不同生长期凡纳滨对虾肝胰腺NAGase的基本性质变化

凡纳滨对虾[Lifopenaeusvannamei（Boune1931）]N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（β-N—acetyl-D-glucosaminidase，简称NAGase。EC3．2．1．52）与周期性蜕壳和生长密切相关．我们研究了凡纳滨对虾肝胰腺中该酶的活力与部分性质在不同生长期的变化，结果表明：在不同生长期该酶活力有较大的变化，幼体虾的酶活力为每mg蛋白40U，随着虾的生长，酶活力迅速下降，当养殖到第6周时，酶活力下降到每mg蛋白18U，达到最低点．随后，酶活力随着虾的长大快速增大，当养殖到成虾时，酶活力达到最高值，为每mg蛋白58U，不同生长期的酶，其最适pH均在5．5～6．0之间，最适温度由原来的34℃改变为37℃，同时测定不同生长期酶的动力学参数（Km、Vm）、酶促反应活化能（En）及对Cu^2＋、Zn^2＋和Hg^2＋的敏感性并进行了相应的比较．

油茶乙酰CoA酰基转移酶基因cDNA克隆及序列特征分析

在已知油茶乙酰COA酰基转移酶基因EST序列基础上,设计6条特异引物,以油茶优良无性系‘湘林1号’种仁总RNA为模板,通过反应体系和反应条件优化,最终扩增出一条700 bp左右的目的片段,将该片段回收、克隆、测序,获得718 bp的cDNA序列,将该序列与油茶乙酰COA酰基转移酶基因进行序列拼接,确定了油茶乙酰COA酰基转移酶基因的全长cDNA序列,将该序列提交至GeneBank,登录号为GU594059。油茶乙酰COA酰基转移酶基因全长cDNA序列为1 495 bp,含有一个1 227 bp的ORF,编码408个氨基酸残基。在氨基酸序列水平上,该基因与胡黄连(P.kurrooa)的乙酰COA酰基转移酶基因的相似性最高,为86%,与稻瘟病菌(M.grisea)的最低,为65%。通过在线预测,油茶乙酰COA酰基转移酶基因编码蛋白的等电点pI为6.19,分子量Mw为41 628.6 Da。本研究为揭示油茶油脂合成规律和油茶的分子育种提供了理论依据和科学基础。

分光光度法测定水产品中甲醛含量的研究

研究采用乙酰丙酮分光光度法测定水产品中的甲醛含量,对样品的前处理过程进行了比较系统的探讨,确定了比色测定参数,并对其用于快速测定水产品中甲醛含量的可行性进行了讨论。实验结果表明,用冰浴浸泡法前处理样品时,最佳浸泡时间为10 min,样液pH值用100 g·L-1氢氧化钾溶液调至6;沸水浴中最佳显色时间为3 min,比色波长为412 nm;当甲醛含量在0～2.5μg.mL-1范围内时,该方法具有很好的线性关系(R2=0.9998);与蒸馏法前处理样品相比,该方法的加标回收率比较高,在89.50%～94.25%之间,而前者为64.17%～76.92%;该方法的RSD(%)为2.93%,样品的最低检出浓度为0.9 mg·kg-1。

月月桂AACT基因的cDNA全长克隆及生物信息学分析

为了克隆分离月月桂AACT(乙酰辅酶A酰基转移酶)全长基因,并研究其基因特征和蛋白结构,以月月桂花瓣RNA为模板,通过反转录PCR及RACCE技术分离克隆AACT全长。再利用NCBI网站及生物信息学软件对其碱基分布、氨基酸组成、亲疏水性、二级结构、保守区及三级结构进行预测和分析,并对10个物种的AACT氨基酸进行多重比对,对基因进行进化分析。分离克隆出AACT基因的cDNA序列长为1580bp,编码405个氨基酸,该蛋白质相对分子质量为41347.89D,等电点为5.66,其中Ala含量最高为14.53%,平均疏水值为0.215,属Cond-enzymes超家族。氨基酸序列比对中,胡黄连、假马齿苋氨基酸序列同源性最高。OsAACT基因稳定,编码的蛋白为疏水性蛋白,其在进化过程中相对保守。试验获得的基因信息为萜类物质合成途径进一步研究奠定基础。

白藜芦醇衍生物白皮杉醇和乙酰化白藜芦醇辐射防护作用研究

目的:研究白藜芦醇(resveratrol)衍生物白皮杉醇(piceatannol)和乙酰化白藜芦醇(acetylated resveratrol)对受照射淋巴母细胞AHH-1和小鼠的辐射防护作用。方法:运用CCK-8试剂盒检测不同浓度(0、10、20、50、100和500μmol/L)白皮杉醇和乙酰化白藜芦醇作用72 h对AHH-1细胞的毒性作用,以及不同终浓度(0、10、20和50μmol/L)白皮杉醇和乙酰化白藜芦醇预处理AHH-1细胞2 h后对经4 Gy ^(60)Coγ射线照射的细胞存活率的影响。并进一步观察白藜芦醇、白皮杉醇和乙酰化白藜芦醇对^(60)Coγ射线辐射损伤模型小鼠外周血白细胞和受照后30 d内小鼠平均存活时间的影响。结果:与对照细胞(0μmol/L)相比,10、20和50μmol/L白皮杉醇和乙酰化白藜芦醇作用AHH-1细胞72 h对细胞存活无明显影响(P>0.05),但可显著提高受照AHH-1细胞的存活率(P<0.05或P<0.01)。受照后24 h,乙酰化白藜芦醇中(100 mg/kg)、高(200 mg/kg)剂量组小鼠外周血白细胞数与照射对照组相比显著升高(P<0.05)。与正常对照组比较,照射对照组小鼠外周血白细胞数和受照30 d内小鼠平均存活时间显著降低(P<0.05);与照射对照组相比,白藜芦醇和乙酰化白藜芦醇高(100 mg/kg)剂量组小鼠受照后30 d内平均存活时间明显延长(P<0.05)。结论:白藜芦醇衍生物白皮杉醇和乙酰化白藜芦醇均对受照射淋巴母细胞AHH-1细胞具有一定的辐射防护作用;乙酰化白藜芦醇对受照射小鼠亦具有显著的辐射防护作用。

乙酰化己二酸糯玉米双淀粉制备工艺研究

采用己二酸与醋酸混合酸酐对糯玉米淀粉进行双重变性制备乙酰化己二酸双淀粉。通过单因素试验,研究了试剂用量、pH值、反应时间、反应温度对沉降积和乙酰基含量的影响。采用正交实验设计确定最佳制备工艺条件为:pH值8,反应时间1h,反应温度40℃,试剂用量为淀粉质量的7%。

姜黄素防治大鼠高脂血症致肾脏损害的实验研究

目的:探讨姜黄素防治大鼠高脂血症致肾脏损害的作用。方法:喂食高脂饲料(膏粱厚味)造成大鼠高脂血症致肾脏损害模型,姜黄素(高、中、低剂量)同时干预给药,分别检测血脂(TG、TC、HDL-C、LDI-C)、血液流变学、24h尿蛋白量、尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)、肾功能(Scr、BUN)、肾组织病理(肾脏指数、系膜基底膜面密度、毛细血管襻面密度)。结果:姜黄素能改善高脂血症大鼠TC、TG、LDL-c、全血黏度、血浆黏度,并能降低尿蛋白量、尿NAG、肾脏指数、系膜基底膜面密度,提高毛细血管襻面密度,呈现量效依赖关系。结论:姜黄素能防治大鼠高脂血症致肾脏损害,以高剂量姜黄素作用最为显著。

机械活化乙酰化淀粉用作尿素缓释膜的研究

[目的]研究机械活化乙酰化淀粉用作尿素缓释膜,为在农业上应用机械活化乙酰化淀粉制作尿素缓释膜提供技术依据。[方法]采用浇铸法制备乙酰化淀粉膜,研究了取代度、铸膜液溶剂种类、铸膜液浓度和铸膜液温度对膜性能的影响。以淋溶法对包膜尿素释放特性进行评价。[结果]机械活化木薯乙酰化淀粉成膜性能好,工艺简单,操作简便;包膜尿素淋溶9次后尿素总溶出率为57.73%,比普通尿素的尿素总溶出率降低39.45%。[结论]用机械活化乙酰化淀粉包膜尿素后,对尿素态氮有释放有明显的缓释放作用。

术前不同时长睡眠剥夺对大鼠认知功能的影响

目的观察术前不同时长睡眠剥夺(sleep deprivation,SD)对大鼠术后认知功能和海马胆碱乙酰转移酶(choline acetyl transferase,ChAT)表达的影响。方法 40只14个月龄Wistar大鼠,雌雄各半,随机分为四组:正常对照组(C组)、D1、D2、D3组,每组10只。D1、D2、D3组分别术前剥夺睡眠1、2、3d。四组大鼠均进行Morris水迷宫训练。C组于第五天行脾切除手术,D1、D2、D3组行睡眠剥夺,结束后对大鼠行脾切除手术。术后24h进行水迷宫测试,免疫组化法测定海马ChAT阳性细胞的表达。结果与C组比较,术后D1、D2、D3组逃避潜伏期及游泳距离明显延长、ChAT的表达明显减少(P<0.05)。D1、D2、D3组随着SD时间的延长,逃避潜伏期和游泳距离明显延长(P<0.05),ChAT的表达明显减少(P<0.05)。结论术前睡眠剥夺可引起大鼠术后空间学习记忆功能减退,且时间越长功能减退越明显。

葛根素乙酰化衍生物的合成和生物利用度研究

本文利用乙酸酐和葛根素反应制备葛根素全乙酰化产物，经碳酸氢钠溶液进行不完全水解，用硅胶层析法对水解产物进行分离，通过紫外、红外、核磁共振和质谱等方法对产物进行鉴定，测定其口服生物利用度。获得四乙酰、五乙酰和六乙酰葛根素，口服生物利用度分别为葛根素的2．24，1．67和1．15倍。结果表明葛根素乙酰化衍生物的口服生物利用度高于葛根素，其中四乙酰葛根素口服生物利用度最高。

全乙酰吡喃溴代糖的一锅法简便合成

将还原糖和乙酸酐在无溶剂和氨基磺酸催化的条件下进行全乙酰化后再与33%的溴化氢/冰醋酸溶液反应一锅法合成标题化合物。与以往分步方法相比,该一锅法简化了操作步骤、节约了反应时间、反应高效经济、环境友好,是一种经济适用的制备全乙酰溴代糖的方法。

系统性红斑狼疮患者尿N-乙酰-β-氨基葡萄糖苷酶水平及其临床意义的研究

目的探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者尿中N-乙酰-β-氨基葡萄糖苷酶(NAG)水平及其临床意义。方法根据尿微量蛋白结果将65例SLE患者分为单纯肾小管受累组(n=30)和肾小管与肾小球均受累组(n=35)。21例健康体检者作为对照组。散射比浊法和比色法检测尿中NAG水平。结果组间比较显示:单纯肾小管受累组和肾小管与肾小球均受累组的尿NAG水平均显著高于对照组(P<0.05),而单纯肾小管受累组和肾小管与肾小球均受累组的尿NAG水平无明显差异(P>0.05)。65例SLE患者尿NAG与尿β2-微球蛋白呈显著的正相关性(r=0.96,P<0.05)。结论 SLE患者的尿检结果提示肾小管的病变可单独存在,而肾小球病变与肾小管病变同时存在。狼疮肾炎患者尿NAG水平显著增高,且与肾小管病变密切相关。

3-乙酰基-6-苯甲酰基-N-乙基咔唑的合成

The novel carbazole derivative — 3-biacetyl-6-benzoyl-N-ethylcarbazole was synthesized through alkylation and Friedel-Crafts acylation from carbazole.The structure of the target compound was characterized by 1HNMR,13CNMR,UV,IR and elemental analysis.The optimal synthetical conditions for the monoacylation was achieved by carrying out orthogonal experiments:when the mole ratio of benzoyl chloride and N-ethyl-carbazole was1.2:1,while the mole ratio of catalyst and N-ethylcarbazole was 1.2:1 at 25℃for 3h.The yield was about 94.6%.

利用超声波辅助合成乙酸苯酯

以苯酚和乙酰氯为原料,直接反应合成了乙酸苯酯,研究了反应时间、原料配比,溶剂用量等条件对合成反应的影响,从而确定了合成乙酸苯酯的最佳工艺条件:n(苯酚):n(乙酰氯)=1∶1.2,在超声波作用下室温反应40min,收率达98.53%。

大豆脑磷脂乙酰化改性及其乳化性能测定

以乙酸酐为乙酰化试剂,嘧啶作为弱碱性催化剂,对大豆脑磷脂进行乙酰化改性。通过正交试验优化反应条件:嘧啶用量为30mmol/100g·LEIF,温度为56℃,反应时间为50min,乙酸酐用量为60mmol/100g·LEIF时,脑磷脂乙酰化率(PECD)可达96.4%。对脑磷脂乙酰化之前与之后的乳化性能进行比较表明,乙酰化脑磷脂的乳化稳定性优于高脑磷脂含量的大豆磷脂。

曲古抑菌素A对人胃癌SGC-7901细胞凋亡及其RASSF1A基因表达的影响

目的探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(TSA)对人胃癌SGC-7901细胞凋亡及其RASSF1A基因表达调控的影响。方法用0.1、0.3、1.0μmol/LTSA分别处理人胃癌SGC-7901细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡率,RT-PCR、Western blot分别检测RASSF1AmRNA和蛋白表达水平。结果流式细胞仪分析表明,不同浓度TSA可诱导SGC-7901细胞凋亡,并呈浓度及时间依赖性(P<0.05)。TSA干预前SGC-7901细胞无RASSF1AmRNA及蛋白表达,而不同浓度TSA处理SGC-7901细胞后,RASSF1AmRNA及蛋白表达分别上调,呈浓度及时间依赖性(P<0.05)。结论TSA诱导SGC-7901细胞凋亡可能与RASSF1A基因异常乙酰化状态恢复导致基因重新表达有关。

尿N-乙酰-β-氨基葡萄糖苷酶在老年心血管疾病病人急性发作期的临床意义

目的研究尿N-乙酰-β-氨基葡萄糖苷酶(NAG)在老年心血管疾病病人急性发作期的临床意义。方法选择2016年5月至2017年5月北京同仁医院老年科收治的年龄≥60岁的住院病人207例,分为急性期组94例和对照组113例,并将急性期组分为重度动脉硬化组23例和轻度动脉硬化组71例。记录一般情况,观察并比较糖化血红蛋白(HbA1c)、血清肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)、尿酸(UA)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、NAG水平,计算并比较动脉粥样硬化指数(AI)及肾小球滤过率(eGFR)。结果急性期组除HbA1c外其他生化指标与对照组比较,差异均无统计学意义(P>0. 05),但NAG水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0. 05)。重度动脉硬化组各生化指标与对照组比较,差异均无统计学意义(P<0. 05),但尿NAG值显著高于轻度动脉硬化组,差异有统计学意义(P<0. 01)。结论尿NAG不仅对老年心血管疾病病人急性发作期有很好的预测价值,而且可能作为一种炎症因子成为动脉粥样硬化进展的预测指标。

N-乙酰肌肽滴眼液的研制和抗白内障药效评价

制备了N-乙酰肌肽滴眼液,室温放置2年,稳定性良好。家兔眼刺激性试验显示制品无明显刺激性。大鼠亚硒酸钠白内障模型试验显示,N-乙酰肌肽滴眼液可延缓晶状体混浊度的进程,明显提高超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶活性,降低丙二醛的含量,减少不溶性蛋白的产生。制品中剂量组的疗效与阳性对照药吡诺克辛钠滴眼液和苄达赖氨酸滴眼液相近。

白藜芦醇乙酰阿魏酸酯的合成

合成了白魏藜芦醇乙酰阿魏酸酯。以阿魏酸为原料与乙酸酐先制得乙酰阿魏酸,再与二氯亚砜反应制得乙酰阿魏酰氯,然后和白藜芦醇反应合成白藜芦醇乙酰阿魏酸酯,并用IR、MS、1H NMR等方法确证了结构。结果表明:该方法具有工艺简单,产率较高,操作方便等优点。

醇、醛类有机物对中华绒螯蟹N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的影响

以甲醇、乙醇、异丙醇、甲醛和戊二醛为效应物,研究它们对中华绒螯蟹N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)活力的影响.结果表明:戊二醛对NAGase活力影响不大;低浓度的甲醇和乙醇对NAGase有激活作用;高浓度的甲醇、乙醇、异丙醇和甲醛对NAGase的作用为可逆抑制.甲醇、乙醇、异丙醇对NAGase表现出竞争性抑制,抑制常数(KI)分别为3.663、0.360和0.480 mol.L-1;甲醛表现为非竞争性抑制类型,其KI为0.288 mol.L-1.