经典藏药如意珍宝片多次给药的药代动力学研究

目的:探讨经典藏药如意珍宝片多次给药的血浆药代动力学特征,为临床用药提供参考和依据。方法:选取斯泼累格·多雷(SD)大鼠12只,雌雄各半,分为对照组和给药组,连续给药7 d,在最后一次给药前0 h及给药开始后0.25、0.5、0.75、1、2、4、8、24、48 h眼眶采血,测定血浆中沉香四醇、异甘草素、胡椒碱、阿魏酸的药代参数。结果:血浆中沉香四醇、异甘草素、胡椒碱、阿魏酸的药代参数达峰时间大部分分别在1~8、0.25、0.25~8、0.25 h;C_(max)分别为(140±53.90)、(8.31±6.34)、(33.4±22.20)、(15.7±7.90)ng/mL;t_(1/2)分别为(10.1±3.85)、(8.51±4.23)、(4.45±1.35)、(67.3±55.10);AUC_(0-t)分别为(1 890±1 440)、(45.6±14.3)、(288±150)、(443±165) h×ng/mL;MRT_(0-∞)分别为(13.2±7.45)、(9.80±4.27)、(4.91±1.34)、(103±77.10) h。沉香四醇、异甘草素、胡椒碱在大鼠体内主要药动学参数差异无统计学意义(P>0.05),阿魏酸在大鼠体内主要药动学参数(C_(max)、AUC_(0-t))差异有统计学意义(P<0.05)。结论:本研究建立了适用于如意珍宝片多次给药后的沉香四醇、异甘草素、胡椒碱、阿魏酸4种成分的药代动力学的研究方法,分析其药代动力学特征,指导临床给药周期和间隔。

白木香内生真菌的分离鉴定及诱导结香作用研究

目的:分离、纯化经通体结香技术诱导的白木香木质部真菌,筛选能够高效促进白木香产生优质沉香的菌株。方法:采用组织块分离法分离、纯化菌株,通过形态学特征结合内转录间隔区(ITS)序列分析鉴定真菌;将真菌菌液接种到白木香树4个月后进行功能验证;依据《中华人民共和国药典》(以下简称《中国药典》) 2020年版沉香项下薄层色谱、浸出物含量测定、沉香四醇含量测定及特征图谱方法分析菌株诱导效果。结果:从白木香木质部中分离出48株真菌,优势菌株为镰刀菌;经刺盘孢菌属(Colletotrichum sp.)、黑曲霉Aspergillus niger、渐进绿木霉Trichoderma paraviridescens诱导的沉香薄层色谱斑点与对照药材一致;经镰刀菌属(Fusarium sp.)、黑曲霉、渐进绿木霉诱导的沉香浸出物质量分数均大于10%,与对照组差异有统计学意义(P<0.05);经可可毛二孢菌Lasiodiplodia theobromae、黑曲霉、渐进绿木霉等6株菌诱导的沉香特征图谱与对照药材一致,沉香四醇质量分数均大于0.1%,与对照组差异有统计学意义(P<0.05)。结论:从白木香木质部分离出的内生真菌可诱导沉香形成,其中黑曲霉和渐进绿木霉能够较快速诱导白木香结香,结香所得的树脂品质符合《中国药典》2020年版标准。

盐胁迫对土沉香中沉香四醇和2-(2-苯乙基)色酮含量的影响

【目的】探究盐胁迫对土沉香中沉香四醇及2-(2-苯乙基)色酮的诱导作用。【方法】在传统冷钻和火钻的基础上增加盐(质量分数26%NaCl)胁迫,设冷钻、冷钻+盐、火钻、火钻+盐4个处理,结香10个月后,使用体积分数95%乙醇对各处理沉香样品进行超声提取得到醇提物,采用气相色谱-质谱(GC-MS)联用法对沉香的化学成分进行定性分析,使用超高效液相色谱串联三重四级杆质谱仪(UPLC-MS-MS),测定其中沉香四醇及2-(2-苯乙基)色酮的绝对含量。【结果】①冷钻和火钻结合盐处理后,沉香醇提物含量均不同程度提升,其中冷钻+盐处理醇提物含量较冷钻处理提高21.43%,火钻+盐处理醇提物含量较火钻处理提高64.86%。②与冷钻和火钻处理相比,加盐处理后沉香中化合物种类总数未增加,冷钻和冷钻+盐处理化合物种类为35种,火钻和火钻+盐处理化合物种类为46种;冷钻+盐处理倍半萜类和色酮类物质种类与冷钻处理相比均未增加,火钻+盐处理倍半萜类化合物较火钻处理增加1种,色酮类化合物较火钻处理增加4种;加盐处理后沉香中倍半萜类物质相对含量减少,色酮类物质相对含量增加,冷钻处理、冷钻+盐处理、火钻处理、火钻+盐处理沉香中倍半萜类物质相对含量分别为88.67%,75.34%,56.72%和54.31%,色酮类物质相对含量分别为8.74%,20.96%,27.05%和43.24%。③冷钻+盐处理沉香中沉香四醇、2-(2-苯乙基)色酮含量分别为1.08和0.14 mg/g,是冷钻处理(0.37和0.01 mg/g)的2.92和13.18倍;火钻+盐处理沉香中沉香四醇、2-(2-苯乙基)色酮含量分别为2.93和0.68 mg/g,是火钻处理(1.22和0.07 mg/g)的2.42和9.90倍。【结论】盐胁迫显著提升了沉香醇提物含量,增加了火钻处理的倍半萜类和色酮类物质种类,且对沉香四醇和2-(2-苯乙基)色酮的产生有诱导作用。

LC/MS/MS法同时测定八宝惊风散中5种成分的含量

目的:建立LC/MS/MS法测定八宝惊风散中升麻素苷、沉香四醇、5-O-甲基维斯阿米醇苷、黄芩苷、异钩藤碱共5个成分的含量。方法:采用C18柱,以甲醇-0.1%甲酸水溶液为流动相,梯度洗脱,流速0.30mL/min,采用电喷雾离子源(ESI),正离子扫描。结果:异钩藤碱在质量浓度0.010~0.20mg/L,升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷在0.025~0.50mg/L,沉香四醇、黄芩苷在0.05~1.0mg/L范围内线性关系良好(r>0.9982),平均加标回收率(n=6)范围为93.5%~108.7%,RSD为2.8%~4.8%,10批次样品中,5个成分的含量分别为升麻素苷55.8~110.5mg/kg、沉香四醇180.4~703.3mg/kg、5-O-甲基维斯阿米醇苷53.0~199.6mg/kg、黄芩苷1860.7~3740.1mg/kg、异钩藤碱0.82~7.89mg/kg。结论:该法快速、灵敏、能准确测定八宝惊风散中升麻素苷、沉香四醇、5-O-甲基维斯阿米醇苷、黄芩苷、异钩藤碱5种成分的含量,可用于中成药八宝惊风散的质量控制。

高效液相色谱法测定沉香舒郁片中沉香四醇和厚朴酚含量

目的:建立高效液相色谱法测定沉香舒郁片中沉香四醇和厚朴酚含量。方法:采用高效液相色谱法,以乙腈为流动相A,0.1%甲酸溶液为流动相B,梯度洗脱;检测波长为252 nm;柱温:30℃;流速:1.0 ml/min;进样量:10μl。结果:沉香四醇的线性范围为4.70~94.08μg/ml(r=0.9999,n=5),厚朴酚的线性范围为4.39~87.84μg/ml(r=0.9999,n=5),平均加样回收率分别为100.0%(RSD为1.0%)和99.6%(RSD为0.8%)。结论:该方法简便、准确,重复性好,可作为沉香舒郁片质量控制方法。

HPLC-DAD测定沉香药材中沉香四醇的含量

目的:建立沉香药材中沉香四醇含量的测定方法,实现该中药的质量控制。方法:采用Diamonsil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%甲酸水,梯度洗脱,流速0.7 m L·min-1,检测波长252 nm,柱温30℃。结果:沉香四醇与相邻色谱峰分离度大于1.5,达到基线分离。在2.0-125.0μg·m L-1范围内呈良好的线性关系,r=0.999 8,平均加样回收率为102.75%。沉香药材中沉香四醇的含量不得低于0.15%。结论:该法能准确可靠地测定沉香药材中沉香四醇的含量,可用于沉香药材的质量控制。

HPLC法同时测定七十味珍珠丸中6种成分

目的建立HPLC法同时测定藏药七十味珍珠丸(西红花、降香、甘草等)中6种成分的含有量。方法该药物50%甲醇提取液的分析采用Inertsil■ODS-3色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);以0.2%磷酸-乙腈为流动相,梯度洗脱;体积流量0.8 m L/min;柱温30℃;检测波长254 nm。结果没食子酸、柯里拉京、沉香四醇、鞣花酸、西红花苷Ⅰ、西红花苷Ⅱ分别在1.41~42.24、0.61~18.24、0.30~9.12、0.47~14.04、0.62~18.48、0.32~9.45μg/m L范围内线性关系良好(R2≥0.999 4),平均加样回收率(RSD)分别为93.41%(1.75%)、96.84%(1.75%)、97.45%(0.58%)、93.22%(0.56%)、97.01%(1.39%)、97.22%(1.11%)。2个厂家不同批次样品中各成分含有量有一定差异,尤其以柯里拉京和沉香四醇更明显。结论七十味珍珠丸质量不稳定,应引起关注。

茉莉酸甲酯重复刺激对白木香所结沉香中沉香四醇含量的研究

利用茉莉酸甲酯,重复刺激诱导白木香结香,提高所结沉香中沉香四醇的含量。白木香经锯伤、及3种浓度(0、10、50 g/L)茉莉酸甲酯重复刺激(仅1次、1次/月、2次/月、4次/月)诱导结香,时长6个月,HPLC法测定所结沉香中沉香四醇的含量。结果表明:10 g/L茉莉酸甲酯2次/月刺激诱导白木香所结沉香中沉香四醇含量最高,为1.78 mg/g。由此可知,利用植物激素茉莉酸甲酯诱导、重复刺激均能明显提高白木香所结沉香中沉香四醇的含量。

高速逆流色谱法分离制备沉香中的沉香四醇和4′-甲氧基沉香四醇

目的:研究高速逆流色谱分离制备沉香中2-(2-苯乙基)色酮类活性成分的方法。方法:采用氯仿-甲醇-水(4∶2.6∶2.4)为两相溶剂体系,上相为固定相,流速1.2 mL/min,正向转速900 rpm。结果:利用高速逆流色谱法从沉香95%乙醇粗提物中一次性分离得到两个2-(2-苯乙基)色酮衍生物——沉香四醇(agarotetrol,AH1)和4′-甲氧基沉香四醇。所得两分离峰经EI-MS、1H-NMR和13C-NMR鉴定确认。HPLC检测纯度可达99.0%以上。结论:高速逆流色谱法对于沉香中结构相近的2-(2-苯乙基)色酮衍生物具有理想的分离效果,产物纯度高。

沉香化滞丸的质量标准提升研究

目的:提升沉香化滞丸的质量标准。方法:对方中厚朴、香附和木香3味药材进行薄层色谱法(TLC)鉴别;使用高效液相色谱法(HPLC)对方中君药沉香中的药效成分沉香四醇进行定量分析。结果:用TLC鉴别厚朴、香附和木香具有较好的专属性;沉香四醇在3.5073~35.0734μg·mL-1浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系,相关系数r=0.9998,平均回收率99.1%,RSD等于1.3%(n=6)。结论:建立的方法操作简单、快速、准确,可用于沉香化滞丸的质量控制。

高效液相色谱法测定藏药八味阿魏丸中沉香四醇含量

目的建立测定藏药八味阿魏丸中沉香四醇含量的高效液相色谱(HPLC)法。方法色谱柱为Thermo C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-水(28∶72,V/V),检测波长为252 nm,流速为1.0 m L/min,柱温为38℃。结果沉香四醇质量浓度在12.4~124.0μg/m L(R^2=0.9996)范围内与峰面积线性关系良好,平均回收率为95.54%,RSD为1.71%(n=9)。结论该方法简便、准确,重复性好,可用于八味阿魏丸的质量控制。

沉香化气胶囊质量标准提升

目的提高沉香化气胶囊的质量标准。方法采用薄层色谱(TLC)法对制剂中的广藿香、木香、沉香进行定性鉴别;采用高效液相色谱(HPLC)法测定制剂中沉香四醇含量,色谱柱为Shim-Pack VP-ODS C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%甲酸(15∶85,V/V),流速为1.0 mL/min,柱温为30℃,检测波长为252 nm,进样量为10μL。结果制剂中广藿香、木香、沉香的TLC特征斑点显色清晰,分离度良好,阴性对照无干扰。沉香四醇进样量在0.038~0.950μg范围内与峰面积线性关系良好(r=1.0000,n=6);精密度、稳定性、重复性试验的RSD均小于1.0%(n=6);平均加样回收率为101.38%,RSD为0.54%(n=6)。10批样品中沉香四醇的含量为每粒0.216~1.004 mg(n=2)。结论该方法操作简便、结果稳定可靠、专属性和重复性均较好,可用于沉香化气胶囊的质量标准提升。

UPLC-MS/MS法检测洁白制剂中沉香的使用情况

目的建立超高效液相色谱-串联电喷雾三重四级杆质谱(UPLC-MS/MS)法,通过对沉香四醇含量测定,对洁白胶囊(丸)中沉香的使用情况进行检测。方法该药物乙醇提取物的分析采用电喷雾离子源(ESI)进行电离,多离子反应监测(MRM)模式进行信号采集,采用外标法进行定量;以乙腈-0.1%甲酸溶液(75∶25)为流动相;等度洗脱;体积流量:0.3 ml/min;柱温:40℃,测定洁白胶囊(丸)中沉香四醇含量。结果50批洁白胶囊(丸)中有29批沉香四醇含量过低,提示企业可能投劣质沉香,3批洁白丸未检出沉香四醇,提示可能未投沉香或以山沉香代替投料。结论该方法选择性强,灵敏度高,可用于测定洁白胶囊(丸)中沉香四醇含量,检测洁白胶囊(丸)中沉香使用情况,确保沉香药材的质量可控。

HPLC法测定清心沉香八味散中沉香四醇的含量

目的:测定清心沉香八味散中沉香四醇的含量。方法:采用高效液相色谱法,以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,以乙腈为流动相A,0.1%甲酸溶液为流动相B,柱温为30℃;流速1.0m L/min;检测波长为252nm。结果:沉香四醇进样量在0.004985~0.074775μg范围之内与两个峰面积之和具有良好的线性关系(r=0.9999);平均加样回收率为98.3%,RSD值0.9%(n=6)。结论:该方法稳定、准确,可用于清心沉香八味散的质量控制。

基于HPLC指纹图谱和多成分含量测定结合化学计量学的暖宫七味丸质量评价研究

目的 建立HPLC指纹图谱与多成分含量测定方法,结合化学计量学分析,评价暖宫七味丸(Nuangong Qiwei Pills,NQP)的质量。方法 采用RP-HPLC法,色谱柱为Grace Alltima HP C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为甲醇-水,梯度洗脱;体积流量为1.0 mL/min;检测波长为220 nm。对4家生产企业14批NQP进行指纹图谱及4种指标性化学成分含量测定,利用化学模式识别法通过SPSS 20.0对含量测定数据进行聚类分析和通过SIMCA 14.1软件对NQP 4种定量成分进行主成分分析(principal component analysis,PCA)并将共有峰按峰面积进行差异性分析。结果 建立了NQP指纹图谱,共匹配出21个共有峰,分别归属沉香、丁香、肉豆蔻、豆蔻4味药材,指纹图谱相似度>0.98;对照品指认沉香四醇(6号峰)、丁香酚(8号峰)、肉豆蔻木脂素(14号峰)、去氢二异丁香酚(20号峰)4种化学成分,质量分数分别为0.120~0.416、1.574~5.018、0.103~0.205、0.093~0.139 mg/g;当平方欧式距离为15时,14批样品通过聚类分析分成3类,PCA结果与聚类分析结果一致;通过对共有峰峰面积为变量进行正交偏最小二乘-判别分析建模分析,RX2为0.696,Q2为0.597,均大于0.5,建立的模型稳定可靠,对照品指认的4种化学成分均为重要差异性标志化合物。结论 指纹图谱及含量测定方法准确可靠,可用于NQP质量控制及综合评价。

Temporal characteristics of agarwood formation in Aquilaria sinensis after applying whole-tree agarwood-inducing technique

Objective: Agarwood—a resinous wood produced by Aquilaria plants in response to injury or artificial induction—is a valuable medicinal and fragrance resource. Whole-Tree Agarwood-Inducing Technique(Agar-WIT) has been widely used to produce agarwood. However, the time-dependent characteristics of agarwood formation induced by Agar-WIT are yet to be clarified. To promote technologically efficient utilization and upgradation of Agar-WIT, the dynamic process and mechanism of agarwood formation were analyzed for one year.Methods: Agarwood formation percentage, barrier layer microscopic properties, extract levels, compound level, and characteristic chromatograms of agarwood were examined by referring to the Chinese Pharmacopeia(2020 version).Results: Agar-WIT could maintain a high percentage of agarwood formation over one year compared with that of healthy plants. Alcohol-soluble extract and agarotetrol levels showed fluctuating cyclic changes with peaks occurring first during the fifth and sixth months, and subsequently in the 11th month.Aquilaria trees subjected to Agar-WIT treatment for 1–12 months showed significant characteristics of a dynamic agarwood formation process. The barrier layer began to appear in the fourth month after treatment. Alcohol-soluble extractive levels in agarwood formed in the second month, and thereafter,exceeded 10.0%, and agarotetrol in agarwood produced after four months or later, exceeded 0.10%.Conclusion: According to the Chinese Pharmacopoeia, alcohol-soluble extractive levels in agarwood should not be less than 10.0% and agarotetrol level should exceed 0.10%. After four months of Agar-WIT treatment, the formed agarwood theoretically met these standards and was suitable for developed and utilization. However, the optimal harvest time was found to be the 11th month, followed by the sixth month after Agar-WIT treatment. Therefore, Agar-WIT resulted in swift agarwood formation and stable accumulation of alcohol-soluble extracts and agarotetrol. Thus, this method is efficient for large-scale cultivation of Aquilaria sinensis to produce agarwood and provide raw materials for the agarwood medicinal industry.

基于“化学物质组-血中移行成分-药动学”的蒙药暖宫七味丸质量标志物研究

目的研究蒙药暖宫七味丸的化学物质组、血中移行成分及药动学,筛选出暖宫七味丸潜在的质量标志物。方法综合运用UPLC-Triple-TOF-MS/MS、GC-MS技术结合数据库及对照品对比,鉴别暖宫七味丸的化学物质组、血中移行成分;使用UPLC-Q-TRAP-MS/MS研究其体内药动学特征。结果采用UPLC-Q-TOF-MS/MS鉴别出暖宫七味丸中的76个化学成分,采用GC-MS鉴别出35个化合物。经大鼠ig给药后鉴别出19个吸收进入血中的原型成分,其中,沉香四醇、绿原酸、科罗索酸表现出良好的可测性,且具有明显的药动学特征。结论沉香四醇、绿原酸、科罗索酸在暖宫七味丸的化学物质组-血中移行成分-药动学研究中具有良好的可测性和可追溯性,可作为暖宫七味丸潜在的质量标志物。

HPLC测定母蒂尼阿丸中的特征成分

目的 HPLC法测定母蒂尼阿丸水提取液中没食子酸、沉香四醇、羟基红花黄色素A的含量。方法 采用安捷伦C18色谱柱(250 mm×4.6 mm, 5μm),没食子酸用流动相为0.05%磷酸溶液-乙腈(93:7),进样量2μL;沉香四醇用流动相为0.1%乙酸溶液-乙腈(77:23~67:33),进样量2μL;羟基红花黄色素A用流动相为0.7%磷酸溶液-乙腈-甲醇(80:4:16),进样量5μL。结果 没食子酸、沉香四醇、羟基红花黄色素A的线性范围分别为0.0856~4.0、0.0127~0.4060、3.5×10-3~0.227 mg·mL-1,r2均为0.9999;平均回收率分别为83.9%、87.2%、85.7%,平均含量分别为1.590%、0.036%、0.0276%,RSD分别为3.90%、2.10%、3.40%。结论 所用方法简便、准确、可靠、重复性良好,可为母蒂尼阿丸的质量控制提供基础。

HPLC法测定沉香化滞丸中沉香四醇含量

目的建立高效液相色谱法(HPLC)测定沉香化滞丸中沉香四醇含量。方法色谱柱为Tech Mate C18-ST(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相为乙腈-0.1%甲酸梯度洗脱;检测波长为252 nm;流速为1.0 ml/min;柱温为30℃。结果沉香四醇在0.04935~0.4935 mg/ml范围内与峰面积呈现出良好的线性关系(r=0.999),样品加标回收率在88.59%~96.32%之间,RSD均小于3%。结论该方法操作简便,回收率好,可用于沉香化滞丸中沉香四醇含量的质量控制。

沉香的醇浸出物和沉香四醇含量测定及品质分类

目的:分析与评价国内外沉香药材的质量,对沉香品质进行分类。方法:按2015年版《中国药典》一部沉香鉴别项下相关要求测定样品醇浸出物的含量;采用HPLC法,Altima C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm),流动相乙腈(A)-0.1%甲酸水(B)梯度洗脱,流速0.7 mL·min^(-1),检测波长252 nm,柱温30℃,测定样品中的沉香四醇含量;结合醇浸出物和沉香四醇含量结果探讨沉香品质分类。结果:沉香四醇在2.0~750.0μg(r=0.999 6)与其峰曲线下面积呈良好的线性关系,平均回收率为102.1%,RSD 2.8%。52种沉香样品中沉香四醇质量分数在0.10%~6.60%,醇浸出物质量分数为6.07%~57.06%。沉香醇浸出物与结香方式、种源无相关性。沉香四醇含量高低与种源、结香方式有一定的相关性。种源为白木香的人工和天然沉香2种结香方式中沉香四醇平均质量分数分别为0.67%,0.15%,两者比较有显著差异(P<0.01);天然沉香种源为Aquilaria malaccensis与A.crassna,沉香四醇平均质量分数分别为2.57%,0.70%,两者有差异(P<0.05);与白木香(0.15%)有显著差异(P<0.01))。结论:沉香按沉香四醇含量高低进行品质分类具有一定的合理性。