生长因子促成年兔关节软骨细胞增殖的研究

目的 研究促进成年兔关节软骨细胞迅速增殖的方法。方法 将体外培养 2 4～ 2 8月龄的新西兰大白兔的原代关节软骨细胞中加入不同浓度的胰岛素样生长因子 - (IGF- )、碱性成纤维细胞生长因子 (b FGF)及 IGF- +b FGF联合应用。于 2 4、4 8及 72小时分别进行 MTT检测软骨细胞的成活数 ;检测传 3代后各组软骨细胞的总增殖倍数 ;第 14天后 ,用流式细胞仪检测各组软骨细胞的增殖倍数 ,观察 IGF- 、b FGF及 IGF- +b FGF联合应用对成年兔关节软骨细胞各时间点的促增殖作用。结果 1施加不同浓度的 IGF- 、b FGF或两者联合应用后各时间点软骨细胞活细胞数明显高于对照组 (P<0 .0 1) ;2传 3代后 ,三组总增殖倍数也都明显高于对照组 (P<0 .0 1) ,且两种因子联合应用 ,增殖倍数明 显比应用单个因子时高 ,有统计学意义 (P<0 .0 1) ;3培养 14天后 ,增殖指数明显高于对照组 (P<0 .0 1) ,两种因子联合应用时 ,增殖指数明显比应用单个因子时高 (P<0 .0 5 ) ;而施加两次因子时 ,增殖指数比施加一次因子时高 (P<0 .0 5 )。结论 IGF- 、b FGF对成年兔关节软骨细胞有明显的促增殖作用 ,两者之间有协同效应。

成年兔关节软骨创伤模型中软骨细胞的分离及体外培养观察

目的：观察成年兔关节软骨损伤模型中能获得的关节软骨和软骨细胞数量，探讨不同浓度的Ⅱ型胶原酶在不同时间段分离软骨细胞的能力及体外培养所获得的软骨细胞的生物学活性。方法：建立成年兔关节软骨损伤模型，用0.1％-0．2％Ⅱ型胶原酶消化4小时，每小时收集消化下来的兔膝关节软骨细胞，计数细胞收获率和细胞存活率。体外培养原代及传代细胞，观察细胞形态和生长规律，绘制生长曲线，榆测细胞合成Ⅰ、Ⅱ型胶原、蛋白多糖能力。结果：成年兔膝关节软骨细胞的收获率平均为3603．6×10^4个／克，细胞存活率平均为97．3％，胶原酶浓度与细胞的获取率无显著关系，但与细胞的存活率相关，在消化时间超过3h后细胞的存活率显著降低，在培养过程中出现易老化现象，原代细胞贴壁时间为48—72h，甲苯胺蓝异染反应较强，Ⅱ型胶原免疫组化染色反应呈强阳性，Ⅰ型胶原免疫组化染色为阴性，传3代细胞形态由卵圆形、多角形变为梭形，甲苯胺蓝染色异染反应较弱，免疫组化工型胶原为强阳性而Ⅱ型胶原表达极弱。结论：0．1～0．2％Ⅱ型胶原酶消化、分批收取细胞具有较高的细胞收获率和存活率，体外培养时，从创伤后关节软骨中获得的原代细胞和1代细胞具有良好的软骨表型，第3代及以后的细胞生物学活性低下。

IGF-1对成兔关节软骨细胞体外增殖的影响

目的研究单独应用胰岛素样生长因子1(IGF-1)对成兔的关节软骨细胞体外增殖的促进作用,为成人关节软骨的体外培养扩增的理论提供新思路。方法通过细胞形态学,细胞计数、细胞计量检测成兔关节软骨细胞的存活及增殖。结果成兔关节软骨细胞增殖活跃。结论在IGF-1的单独作用下成兔关节软骨细胞在体外增殖能力明显增强。

依达拉奉对在体成年兔肺缺血再灌注损伤的保护作用

目的:观察氧自由基清除剂依达拉奉对在体成年兔肺缺血再灌注损伤的影响,从而探讨其可能的保护作用机制。方法:由南京农业大学实验动物中心提供的27只健康成年新西兰白兔,随机分为3组:假手术组(Sham,n=6),缺血再灌注组(IR,n=10)和依达拉奉干预组(IR+Edaravone,n=11)。用小儿肠钳钳夹左肺门60min,然后再开放60min制备成年兔在体肺缺血再灌注模型。依达拉奉干预组于阻断前和开放前各予静脉注射依达拉奉3mg/kg。对比观察各组肺组织中超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)含量、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活力、过氧化氢酶(CAT)活力、总抗氧化能力(T-AOC)、抑制羟自由基能力(IHR)、髓过氧化物酶(MPO)含量,肺组织湿干重比(W/D),并在光镜下比较组织形态学改变。结果:依达拉奉干预组与IR组相比,SOD、GSH-PX、CAT与T-AOC活力显著增高,MDA、MPO含量及W/D显著降低(P<0.05);IR组镜下见有肺间质增宽水肿,大量炎症细胞浸润,肺泡腔中可见明显出血、渗出,部分肺泡萎陷不张;而依达拉奉干预组肺组织上述改变明显减轻。结论:在体成年兔肺缺血前后用依达拉奉处理,可减轻缺血再灌注损伤,其机制可能与依达拉奉自由基清除和抗氧化作用有关。

限制性输液对家兔内毒素性急性肺损伤的影响

目的探讨限制性输液对家兔内毒素性急性肺损伤的影响。方法白兔20只,随机分为2组,对照组(非限制性输液),静脉输液12mL·kg^(-1)·h^(-1);实验组(限制性输液),静脉输液4mL·kg^(-1)·h^(-1)。经耳缘静脉注射内毒素,建立家兔内毒素性急性肺损伤模型,于注入内毒素后0、0.5、1、2、3h抽取动脉血行血气分析,监测动脉氧分压(arterial partial pressure of oxygen,PaO_2),抽取静脉血离心后留取血清,待检测血栓素A-2(thromboxane A-2,TXA-2)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α);3h后取左下叶肺组织,做病理检查,并测量右肺组织的湿/干质量比,以反应肺水肿程度。结果静脉注射内毒素后0.5h,2组PaO_2均明显下降(P<0.05),TXA-2、TNF-α均明显升高(P<0.05);实验组在2h和3h时PaO_2明显高于对照组,TXA-2、TNF-α、肺组织湿/干质量比值均明显低于对照组(P<0.05)。组织学检查,对照组肺泡腔内含不等量的水肿液,红细胞,肺泡间隔毛细血管扩张充血,有炎细胞聚集、渗出;实验组肺泡腔内含少量红细胞,炎细胞聚集、渗出。结论限制性输液对内毒素致肺组织改变具有保护作用。

人发角蛋白人工肌腱(HHKAT)组织相容性的实验研究(英文)

目的 :研究人发角蛋白人工肌腱 (HHKAT)植入大白兔体内的组织相容性。方法 :取 18只新西兰大白兔在兔的右侧臀大肌埋入人发角蛋白人工肌腱 (HHKAT) ,左侧埋入正常人发 (NHH)。术后 2W ,8W ,12W比较兔两侧的局部反应及组织学变化。结果 :植入人发角蛋白人工肌腱侧的局部反应、组织反应较正常人发侧弱 ;取 10个高倍镜下炎症细胞 (淋巴细胞、异物巨细胞、巨噬细胞 )的平均数比较 ,有统计学意义。结论 :人发角蛋白对机体制激性较小 ,是一种组织相容性良好的人工材料。

电穿孔介导外源基因转染兔成体成纤维细胞的初步研究

目的采用电穿孔方法，介导质粒载体pEGFP-cl转入兔成体成纤维细胞，探讨建立电穿孔介导外源基因转染兔成体成纤维细胞的基本条件。方法电穿孔介导质粒载体pEGFP—cl转入7．10代兔耳成体成纤维细胞系GG，研究不同电压、电容、DNA剂量，孵育温度的条件下，观察细胞存活数，流式细胞仪测试GFP的含量。结果以PBS作为电击基础液、细胞浓度2×10^6个／ml，电压250V、电容700μF，DNA用量30μg时，兔耳成纤维细胞的转染率和存活率最佳。且电击前冰浴10min，电转染后37℃孵育10min有利于提高细胞的转染率和存活率。结论在合适电压、电容、DNA剂量条件下，电转染提供了外源基因转染兔耳成体成纤维细胞适用性；电转染前的一定时间冰浴和电转染后一定温度孵育可使电转染效率得到改善。

兔子宫内膜中标记滞留细胞的初步鉴定

目的:利用鉴定标记滞留细胞(LRC)的方法分析兔子宫内膜中可能存在的成体干细胞及其分布。方法:首先用促性腺激素处理兔,将子宫内膜调整到增殖期,并采用免疫组织化学方法鉴定增殖期子宫内膜中雌激素受体、孕激素受体、增殖细胞核抗原(PCNA)的表达,以评价子宫内膜的增殖期状态。BrdU标记后追踪8周,以鉴定LRC细胞的存在与分布。结果:增殖期子宫内膜较促性腺激素处理前明显增厚,子宫内膜中雌激素受体、孕激素受体与PCNA的表达明显升高。8周追踪后,子宫内膜中有(2.1±2.4)%的细胞核为BrdU阳性,即LRC细胞。这些LRC细胞主要存在于腔上皮组织中。结论:在成年兔子宫内膜中有LRC存在,子宫内膜成体干细胞可能存在于这些LRC中。

内毒素致兔急性肺损伤及1,6-二磷酸果糖保护性作用的研究

目的:研究1,6 二磷酸果糖(FDP)对大肠杆菌内毒素(ET)致大耳白兔急性肺损伤(ALI)的保护性 作用及其对磷脂酶A2(PLA2)活性的影响。方法:大耳白兔随机分为对照组、ET致伤组、ET致伤+FDP干预组。 经静脉一次性注射ET复制兔ALI模型。各组分别于0h、0.5h、2h、4和6h等不同时点测定呼吸频率、心率、血 压、血气分析及血清中PLA2活性;于6h点处死动物,测定肺组织PLA2活性,并行肺组织病理学观察。结果:静注 ET后,致伤组动物与对照组相比较,出现呼吸频率加快、血压下降、心率加快、血氧分压降低和PLA2活性增高,肺组 织出现明显的病理损害。干预组动物肺损伤轻于致伤组。结论:FDP对PLA2激活起抑制作用,可改善其病理生理 过程;对ET所致的兔早期ALI有一定的保护作用。

内毒素致兔急性肺损伤及1,6-二磷酸果糖的拮抗作用

目的:研究内毒素(ET)致大耳白兔急性肺损伤(ALI)过程中的氧化应激反应;探讨1,6-二磷酸果糖(FDP)对氧化损伤的拮抗作用。方法:大耳白兔随机分为对照组(A组)、ET致伤组(B组)、ET致伤+FDP干预组(C组)。经静脉一次性注射ET复制兔ALI模型。各组分别于0h、0·5h、2h、4h及6h等不同时点测定呼吸频率、心率、血压、血气分析和血常规;于6h点处死动物,测定肺组织中脂质过氧化物(LPO)的含量和超氧化物歧化酶(SOD)的活性,并行肺组织病理学观察。结果:静注ET后,B组动物与A组相比较,出现呼吸频率和心率增快、血压和血氧分压降低、外周血白细胞(WBC)计数下降、肺组织LPO含量增高及SOD活性降低,肺组织出现明显的病理损害。C组动物肺损伤轻于B组,相应指标好于B组。结论:氧化应激反应能力的相对不足和氧化损伤在ALI发病过程中起了重要作用;FDP可抑制氧化损伤、改善氧化应激反应能力,对ET所致的兔ALI有一定的拮抗作用。

促凝血活性在急性肺损伤中的变化及1,6-二磷酸果糖的作用

目的:观察内毒素(ET)致大耳白兔急性肺损伤(ALI)过程中肺组织的促凝血活性变化及1,6-二磷酸果糖(FDP)的影响,研究FDP对ALI的可能拮抗作用。方法:大耳白兔随机分为对照组、ET致伤组、ET致伤+FDP干预组。经静脉一次注射ET复制兔ALI模型。各组分别于0 h、0.5 h、2 h、4 h及6 h等不同时点测定呼吸频率、心率、血压、血气分析和血常规;于6 h点处死动物,测定肺组织中血栓烷B2(TXB2)、6-酮-前列腺素F1α(6-keto-PGF1α)的含量,并行肺组织病理学观察。结果:致伤组静注ET后与对照组相比较,出现呼吸频率增加、心率加快、血压下降、血氧分压降低、外周血白细胞计数下降和肺组织TXB2/6-keto-PGF1α比值升高,肺组织出现明显的病理损害。干预组动物的相应指标好于致伤组。结论:肺组织促凝血活性升高在ALI发病过程中起了重要作用;FDP可抑制肺组织促凝血活性的升高,对ET诱导的ALI有一定的拮抗性作用。

内毒素致兔早期急性肺损伤及氯喹的保护性作用

目的:研究内毒素(ET)致兔早期急性肺损伤(ALI)的病理生理过程,探讨氯喹对ET所致的兔早期ALI的保护性作用。方法:大耳白兔随机分为对照组、ET致伤组、ET致伤+氯喹干预组。静脉注射ET(500μg/kg)复制兔早期ALI的动物模型。测定动脉血气、血清及肺组织中磷脂酶A2(PLA2)活性、肺组织脂质过氧化物(LPO)含量和超氧化物歧化酶(SOD)的活性,并取肺组织行光镜及电镜下病理学观察。结果:与对照组相比,静注ET后,致伤组动物出现动脉血氧分压(PaO2)下降、肺内白细胞扣押、血清及肺组织中PLA2活性增高、肺组织LPO含量增高(P<0.05)和SOD活性降低(P<0.05)。组织病理学观察可见致伤组肺组织出现了典型的ALI改变。干预组PaO2未见下降,血清及肺组织PLA2活性和肺组织LPO含量低于致伤组(P<0.05),肺组织SOD活性则高于致伤组(P<0.05),组织病理学观察显示肺损伤程度较轻。结论:静脉注射ET可复制兔早期ALI的动物模型,PLA2激活及氧化损伤在ALI的病理生理过程中起重要作用;氯喹可抑制PLA2激活和氧化损伤,对ET所致的兔早期ALI具有一定的保护作用。

山莨菪碱对油酸所致肺损伤的保护作用及机理探讨

山莨碱(654—2) 防治油酸所致兔肺损伤的结果表明,654—2能防止肺组织和BAIF中MDA含量的增加,在一定程序上抑制了血浆TXB_2和6-Keto-PGF_(1α)含量的升高和减轻肺水肿,其机制可能与减少肺内过氧化脂质的生成和调节前列腺素的代谢有关。

温度因子对公兔精液品质影响的研究

使用二台人工气候箱分别以25℃,28℃和31℃观察温度对公兔精液品质的影响,试验观察32天,共采精9次。结果以31℃影响较大,射精量少,精子活力低,甚至试兔死亡;高温对公兔影响的结果与个体间差异有关,有耐受性较强的,也有耐受性较差的,可为建立耐高温品系提供种质基础。

非休眠期成年兔骨髓基质干细胞和脂肪基质干细胞用于核移植构建重组胚(英文)

目的 研究非休眠期成年兔骨髓基质干细胞和脂肪基质干细胞作为供体 ,以体外成熟去核兔卵母细胞作为受体进行核移植构建重组胚胎的可行性及囊胚形成率 .方法 首先利用新西兰兔骨髓和脂肪为来源分别培养骨髓基质干细胞和脂肪基质干细胞 ,然后用他们作为核供体 ,采用卵细胞胞质内直接注射法构建重组胚胎 ,7d后比较囊胚形成率 .结果 核移植操作后卵细胞存活率达 80 .0 % ,骨髓基质干细胞和脂肪基质干细胞作为供体重组胚胎囊胚形成率分别为 88/ 5 2 2(16 .9% )和 73/ 4 6 4 (15 .7% ) ,(P>0 .0 5 ,Yates corrected) .结论 处于非休眠期的成年兔骨髓基质干细胞和脂肪基质干细胞移植到去核卵母细胞后能够进行早期胚胎发育 。

内毒素致兔急性肺损伤血红素加氧酶拮抗作用

目的:探讨血红素加氧酶-1(HO-1)对内毒素致兔急性肺损伤(ALI)的保护作用。方法:将24只雄性新西兰白兔随机分为生理盐水对照组(A组),内毒素损伤组(B组),血晶素预处理组(C组)。用内毒素(700μg/kg)一次性静脉注射复制兔急性肺损伤模型。检测肺组织HO-1蛋白的表达情况,以及在实验前(0 h)、实验后0.5 h、1 h、2 h、4 h各点动脉血气、血清SOD值与MDA值。结果:B组动物静脉注射内毒素0.5 h后,动脉血氧分压下降至最低7.287kPa(<8kPa,符合急性肺损伤标准),血清SOD值2 h、4 h时明显低于A组(P<0.01),血清MDA值明显高于A组(P<0.01)。C组肺组织HO-1蛋白(平均光密度)明显高于A和B组(P<0.01)。结论:肺组织HO-1表达增加对内毒素所致ALI有一定的保护作用。

塞北兔成年体重与体尺、耳型的通径分析

对105只成年塞北兔的体重、体尺、耳型进行了通径分析.结果表明:塞北兔成年体重与体长、胸围、耳长、耳宽的相关系数依次为0.730、0.736、0.465、0.354;通径系数依次为0.526、0.535、0.264、-0.148.通过决定系数与相关原因决定系数的分析,决定系数总和为0.849,误差项决定系数为1～0.849.并建立了塞北兔成年体重的'最优'回归方程.

兔急性肺损伤肺组织中PPAR-γ蛋白表达及美洛昔康的影响

目的:观察内毒素(ET)致兔急性肺损伤(ALI)时肺组织中过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)蛋白表达及美洛昔康的影响,探讨美洛昔康对兔急性肺损伤干预的机制。方法:将24只日本大耳白兔随机分为对照组、致伤组、美洛昔康干预组。用ET(700μg/kg)一次性静脉注射方法复制兔ALI模型,应用美洛昔康(2.5mg/kg)进行干预。采用免疫组织化学技术和Westernblot方法检测肺组织中PPAR-γ蛋白的表达。结果:PPAR-γ蛋白表达在致伤组显著低于对照组(P<0.01),美洛昔康干预组显著高于致伤组(P<0.01)。结论:PPAR-γ蛋白表达在ALI时下调。美洛昔康可促进PPAR-γ蛋白的表达,在一定程度上对兔内毒素性ALI产生保护作用。

家兔急性肺损伤胸部超声与病理的相关性

目的急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征是一种临床常见危重症,本文探讨家兔急性肺损伤胸部弥漫性彗星尾征的病理基础及其对提示病理改变的价值。材料与方法将家兔双侧前胸壁分为上、下肺区,共4区;留取6只家兔每个肺区的正常胸部声像图。按0.1 ml/kg油酸注入后开始计时,动态观察每个肺区的彗星尾征并存储图像,直至1 h结束。按超声评分标准对胸部超声声像图表现进行评分;评估每个肺区的病理损伤程度,并分析与超声结果的相关性。结果 6只家兔全部成功复制急性肺损伤胸部弥漫性彗星尾征动物模型。油酸型动物模型胸部弥漫性彗星尾征的病理改变主要为弥漫性肺水肿、淤血及淤血性出血,4例可见坏死;肺水肿、淤血及淤血性出血的面积百分比自上而下呈逐渐增加的趋势,以双膈叶为著;胸部彗星尾征超声评分与病理损伤程度呈正相关(r=0.819,P<0.05)。结论急性肺损伤胸部弥漫性彗星尾征的组织学改变为肺水肿、淤血及淤血性出血;超声声像图显示的弥漫性彗星尾征的范围和密度,可以提示肺实质内损伤程度,对指导治疗及预后有重要意义。

体位改变对兔急性肺损伤生理和病理的影响

目的:观察不同体位下兔油酸型急性肺损伤(ALI)模型肺生理功能和肺病理的改变。方法:采用油酸型ALI兔模型,分为正常对照组(Ⅰ组)、仰卧位油酸组(Ⅱ组)、俯卧位油酸组(Ⅲ组)、旋转体位油酸组(Ⅳ组),观察各组兔实验过程中血压、心率和动脉血氧分压、呼吸力学、肿瘤坏死因子(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)的变化以及病理的改变。结果:在实验结束时Ⅳ组的心率(176.13±26.55)beats/min低于Ⅲ组(217.75±14.44)beats/min,P<0.05;Ⅲ、Ⅳ组的动脉血氧分压(157.75±51.19和166.08±37.07)mmHg、肺的顺应性(2.75±0.89和2.63±0.74)mL/cmH2O高于Ⅱ组动脉血氧分压(86.59±23.82)mmHg和肺的顺应性(1.63±0.52)mL/cmH2O,P<0.05;Ⅲ、Ⅳ组的肺内分流(20.94±5.23和18.06±5.28)%低于Ⅱ组(29.30±7.54)%,P<0.05;Ⅳ组的气道峰压(19.63±2.45)cmH2O高于Ⅲ组(16.00±2.27)cmH2O,P<0.05;Ⅱ、Ⅳ组TNF-α(3.12±0.83和2.59±0.79)μg/L显著高于对照组(1.36±0.34)μg/L,P<0.05,而Ⅲ组(1.84±0.46)μg/L和对照组差别无显著;3个实验组的动脉血氧分压与肺的顺应性呈明显正相关,与肺内分流呈明显负相关。Ⅱ组光镜下见背侧水肿比腹侧重,Ⅲ组腹侧水肿比背侧重,Ⅳ组腹背侧病变大体一致。结论:俯卧位和旋转体位能改善ALI肺的顺应性、减少肺内分流,改善氧合;但俯卧位比旋转体位安全并能减少TNF-α的产生。体位改变可使肺水肿的分布发生变化。