犬瘟热琼脂扩散试验方法的建立及初步应用

采用犬瘟热鸡胚成纤维细胞弱毒疫苗免疫绵羊制备琼脂扩散抗体，应用犬瘟热病貉肝脏（电镜检查“＋＋”以上）制备琼脂扩散抗原，建立了琼脂扩散试验方法，用于犬瘟热病死动物肝、脾脏器中病毒抗原成分的检出。检测送检病料１０份，与电镜检查结果比较，阳性符合率为８５．７％（６／７），阴性符合率为７５％（３／４），总体符合率为９０％（９／１０）。本方法特异、敏感，操作简便，易于推广应用。

“全胚双氟碳法”制备禽脑脊髓炎琼扩抗原的研究

用禽脑脊髓炎病毒 (AEV) Van Rockel毒株接种 6日龄 SPF鸡胚 ,感染 11d后 ,分别收集鸡胚、绒毛尿囊膜及尿囊液 ,鸡胚剔除羽毛、眼球、爪和喙后与绒毛尿囊膜一起 ,制成匀浆 ,反复冻融 3次。通过 2次氟碳 (三氯三氟乙烷 )从全胚匀浆中萃取制备 AE琼扩抗原 (AGP- Ag)。用进口标准 AE AGP试剂进行标化 ,结果发现 :制备的 AE AGP- Ag与标准阳性血清之间有清晰、致密的沉淀线 ,并与标准 AE AGP- Ag的沉淀线完全吻合 ,表明两者的沉淀反应一致 ,从而建立了 AE AGP- Ag制备新方法——“全胚双氟碳法”。其制备 AEAGP- Ag有如下特点 :1产量高 ,平均每 3个 SPF鸡胚可获得 1m L AE AGP- Ag;2特异 ,与类症阳性血清无交叉反应 ;3敏感 ,AGP试验中毋需重复加样 ,普通琼脂板即可出线 ;4稳定性好 ,保存期长 ;5与标准 AEAGP- Ag阳性检出符合率均达 10 0 %。本研究表明用“全胚双氟碳法”制备的 AEAGP- Ag达到了进口标准 AEAGP- Ag质量 ,可用于 SPF鸡 AE抗体的监测 ,且生产成本低 ,也可用于商品鸡

牛病毒性腹泻病毒地方株的分离与鉴定

从河南省不同地区规模化肉牛场牛病毒性腹泻 (BVD)疑似病例中采集病料 ,将处理好的 6份病料接种MDBK细胞 ,并盲传 4代 ,得到了 2株可产生细胞病变的病毒。 2株病毒的TCID50 分别为 10 - 5.59和 10 - 5.51;琼脂扩散试验表明 ,2株病毒均能与牛病毒性腹泻病毒 (BVDV)OregonC2 4 标准阳性血清反应 ,出现沉淀线 ;中和试验表明 ,2株病毒均能被BVDV标准阳性血清中和 ,中和指数分别为 10 3.30 和 10 3.16 ;电镜观察到圆形 ,直径为 4 0～ 6 0nm ,有囊膜 ,囊膜表面有突起的病毒粒子 ,与BVDV颗粒基本一致。因此 ,确定分离的 2株病毒均为BVDV ,分别将其命名为HN - 1株和HN - 2株。

应用核酸斑点杂交法检测鹅细小病毒(GPV)

利用鹅细小病毒 (GPV)核酸探针 ,设计并建立了核酸斑点杂交法 ,用以检测 GPV核酸。该方法特异性与敏感性均较好 ,其敏感度可达 3pg。应用该方法对 4例病变典型的小鹅瘟患鹅组织器官进行检测 ,结果表明 ,患鹅脏器中 ,小肠、心、肝、胰、脾组织含毒量较高 ,其中小肠组织含毒量最高 ,而脑组织中含毒量较低。应用琼脂扩散试验验证了核酸斑点杂交法的检测结果。

应用反向间接血凝试验检测山羊痘病毒抗原

以兔抗山羊痘病毒IgG致敏绵羊红细胞,采用反向间接血凝试验(RPHA)检测山羊痘病毒抗原.该诊断试剂与山羊痘病毒抗原发生特异性的凝集反应;在PBS中不自凝;与其它动物病病毒抗原无交叉反应.对贵州省8个疫区现场采集山羊痘待检抗原检测结果表明,该方法阳性检出率为87.5%(7/8),与琼脂扩散试验(AGP)阳性检出率为50%(4/8)相比较,RPHA敏感性比AGP高;同时对山羊痘野生强毒H-GZ株F1～F5代细胞培养物进行检测,F1代就可检出RPHA效价,而AGP则不能检测.该诊断试剂可用于兽医临床上山羊痘的快速诊断及作为病毒分离培养的检测指标.

二维琼脂凝胶体系中过渡金属离子对草酸钙晶体生长和周期性沉淀的影响

在二维凝胶圆盘体系中,研究过渡金属离子对草酸钙晶体生长和周期性环状沉淀的影响,并对其形成机理进行探讨。结果表明:在一定浓度的Fe3+存在下,体系中出现了周期性环状沉淀现象。同时发现在此条件下抑制了一水合草酸钙(COM)晶型生成。此外,加入Zn2+、Co2+、N i2+体系中的晶体都以二水合草酸钙(COD)为主;而加Cu2+离子的圆盘中,三水合草酸钙(COT)占据了主要的成分,这说明不同的过渡金属离子对三种草酸钙晶型的生成影响不同。另外,还对出现的与尿结石有关的特殊现象(白斑和放射状的条纹)进行了探讨。

马立克氏病疫苗免疫鸡群强毒攻击后羽囊排毒情况

分别以血清型Ⅱ型马立克氏病病毒（ＭＤＶ）疫苗株（Ｚ４、ＳＢ１）、血清Ⅲ型火鸡疱疹病毒（ＨＶＴ）疫苗株（ＦＣ１２６）及二价疫苗（Ｚ４＋ＦＣ１２６、ＳＢ１＋ＦＣ１２６）免疫鸡群，用琼脂扩散试验（ＡＧＰＴ）检查各鸡群ＭＤＶ强毒攻击后不同时期的羽囊抗原。结果，二价苗能使试验鸡羽毛囊强毒排出高峰推迟，排毒率显著下降。

山羊痘病毒增殖与沉淀抗原制备

取山羊痘分离野生强毒H -GZ株通过Vero -E6细胞传代增殖 ,经硫酸铵盐析与SephadexG - 2 0 0层析制备了山羊痘病毒沉淀抗原。该抗原在琼脂扩散反应和对流免疫电泳的试验中能够与山羊痘参考阳性血清、山羊痘免疫阳性血清出现沉淀线 ,所形成的沉淀反应能够被山羊痘参考阳性血清特异性地抑制 ,与其它常见的动物病血清不发生交叉反应。本次制备的山羊痘病毒沉淀抗原和山羊痘免疫阳性血清 ,可以用于兽医临床诊断。

应用正向间接血凝试验检测山羊痘抗体

采用硫酸铵盐析、Sephadex G-200柱层析的方法纯化山羊痘病毒,以病毒抗原致敏绵羊红细胞建立了山羊痘正向间接血凝试验,并进行了最佳试验条件的摸索。结果表明,试验所制备的诊断液能与山羊痘参考阳性血清发生特异性凝集,其凝集现象能被山羊痘阳性抗原特异性抑制,与其它常见的动物病阳性血清无交叉反应。用本方法及琼脂扩散试验对山羊痘血清进行检测,IHA阳性检出率为89.1%(41/46);而AGP阳性检出率为34.8%(16/46)。表明正向间接血凝试验比琼脂扩散试验敏感性高。本次试验制备的正向间接血凝试验诊断液可用于兽医临床上进行快速诊断。

陕西省关中地区鸡马立克氏病调查研究

１９９５～１９９７年对陕西省１１个县（市、区）的养鸡场（户）进行了ＭＤ流行病学调查。结果表明，１３个品种５８８个鸡群中有１９９群发生了ＭＤ，发病鸡群占３３．８％；ＭＤ临床表现与鸡的品系有明显相关性；１９９个发病鸡群死淘率１８．９％（２６３９７／１３９７００），其中肉仔鸡群死淘率明显低于蛋用鸡；血清学检查表明，蛋用鸡ＭＤ抗体阳性率为１５．６％～５８．３％，ＭＤ抗原阳性率为７４．１％～８４．４％，而肉仔鸡ＭＤ抗体阳性率为４．２％～６．０％，ＭＤ抗原阳性率为６８．１％～７９．２％．经ＨＶＴ疫苗免疫鸡群仍有３９．７％发生了ＭＤ．

商品蛋鸡群马立克氏病与细菌性混合感染的诊断

对某养殖场送检的8只病死鸡,用琼脂扩散试验检出马立克氏病毒抗原阳性率为62.5%(5/8);马立克氏病毒抗体阳性率为66.7%(4/6)。从病料中分离出7株细菌,其中4株为大肠杆菌,3株为鸡伤寒沙门氏菌。根据流行病学、临床症状及实验室诊断,判定为鸡马立克氏病和细菌的混合感染。同时对马立克氏病与禽淋巴细胞性白血病进行了鉴别诊断。

对流免疫电泳鉴定猪源多杀性巴氏杆菌血清型

通过特异性试验、敏感性试验、阻断试验等建立鉴定猪源多杀性巴氏杆菌Pasteurella multocida血清型的对流免疫电泳(CIE)技术。结果表明,抗原、抗体之间具有较好的特异性,而且有着很好的重复性;敏感性较琼脂扩散试验至少提高4倍;对本实验室分离的13株Pm进行荚膜血清型分型鉴定显示,A型(8/13,61.54%)、D型(5/13,38.46%),符合PCR鉴定结果。本方法具有快速、特异等特点,且不需要特殊设备,操作简便。

利用小鹅瘟病毒增殖制备GPV沉淀抗原

将小鹅瘟病毒 (GPV)通过家禽胚胎传代增殖 ,取感染胚尿囊液制备了GPV沉淀抗原。其抗原在琼脂扩散反应和对流免疫电泳的试验中能够与小鹅瘟阳性血清出现沉淀线 ,而且与小鹅瘟标准抗原的沉淀线相吻合。所形成的沉淀反应能够被小鹅瘟阳性血清特异性地抑制 ,与其它常见的禽病血清不发生交叉反应。

白痢康复鸡种用及经济价值的评价

本文对某农场688只白痢康复鸡的种用及经济价值进行的评价结果为,日产蛋率比发病前正常水平降低了12.3％,蛋的受精率降低了5.1～8.1％,孵化率降低了18.9％;全血平板凝集试验、血清琼脂扩散及卵黄琼脂扩散反应的阳性率分别为92.5％、90.0％和84.0％。从这些康复鸡所产的鲜蛋,入孵后7日龄和21日龄的死胚以及后代死雏中均分离出鸡白痢沙门氏菌,检出率依次为8.0％(2/25)、16.6％(5/30)、53.3％(16/30)和77.7％(7/9)。为此,该鸡群显然不能留作种用,其继续喂养的经济价值亦低,建议于产蛋期后全部淘汰。

不同鸡MD疫苗免疫鸡及强毒攻击后羽囊排毒规律

分别以７种鸡ＭＤ疫苗免疫ＳＰＦ鸡和狼山鸡，用琼脂扩散试验（ＡＧＰ）检查鸡群ＭＤＶ强毒攻击后不同时期的羽囊抗原，结果表明，免疫组鸡羽囊排毒高峰推迟，排毒率下降，排毒高峰维持时间短，不同疫苗免疫不同品种鸡后排毒情况有差异，ＣＶＩ９８８和两种二价苗效果优于ＨＶＴ苗。

禽成骨髓细胞性白血病人工复制试验

取AMV毒株经颈静脉接种1目龄AA雏鸡复制出禽成骨髓细胞性白血病,用琼扩试验和酶联免疫吸附试验测定了感染鸡血浆中的病毒抗原。

小鹅瘟病毒的增殖与沉淀抗原的制备

取小鹅瘟病毒经尿囊腔接种12日龄非免疫鸭胚进行传代增殖，收集尿囊液后采用聚乙二醇沉淀法制备小鹅瘟病毒沉淀抗原，经琼脂扩散试验检测，结果表明：该抗原能够与小鹅瘟阳性血清出现沉淀线，而且与小鹅瘟标准抗原的沉淀线相吻合，与其他常见的禽病血清不发生交叉沉淀反应．本次制备的小鹅瘟沉淀抗原可以用于免疫效果的监测和流行病学调查。

猪原环病毒2型衣壳蛋白含量与抗原滴度的相关性研究

将猪圆环病毒2型衣壳蛋白原核表达工程菌用PBS溶解破碎后,经2次50%饱和度硫酸铵沉淀,用Brodford法分别测定不同稀释度的原核表达菌破菌液中的蛋白含量,同时进行琼脂双向免疫扩散试验(AGP),48h观察免疫沉淀线,以出现免疫沉淀线的表达产物最高稀释倍数为该抗原的滴度,并由此探讨猪圆环病毒2型衣壳蛋白(PCV2-CAP)原核表达产物中总蛋白含量与抗原滴度之间的相关关系。结果表明,AGP最小检出值为0.255mg(蛋白)/ml,表达产物总蛋白含量在0.255～0.857mg/ml与以0.5为底的AGP滴度的对数成正相关关系(R^2=0.9938)。当总蛋白含量超过0.857mg/ml时抗原滴度变化不再相关联。可见,AGP能检出表达产物中总蛋白的最低值为0.255mg/ml,最高值为0.857 mg/ml,在此区间内蛋白含量与AGP滴度成正相关关系,可以通过测定蛋白含量估算抗原滴度。

鸡传染性法氏囊病的对流免疫电泳诊断技术

本试验建立了诊断鸡传染性法氏囊病的对流免疫电泳 (CIE)技术。试验结果表明 ,该法的敏感性较琼脂凝胶沉淀试验至少高 4倍 ,并具有快速、敏感、特异等特点。鸡传染性法氏囊病 (IBD)是一种由传染性法氏囊病毒引起的急性高度传染性疾病。肉鸡感染后死亡率很高 ,通常死亡率约为 10 % - 90 % ,如并发其他疾病 ,则死亡率更高。早期快速准确的诊断是防治本病的基础。

臭氧对肉仔鸡体质量及免疫水平的影响

臭氧(O3)进入机体内可以激活免疫细胞,增强机体免疫能力,提高血氧饱和度,促进三羧循环,影响糖、蛋白质和脂肪代谢。设置试验Ⅰ组(饮水供臭氧组)、试验Ⅱ组(饮水+空气供臭氧组)和对照组研究臭氧对肉仔鸡体质量及免疫水平的影响。结果显示,试验Ⅱ组比对照组体质量增加263.63 g(P<0.01),料重比较对照组降低0.376;鸡新城疫血凝抑制试验值(NDHI)比对照组高2.19倍,离散度比对照组低0.483 6;鸡法氏囊病琼脂扩散试验抗体阳性率(IBD AGP)也比对照组高。说明在饮水中和空气中同时供给臭氧能够提高肉用仔鸡的体质量和免疫力。