目的:分析膳食变化对大鼠下丘脑刺鼠相关蛋白( AgRP)表达的影响,探讨AgRP在肥胖发生中的作用,为肥胖的研究提供一个新的思路。方法将80只体重为100~120 g的雄性Wistar大鼠随机分成高能饲料组( n=40)、饥饿组( n =20)、对照...目的:分析膳食变化对大鼠下丘脑刺鼠相关蛋白( AgRP)表达的影响,探讨AgRP在肥胖发生中的作用,为肥胖的研究提供一个新的思路。方法将80只体重为100~120 g的雄性Wistar大鼠随机分成高能饲料组( n=40)、饥饿组( n =20)、对照组( n =20)。高能组给予自制的高能饲料,对照组和饥饿组给予基础大鼠饲料。12周后,高能组体重超过对照组平均体重30%的大鼠设为膳食诱导肥胖( DIO)组,饥饿组给予72 h禁食,自由饮水。取大鼠下丘脑采用免疫组化实验和western blot检测AgRP表达。结果免疫组化显示DIO组大鼠和饥饿组大鼠下丘脑AgRP表达显著高于对照组( P <0.05);而DIO组大鼠和饥饿组下丘脑AgRP表达差异无统计学意义( P >0.05)。Western Blot实验显示DIO组和饥饿组大鼠下丘脑AgRP表达明显高于对照组大鼠( P <0.01)。而DIO组大鼠和饥饿组大鼠下丘脑AgRP表达差异无统计学意义( P >0.01)。结论长期高能饮食导致肥胖,其下丘脑内AgRP表达的增高可能是导致机体摄食量和体重增加并引起肥胖的主要因素之一。饥饿状态下,下丘脑内AgRP表达增高,可能是由于在饥饿状态下机体内瘦素、胰岛素、糖的减少共同所致。展开更多
【目的】揭示刺豚鼠信号蛋白基因(ASIP)SNP位点突变与不同鸡种羽色差异形成机制的关联性,筛选出与鸡种羽色相关的辅助育种分子标记。【方法】参考NCBI已公布的红色原鸡ASIP基因序列(登录号NC_006107.5),运用Primer Premier 5.0设计特异...【目的】揭示刺豚鼠信号蛋白基因(ASIP)SNP位点突变与不同鸡种羽色差异形成机制的关联性,筛选出与鸡种羽色相关的辅助育种分子标记。【方法】参考NCBI已公布的红色原鸡ASIP基因序列(登录号NC_006107.5),运用Primer Premier 5.0设计特异性引物,以罗曼蛋鸡、泰和乌骨鸡、兴义矮脚鸡白羽系、赤水乌骨鸡、贵州黄鸡和瑶山鸡为研究对象,通过DNA混合池及PCR直接测序法筛选不同羽色鸡种ASIP基因SNP位点;估算各SNP位点等位基因频率后,使用RNAfold、NetPhos 2.0、NetOGlyc 4.0、SOPMA和SWISS-MODEL等在线软件进行生物信息学分析,探究不同羽色鸡种ASIP基因SNP位点突变对基因mRNA二级结构、ASIP蛋白翻译后修饰位点及其二、三级结构的影响。【结果】从6个鸡种ASIP基因中检测到7个SNPs位点,分别为Exon-2-G17C、Exon-2-T168C、Exon-2-C3032T、Exon-2-T3203G、Exon-2-G3287A、Exon-2-G3313T和Exon-2-C3350T。其中,Exon-2-T3203G只出现在罗曼蛋鸡上,Exon-2-G3287A只出现在瑶山鸡上。Exon-2-T168C只出现在贵州黄鸡和兴义矮脚鸡白羽系且位于编码区,该位点突变导致编码氨基酸改变[苏氨酸(Thr)→甲硫氨酸(Met)],且能导致ASIP基因mRNA二级结构改变,最小自由能增加,稳定性降低。Exon-2-T168C位点突变还导致ASIP蛋白激酶磷酸化位点数量和位置发生改变,但糖基化位点未发生改变;Exon-2-T168C位点突变后ASIP蛋白二级结构中α-螺旋、β-转角和延伸链的占比增加,而无规则卷曲占比降低,且蛋白三级结构预测结果与二级结构预测结果一致。【结论】在贵州黄鸡和兴义矮脚鸡白羽系ASIP基因上检测到Exon-2-T168C位点,且该位点突变能引起ASIP基因m RNA二级结构、蛋白激酶磷酸化位点数量和位置及ASIP蛋白二、三级结构均发生改变,但并不是影响贵州黄鸡和兴义矮脚鸡白羽系羽色差异的内在机制。展开更多
文摘目的:分析膳食变化对大鼠下丘脑刺鼠相关蛋白( AgRP)表达的影响,探讨AgRP在肥胖发生中的作用,为肥胖的研究提供一个新的思路。方法将80只体重为100~120 g的雄性Wistar大鼠随机分成高能饲料组( n=40)、饥饿组( n =20)、对照组( n =20)。高能组给予自制的高能饲料,对照组和饥饿组给予基础大鼠饲料。12周后,高能组体重超过对照组平均体重30%的大鼠设为膳食诱导肥胖( DIO)组,饥饿组给予72 h禁食,自由饮水。取大鼠下丘脑采用免疫组化实验和western blot检测AgRP表达。结果免疫组化显示DIO组大鼠和饥饿组大鼠下丘脑AgRP表达显著高于对照组( P <0.05);而DIO组大鼠和饥饿组下丘脑AgRP表达差异无统计学意义( P >0.05)。Western Blot实验显示DIO组和饥饿组大鼠下丘脑AgRP表达明显高于对照组大鼠( P <0.01)。而DIO组大鼠和饥饿组大鼠下丘脑AgRP表达差异无统计学意义( P >0.01)。结论长期高能饮食导致肥胖,其下丘脑内AgRP表达的增高可能是导致机体摄食量和体重增加并引起肥胖的主要因素之一。饥饿状态下,下丘脑内AgRP表达增高,可能是由于在饥饿状态下机体内瘦素、胰岛素、糖的减少共同所致。