鸡肝原代细胞药物代谢模型的建立与优化

[目的]建立成年鸡原代肝细胞的药物代谢模型并对其进行优化。[方法]以改进的二步灌流法分离8~12周龄的雄性黄羽鸡肝细胞,比较在不同细胞基础培养液条件下鸡肝细胞体外培养的情况,利用倒置显微镜观察肝细胞的形态,利用MTT检测法绘制生长曲线,测定细胞培养上清液中乳酸脱氢酶（LDH）活性,用q PCR和Western blot测定肝细胞中CYP450酶亚型CYP1A4、CYP1A5和CYP3A37 mRNA相对表达水平和3种酶蛋白的表达量。[结果]离体灌流操作简便,获得的细胞存活率高达90%以上;用含0.5 mg·L^-1牛胰岛素、10 g·L^-1双抗（100 U·m L^-1青霉素和链霉素）和体积分数为10%胎牛血清的DMEM基础培养液体外培养鸡肝细胞,贴壁培养时可见到肝细胞较为明显的分化过程,贴壁后呈上皮细胞样生长,多角形,胞浆内容物均匀丰富,细胞核清晰透亮,少数有双核,细胞生长状态良好。生长曲线和LDH活性测定结果显示：培养3~5 d时细胞状态稳定,并且在肝原代细胞培养的8 d内,CYP1A4、CYP1A5和CYP3A37 mRNA相对表达水平和蛋白的表达量没有显著差异。[结论]以改进的二步灌流法分离鸡肝细胞操作简便,分离的鸡肝原代细胞存活率高,用含0.5 mg·L^-1胰岛素、100 U·m L^-1青霉素、100μg·m L^-1链霉素和10%胎牛血清的DMEM基础培养液体外培养鸡肝原代细胞效果最好,培养3~5 d是进行体外药物代谢等试验的最佳时机。

镉对育成鸡卵巢发育及性激素水平的影响

以雌性育成鸡为研究对象,研究重金属镉对雌性育成鸡血清激素水平的影响。将180只50日龄的"海兰白鸡"随机分成3组,每组60只,分别饲喂不添加或添加140、210 mg/kg CdCl2的全价饲料,建立亚慢性镉中毒模型,分别在试验20、40、60 d心脏采血处死,静置取血清,用放射性免疫方法检测血清内孕酮(P4)、雌二醇(E2)含量,称量鸡体重及卵巢重量。结果表明,镉影响鸡的生长性能,抑制卵巢发育,使血清内E2、P4含量降低,且呈明显的时间-剂量效应关系。

成年鸡盲肠正常菌群的初步研究

采用定量分析方法，对成年鸡盲肠内７个菌属正常菌群进行了测定。结果表明：乳酸杆菌数量最高，其对数值为８．６±０．５，其次是双歧杆菌，对数值为８．１±１．０，肠球菌的数量最低，为５．９±０．７；乳酸杆菌和双歧杆菌的数量极显著地高于其它菌类（Ｐ＜０．０１），为成年鸡盲肠内优势菌群。

成体鸡精原干细胞和性原细胞分化潜能的研究

实验共设计了8对引物,即发育全能性的标志基因(OTC4)引物1对,管家基因(β-actin)引物1对,三胚层分别特异表达的基因引物各2对。每个胚层筛选出1个在4日龄鸡胚上表达的基因,然后用RT-PCR法检测性原细胞皮下移植10d后和精原干细胞翅下移植8d后组织内这3个基因的表达情况。结果表明:在OTC4基因和β-actin基因都表达的情况下,性原细胞皮下移植10d后的组织和精原干细胞翅下移植8d后组织都是中胚层和外胚层基因表达,内胚层基因不表达,即成体鸡精原干细胞和性原细胞可自动分化成中胚层和外胚层2个胚层,这说明成体鸡精原干细胞和性原细胞拥有形成多能细胞的潜能。

烘干鸡粪的营养成分及其对鸡的饲喂效果研究

为了有效处理养鸡场的鸡粪,避免其可能造成的环境问题,利用鸡粪烘干机对鲜鸡粪进行烘干处理,测定烘干后鸡粪的营养成分,并在鸡日粮中添加10%的烘干鸡粪,以研究其对育成鸡的饲喂效果。结果表明:鸡粪中粗蛋白含量较高,达30.12%,几乎与大豆相当,同时鸡粪中还含有粗脂肪,粗纤维,B族维生素以及钙、磷、铜、铁、锌、锰等元素,可作为较好的饲料资源;在鸡日粮中加入10%的烘干鸡粪,不仅对育成鸡的体重和饲料转化率均没有显著影响,而且可以节省饲料成本0.16元/只,可为养鸡场取得较好的经济效益。

镉对育成鸡卵巢发育及性激素水平的影响

以雌性育成鸡为对象,研究重金属镉对卵巢发育和血清激素水平的影响。将180只50日龄"海兰白鸡"随机分成3组,每组60只,分别饲喂不添加或添加140 mg/kg CdCl22、10 mg/kg CdCl2的全价饲料,建立亚慢性镉中毒模型。于试验20、406、0 d心脏采血处死、静置取血清,用放射性免疫方法检测血清内孕酮(P4)、雌二醇(E2)含量,称量鸡体重及卵巢重量。结果表明,镉影响鸡的生长性能、抑制卵巢发育,使血清内E2、P4含量降低,且呈明显的时间-剂量效应关系。

成人水痘46例临床分析

目的探索更昔洛韦治成人水痘的疗效,与阿昔洛韦比较。方法将46例成人水痘随机分成2组：治疗组22例,用更昔洛韦10mg/kg,每日1次静滴,连用7d;对照组24例,用阿昔洛韦10mg/kg,每日1次静滴,连用7d。2组年龄为18~34岁,平均25~39岁。结果治疗组与对照组按照随机分组治疗1周后皮疹消失,体温逐渐降至正常,血常规正常,症状消失。治疗组发热持续时间短于对照组（P〈0.01）,皮疹结痂时间早于对照组（P〈0.01）。结论更昔洛韦治疗成人水痘效果优于阿昔洛韦。

散养成年蛋鸡空肠乳酸菌群的区系分析

试验以5只55周龄散养健康成年蛋鸡空肠内容物为样本,用无菌生理盐水稀释至10-6稀释浓度,吸取0.1 mL菌液滴于MRS平板上,置37℃培养箱培养24 h,分离乳酸菌。将分离纯化得到的乳酸菌,通过革兰氏染色、菌落形态观察、糖发酵试验进行乳酸菌种属鉴定。结果显示,从55周龄散养健康成年蛋鸡空肠中分离筛选出20株乳酸菌,经革兰氏染色后镜检显示,分离菌株有杆状和球形2种;经糖发酵试验鉴定为7个乳酸菌种,分别为唾液乳杆菌唾液亚种、棒状乳杆菌扭曲亚种、唾液乳杆菌水杨素亚种、能动乳杆菌、格氏乳杆菌、嗜酸乳杆菌和德氏乳杆菌保加利亚亚种。

成人手足口病误诊为多形红斑、水痘2例

例1男,27岁。头痛、发热4d,伴手足、臀部米粒大红色丘疹及灰色水疱3d。例2男,48岁。发热5d,伴双手掌跖水肿性红斑、双肘部散在米粒大红丘疹及灰白色水疱。例1被误诊为多形红斑,例2被误诊为水痘。2例皮损组织病理示:棘细胞水肿,形成网状变性,基底层与真皮分离形成大的腔隙,以中性粒细胞渗出为主,真皮浅层小血管壁少量淋巴细胞浸润。均诊断为手足口病。

城关社区成人水痘并发症76例诊治分析

目的 了解成人水痘并发症的临床特点,为成人水痘的预防和临床诊治提供依据。方法 回顾性分析2011-2015年我院收治的76例成人水痘并发症患者的临床资料,对临床流行特征和并发症发生情况及预后进行分析。结果 76例成人水痘并发症患者继发皮肤感染占84.21%,肝功能损害占55.26%,呼吸道感染占47.37%;发病比例男性高于女性,且以冬春季节发病为主。76例患者经临床应用阿昔洛韦联合麻疹减毒活疫苗治疗,均治愈。结论 成人水痘发病率有增高趋势,而且成人水痘并发症有发热程度和热程、全身毒血症状以及皮疹数量、各种并发症发生比例均较儿童高且严重,无疫苗免疫史患者病情较重。临床上应尽早明确诊断,及时治疗;可通过接种水痘减毒活疫苗（VarV）（建议推行2剂次接种的免疫策略）来控制发病率和减少并发症发生。

热应激环境下育成鸡肠道菌群多样性及黏膜结构的相关性分析

为分析热应激环境下育成鸡肠道菌群以及黏膜结构的变化,揭示热应激下家禽肠道中正常菌群定植与黏膜结构变化的相关性,选取健康状况相似的10周龄日照琅琊鸡96只,设适温对照组((24±1)℃,Ⅰ)和高温组((38±1)℃),随机分在2个人工环境气候舱中饲养,试验期为14d。采用16SrDNA PCR-DGGE技术,分析热应激处理后1d(Ⅱ)、7d(Ⅲ)和14d(Ⅳ)时十二指肠、空肠及回肠部位内容物细菌群落多样性以及组织黏膜形态变化、肠黏膜上皮内杯状细胞数量。结果表明:热应激持续时间越长,对回肠部位菌群影响越大,Ⅲ组十二指肠与回肠部位优势细菌菌群组成分离明显;Ⅳ组十二指肠、空肠与回肠部位优势细菌菌群组成具有明显差异。不同热应激时段在空肠部位可检测到罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)、螺旋链霉菌(Streptomyces spiralis)、Plebeius杆菌属细菌(Bacteroides plebeius strain)和嗜酸乳杆菌(L.acidophilus),而回肠部位可检测到拟杆菌属(Bacteroidetes)和不可培养的细菌等;Ⅲ组十二指肠、空肠和回肠的绒毛长度、宽度、隐窝深度及绒毛高度/隐窝深度(V/C)均发生了明显的变化,各肠段的绒毛长度均明显下降,其中回肠绒毛长度减少最为显著(P<0.05);十二指肠、空肠隐窝深度及V/C均出现明显下降(P<0.05),各肠段肠壁厚度均显著比对照组低(P<0.05)。Ⅲ组空肠和回肠内杯状细胞的数量明显减少,其中回肠差异显著(P<0.05)。结果显示,热应激对育成鸡各肠段细菌菌群组成的影响很大,并且黏膜组织结构发生了明显变化,从而破坏消化道菌群平衡,导致消化吸收功能严重受阻。

成年鸡原代肝细胞的原位分离和长期培养

为探讨成年鸡原代肝细胞的分离条件和长期培养过程中的形态学特征,本试验采用改进胶原酶二步原位灌流法分离高活性鸡原代肝细胞,并优化培养液,得到肝细胞长期培养的初步条件。结果显示,分离得到的活性肝细胞达94%,培养3 d细胞活性最强;贴壁培养时可见到肝细胞较为明显的分化过程。

红外线体温计测量成年鸡体温部位优选

为了筛选红外线体温计测量成年鸡体温的适宜部位,试验以100只成年海兰褐蛋鸡的冠、眼、耳叶、肉髯、翅下和胫部为测量部位,分别于2019年夏季(6月22—29日)、秋季(9月12—19日)、冬季(12月22—29日),用红外线体温计测量距离测量部位表面1,2,4 cm的温度,并用水银体温计测量试验鸡直肠温度并进行比较分析。结果表明:成年鸡冠、眼、耳叶、肉髯、翅下和胫部不同部位温度存在显著或极显著差异(P<0.05或P<0.01),其中以眼部为最高(31.73-38.51℃),与直肠温度(41.15-42.32℃)差异最小,肉髯和胫部为最低;不同季节成年鸡各部位温度之间均呈显著或极显著差异(P<0.05或P<0.01),但以眼部温度差异最小;不同距离测量成年鸡各部位的温度除胫部差异不显著外(P>0.05),其他部位均呈显著或极显著差异(P<0.05或P<0.01),其中以眼部温度差异最小。说明眼部应作为红外线体温计测量成年鸡体温的适宜部位。

成人水痘28例临床分析

目的了解成人水痘的临床特点。方法对住院28例成人水痘临床资料进行回顾性分析。结果成人水痘近来发病人数有增多趋势,且传染性强,病程长,全身症状较儿童重。成人水痘有一定严重并发症出现。结论成人,尤其是青年人可以成为水痘易感者。预防和控制成人水痘的关键是普遍进行水痘疫苗接种。