稀释法测定菌株在环丙沙星、含有不同浓度羟基氰氯苯胺(CCCP)的环丙沙星、亚胺培南-西司他丁的MIC。PCR扩增gyrA基因和parC基因并进行酶切分析,选取部分PCR扩增产物进行测序鉴定。荧光定量PCR方法检测环丙沙星敏感株与耐药株的adeBmRNA表达的相对定量。结果鲍曼不动杆菌对环丙沙星的敏感率为15%,随加入CCCP的浓度增高而增加,并接近亚胺培南的敏感率。PCR限制性片段长度多态性(RFLP)分析显示,58株耐药菌中39株gyrA基因不能被Hinf I酶切,23株praC基因不能被Hinf I酶切,敏感株均能被Hinf I酶切,耐药株中的gyrA和parC基因存在突变。环丙沙星耐药菌株的adeBmRNA表达量明显高于敏感菌株。结论鲍曼不动杆菌对喹诺酮类药物耐药除了与gyrA、praC基因突变有关外,还与主动外排泵基因adeBmRNA过表达有关。

主动外排系统作为鲍曼不动杆菌耐环丙沙星重要机制的研究

目的探讨耐环丙沙星鲍曼不动杆菌的主动外排机制。方法试管稀释法检测56株临床鲍曼不动杆菌对环丙沙星的敏感性;用直接荧光法检测耐药株在有无外排泵抑制剂时鲍曼不动杆菌胞内药物聚集浓度;结合药敏和直接荧光法两项结果筛选出6株外排抑制剂存在时胞内药物聚集浓度明显升高的环丙沙星耐药株,对该耐药组及对照敏感组做胞内环丙沙星聚集浓度的线性测定;RT-PCR法检测两组菌株主动外排泵基因adeABC的表达水平;对adeABC自身启动子区域相关基因片段进行PCR扩增并测序。结果(1)56株鲍曼不动杆菌中,48株对环丙沙星耐药(M IC>4mg/l);0株对环丙沙星中介(1mg/l≤M IC≤4mg/l);8株对环丙沙星敏感(M IC<1mg/l)。(2)耐药组药物积累量不及敏感组,加入外排泵抑制剂叠氮化钠后积累量上升并接近敏感组。(3)耐药组主动外排基因adeB的表达水平(2.372±0.032)明显高于敏感组(1.654±0.040)(P<0.01)。(4)自身启动子区域相关基因片段没有发现突变。结论鲍曼不动杆菌对环丙沙星的耐药现象非常严峻;外排泵基因adeABC的过度表达是鲍曼不动杆菌对环丙沙星耐药的重要原因;adeABC基因自身启动子区域无导致adeABC过度表达的基因突变。

Ade ABC主动外排系统及外膜蛋白在鲍氏不动杆菌对碳青霉烯类耐药中的作用研究

目的探索AdeABC主动外排系统及外膜蛋白在鲍氏不动杆菌对碳青霉烯类耐药中的作用。方法随机收集复旦大学附属中山医院临床标本鲍氏不动杆菌40株,以琼脂稀释法测定其对美罗培南、亚胺培南的最低抑菌浓度,按不同的耐药表型分组,进行羰基氢氯苯腙抑制试验,普通PCR扩增外排泵基因adeB,实时荧光定量PCR检测adeB基因表达水平;超声物理法提取外膜蛋白,12%十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析外膜蛋白。结果 40株鲍氏不动杆菌中,对亚胺培南、美罗培南均敏感检出15株,检出率37.5%,亚胺培南敏感美罗培南耐药检出6株,检出率15.0%,亚胺培南、美罗培南均耐药检出19株,检出率47.5%;中山医院鲍氏不动杆菌中,adeB外排泵基因广泛存在,在敏感菌株中存在率也很高;碳青霉烯类耐药组外排泵adeB基因的表达量相对高于敏感组,统计学分析3组之间差异无统计学意义;外膜蛋白分析发现,部分菌株有29 kd的条带丢失。结论主动外排系统和外膜蛋白缺失在鲍氏不动杆菌对碳青霉烯类耐药中可能发挥一定的作用。

亚胺培南诱导耐药鲍曼不动杆菌adeB表达变化研究

目的：明确AdeABC外排系统在亚胺培南获得性耐药鲍曼不动杆菌中的作用。方法用试管二倍稀释法对6株亚胺培南敏感鲍曼不动杆菌进行体外诱导；用琼脂稀释法测定10种抗菌药物及加入外排泵抑制剂氰氯苯腙（ CCCP ）12.5 mg· L-1后菌株的耐药表型。脉冲场凝胶电泳对菌株进行分型。用PCR及测序方法检测相关耐药基因。 Real -time PCR 方法检测菌株 blaAdeB及blaOXA-51-like mRNA表达量变化。结果6株鲍曼不动杆菌为亚胺培南及美罗培南敏感的多药耐药菌株。经亚胺培南体外诱导后，4株菌对亚胺培南的最低抑菌浓度（ MIC）值有4倍以上增加，成为亚胺培南耐药菌株。在加入CCCP后，对亚胺培南及美罗培南的MIC值下降到1/2～1/8。6株菌均携带blaOXA-66基因。blaoxa-23-like、blaoxa-24-like、blaoxa-58-like、blaimp及blavim基因检测均阴性。4株诱导后对亚胺培南耐药的菌株中，3株（H099、R010及T375）blaAdeB表达量增加2～14倍。另外1株K645菌株blaAdeB表达量无增加，blaOXA-51-like表达量增加17倍。2株诱导后亚胺培南MIC值无升高的菌株，其诱导前后blaAdeB及blaOXA-51-like表达量均无增加。结论在对鲍曼不动杆菌临床治疗应当尽量避免亚MIC浓度碳青霉烯类抗菌药物暴露，避免细菌耐药表型变化。 AdeABC外排系统的过表达可能同本实验1株鲍曼不动杆菌对亚胺培南获得性耐药相关。

鲍曼不动杆菌耐药程度与其主动外排泵蛋白的相关性研究

目的:探讨鲍曼不动杆菌耐药程度与其主动外排泵蛋白的相关性。方法:首先用纸片扩散法检测64株临床鲍曼不动杆菌对8种抗菌药物的敏感性;将其分为A组(0～2种抗生素耐药)、B组(对3～5种抗生素耐药)和C组(对6～8种抗生素耐药);检测64株临床鲍曼不动杆菌对罗丹明6G的外排情况,筛选出罗丹明6G外排明显增加的菌株;并用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测主动外排泵基因AdeABC的表达水平。结果:64株鲍曼不动杆菌中有4株对0～2种抗生素耐药(A组),对3～5种抗生素耐药的有33株(B组),对6～8种抗生素耐药的有27株(C组);多重耐药组鲍曼不动杆菌罗丹6G外排明显增高,外排程度A组<B组<C组;罗丹明6G外排增强的多重耐药不动杆菌主动外排泵基因AdeABC的表达水平显著增高。结论:鲍曼不动杆菌的耐药现象严峻;多重耐药性与药物主动外排增强有关;AdeABC基因的过度表达是鲍曼不动杆菌药物外排增加的重要原因。

多药耐药鲍曼不动杆菌AdeB外排系统与碳青霉烯类耐药的关系

目的 探讨我国多药耐药鲍曼不动杆菌（鲍氏不动杆菌,MDR-AB）AdeB外排系统对碳青霉烯类抗生素耐药的介导作用.方法 选取全国21家医院MDR-AB菌株101株和敏感菌株12株,用琼脂稀释法检测外排泵抑制剂苯丙氨酸-精氨酸-β-苯胺（PAβN,50 mg/L）对菌株AdeB外排系统的抑制作用及菌株对亚胺培南和美罗培南的耐药情况.利用实时荧光定量PCR技术分析adeB的表达情况,并探讨其与外排表型及耐药之间的关系.结果 101株MDR-AB对亚胺培南和美罗培南的耐药率分别为62.4％和52.5％.1 13株菌株中,共有82株adeB阳性菌株,其中adeB表达比率＞2.5的7株菌株均表现为多重耐药.亚胺培南的耐药组和非耐药组adeB的表达比率分别为1.237±0.159和0.698±0.115,差异有统计学意义（t=2.641,P＜0.05）；而美罗培南耐药组和非耐药组adeB的表达比率分别为1.013±0.148和0.978±0.150,组间差异无统计学意义（t=0.166,P＞0.05）.结论 我国MDR-AB中,AdeB外排泵系统的过度表达介导了其对亚胺培南耐药,并可能和美罗培南耐药有关.