泼尼松对Ⅱ型胶原诱导性关节炎大鼠股骨微结构及生物力学的影响

目的应用骨生物力学和micro-CT技术,探讨泼尼松对Ⅱ型胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠股骨微结构及生物力学的影响。方法 40只8周龄Lewis♂大鼠,随机分为正常对照(CON)组6只、其余34只用来建立CIA模型。免疫3周后筛选出CIA大鼠随机分成CIA组、CIA加泼尼松4.5mg·kg-1·d-1组和CIA加泼尼松9 mg·kg-1·d-1组。CON和CIA组给予溶剂对照溶液,其它2组给予泼尼松4.5、9 mg·kg-1·d-1。连续给药90 d后处死,取左股骨进行生物力学测定,然后进行micro-CT扫描及三维重建。结果与CON组比较,CIA组骨小梁厚度、骨小梁数量、骨体积分数、骨密度明显减小,而骨小梁分离度、结构模型指数明显增加,骨生物力学参数(弹性载荷、最大载荷、断裂载荷、刚度)均明显减小。与CIA组比较,泼尼松2个剂量组骨体积分数与骨小梁数量均增加,骨小梁分离度均减小,而骨生物力学参数均无明显变化。结论泼尼松治疗CIA大鼠3个月后,对股骨松质骨微结构破坏有所改善,但对股骨生物力学性能和骨密度没有明显改变。

5, 7, 3′-三乙酰橙皮素对AA大鼠成纤维样滑膜细胞Jak2/Stat3信号通路及凋亡相关蛋白的影响

目的研究5,7,3'-三乙酰橙皮素(5,7,3'-triacetylhesperetin,TAHP)对佐剂性关节炎大鼠成纤维样滑膜细胞(FLS)Jak2/Stat3信号通路及凋亡相关蛋白的影响。方法用弗氏完全佐剂诱导大鼠AA模型;MTT法检测FLS的增殖反应;Hoechst 33258染色法检测FLS的凋亡;RT-PCR法检测FLS中Jak2、Stat3、Bcl-2、Bax及Caspase-3的基因表达;Western blot法检测FLS中p-Stat3及Caspase-3的蛋白表达情况。结果 TAHP呈剂量和时间依赖性抑制FLS的增殖(P<0.05);Hoechst 33258染色结果提示TAHP可以明显地促进FLS的凋亡;同时TAHP(50,250μmol·L-1)可以明显降低Jak2、Stat3及Bcl-2表达,而上调Bax及Caspase-3表达。Western blot结果显示,TAHP可降低p-Stat3的表达、上调Caspase-3表达。结论 TAHP可以抑制FLS增殖,其作用机制可能与抑制FLS Jak2/Stat3信号通路、促进Bax及Caspase-3表达、抑制Bcl-2的表达有关。

芍甘附子汤加味对胶原诱导性关节炎大鼠滑膜血管新生相关因子表达的影响

目的观察芍甘附子汤加味对胶原诱导性关节炎大鼠滑膜组织缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)、血管生成素1(angiopoietin-1,Ang-1)和血管生成素2(angiopoietin-2,Ang-2)的影响,探讨其治疗类风湿关节炎的抗血管新生作用机制。方法选用健康Wistar大鼠30只,随机分为正常组、模型组、对照组(雷公藤多甙片组)和小、中、大剂量治疗组(芍甘附子汤加味组),除正常组均制备胶原诱导性关节炎(Collagen-induced arthritis,CIA)模型,造模成功后连续给药28天。测定各组大鼠足趾肿胀体积,进行关节炎指数(Arthritis index,AI)评分,采用免疫组织化学方法检测大鼠膝关节滑膜组织HIF-1α、Ang-1和Ang-2的表达。结果与模型组比较,对照组和大剂量治疗组足趾肿胀体积有所降低(P<0.05),对照组和中、大剂量治疗组AI评分明显降低(P<0.01);与正常组比较,模型组HIF-1α和Ang-1表达均显著升高(P<0.01),Ang-2表达有所升高(P<0.05);与模型组比较,对照组和大、中剂量治疗组HIF-1α和Ang-1表达均出现显著降低(P<0.01),Ang-2表达呈降低趋势。结论芍甘附子汤加味可能通过降低类风湿关节炎滑膜组织HIF-1α、Ang-1和Ang-2的表达,抑制滑膜血管新生,从而起到治疗类风湿关节炎的作用。

风寒湿外邪对痹证(佐剂性关节炎)发生发展的影响

目的探讨风寒湿外邪对痹证[类风湿关节炎]发生发展的影响。方法 (1)雄性SD系大鼠20只,采用分层随机法分为单纯完全弗氏佐剂(CFA)组(10只)及风寒湿14天+CFA组(10只)。单纯CFA组大鼠正常饲养14天,风寒湿+CFA组大鼠风寒湿刺激14天,尾根部皮下注射0.1mL含100μg结核分支杆菌(Mtb)的CFA诱导佐剂性关节炎(AIA)观察并记录大鼠发病数,计算发病率。(2)雄性SD系大鼠30只,分层随机分为单纯CFA组(10只)、风寒湿7天+CFA组(10只)及风寒湿14天+CFA组(10只),3组大鼠分别尾根部皮下注射0.1mL含200μg Mtb的CFA诱导AIA。观察各组大鼠发病时间及关节炎指数。(3)雄性SD系大鼠30只,分层随机分为正常组(10只)、单纯CFA组(10只)及风寒湿14天+CFA组(10只),观察并记录各组大鼠精神状态、舌质、大便情况,测量体质量、饮水量和光辐射热刺激撤足时间。(4)雄性SD系大鼠20只,分层随机分为正常组(10只)及风寒湿14天组(10只),检测外周血CD4+T细胞亚群。结果 CFA(含100μg Mtb)注射后,单纯CFA组大鼠关节炎发病率为50%,风寒湿刺激14天+CFA组大鼠达到100%(P=0.039)。风寒湿刺激14天+CFA组在CFA(含200μg Mtb)注射后出现关节炎时间为(8.3±1.2)天,比单纯CFA组大鼠[(13.2±1.2)天]显著提前(P<0.01);与单纯CFA组比较,风寒湿14天+CFA组大鼠体毛欠光泽、明显畏寒、蜷卧懒动、大便稀溏,舌质偏淡、舌苔腻。风寒湿14天+CFA组大鼠关节炎初发阶段体重显著下降(P<0.05,P<0.01),后足肿胀程度显著增加(P<0.05,P<0.01),饮水量显著减少(P<0.05),热刺激撤足时间显著增加(P<0.01)。风寒湿14天组大鼠外周血中CD4+T细胞亚群数量较正常组明显升高(P<0.05)。结论风寒湿外邪影响AIA病证的发生,在疾病初发阶段中医证候表现为风湿寒痹证,其形成机制可能与CD4+T细胞亚群异常活化有关。