初生及成年牦牛大脑皮质的转录组分析

旨在分析初生和成年牦牛大脑皮质转录组表达谱,筛选影响大脑皮质发育的候选基因。本研究选取初生(1~7日龄(NYB),n=3)和成年(3~4岁(AYB),n=3)牦牛,放血处死,采集大脑皮质,利用Illumina HiSeq平台对转录组进行测序与分析,筛选得到差异表达基因,在此基础上对差异基因进行GO功能注释、KEGG富集分析和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法验证。测序结果共分析得到了4790个显著差异表达的基因(P<0.05),其中包括2670个上调表达的差异基因,2120个下调表达的差异基因。随机选取了9个差异基因进行qRT-PCR验证,表达趋势与转录组测序结果一致,表明测序结果可靠。GO功能注释发现其中占比较多的条目为与蛋白合成及ATP利用相关的转录调控、RNA聚合酶II正调控转录、蛋白结合及ATP结合;KEGG富集分析发现占比较多与大脑发育相关的通路为调控轴突发育及重塑的轴突导向通路,与神经胶质细胞增殖相关的MAPK信号通路,与突触传递相关的神经活性配体-受体相互作用、PI3K-Akt、钙信号及磷脂酶D信号通路,与免疫防御相关的Toll样受体通路,与低氧适应调控相关的HIF信号通路。从富集通路中发现,Slit2、SEMA 5A、BDNF、Rab 3a、FGF18、HIF 1α、HIF 2α、NGF、VEGF A、CaMK 2A、PLD1、TLR1、TLR 4基因可能是影响牦牛大脑皮质发育的候选基因。上述结果提示,成年牦牛大脑皮质的突触发育、可塑性和传递、免疫防御可能更活跃,并且低氧适应性更强,这为进一步探讨牦牛大脑发育潜在分子机理提供了一定参考。

脂联素及其受体在成年牦牛不同部位皮肤中的差异性分析

为探究脂联素(APN)及其受体(APNR1和APNR2)在成年牦牛不同部位皮肤内的分布和表达情况,以及其在皮肤中可能发挥的作用,选取12头健康成年牦牛,采集毛囊处于生长期的皮肤(颈部、腹部、腋下部和腹股沟部),采用免疫组织化学(IHC)、蛋白免疫印迹(WB)和实时荧光定量PCR(qRTPCR)的方法,对APN、APNR1和APNR2的mRNA和蛋白在成年牦牛皮肤中不同部位的表达和分布进行探究。IHC结果表明,APN、APNR1和APNR2在成年牦牛皮肤的表达部位基本相同,其主要分布于皮肤的表皮层、皮脂腺、汗腺、血管及毛囊的上皮根鞘。WB结果表明,APN、APNR1和APNR2蛋白在颈部和腹部(多毛皮肤)的表达量显著高于腋下和腹股沟部(少毛皮肤)(P<0.05),APNR1在颈部和腹部的表达量显著高于APNR2(P<0.05)。qRT-PCR结果表明,APN、APNR1和APNR2的表达在mRNA水平上存在差异。APN和APNR1的mRNA在颈部和腹股沟部的表达量显著高于腹部(P<0.05);APNR2的mRNA水平在颈部表达量显著高于腹股沟部(P<0.05)。首次在成年牦牛皮肤上检测到了APN、APNR1和APNR2的表达,不同部位皮肤组织中的表达位置基本相同,主要分布于皮肤的表皮层、皮脂腺、汗腺、血管及毛囊的上皮根鞘。同时通过对APNR1和APNR2在蛋白水平上的对比,推测APN主要通过APNR1发挥作用。本研究结果为进一步探究APN、APNR1和APNR2对成年牦牛皮肤和毛囊生长发育的影响提供了理论依据。

青海牦犊牛肉脂肪酸组成分析

分析青海牦犊牛与成年牦牛肌肉脂肪酸组成特点,将肌肉提取脂肪后进行甲酯化,以脂肪酸酯标样作为标准品,采用气相色谱仪对试样的脂肪酸甲酯进行定性与定量。结果显示,牦犊牛的MUFA、PUFA相对含量极显著高于成年牦牛(P<0·01),分别占到总量的32·38%和11·59%,其中油酸、亚油酸含量尤为突出,分别为29·52%、5·72%,而SFA相对含量为53·54%显著低于成年牦牛的61·04%(P<0·05)。牦犊牛PUFA/SFA与n-6/n-3值分别为0·98%、0·22%均极显著高于成年牦牛(P<0·01)。青海牦犊牛肉脂肪酸营养价值更高、更均衡,对牦犊牛的选育、肉品深加工具有一定意义。

青海大通犊牦牛肉与成年牦牛肉品质的比较

用常规方法测定了青海大通犊牦牛肉和成年牦牛肉的产肉性能和食用品质,并研究了犊牦牛肉与成年牦牛肉在成熟过程中肌原纤维超微结构的变化.结果表明:犊牦牛肉的系水力、pH值均高于成年牦牛肉,并且失水率、熟肉率、剪切力均低于成年牦牛肉,说明青海大通犊牛肉比成年牦牛肉食用品质高;在成熟过程中,青海大通犊牦牛肉与成年牦牛肉肌原纤维发生不同程度的轻微断裂,Z线断裂,犊牦牛肉肌原纤维间的横桥交联断裂,结构模糊,说明犊牦牛肉降解效果更加明显.

成年牦牛感染扩展莫尼茨绦虫的局部免疫细胞学反应

为明确扩展莫尼茨绦虫感染成年牦牛所引起的免疫细胞学反应及致病作用,对感染牛的寄生部位进行了观察与研究,并同正常成年牦牛进行了比较。结果表明,扩展莫尼茨绦虫成虫仅寄生于牦牛的小肠。寄生部位的黏膜可见少量出血点,表面附有较多黏液,散在直径2-3 mm的溃疡灶,小肠黏膜集合淋巴小结较对照组发达,数量明显增多。光镜下可见小肠黏膜出血,部分黏膜上皮坏死、脱落,局部黏膜相关淋巴组织增生明显,黏膜层嗜酸性粒细胞大量浸润,浆细胞、杯状细胞和嗜银细胞显著增生,黏膜下层血管周围肥大细胞增多。非寄生部位的组织及器官无明显病变。扫描电镜结果显示寄生部位的肠绒毛断裂或脱落,圆顶区的数量较对照组多,圆顶区滤泡相关上皮中M细胞的数量也较对照组多。研究证实,扩展莫尼茨绦虫感染可引起成年牦牛感染部位强烈的免疫细胞学反应,表明成年牦牛肠道黏膜的抗感染能力较强,故寄生虫对其致病作用较弱。

日粮组成对成年牦牛消化和能量代谢的影响

在海拔3980m的果洛州大武乡对3头成年牦牛饲喂3种不同的日粮,按3×3拉丁方设计安排消化代谢试验,结果表明:(1)随日粮中精料比例的增加,粗蛋白的消化率逐渐升高,而其它各营养成分的消化率则逐渐降低,且日粮粗蛋白、粗灰分和能量消化率之间的差异显著(P<0.05),干物质和有机物质消化率之间的差异不显著(P>0.05);(2)能量代谢率和消化能转化为代谢能的效率之间的差异显著(P<0.05),且其平均转化效率为0.77;(3)钙、磷食入量之间的差异不显著(P<0.05),磷存留量随日粮中精料比例的增加而增加;钙存留量在B日粮下最大,B日粮显著高于A和C日粮。

西藏嘉黎成年母牦牛体重与体尺指标的相关与回归分析

[目的]分析嘉黎成年母牦牛体尺指标与体重的相关性,并进一步进行了估测体重的回归分析,以指导该品种的生产实际及选育工作。[方法]以西藏嘉黎县测量的64头嘉黎成年母牦牛的体尺数据为基础,分析了嘉黎成年母牦牛体重与体高、体长、胸围、管围的相关系数,同时,进一步分析了估测成年母牦牛体重的回归模型。[结果]嘉黎成年母牦牛体重与体高、体长、胸围、管围的相关系数分别为0.887、0.828、0.807、0.712,经检验,体高、体长、胸围、管围与体重的相关系数达到了极显著水平(P<0.01);得到了3个估测体重的回归模型,估测值与实测值之间的相关程度分别为0.854、0.787和0.843。[结论]嘉黎成年母牦牛体重与体高、体长、胸围、管围存在明显的线性相关。

不同地区成年牦牛肉营养成分比较

为比较不同地区成年牦牛肉营养成分差异,以四川省九龙县、云南省迪庆州和新疆省巴州3个地区年龄在7岁左右的阉牦牛为研究对象,对其背最长肌肉样常规营养成分粗蛋白、粗脂肪、灰分、干物质、胆固醇及氨基酸和脂肪酸各组分的含量进行了系统的实验比较和分析。并利用主成分分析找出三个地区幼年牦牛肉的异同点,以实现对它们的区分,为各个地区牦牛肉资源的开发利用提供理论依据。实验结果表明:营养成分除了粗蛋白、灰分和干物质含量无明显差异(p>0.05),粗脂肪、胆固醇、氨基酸各组分及脂肪酸各组分含量上存在显著差异(p<0.05)或极显著差异(p<0.01)。新疆省巴州牦牛肉粗脂肪和胆固醇含量最高,云南省迪庆州牦牛肉粗脂肪含量最低,四川省九龙县牦牛肉胆固醇含量最低;氨基酸各组分除了脯氨酸含量上四川省九龙县牦牛肉的脯氨酯含量显著高于新疆省巴州牦牛肉(p<0.01),其余氨基酸含量三个地区牦牛肉均无显著差异(p>0.05);脂肪酸各组分的含量差异较大。三个地区牦牛肉质存在较大差异,但均具有"高蛋白、低脂肪、营养丰富"的特点,四川省九龙县牦牛肉氨基酸含量最为丰富,新疆省巴州牦牛肉不饱和脂肪酸最为丰富。

成年牦牛汗腺和皮脂腺的组织学特征

目的探讨青海健康成年牦牛汗腺和皮脂腺的组织学特征。方法从10头健康成年牦牛背部、肋部和腹部皮肤取样,运用HE、过碘酸-雪夫(PAS)和阿利新蓝-过碘酸-雪夫(AB-PAS)染色法,对汗腺和皮脂腺组织学结构进行观察与分析。结果青海成年牦牛背部、肋部和腹部皮肤的汗腺为单管状腺,属于顶浆分泌型腺体,其分泌物为中性和酸性混合液,腺细胞胞质中含有糖原。皮脂腺呈葡萄状、多叶且分支的泡状腺,属于全浆分泌型腺体,其分泌物为中性黏液,腺细胞胞质中含有少量糖原。汗腺的密度、直径、长度和体积从背部到腹部呈递减趋势,但距离皮肤表面的深度呈递增趋势,且部位间差异显著(P<0.05)。皮脂腺的密度、导管部直径和长度、分泌部直径和长度及距离皮肤表面的深度从背部到腹部呈递减趋势,且部位间差异显著(P<0.05)。结论青海成年牦牛背部、肋部和腹部皮肤的汗腺和皮脂腺形态学结构相似,但其密度、大小和深度差异显著,且从背部到腹部存在渐变趋势。与其他牛类相比,牦牛汗腺和皮脂腺的密度高,但前者的分泌功能不发达而后者发达,这可能与其为了适应高原高寒环境有关。

Ⅳ型胶原蛋白在成年牦牛生精小管的定位及分布特征

采用H．E和Masson特殊染色以及免疫组织化学法结合形态计量学统计分析，对成年牦牛（5～7岁）生精小管中的Ⅳ型胶原蛋白进行定位，研究其分布特征．结果表明：睾丸生精上皮结构清晰，有4～8层细胞，胶原纤维分布于生精小管固有膜和间质血管壁上；免疫组织化学染色观察Ⅳ型胶原蛋白在sertoli细胞、各级生精细胞及精子上呈强阳性表达，血管内皮细胞有阳性表达，生精小管基膜及管周肌样细胞为弱阳性表达，而leydig细胞几乎元表达；Ⅳ型胶原蛋白的相对表达量在sertoli细胞及各级生精细胞显著高于在leydig细胞和管周肌样细胞中（P〈0．05），但在固有膜和管周肌样细胞之间的相对表达量无显著差异（P〉0．01）．IV型胶原蛋白在成年牦牛睾丸中的分布特征与胶原纤维分布相一致，sertoli细胞和管周肌样细胞在合成及分泌Ⅳ型胶原蛋白中发挥作用．

青海高原不同源原头节感染犬后细粒棘球绦虫成虫的形态学观察

本文对青海高原藏羊、牦牛体内棘球蚴和原头节实验感染犬后获得的细粒棘球绦虫成虫进行了形态学观察和测量。结果表明二者在某些形态学上有显著差异,很可能是不同的虫株。牦牛-犬型细粒棘球绦虫的形态与世界各地报道过的虫株相比,有其独特之处,很可能是存在于我国的独立株系。

IGF-1和IGF-2在成年牦牛皮肤毛囊生长周期中的表达与定位

为探究胰岛素样生长因子1(IGF-1)和胰岛素样生长因子2(IGF-2)对成年牦牛皮肤毛囊生长周期转换的影响,本研究采集成年牦牛毛囊生长期、退行期和休止期的皮肤,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、蛋白免疫印迹(Western blot)和免疫组织化学(IHC)方法检测IGF-1和IGF-2在毛囊生长周期过程中皮肤的表达与定位。qRT-PCR结果显示,IGF-1和IGF-2 mRNA转录水平均在毛囊生长期皮肤中最高,在休止期皮肤中最低,且在各个时期之间差异显著(P<0.05)。Western blot结果表明,IGF-1和IGF-2蛋白表达量均在毛囊生长期皮肤中最高,且显著高于毛囊退行期和休止期皮肤(P<0.05)。IHC结果显示,IGF-1和IGF-2在毛囊生长期、退行期和休止期皮肤中表达位置基本相同,主要定位于皮肤表皮、毛囊外根鞘和毛母质细胞。综上所述,IGF-1和IGF-2都参与毛囊生长周期的调控,并具有协同作用的关系,且该过程可能通过影响上皮细胞的活性来促进毛囊的生长。本研究结果为进一步探讨IGF-1和IGF-2在牦牛毛囊周期循环中的调控机制提供了理论依据。

牦牛海马的形态特征及成体神经发生的初探

采用传统H.E染色和Golgi-Cox染色方法观察成年牦牛海马结构的形态和细胞构筑,并通过DCX-DAB免疫组化染色和DCX/NeuN、GFAP/NeuN双重免疫荧光标记等技术观察齿状回颗粒下层中的新生神经元和放射状胶质细胞。结果表明,牦牛海马结构主要包括齿状回和海马本部,二者分层清晰。海马的主要细胞为颗粒细胞、苔藓细胞和锥体细胞。CA3区的锥体细胞胞体较CA1区的大,但其顶树突的平均长度较短。CA1区的锥体细胞明显分为两层,而CA3区的则为一层。DCX阳性细胞的胞体主要集中在齿状回颗粒下层靠近门区处,沿颗粒层内侧单个或少数聚集分布。沿齿状回颗粒下层分布着一层GFAP阳性的放射状胶质细胞样细胞,其胞质和单极性的细长突起均呈GFAP阳性,而胞核为阴性。在整个海马结构中均有大量星形GFAP阳性细胞散在分布,特别是海马分子层和门区内靠近颗粒层部分的密度较其它部位大。牦牛海马的形态结构与绵羊的相似,而与大鼠、小鼠、家猫、兔子等小型哺乳动物有一定差别。两种DCX免疫组化实验结果表明在牦牛海马中存在着新生神经元。GFAP免疫荧光标记表明,牦牛海马结构中分布有星形胶质细胞;特别是放射状胶质细胞。

成年牦牛与黄牛肺内肺动脉结构组织和形态学比较分析

运用组织学研究方法,比较成年牦牛和平原黄牛肺动脉的结构组织和形态学差异,初步探讨成年牦牛肺动脉对低氧的适应性结构。结果表明,成年牦牛肺动脉管壁直径小于200μm时,仍含有较多的弹性纤维,在直径为50μm的肺动脉管壁中,仍存在1-2层完整的平滑肌。而成年黄牛其肺动脉管壁直径小于100μm时,其管壁中含有的弹性纤维比成年牦牛直径大小相似的肺动脉管壁中的弹性纤维少,平滑肌消失或呈月牙状分布,但外弹性膜完整。成年平原黄牛肺动脉血管中膜的MT值随管径的增加逐渐减小,成年牦牛肺动脉血管中膜MT值在管径为100-200μm时最大,然后逐渐减小。至肺门部时,其肺动脉血管中膜MT值接近相等,且差异不显著。因此,成年牦牛肺动脉含有的弹性纤维比成年平原黄牛多,该结构特点是成年牦牛在高原低氧环境下维持肺动脉较好射血功能的结构基础,此外,与成年黄牛比较可见,成年牦牛50μm直径的肺微动脉仍具有完整的平滑肌层,这一现象可能是牦牛在高原低氧环境下维持较好血流的结构基础。