亲和色谱-氢化物发生原子荧光分光光度法纯化检测人血浆中的硒蛋白-P

开发了两步亲和色谱法:肝素-琼脂糖凝胶、Ni-琼脂糖凝胶色谱纯化人血浆中硒蛋白-P的方法,并采用氢化物发生-原子荧光分光光度法(HG-AFS)检测,成功搭建了硒蛋白-P的纯化检测平台。确定了亲和色谱纯化的最佳梯度洗脱条件,通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)定性检测,得到了一定纯度的硒蛋白-P,其回收率达43.2%。HG-AFS方法的线性相关系数为0.999 1,检出限为0.09μg/L,日内精密度(RSD)为0.12%,日间精密度(RSD)为0.27%,加标回收率为95%～104%。该亲和色谱纯化方法简单易控、回收率高,HG-AFS检测灵敏度高,结果准确可靠。

用聚焦层析法纯化人巯基蛋白酶抑制肽C-hCRI_c

以肾衰病人尿为材料,通过碱变性、酸变性和热变性除去部分杂质和尿蛋白。然后用羧甲基-木瓜蛋白酶-琼脂糖4B亲和层析,最后用多缓冲剂聚焦层析,把人的巯基蛋白酶抑制肽C(human cysteine proteinase inhibitor C,简称 hCPI_C)和其他的hCPI_C分开,制备得高纯度、高活性的hCPI_C。在SDS-PAGE中为均一条带,每mg蛋白可抑制50单位木瓜蛋白酶活性的50-63％。

血清碱性磷酸酶的凝集素亲和层析在肝脏疾病鉴别诊断中的应用

血清碱性磷酸酶（ＡＬＰ）通过ＷＧＡ亲和层析柱后，可分成不结合的峰Ⅰ和结合的峰Ⅱ两个活力峰，峰Ⅰ为肝型（Ｌ－ＡＬＰ），而峰Ⅱ为骨型（Ｂ－ＡＬＰ）。Ｌ－ＡＬＰ在急性肝炎时明显增高；慢性肝炎或肝癌时轻度上升，而肝硬化时变化不大。如将Ｌ－ＡＬＰ再通过欧蔓陀罗凝集素（ＤＳＡ）亲和层析柱，则正常血清Ｌ－ＡＬＰ完全不被ＤＳＡ结合；急性肝炎的血清Ｌ－ＡＬＰ有部分为弱结合；慢性肝炎和肝硬化除弱结合组分外，出现较多的中度结合组分；而原发性肝癌则出现中度结合组分及特有的强结合组分。这些结果说明肝病越发展成慢性或恶习性或恶性，血清Ｌ－ＡＬＰ和ＤＳＡ的结合力越强。这可应用于临床上鉴别各类不同肝的。肝病血清Ｌ－ＡＬＰ结合于ＤＳＡ增多的原因主要是Ｎ－连接型糖链的无线数增加，后者尚可从天线末端唾液酸增多以及强结合组分不被ＣｏｎＡ结合而获得证明。

sFGFR3的原核表达及其对乳腺癌细胞增殖的抑制作用

成纤维细胞生长因子(FGFs)是一类高效的细胞分裂、成形促进剂,以及血管生成的诱导物。FGF信号通路是与癌症的发生和发展紧密相关的。可溶性成纤维细胞生长因子受体(sFGFRs)能够与FGFs相结合,从而阻断它们的信号。为了研究sFGFR3对乳腺癌细胞增殖的抑制作用,作者利用从人类胎盘组织中提取的总RNA,通过逆转录聚合酶链式反应技术(RT-PCR),扩增了FGFR3IIIc的胞外域(sFGFR3)。克隆了sFGFR3片段并将其插入到pET3c载体中,然后在大肠杆菌BL21(DE3)中以包涵体的形式进行表达。通过凝胶层析和肝素亲和层析,分离和纯化了成功重折叠的蛋白。sFGFR3的重折叠率为10.2%,纯化后的蛋白其纯度高达95%。3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)处理后的细胞扩增分析结果显示,sFGFR3能够有效抑制乳腺癌细胞BT549的增殖,且其抑制不具有剂量依赖性。